琥珀酸在海马CA1区对突触前GABA释放的影响

为了观察琥珀酸在大鼠海马CA1区对突触前GABA释放的影响,我们采用红外可视全细胞膜片钳技术记录了琥珀酸对γ-氨基丁酸(GABA)能自发性微小抑制性突触后电流(miniature inhibitory postsynaptie eurrents,mIPSCs)的作用.结果显示不同浓度的琥珀酸(10-6 moL/L、10-5 moL/L、10-4 mol/L和10-3 mol/L)在海马CA1区均能以浓度依赖的方式增强GABA能mlPSCs的频率,而对其电流幅度没有影响.10-4mol/L琥珀酸组GABA能mIPSCs的频率为2.25±0.99 Hz.与正常对照组相比有显著性蔗异(n=8,P＜0.01),而其电流幅度为31.63±6.16 pA.与正常对照组相比没有差异(n=8,P＞0.05).以上实验结果表明琥珀酸能通过增强突触前GABA的自发性释放,对海马CA1区神经元产牛超极化作用,此作用可能足琥珀酸抑制癫痫形成的主要方式之一.

脑缺血再灌注大鼠额叶皮质内Bcl-2和HSP70的表达及川芎嗪、尼莫地平的干预作用

为了探讨脑缺血再灌注(CIR)大鼠额叶皮质细胞内Bcl-2和HSP70的表达及川芎嗪、尼莫地平的干预作用,本研究采用Bannister's颈动脉血引流法复制Wistar大鼠CIR模型,将动物随机分成6组,即正常对照组、假于术组、模型组、川芎嗪治疗组、尼奠地平治疗组和川芎嗪+尼莫地平联合治疗组,每组各15只动物.川芎嗪治疗组按100 me,/kg经腹腔注射,尼莫地平组经静脉给药(1 mg/kg),联合治疗组则同时给上述剂量约物.三个治疗组均白缺血起给药一次,然后,坼24 h给药一次.所有动物额叶皮质的切片均采用免疫组织化学技术榆测Bcl-2和HSP70阳性细胞的表达情况.结果显示:正常对照组Bcl-2和HSP70无阳性表达,假手术组仅HSP70有少量表达,模型组Bcl-2和HSP70阳性细胞数明显有所增多,而川芎嗪或尼莫地平治疗组Bcl-2和HSP70阳性细胞数明显多于模型组(P＜0.05).与单独用药组相比,川芎嗪+尼莫地甲联合治疗组Bcl-2、HSP70阳性细胞数明显增多(P＜0.05).以上结果表明川芎秦和尼莫地平能够上调CIR时Bcl-2和HSP70的表达,提示它们可能在CIR中发挥保护作用.

神经发生对小鼠学习记忆能力的影响

本研究探讨神经发乍对学习记忆能力的影响.选择健康成年昆明小鼠随机分7组,分别为牛理盐水对照组,酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)高、中、低剂量组,甲氨喋呤(MTX)高、中、低剂量组.使用脑立体定位仪行侧脑室埋管手术及侧脑室微量注射.用Morris水迷宫训练测试其空间学习与记忆能力;腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU)后通过免疫组织化学方法来显示BrdU阳性细胞.结果表明,aFGF各剂量组学习记忆能力均强于生理盐水埘照组;MTX高剂量组学习记忆能力显著低于生理盐水对照组.免疫组织化学结果显示aFGF各剂量组齿状回内BrdU阳性细胞数目显著高于对照组;而MTX高剂量组齿状回BrdU阳性细胞较之显著减少.结果提示,aFGF和MTX可能通过促进或抑制齿状回的神经发生,从而影响小鼠的学习与记忆能力.

PD模型大鼠黑质中Nurr1和TH的表达变化及其意义

为探讨孤儿核受体(Nurrl)在多巴胺能神经元损伤修复过程中对特肄性表型酪氨酸羟化酶(TH)的影响,本研究用6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤大鼠一侧前脑内侧束(MFB)制备单侧帕金森病(PD)模型,分别应用Western blot和免疫组织化学技术观察不同时间点中脑黑质中Nurr1、TH蛋向表达的变化及其相关性.结果硅示,Nurr1蛋白表达在术后1 d损伤侧黑质中即明显下降,7 d后开始逐渐上升,14 d接近止常水平,28 d明显升高;TH蛋白表达在术后1 d损伤侧黑质中无明显变化,7 d开始下降,14 d达低,28 d开始上升.上述结果提示,在6-OHDA损伤黑质一纹状体通路后,Nurr1的表达先下降后上升,其表达变化早于TH,可能在PD模型大鼠的损伤修复中发挥重要作用.

酒精处理影响青春期大鼠海马CA1区BDNF和TrkB的表达

为探讨青春期饮酒敛学习记忆力下降的可能机制,本研究观察了青春期大鼠酒精处理后海马CA1区脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸激酶受体B(TrkB)的表达变化.实验选用30 d龄SD雄性大鼠,以25%的酒精按8 g/kg/d灌胃,连续灌7d,动物分别在停酒后0 d,3 d,7 d和14 d处死;对照组以等量生理盐水代替酒精按同样方法处理.用免疫组织化学方法(ABC法)检测海马CA1区BDNF和TrkB的表达,Motic3.2图像分析系统测定免疫阳性产物的平均灰度值.结果显示,BDNF的表达在停酒后0 d和14 d,实验组与相应对照组相比差异无显著性(P＞0.05);3 d显著升高(P＜0.05);7d明显下降(P＜0.05).TrkB的表达在停酒后0 d,3 d,7 d,实验组与相应对照组相比差异无显著性(P＞0.05);14 d显著下降(P＜0.05).以上结果提示,BDNF表达的相对不足可能是青春期饮洒致学习记忆力持续性下降的原因之一.

蛛网膜下腔出血后鼠脑底动脉降钙素基因相关肽能神经纤维的变化

本文旨在探讨大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)诱发脑血管痉挛时脑底动脉降钙索基因相关肽(CGRP)能神经纤维的变化.大鼠随机分为正常组、蛛网膜下腔出血组.SAH组大鼠取股动脉自体血注入蛛网膜下腔,正常组动物不做任何处理.3 d后灌注固定后,应用免疫组织化学ABC法,对两组大鼠脑底动脉CGRP能神经纤维变化进行观察.结果显示:正常组大鼠脑底动脉可见棕褐色,细线状CGRP能免疫反应阳性纤维;而SAH后3 d组大鼠脑底动脉与正常组大鼠脑底动脉相比CGRP能神绛纤维密度明显减少,具有统计学意义.以上结果提示脑底动脉CGRP能神经纤维在蛛嘲膜下腔出血诱发脑血管痉挛的病理生理过程中可能发挥重要的作用.

胚胎期X线照射致大鼠皮质-纹状体区异常的研究

为探讨胚胎期X线照射致大鼠皮质-纹状体区的异常,本研究选取妊娠14 d(E14)大鼠接受X线(剂量为1.0Gy)照射.照射前2 h经尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU),用以标识E14的神经细胞的发生.取不同时期(E14-E18)胚脑用于HE染色、BrdU免疫组化染色及Fluoro Jade B(FJB)染色观察.结果显示:HE染色观察到E14大鼠受X线照射后背侧端脑有大量细胞脱落人侧脑室并在2 d后被完全清除.而腹侧的皮质-纹状体区在照射后2 d形成窄洞并于4 d后修复.BrdU标识显示腹侧端脑的外侧节隆起的神经细胞移动类似于正常对照组,2 d后阳性细胞分布在皮质-纹状体区形成的空洞周围,4 d后移动到腹侧皮质板.Fluoro Jade B染色显示照射后1 d在皮质.纹状体区有大量阳性细胞,2 d后显著减少.本实验结果提示:E14大鼠受X线照射引起外侧节隆起的神经细胞在移动过程中死亡并导致皮质-纹状体区形成空洞,从而引起内囊发生异常.

双重引物PCR鉴定APPSWE转基因小鼠

本实验旨在探讨一种简单易行,能有效识别APPSWE转基因小鼠基因检测中假阴性结果的方法.在PCR体系中设计两对引物,一对为APP基因特异性引物,另一对为根据其内源性管家基因β-actin设置的参照引物.利用同一个PCR反应体系,对两对引物进行扩增.结果显示,双重引物PCR扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合,利用该法检出的转基因阳性率高于单引物PCR检出的转基因阳性率.本方法简单易行,能够有效识别以往利用单-PCR检测出现的假阴性结果,并且具有很好的特异性和灵敏性,值得在转基因小鼠鉴定实验中推广.

银杏内酯B对大鼠海马CA1区神经元自发放电的影响

为了研究银杏内酯B(Ginkgolide B,BN52021)对静息状态下的海马脑片神经元活动的影响.本研究应用细胞外记录单位放电技术观察了r银杏内酯B对海马神经元电活动的影响,并分析了相关机制.结果显示:(1)在43个CA1区神经无放电单位给予银杏内酯B(0.1,1,10 μmol/L)2 min,有42个放电单位(97.67%)放电频率明显降低,且呈剂量依赖性;(2)预先用0.2mmol/L的L-glutamate(L-Glu)灌流海马脑片,10个放电单位放电频率明显增加,表现为癫痫样放电,在此基础上灌流银杏内酯B(1μmol/L)2 min,其癫痫样放电全部被抑制;(3)预先用L型钙通道开放剂Bay K 8644灌流8个海马脑片神经无,8个单位(100%)放电全部增加,在此基础上灌流银杏内酯B(1 μmol/L)2 min,7个放电单位(87.5%)放电频率明显减低;(4)在8个CA1区神经元,银杏酯B(1μmol/L)对单位放电的抑制效应可被l mmol/L广泛钾通道阻断剂(tetraethylammonium,TEA)完全阻断.上述结果提示,银杏内酯B可抑制海马CA1区神经元的自发放电,这种作用可能与银杏内酯B抑制L型钙通道有关,而且可能与延迟整流型钾通道(delayed rectifier potassium channel,KDR)有关.银杏内酯B通过降低神经无的活动而发挥对中枢神经元的保护作用.

坐骨神经切断对猫脊髓前角蛋白组表达的影响

用蛋白组学方法探讨猫双侧坐骨神经切断后脊髓前角蛋白组表达变化,找出差异蛋白.用二维凝胶电泳法获得脊髓前角蛋白组的考马斯亮监染色图谱,PDQuest软件对蛋白点进行定量分析.结果显示:在凝胶图谱中平均检测到382个蛋白点.损伤组与正常组比较后榆测到11个明显差异蛋白.经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和串联质谱技术鉴定差异蛋白.其名称分别为:蛋白二硫键异构酶,磷酸苷油酸变位酶1、热休克蛋白70、A11P合成酶α链、丙酮酸脱氧酶13亚基,载脂蛋白A前体、肌球蛋白调节轻链异构体b/2、三磷酸苷油醛脱氢酶等.本实验鉴定了外周神经损伤后与脊髓前角变化相关的蛋白分子,为了解运动神经元轴突损伤所致的胞体蛋白组变化奠定了基础.

鼠胚大脑皮层子宫内电穿孔法基因转移体系的建立

体内电穿孔法转基因技术作为一种新型有效的转基因方法,被广泛应用于发育生物学的研究,特别是中枢神经系统发育.本研究旨在通过子宫内电穿孔法,建立鼠胚大脑皮层体内基因转移体系:将带有GFP的表达载体pCAGGS-IRES-EGFP显微注入胚胎期14.5 d的鼠胚侧脑室中,电极沿与脑中缝平行的方向夹持鼠脑,在电压30 V,脉冲时间50 ms,脉冲数5的条件下方波电击,将外源基因转移到窜管膜层细胞.胚胎被重新放回母体内,继续发育3 d.分离被转染的鼠胚脑组织,沿冠状面冰冻切片,在荧光显微镜下观察到外源蛋白GFP在鼠胚大脑皮层中的瞬时表达.鼠胚大脑皮层子宫内电穿孔法基因转移体系的建立将为进一步研究皮层发育、神经元迁移、轴突导向等以及神经发生过程中相关基摹因功能奠定基础.

依达拉奉对次声性脑损害的保护

为了观察16 Hz、130 dB次声对SD大鼠记忆功能的影响及依达拉奉对其脑损害的防治作用.依达拉奉干预组在次声作用前3 d开始连续给药(3 mg/kg)直至次声作用7 d后停止.次声作用7 d后,测Y型电迷宫评定大鼠记忆功能,用单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)免疫标记法检测海马内ssDNA阳性细胞(凋亡细胞)数,并通过透射电镜观察脑超微结构.结果发现次声作用后大鼠学习记忆功能下降、海马ssDNA阳性细胞数明显增多(与正常对照组相比,P＜0.05);电镜下可见神经细胞出现较严重缺血、缺氧性改变,并可见不同时期凋亡细胞.依达拉奉干预组大鼠学习记忆成绩与空白对照组相比无差异;海马ssDNA阳性细胞数较次声对照组明显减少.但仍较正常对照组多,差异均有统计学意义;电镜下细胞变件改变程度较轻.由此得到结论16 Hz、130 dB次声可引发大鼠的脑损伤、细胞凋亡、记忆功能受损,依达拉奉可明显减轻次声引发的这些损害.

神经调节素对大鼠脑缺血再灌注损伤AQP-4及GFAP表达的影响

应用线栓法经颈外-颈内动脉插线建立大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)大鼠动物模型,经颁内动脉单剂量注射1.5%神经调节素-1β(NRG-1 B,0.3μg/kg)干预治疗.用干湿重法、免疫组化,免疫荧光双标记法和免疫印迹法观察NRG-1β对大鼠脑缺血再灌沣损伤水通道蛋白(AQP-4)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,结果显示:随若缺血时间延长,对照组脑组织含水量逐渐增加,NRG-1β治疗能减少MCAO/R后脑组织含水量,与对照组相比,缺血1.5-2.0 h组存在显著性差异(P＜0.05).脑缺血再灌注损伤可诱导脑组织AQP-4及GFAP表达,且随着缺血缺氧时间的延长,AQP-4及GFAP蛋白的表达逐渐增加.尽管它们均在胶质细胞中表达,但在脑组中的分布略有不同.NRG-1β治疗可以增加二者在在脑中的表达水平,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.01).以上结果提示,NRG-1β可能通过激活内在的保护机制,增强胶质细胞的活性,从而抑制MCAO/R早期脑水肿的形成过程,改薄神经元的生存环境,进而干扰脑缺血再灌注损伤的病理牛理过稃,对缺血性脑损伤具有积极的保护作用.

不同培养代数大鼠骨髓基质细胞向神经元样细胞转分化能力的比较

为确定诱导大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)向神经元样细胞转分化的适宜培养代数,本研究比较了不同培养代数的BMSCs的转分化潜能.首先体外培养大鼠BMSCs并传代,于不同的培养代数利用碱性成纤维细胞牛长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、全反式维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)诱导分化,随后运用免疫荧光法和免疫印迹法检测诱导细胞中的神经元样细胞.结果显示骨髓基质细胞体外培养1至3代时能够被诱导分化为神经无样细胞,培养至第7代时丧失转分化为神经元样细胞的潜能.上述结果提示:传代次数增多将引起BMSCs自发分化,使其向神经元样细胞转分化的能力下降,因而BMSCs培养至第3代时适宜进行诱导分化.

丹参素联合生长因子体外诱导人脐血间充质干细胞分化为神经细胞的研究

人脐血间充质干细胞(MSCs)是从脐带血中分离和培养的一种多潜能成体干细胞.本实验通过密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,贴壁法筛选出脐血MSCs,体外扩增,免疫荧光方法检测表面抗原.传3代的脐血MSCs经20 ng/ml bFGF预诱导24 h、3μg/μl丹参素诱导6 h、20 ng/ml EGF和20 ng/ml bFGF诱导分化5 d后出现类似神经元样细胞的形态改变,伸出长突起.免疫组织化学和免疫荧光方法鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达神经元特异性标志NeuN和β-TubulinⅢ,而星形胶质细胞特异性标志GFAP阳性细胞较少.上述结果表明,丹参素联合生长因子EGF和bFGF在体外可定向诱导人脐血MSCs分化为神经元样细胞.

Edaravone对大鼠弥漫性脑创伤后ERK1/2通路的影响

为探讨Edaravone对脑创伤的保护机制,本研究观察了Edaravone对弥漫性脑创伤大鼠脑组织磷酸化细胞外信号调节激酶ERK1/2表达变化的影响.114只雄性SD大鼠,随机分为3组:(1)假手术对照组(A组,n=18),(2)创伤组(B组,n=48),(3)Edaravone治疗组(C组,n=48),采用Marmarou's法建立大鼠弥漫性颅脑损伤模型.伤后1、3、6、24、48和72 h,HE染色观察伤后皮质和海马区神经细胞组织形态变化,Western blot法、免疫组化法检测皮质和海马区p-ERK1/2的表达,术后24、48、72 h对大鼠神经运动功能和综合运动能力评分.结粜显示:光镜下,伤后6、24 h即可见B组大脑皮质和海马区神经细胞胞体收缩呈三角形,胞浆嗜色性减弱,核皱缩浓染,细胞周围出现空隙,即神经细胞变性坏死改变,C组上述改变明显减轻;免疫组化与Westem blot法结果显示,与A组比较,B组ERK1/2(即p-ERK1/2)活性在伤后1、3、6、24、48 h显著增高(P＜0.05);与B组比较,C组中p-ERK1/2在6、24及48 h显著回降(P＜0.05);神经功能与综合运动能力评分在B组中(8.73.±1.4,63.8±27.7)明显低于A组(24.00±0.00,278.4±27.7),C组(17.36±1.63,117.6±20.9)显著回升(P＜0.05).本研究表明Edaravone可改善脑创伤后神经功能损伤,其机制与调节脑创伤后ERK1/2信号活化水平有关.

组织激肽释放酶对酸敏离子通道介导的神经元缺血/再灌注损伤的影响

为了解缺血/再灌注过程中组织激肽释放酶(tissu kallikrein,TK)对神经元的保护作用与酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)激活的关系以及其可能涉及的细胞内信号通路,本研究建立大鼠原代皮层神经无缺氧缺糖(oxygen-glucosedeprivation,OGD)、缺氧缺糖一酸中毒(OGD-Acidosis)损伤模型以模拟在体缺血/再灌注损伤.应用细胞免疫化学方法观察损伤前后神经元形态学的变化,并检测ASIC1a的分布变化;用活细胞计数试剂盒CCK-8了解神经元存活情况并检测Caspase-3酶活性了解神经元凋亡情况.观察OGD和OGD-酸中毒对培养神经元的存活率和Caspase-3活性的影响及TK预处理、缓激肽(bradykinin,BK)预处理、ASICI a特异性和非特异阻断剂预处理对OGD-酸中毒损伤神经元上述指标的影响,并检测细胞外信号调节激酶(ERK)、C-Jun-N末端激酶(JNK)和磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B或Akt(P13K/Akt)信号通路抑制剂对TK作用的影响.结果显示:OGD-酸中毒对神经元的损伤明显重于单纯OGD,阻断ASICs的激活能提高OGD-酸中毒神经的存活率,降低Caspase-3活性;TK和BK预处理能促进OGD-酸中毒损伤神经元存活、抑制Caspase-3激活;阻断ERK和P13K/Akt信号通路能够抑制TK促OGD-酸中毒损伤神经元存活效应.结果表明,ASICs的激活参与了OGD-酸中毒神经元损伤过程;TK对OGD-酸中毒神经元的保护作用可能是拮抗了ASICs介导的谷氨酸非依赖的神经元毒性作用,并可能与ERK和P13K/Akt信号通路的激活有关.

脑的不对称性影响大鼠局灶性脑缺血的结局

为评价左右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)对右利大鼠神经行为功能和脑梗死体积的影响,本研究应用四足动物觅食实验筛选右利爪雄性SD大鼠24只,随机分为经左、右侧插线组各12只,8%水合氯醛腹腔注射(300 rag/kg)麻醉,线栓法经左、右侧颈外-内动脉插入头端涂有多聚赖氨酸的4-0尼龙线,建立大鼠MCAO缺血2 h模型,再灌注72 h后评价动物的神经行为功能,测量脑梗死体积.结果表明,所有动物在脑缺血2 h神经功能缺损评分高,再灌注1、24、48和72 h经左侧MCAO大鼠显著高于经右侧MCAO大鼠(P＜0.05),后者功能明硅优于前者,脑梗死体积经左侧插线的大鼠显著大于经右侧插线的大鼠(P＜0.05).研究结果提示,大鼠主侧半球大脑中动脉缺血后,神经功能缺损和腩梗死体积较对侧严重,脑的不对称性影响大鼠局灶性脑缺血的终结局.

体内电穿孔法转基因技术的应用

电穿孔法转基因是将外源基因通过电场作用导入动物目标组织或器官细胞中的技术.Neumann等[1]首次成功应用该技术,把外源DNA导人小鼠成纤维细胞.随后大的实验证明,几乎所有类型的细胞,包括植物原生质体、动物初生细胞,以及不能用其他方法转染的细胞和组织,都可以成功地使用电穿孔技术进行基因转移.

阿尔茨海默病淀粉样肽级联假说及其相关基因研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是老年人群中常见的一种痴呆症,为一种原因不明的神经系统退行性病变.AD的组织病理学表现主要为老年斑(senile plaques,SP)、神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),以及由凋亡引起的区域性神经细胞死亡等.老年斑在镜下呈球形病变,表现为退变的神经轴突围绕中心淀粉样物质,这种淀粉样物质主要是β-淀粉样肽(β-amyloid,AB).

Nogo-A蛋白的研究进展

成年哺乳动物外周神经损伤后有再生能力,但中枢神经系统(CNS)损伤后则小能再生.目前认为,成熟CNS极其微弱的再生能力主要与内、外两方面的因素有关:(1)CNS神经元自身缺乏足够的再生能力;(2)CNS神经元所生存的环境受各种外源性生长促进性和抑制性因子的影响.大多数抑制因素是由髓鞘引起的.

肾上腺嗜铬细胞的研究

1981年Livett[1]发现肾上腺嗜铬细胞可分泌阿片样肽(opiatic peptide)和儿茶酚胺(catecholamine)后,肾上腺嗜铬细胞的研究受到各国研究者的关注,肾上腺嗜铬细胞移植或与神经细胞联合移植被推荐用于治疗顽固性疼痛和由脑神经细胞损伤而引起的疾病(如帕金森病).实际上肾上腺嗜铬细胞不仪分泌上述神经活性物质,同时还分泌多种神经营养因子、细胞凶子等[2],这使它住临床上有较好的应用价值.

《神经解剖学杂志》重要启事