神经解剖学杂志
Chinese Journal of Neuroanatomy 신경해부학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中国解剖学会,第四军医大学
- 影响因子: 0.53
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1000-7547
- 国内刊号: 61-1061/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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大鼠脊髓神经干细胞的鉴定及光镜和电镜观察
本研究应用无血清培养技术对分离的大鼠胚胎脊髓神经干细胞进行体外培养,在倒置显微镜和电镜下观察细胞形态,应用BrdU标记、免疫荧光染色检测细胞增殖、分化情况.免疫荧光显示nestin、MAP2、GFAP以及BrdU/nestin、BrdU/MAP2、BrdU/GFAP均有阳性表达,说明从大鼠胚胎脊髓可成功分离出神经干细胞,它们分化后可以表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原.脊髓神经干细胞具有自我更新能力,能分化为神经元和星型胶质细胞.
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骨髓基质细胞体外诱导分化为神经元样细胞的研究
本实验观察了骨髓基质细胞(BMSCs)经化学诱导向神经细胞分化的过程,并初步探索其分化机制.首先分离培养扩增纯化SD大鼠BMSCs,应用β-巯基乙醇(BME)对第4代BMSCs进行诱导分化,分化稳定后撤除诱导液继续常规培养2周.结果显示:诱导分化前,细胞呈现梭彤,平行排列生长.诱导分化后,多数BMSCs伸出突起,并发出初级和次级分支,相瓦交织成网状结构,成典型的神经元样细胞形态,分化过程中有部分细胞漂浮死亡.撤除诱导液常规培养2周后,分化的细胞逐渐缓慢恢复剑原来成纤维细胞样长梭状形态.透射电镜观察到分化后细胞具有发育早期神经元的超微结构特点,免疫组织化学方法证实,神经干细胞标志蛋山(Nestin)在诱导分化后即开始表达,1 h达到高峰,此时Nestin阳性细胞率为(29.35±1.45)%,之后随时间逐渐下降,5 h时降至很低;神经元细胞标志蛋白-神经元特异性烯醇化酶(NSE)在诱导分化前不表达,在诱导分化后随时间表达逐渐增强,5 h时阳性细胞率高为(57.53±2.63)%;撤除诱导液常规培养2周时,Nestin、NSE表达均为阴性.星形胶质细胞标志蛋白-胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein GFAP)测定在不同组、不同时间点均为阴性结果.提示,BMSCs体外经BME化学诱导可向神经元样细胞分化,不能分化为胶质细胞;分化机制可能足先分化为神经干细胞,再转分化为神经元样细胞,这一化学分化过程是迅速、短暂、町逆的.且对细胞有损伤,凶此,化学诱导后的BMSCs不适宜做细胞疗法的种子细胞.
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两种不同纯度的嗅鞘细胞在体外存活与生长的比较
比较80%和50%两种纯度的嗅鞘细胞在体外培养条件下的存活与生长,为嗅鞘细胞体内移植选用佳纯度提供依据.分离、培养并纯化成年SD大鼠嗅鞘细胞,将纯化的嗅鞘细胞和收集到的贴壁成纤维细胞进行约80%和50%的比例混合后接种,继续培养1 d或3 d.所有细胞于不同时间点行P75免疫细胞化学,荧光染色,以罄定嗅鞘细胞的初始及其后培养过程中数量和纯度的变化.观察细胞状态,计数细胞总数和P75免疫阳性细胞数目,求得各组嗅鞘细胞数量和纯度并行统计学分析.结果显示:两种不同纯度嗅鞘细胞在培养1 d时形态正常,3 d时纯度为50%的嗅鞘细胞胞体依然饱满,突起更加纤长,数量和纯度亦无明显下降.而纯度为80%的嗅鞘细胞在培养3 d时已出现胞体萎缩和突起变短,数量从1 d时每一观察区域内的35±13显著下降为23±5(P=0.02).但纯度未发牛明显变化.结果表明50%纯度嗅鞘细胞的存活及生长状态优于80%者,提示细胞体内移植时应考虑选取50%纯度的嗅鞘细胞.
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切割穹窿海马伞海马提取液和银杏叶提取物联合诱导海马NSCs向胆碱能神经元的分化
为探讨切割穹窿海马伞海马提取液和银杏叶提取物(extract of ginkgo bilobo,EGb)在海马NSCs向胆碱能神经元定向分化中的作用,分别制备大鼠穹窿海马伞切割侧和正常侧海马提取液;将从鼠胚海马中分离扩增的NSCs球分成4组,应用不同的培养液促其分化:(1)联合组:含切割侧海马提取液和银杏内酯的DMEM/F12培养基;(2)提取液组:含切割侧海马提取液的DMEM/F12培养基;(3)EGb组:含银杏内酯的DMEM/F12培养基;(4)对照组:含正常侧海码提取液的DMEM/F12培养基.培养14d后行ChAT免疫荧光检测,计算ChAT阳性神经元的分化率,图像处理细胞面积和周长.结果显示联合组各项指标均明显优于其它各组(P<0.01);提取液组、EGb组各项指标也均优于对照组(P<0.05);细胞而积提取液组优于 EGb组(P<0.05),细胞周长 EGb组优于提取液组(P<0.05),两组ChAT阳性神经元分化率无明显差异(P>0.05).上述提示切割穹窿海马伞的海马提取液和EGb联合应用可诱导海马NSCs分化为更多、更为成熟的胆碱能神经元.
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Neuroplastin在培养的神经元的表达及对小脑颗粒细胞神经突起生长与神经元存活的影响
研究neuroplastin在培养神经元的表达及对大鼠原代培养小脑颗粒细胞分化与存活的影响.培养大鼠小脑颗粒细胞、中脑多巴胺能神经元、海马神经元、PC12-E2、新乍鼠前脑组织,用RT-PCR检测neumplastin 65 mRNA和neumplastin 55 mRNA的表达;加入neuroplastin合成肽,观察小脑颗粒细胞神经突起生长及在低钾的神经毒性条件下神经元的存活.结果表明:在培养0、7 d的海屿神经元、中脑多巴胺能神绛元、小脑颗粒细胞以及新生鼠前脑组织,PC12-E2细胞均表达np65 mRNA、np55 mRNA,且np55 mRNA的表达高于np65 mRNA;米自neuroplastin Ig1的合成肽是1ab-s,1cd-s,1dd,1ef,1fg来自neumplastinIg2的合成肽是2cd和2fg.1fg,1cd-s,2cd,2fg强烈刺激神经突起的生长,1 dd,1ab-s中等程度刺激神经突起的生长,1cf,1bc则无效.1cd-s,1bc,1dd,1ef,2cd,2fg能促进低钾神经毒性环境下神经元的存活,1fg,1ab-s无效.以上结果提示,neumplastin通过亲同性结合或亲异性结合后,诱导神经突起牛长和促进神经元存活.
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补阳还五汤和NGF对异种去细胞神经支架移植后神经再生和修复的影响
为了探讨补阳还五汤对异种去细胞神经支架移植后神经再生及功能恢复的影响以及与NGF的效果比较.我们将36只健康成年SD大鼠随机分为3组:补阳还五汤(BuYangHuanWu Decotion,BYHWD)治疗组、NGF治疗组和牛理盐水(NS)对照组.动物分别存活4周和8周,不同时段各组为6只.以上3组大鼠分别以10 mm长度的兔异种去细胞神经支架桥接大鼠坐骨神经缺损.术后补阳还五汤组和生理盐水对照组分别用补阳还五汤水煎剂和生理盐水按10 ml/kg灌胃,持续1月.各组分别在术后第4周、8周行大体观察、坐骨神经功能指数(SFI)测定、辣根过氧化物酶逆行示踪、小腿三头肌湿重恢复率测定、移植体的组织学观察.结果显示,在同一时相点补阳还五汤组SFI、术侧L3~L5脊神经节和L3~L5脊髓节段前角运动细胞的HRP标记细胞数均优于生理盐水对照组(P<0.05).补阳还五汤组与NGF组比较没有显著性差异(P>0.05).在同一时相点形态学观察结果:各组神经移植体粗细基本正常,表而大量血管分布,与周围组织轻度粘连;补阳还五汤组再生神经纤维更加密集、排列规则整齐,移植体雪旺细胞(SC)大量增殖,接近于正常.上述结果提示,应用补阳还且汤可促进异种去细胞神经支架移植后神经再生与功能恢复,与NGF的作用效果没有差别.
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龟板促进Parkinson病大鼠黑质骨形态发生蛋白信号分子的表达
为了进一步探讨骨形态发生蛋白(BMP)/分化抑制因子(Id)通路在龟板抗PD大鼠多巴胺能神经元凋亡中的作用,本实验用6-羟基多巴胺(6-OHDA,0.2%)于大鼠芹侧黑质致密带沣射2μl造成PD模型,设立正常对照组、模型组和龟板组,用免疫组织化学染色方法观察PD大鼠中脑黑质骨形态发生蛋白IB受体(BMPR-IB),Smad8和Id1阳件细胞数目;用Western-blotting检测BMPR-IA、BMPR-IB、BMPR-Ⅱ、Smad1、Smad5、Smad8和Id1蛋白表达水平的变化.免疫组化染色显示龟板组PD大鼠中脑黑质BMPR-IB,Smad8和Id1的阳性细胞数明显多于模型组(P<0.05).Western-blotting结果显示龟板组PD大鼠中脑黑质BM-PR-IB,Smad8和Id1的蛋白表达水平高于模型组,而BMPR-IA,BMPR-Ⅱ,Smad1和Smad5没有被检测出.以上结果表明龟板能上调6-OHDA诱导的PD大鼠中脑黑质BMPR-IB,Smad8和Id1的表达,这可能足其抗PD大鼠多巴胺能神经元凋亡的分子机制.
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一种快速简单显示神经元树突棘的Golgi-Cox法
现存很多高尔基染色法有成功率低、产生沉淀或操作程序复杂等缺点.本文报道了我们发展的显示大脑皮层神经元树突棘的另一种Gogli-Cox染色方法.其方法是将动物灌注固定后取脑并将全脑浸于Golgi-Cox液中2周,然后浸于 30%蔗糖中;反应采用100微米厚的震动切片,经过蒸馏水洗涤、氨化、酸性坚膜定影液反应、蒸馏水再洗涤,然后切片经上升梯度酒精脱水、透明,裱片后观察.结果显示,神经元的形状和树突棘标记十分清楚;相比之下,我们采用的另一种应用K2S的Golgi-Cox法则标记质量很差.本研究结果提示我们使用酸性坚膜定影液的变通Golgi-Cox染色法是一种简单而有效的标记神经元树突棘的方法.
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虎皮鹦鹉小脑皮层光镜和透射电镜观察及Bax蛋白的表达
为了搞清虎皮鹦鹉的小脑皮层结构特征,为动物学和生理学研究提供基础资料,本研究利用生物显微技术、透射电镜技术埘虎皮鹦鹉(Melopsittacus undulates)小脑皮层的显微结构和超微结构进行了观察,并应用免疫组织化学方法检测了小脑皮层Bax蛋白的表达.结果表明小脑皮质从外向内依次可分为分子层、蒲肯野细胞层和颗粒层.分子层厚约481~132 μm,细胞数量较少;蒲肯野细胞呈梨状,底宽在16.07~26.78μm之间,高约为39.29~53.57 μm,细胞中富含线粒体、内质网、核精体和溶酶体等细胞器;颗粒层的颗粒细胞核周间隙明显,胞质少.有髓鞘神经纤维的轴突直径多在0.67~2.17μm之间,轴突或树突中含有线粒体等细胞器,髓鞘厚约为0.23 μm.血脑屏障由毛细血管内皮细胞、基膜和神经胶质膜构成.内皮细胞的细胞核常被挤到一侧,成扁形,细胞质中多含有线粒体.Bax蛋白在小脑皮质分子层、蒲肯野细胞层和颗粒细胞层中均有阳性表达,可能在小脑皮层神经系统发育和成年神经系统稳态的维持中发挥重要作用.
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成年大鼠和恒河猴骨髓基质干细胞的体外培养及鉴定
本实验目的是比较成年大鼠和恒河猴骨髓基质干细胞(MSCs)原代培养的细胞形态和生长状况的差异.分别分离成年大鼠和恒河猴的骨髓,密度梯度离心法分离MSCs,传代培养.在细胞生长过程中显微镜观察两种细胞形态及生长状况的差异,并分别进行成脂及成骨诱导.结果表明,在相同的培养条件下,成年大鼠和恒河猴MSCs原代培养细胞形态比较接近,但细胞原代及传代生长状况有差异.大鼠MSCs原代培养及细胞冻存后复苏的生长均快于猴的MSCs.两种动物的细胞都可以向脂肪和成骨细胞分化.猴的MSCs因其生长缓慢和细胞形态的明显改变,需改良其培养条件,才能用于进一步的研究.
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NMDA受体亚单位在离体大鼠海马神经干细胞中的表达
为了研究早期离体培养的胎鼠海马神经千细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达,分离、培养、传代孕18~19 d胎鼠海马NSCs,对NSCs进行nestin和分化鉴定.通过免疫荧光反应和RT-PCR法检测原代培养、传代1次、传代2次的NSCs中NMDA受体业单位NR1、NR2A和NR2B的蛋白和mRNA表达.结果显示,从孕18~19 d的胎鼠人脑海马分离培养出的NSCs,NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的免疫荧光反应均旱阳性,这三种受体亚单位的mRNA在海马NSCs上均被检测到.上述结果提示,离体培养的胎鼠早期海鸟NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B.
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雌激素减少去卵巢兔高胆固醇诱导的淀粉样前体蛋白信使RNA过表达并抑制前额叶皮层Aβ表达
长期以来循环胆固醇增高被认为与冠心病相关,现在认为与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)也有关联.雌激素是一种神经保护剂,为了证明胆固醇促进APP mRNA表达和雌激素的抑制作用及其与AD的关系,我们测定了接受胆同醇和/或雌激素兔血清脂质,显示了其APP mRNA和AB表达.与先前撤道相似,胆固醇饮食增高血清TC,TG,LDD-C和HDL-C.雌激素可逆转胆固醇饮食诱导的血清TC,TG和LDL-C增高,但降HDL-C作用不明显.高肌固醇饮食去卵巢兔APPmRNA过度表达.高胆固醉饮食同时补充雌激素去卵巢兔与正常兔间无显著差异.高胆固醇玄卵巢兔Aβ刚果红染色阳性.我们的结果提示,补克雌激素降低胆固醇可能有效地预防AD.
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丹参注射液对大鼠脑出血灶周围凋亡神经元超微结构的影响
本研究用胶原酶脑内注入法制作大鼠腩出血模型,探讨丹参对大鼠脑出血后出血灶周围神经元的保护作用.将25只雄性SD大鼠随机分为丹参治疗组,模型组和正常组,其中丹参治疗组又分为出血后0,6,24 h治疗组.各组均于72 h后处死.利用透射电镜观察不同时间点人鼠脑出血灶周围冲经元的超微结构.结果显示:与正常对照组比较,出血对照组可见神经元内核固缩,染色质移向细胞周边,核仁少见,细胞质严重空化;多数线粒体肿胀、体积增火、嵴断裂、空泡样变性;粗面内质网扩张.丹参治疗组神经元线粒体,粗面内质网等细胞器损伤程度明显好于出血组.其中出血后6 h治疗组的神经元超微结构好于出血后24 h治疗组.本研究结果提示丹参能保护脑出血灶周围的神经元,减少大鼠脑出血后神经元的凋亡,并且早期用药效果较好.
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大鼠胚胎中脑腹侧细胞和大脑皮质神经干细胞移植治疗帕金森病大鼠的比较
体外培养的大鼠胚胎中腩腹侧(VM)细胞和大脑皮质神经干细胞(NSCs)分别移植入帕金森病(PD)模型大鼠毁损侧纹状体.移植后2,4,8周采用脑微透析术结合高效液相色谱(HPLC)动态监测毁损侧纹状体内多巴胺水平,同期观察大鼠的旋转行为.移植后8周采用免疫组化法检测植入细胞的存活及分化情况.结果显示:移植后4,8周VM移植组多巴胺水平明显高于NSCs移植组或对照组,同期VM移植组较其余两组旋转行为有显著改善,而 NSCs移植组与对照组多巴胺水平及旋转行为无显著差异.VM移植组较NSCs移植组植入的细胞易存活和分化.以上结果提示,大鼠胚胎VM细胞移植治疗PD模型的疗效明显优于胚胎大脑皮质NSCs.
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一种新的培养嗅鞘细胞方法
为了建立一种新的培养嗅鞘细胞的方法,从而为神经诱导修复材料的研究提供种子细胞.本研究取新生鼠的嗅球外两层经胰蛋白酶消化成单细胞悬液,经差速贴壁法纯化,观察并记录其形态特征;经HE染色以及神经生长因子蛋白受体p75(NGFR-p75)和S-100免疫组化染色鉴定并计算其纯度.结果显示,获得的嗅鞘细胞突起呈双极或三级,p75和S-100阳性细胞纯度达剑91%.上述结果提示该方法经济易行,所获得的嗅鞘细胞纯度高,活性好.
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老化大鼠坐骨神经Fas与FasL的表达及纤维结构变化
为了观察老化对神经纤维组成和结构的影响以及对凋亡相关凶子Fas及其配体FasL表达的影响,随机取3月龄(成年组)和24月龄(老年组)止常SD大鼠各16只进行以下实验:采用透射电镜(TEM)观察坐骨神经的超微结构变化;苏木精-伊红(HE)染色计数轴突数与Schwann细胞数的比例;免疫组织化学染色榆测大鼠坐骨神经老化时Fas和FasL的表达变化.结果显示:透射电镜下可见老年大鼠坐骨神经轴突直径增加,轴突周围间隙扩大,多数髓鞘分离,部分板层结构排列紊乱、破坏甚至呈气球样变.老年组的轴突数与Schwann细胞数的比例较成年组变大(P<0.01).两组动物坐骨神经的髓鞘与轴突均町见Fag和FasL免疫组化阳性染色.但老年组大鼠的Fas和Fagl表达量明显增多(P<0.05).以上结果提示老化大鼠坐骨神经神经纤维的形态结构发生很大的变化,可能与凋亡相关基因产物Fas及其配体FasL的表达增加有关.
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肾缺血再灌注对大鼠室旁核电活动的影响
为了观察肾缺血-再灌注对室旁核电活动的影响,探讨中枢神经活动在急性缺血再灌注肾损伤发生、发展中的作用和机制.本实验通过夹闭大鼠一侧肾动脉30 min、再灌注30 min的肾缺血冉灌注模型,同步动态记录肾动脉央闭致缺血-再灌注性肾损伤大鼠室旁核的放电频率、放电周期、放电积分等参数的变化.结果显示:(1)与对照组相比,肾缺血瞬间室旁核电活动受到抑制,缺血5 min后电活动逐渐增强并维持存较高水平;(2)去夹闭再灌流瞬间放电立即减少,再灌注5 min后放电义逐渐增强,并于再灌注20 min~25 min时窀旁核放电达强,与缺血前及缺血中各个观测点相比,均有显著性差异(P<0.05~0.01).上述结果提示肾脏在缺血和缺血-再灌注过程中可引起事旁核电活动发生周期性变化,其中再灌注后对室旁核电活动的影响较缺血的影响更为明显.
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鱼藤酮对PCI2细胞多巴胺相关转运体的影响
探讨鱼藤酮对PC12细胞多巴胺转运体(DAT)和突触囊泡单胺转运体2(VMAT2)的影响.我们将PC12细胞经不同浓度的鱼藤酮处理24 h后,利用HE染色观察PC12细胞的形态学变化;利用免疫组织化学法观察不同浓度的鱼藤酮对PC12细胞酪氨酸羟化酶(TH),DAT和VMAT2蛋白表达的影响;利用RT-PCR法检测鱼藤酮对PC12细胞DAT和VMAT2基因表达的影响;通过生化实验检测Na+/K+-ATP酶活性.实验结果显示:鱼藤酮浓度为1.0mmol/L时,PC12细胞出现了明显的形态学改变,胞浆染色不均、胞体呈圆形、细胞核形状不规则、核浆比例增加;TH蛋白阳性细胞数量减少;DAT蛋白和基因表达增加;VMAT2蛋白和基因表达降低,与对照组比较均具有统计学意义(P<0.05),且随着鱼藤酮浓度的增加,变化趋势更为明显.鱼藤酮浓度为1.0 mmol/L时,Na+/K+-ATP酶活力与对照组比较显著降低(P<0.05).因此,DAT和VMAT2的表达异常可能参与了毒性作用.
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外周注射福尔马林诱导前扣带皮层中胶质细胞激活和细胞因子表达增高
为了观察外周注射福尔马林对大鼠前扣带皮层(ACC)中星彤胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S100B,小胶质细胞标记物CD14以及与胶质细胞密切相关的炎症前细胞因子白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,本研究结合行为学检测和RT-PCR方法,观察了大鼠单侧足底皮下注射福尔马林后的行为学变化,并检测了在不同时间点ACC中GFAP、S100B、CD14、IL-1β和TNF-α在基因水平的表达变化.结果显示:福尔马林急性疼痛刺激的大鼠出现典型的双时相自发性疼痛反应.ACC中GFAP和S100B mRNAs表达水平在刺激后30 min、1 h增高,2 h恢复正常;CD14 mRNA表达水半在15 min开始增高,1 h达到高峰,6 h恢复正常;IL-1β和FNF-α mRNAs表达水平在刺激后30 min、1 h、2 h增高,6 h恢复正常.上述结果表明,福尔马林外周急性伤害性刺激能够诱导ACC内短暂性的星形胶质细胞、小胶质细胞激活及IL-1β、TNF-α表达增高,提示激活的胶质细胞及表达上调的炎症前细胞因子可能参与伤害性信息的调制.
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转录因子Olig在少突胶质细胞发育和髓鞘再生中的作用
少突胶质细胞是中枢神经系统(CNS)的髓鞘形成细胞,对髓鞘的形成和神经信息的传递发挥着极为重要的作用.少突胶质细胞发育异常、脱髓鞘或髓鞘再生障碍参与了CNS多种疾病的形成,甚至可能包括精神分裂症、抑郁症等精神疾病的病理生理过程.因此,了解少突胶质细胞的分化调控机制对促进细胞成熟和髓鞘修复具有指导意义.
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多电极同步记录中的锋电位分拣技术
神经系统的工作方式涉及大量神经元之间的协作.因此,当代神经电生理学需要对多个神经元进行同步记录(simultaneous recording)[1-3].细胞外多电极同步记录的数据处理过程,通常包含三个步骤:信号的获取(signal detec-tion)、锋电位分拣(spike sorting)和神经信息的分析.这种用粗电极对细胞外场电位进行记录的方式.记录精度可达到单个神经元锋电位放电的水平;但这时即便是用单一的记录电极,也可能同时记录到电极附近多个神经元产生的形状各异的锋电位序列(spike train,图1A).
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视觉注意的脑功能成像研究进展
医学影像学技术应用于心理学基础研究始于20世纪80年代末期,近十几年来,医学影像学技术在感知觉、注意、语言认知、认知发展等研究领域中得到了广泛的应用.医学影像学技术主要是从神经基础和脑功能定位的角度揭示心理过程的神经机制.
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脆性X综合征树突棘形态发育研究进展
脆性X综合征(fragile X syndrome,FXS)是X连锁的显性遗传病之一,可导致身体、智力、情感和行为各方面不同程度的改变.该综合征与位于X染色体的FMR-1(fragile mental retardation-1)基因上的三核苷酸基因序列CGG的过度扩增有关.过度扩增导致FMR-1基因甲基化沉默,其编码蛋白FMRP(fragile mental retardation protein)表达下降甚至完全缺失.而FMRP与mRNA共同参与了树突特定mRNA的转运及翻译调控,影响突触的可塑性,从而影响神经系统正常发育.
关键词:
年 | 期数 |
2019 | 01 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 |
2002 | 01 02 03 04 |
2001 | 01 02 03 04 |
2000 | 01 02 03 04 |