听源性惊厥点燃诱导新皮质内c-fos和BDNF变化的研究

为探讨前脑结构参与听源性惊厥点燃过程的神经化学机制,本研究以c-fos基因表达作为神经元功能活动的标志,采用免疫细胞化学方法,对新皮质内参与听源性惊厥点燃过程的神经元的分布状况进行了观察,并对相关区域内脑源性神经营养因子表达水平的变化进行了分析.结果显示,单次听源性惊厥发作后,新皮质内仅有少量散在的c-fos阳性神经元存在;听源性惊厥点燃后,额、顶、枕及颞叶皮质内出现大量c-fos阳性神经元.点燃后额叶及顶叶皮质内脑源性神经营养因子免疫阳性产物的校正光密度值显著增高.结果表明,新皮质内大量神经元参与听源性惊厥点燃过程,脑源性神经营养因子表达增强很可能是其中的机制之一.

北京鸭中脑网状结构内神经核团的形态学及细胞构筑研究(一)

用10只北京鸭脑制成的Nissl法连续切片,在光镜下观察了分布于中脑网状结构内的峡视核、桥上核、三叉问核、被盖腹侧核、楔状核及臂旁核等的形态及细胞构筑.结果表明:(1)在北京鸭观察到在禽类文献中未见报道的桥上核、三叉间核;(2)在北京鸭首次观察到有楔状核;(3)北京鸭的峡视核、被盖腹侧核、臂旁核与其它禽类者相似.

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核浅层内囊泡膜谷氨酸转运体样和P物质样阳性终末与Sindibis病毒转染表达GFP神经元之间的联系

应用GFP基因重组病毒标记技术和免疫荧光组织化学技术,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察了大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)浅层内两种囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1样和DNPI样)以及SP样阳性纤维和终末与Sindibis病毒转染表达绿色荧光蛋白阳性神经元之间的联系.目的在于为探索兴奋性神经递质和SP参与面口部伤害性信息在Vc浅层内的传递和调控提供形态学依据;并为今后更好地开展绿色荧光蛋白基因重组病毒标记法的研究探索新路.结果显示:(1)绿色荧光蛋白基因重组Sindibis病毒注入一侧Vc浅层后,仅在同侧Vc注射部位附近的Ⅰ～Ⅲ层内观察到5～9个绿色荧光蛋白标记神经元,这些神经元的胞体为小型(≤15 μm),呈圆形、多角形或不规则形;(2)Vc浅层内均可见大量的VGluT1样、DNPI样和SP样阳性纤维和终末,其中VGluT1样阳性纤维和终末主要密集分布于Ⅱ层的内侧部和Ⅲ层,Ⅰ层和Ⅱ层外侧部较为稀疏;而DNPI则主要密集分布于Ⅰ层和Ⅱ层,Ⅲ层相对地较为稀疏;SP样阳性纤维和终末主要分布于Ⅰ层和Ⅱ层;(3)VGluT1样、DNPI样和SP样阳性终扣分别聚集于绿色荧光蛋白标记神经元的胞体或树突周围,并与之形成密切接触.以上结果提示,Vc浅层内两种囊泡膜谷氨酸转运体样和SP样神经终末可能与面口部伤害性信息的传递和调控密切相关.

地塞米松对谷氨酸钠致痫大鼠脑电图及GABA免疫反应的影响

为了探讨糖皮质激素的抑痛效应,本研究用免疫细胞化学方法和脑电图仪观察了地塞米松对谷氨酸钠致痫大鼠脑电图以及GABA免疫反应的影响.结果显示:大鼠在注射谷氨酸钠前30 min经腹腔注射地塞米松,能明显减轻严重的癫痫发作症状和脑电图中高电位的痫波发放,并使海马齿状回及大脑皮层GABA阳性神经元表达明显增强.显微图象统计分析:与致痫组相比,抑痫组GABA阳性神经元平均光密度值增加,差异有显著性(P＜0.05).上述结果提示:地塞米松具有抑制谷氨酸钠诱发癫痫的作用,其抑痫效应可能与增强GABA的表达有关.

AChE纤维在大鼠海马结构的生后发育

用乙酰胆碱酯酶组织化学反应结合形态计量学分析,对出生后第1d至第60 d SD大鼠海马结构中胆碱能纤维和各层宽度的发育进行了定量观察.结果发现:乙酰胆碱酯酶纤维在海马结构中呈层状分布,生后1～7 d,各层分布稀疏;此后纤维均在生后7～21 d快速增长,始层和辐射层纤维密度于生后21d达到高峰,分别为63/0.01 mm2和54/0.01mm2;在稳定一段时间后开始下降;腔隙分子层和齿状回分子层纤维密度于生后42 d达到生长高峰,分别为52/0.01 mm 2和109/0.01 mm2,此后开始下降.各层宽度随着年龄增长逐渐增宽,且于生后7 d到21 d增长为迅速.结果表明:胆碱能纤维在海马结构的发育主要是在出生后出现并体现"先过度生长后降低"的模式.胆碱能纤维的发育可能与树突的发育有关.

一氧化氮合酶和5-羟色胺在体外培养的胚鼠脑干神经元内的共存研究

采用NADPH-d组织化学和5-羟色胺免疫组织化学双重反应技术,探讨在体外培养条件下E14d SD胚鼠脑干神经元中5-羟色胺与一氧化氮合酶阳性神经元的体外生长发育过程以及5-羟色胺与一氧化氮合酶的共存.将E14 d SD胚鼠脑干细胞悬液接种于24孔培养板,实验按培养龄分4组分别在接种后5 d、10 d、1 5 d和21 d终止培养,先进行NADPH-d组织化学反应,再行5-羟色胺免疫组织化学反应.结果显示:各实验组均可观察到三种神经元,即5-羟色胺免疫阳性神经元、一氧化氮合酶阳性神经元和两者的双重阳性神经元,其中双重阳性神经元占多数,并以梭形神经元为主,胞体呈三角形、多角形、梭形或卵圆形.10 d组的双重阳性神经元突起长可达600 μm以上,末端可见明显的生长锥,轴突终末分支上分布有大量的膨体,并与其它神经元的胞体或突起之间形成接触.本研究结果证明一氧化氮合酶和5-羟色胺可以在体外培养的胚鼠脑干神经元内共存,提示一氧化氯合酶可能与5-羟色胺共同参与胚脑的发育.

偏侧帕金森病大鼠基底神经节亚区GABA能神经元的免疫组织化学研究

为探讨基底神经节各亚区γ-氨基丁酸能神经元在帕金森病时的变化.本研究应用免疫组织化学和图象分析技术对6-羟基多巴胺脑内注射制备的偏侧帕金森病大鼠模型基底神经节亚区γ-氨基丁酸能神经元的变化进行了观察和计数.结果发现,与假手术对照组比较,6-羟基多巴胺损毁侧基底神经节亚区γ-氨基丁酸免疫反应阳性神经元的数量均明显减少(P＜0.05).本研究结果提示,帕金森病时基底神经节直接回路和间接回路兴奋-抑制失衡,可能与γ-氨基丁酸表达减少有关.

太空发育鸡胚的前庭感受器细胞形态学研究

为了探讨太空微重力对鸡胚前庭感觉上皮细胞的形态发育的影响,选取在航天飞机(STS-29)发育鸡胚和地面发育鸡胚各两只,利用计算机显微测量技术分别测量椭圆囊和球囊的毛细胞、支持细胞核的切面面积、周长、形状系数.太空发育鸡胚的球囊支持细胞核的切面面积、周长显著大于地面组,形状系数无差异;太空发育鸡胚的椭圆囊支持细胞核的切面面积、周长、形状系数以及椭圆囊和球囊毛细胞的切面面积、周长与地面发育鸡胚相比无明显差异.微重力可能对球囊支持细胞核的体积发育有影响,对椭圆囊和球囊的毛细胞以及椭圆囊支持细胞核的形态发育无影响.

感觉神经和运动神经Schwann细胞的培养研究

为了建立应用于神经组织工程的感觉神经和运动神经的Schwann细胞的体外培养方法,采用联合酶消化法对SD乳鼠后根神经和股神经运动支的Schwann细胞进行了培养,并经抗S100荧光染色鉴定和双抗体夹心问接Elisa法测量两种Schwann细胞培养基中NGF的表达.结果表明,两种培养细胞经荧光染色证明均为Schwann细胞,细胞纯度均超过95%,光镜观察未见形态学差异,但NGF的表达量和表达模式均有显著性差别(P＜0.05).提示,本实验方法可以获得高纯度的感觉神经和运动神经的Schwann细胞,两者的生物学功能有一定差异.

NGF、BDNF及受体trkA、trkB、trkC在正常猴脊髓的表达

采用免疫组织化学方法观察了神经生长因子(NGF),脑源性神经营养因子(BDNF)以及NGF家族因子受体t rkA、trkB、trkC的免疫阳性反应在正常猴脊髓的分布.结果表明:NGF免疫反应阳性的神经元在脊髓灰质各层中均有分布,灰、白质内也可见较多的NGF免疫反应阳性的胶质细胞.BDNF在脊髓各型神经无有明显的表达,特别是前角运动神经元.trkA、trkB、t rkC的免疫阳性反应产物主要分布在灰质的神经元及胶质细胞.本实验结果揭示了在正常猴脊髓中神经营养因子(NGF、BDNF)及受体trkA、trkB、trkC的表达状况,提示这些神经营养因子及受体在维持猴脊髓神经元的正常生理功能中具有重要作用.

北京鸭中脑网状结构内神经核团的形态学及细胞构筑研究(二)

用10只北京鸭脑的Nlssl染色连续切片,在光镜下观察了分布于中脑网状结构内的红核、脚桥被盖核、中脑深核、外侧丘系核、外侧丘系腹侧核、乳头状核等的形态学及细胞构筑.结果表明:(1)红核和中脑深核均未分出明显亚核;(2)脚桥被盖核分成两个亚核,与其它禽类有异;(3)首次观察到外侧丘系核的尾段有一个深染的结构;(4)北京鸭的外侧丘系腹侧核及乳头状核与其它禽类相似.

GDNF转基因成纤维细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠模型

为了观察表达胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)的基因工程细胞在脑内移植后对帕金森病大鼠的治疗作用,将6-羟基多巴胺脑内定位单侧(损伤侧)注射制备大鼠帕金森病模型.随机将动物分为实验组(20只)和对照组(15只),分别植入GDNF和Lac Z转基因的原代培养大鼠成纤维细胞于损伤侧纹状体内,动态观察动物单侧旋转行为以及多巴胺及其代谢产物3,4-二羟苯乙酸和高香草酸含量的变化.结果表明:实验组帕金森病大鼠单侧旋转行为明显减少,为移植前旋转圈数的(64.8±5.8)%(P＜0.05);其纹状体内多巴胺含量显著提高,恢复至移植前水平的(14.5±2.2)%(P＜0.05),而对照组仅为(1.92±0.15)%;转基因细胞在脑内可存活1年以上.本研究结果提示GDNF基因治疗对大鼠帕金森病具有潜在的临床应用价值.

5-HT受体亚型在原代培养大鼠脊髓背角神经元的表达

为探讨脊髓背角内5-HT发挥作用的受体类型及其胞内信号转导机制,本研究首先利用免疫荧光技术对胎鼠脊髓背角神经元的产率进行了观察,再利用反转录PCR方法观察了5-HT受体14种亚型mRNAs在原代培养神经元中的表达.原代培养的背角神经元生长状态良好,存活时间达到14～21 d.对培养的背角细胞用神经元特异性标志物-神经细胞核蛋白(NeuN)进行免疫荧光检测的结果表明,神经元的产率超过90%;用PCR方法在培养的背角神经元中检测到了5-HTiA、5-HT1B、5-HT1D、5-HTiF、5-HT2A、5-HT2c、5-HT3、5-HT4、5-HT5A、5-HT5B、5-HT6和5-HT7等受体亚型mRNAs的表达.但上述各受体亚型的表达水平存在差异,未检测到5-HT1E和5-HT 2u受体亚型mRNAs的表达.结果表明,本研究建立的实验方法可满意地获得原代培养脊髓背角神经元;这些神经元不但表达多种受体亚型,而且表达类型与以往在成年大鼠脊髓背角观察到的表达状况基本一致.上述结果为进一步开展5-HT作用机制的体外研究奠定了基础.

MPTP对小鼠不同脑区神经递质代谢酶基因表达的影响

1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)能够诱发黑质纹状体系统多巴胺能神经元损伤并产生与帕金森病类似的症状.本实验通过MPTP注射诱导C57BL小鼠神经元损伤,利用逆转录PCR方法检测酪氨酸羟化酶(TH)、单胺氧化酶B(MAO-B)以及胆碱乙酰基转移酶(ChAT)三种神经递质代谢相关基因的表达变化.结果发现,在小鼠黑质与纹状体中,MPTP导致TH基因表达显著降低,而MAO-B与ChAT基因的表达变化在黑质与纹状体则有所不同,在黑质MPTP导致MAO-B与ChAT基因表达的上升,在纹状体则略有下降.

吸入麻醉剂氟烷对大鼠视上核和杏仁中央核神经元自发放电频率的影响

为了探讨吸入麻醉剂对中枢神经元作用的机制,应用膜片钳全细胞记录技术在新生SD大鼠脑薄片上观察了吸入麻醉刺氟烷对视上核和杏仁中央核自发放电频率的影响.结果证明,0.75%、1.5%和2.55%浓度的氟烷对杏仁中央核神经元的自发放电频率可产生不同程度的抑制作用,而对视上核神经元的自发放电频率则产生明显的增强效应.给药后用人工脑脊液冲洗5min后,1.5%浓度的氟烷对神经元的作用可恢复至给药前水平.本研究的结果提示,吸入麻醉剂氟烷能明显地改变中枢神经元自发放电频率,但对不同部位的神经元,氟烷的作用不同;视上核和杏仁中央核是麻醉剂对中枢神经系统作用的重要部位.

建立新生鼠脊髓细胞凋亡的动物模型

本研究目的在于制作新生鼠脊髓细胞(神经细胞和神经胶质细胞)凋亡模型,为筛选神经组织的保护物质提供新手段.为此,将新生大鼠一侧坐骨神经切断后,用无菌止血海绵包裹断离的神经近侧断端,海绵内加入无菌生理盐水或NGF,术后3、6、12 h用TUNEL法检测脊髓细胞凋亡状况.结果表明,TUNEL显示生理盐水组在三个时间段均出现大量脊髓细胞凋亡,而NGF组的凋亡细胞数量很少.提示,切断新生大鼠一侧坐骨神经后可建立脊髓细胞凋亡的动物模型.

bFGF对胚胎神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的影响

本研究观察了碱性成纤维生长因子对胚胎神经干细胞生长和分化的影响.从孕12 d大鼠胚胎神经管分离神经干细胞,进行体外培养,分为碱性成纤维生长因子组及对照组.培养过程中观察神经干细胞的生长,于培养第3、5、10 d用免疫组化方法检测培养细胞神经元特异烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达,以观察神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的状况.碱性成纤维生长因子可明显地促进培养细胞的生长和分化.免疫组化细胞计数显示,培养第3 d,特异烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数均明显增加;培养第5 d,特异烯醇化酶阳性细胞数是对照组的1.9倍,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数为对照组的1.6倍,前者表达增加明显;培养第10 d,两者的阳性细胞数仍高于对照组,但增加不明显.不同培养时问的胞体长突起长度也均高于对照组;胞体直径及表面积随培养时问延长而增大.说明,碱性成纤维生长因子既能促进胚胎神经干细胞的生长,也可促使其分化为神经元及神经胶质细胞,尤以神经元为明显.

生长相关蛋白及其mRNA在大鼠损伤坐骨神经中的表达

为了研究大鼠周围神经损伤后远侧端组织中生长相关蛋白(GAP-43)及其mRNA的表达,采用正常SD大鼠坐骨神经横断损伤的模型,于术后不同时间取坐骨神经远侧端组织,以Western Blot和RT-PCR法检测GAP-43及其mRNA的表达.RT-PCR法检测结果显示,正常大鼠坐骨神经组织中GAP-43 mRNA表达量较低,而损伤坐骨神经的远侧段GAP-43 mRNA的表达量明显增加,于损伤第2周时达高峰.用抗GAP-43抗体进行WesternBlot检测,结果表明,正常坐骨神经43 kDa处出现弱阳性反应的蛋白区带,而损伤后坐骨神经远侧段43 kDa处阳性反应条带着色明显加深,损伤后第3周时阳性反应着色强.本研究结果提示,GAP-43及其mRNA在大鼠损伤坐骨神经远侧段组织中表达增强,其mRNA表达上调高峰在神经损伤后的第2周:而其蛋白合成增加为明显的时间是在神经损伤后的第3周.

影响神经干细胞增殖分化的因素

传统认为哺乳动物和人脑神经细胞一经发育成熟即不再进行增殖、分化,不具备再生能力,只有细胞的不断退化和死亡,因此中枢神经系统损伤后基本上不能恢复.

5-羟色胺在脊髓影响伤害性信息传递的机能学和形态学基础

5-羟色胺(5-HT)是下行抑制系统参与镇痛作用的主要神经活性物质.脊髓背角浅层(Ⅰ层和Ⅱ层)是外周伤害性信息向中枢传递和中枢对外周伤害性信息进行调控的主要部位.但5-HT发挥镇痛作用的途径和机制仍不清楚.

Liljestrand教授在1932年的诺贝尔生理学医学奖授奖仪式上的讲话

Santiago Ramóny Cajal-神经科学的金字塔

Charles Scott Sherrington的生平简介

Sherrington在获诺贝尔奖授奖仪式上的报告