神经解剖学杂志
Chinese Journal of Neuroanatomy 신경해부학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中国解剖学会,第四军医大学
- 影响因子: 0.53
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1000-7547
- 国内刊号: 61-1061/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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RNA干扰抑制Nogo-A基因表达及对PC12细胞凋亡的影响
为研究Nogo-A基因沉默对细胞凋亡的影响,本文构建了靶向Nogo-A的短发夹样RNA(short hairpin RNA, shRNA)真核表达载体并经脂质体转染到培养的PC12细胞.分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测转染48 h后Nogo-A mRNA及蛋白表达的变化.在转染后不同时间应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性,用原位末端标记 (TUNEL)法及流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果显示:由shRNA产生的小干扰RNA(siRNA)可有效抑制PC12细胞Nogo-A 基因的表达.Nogo-A siRNA处理组细胞的增殖活性增加、凋亡率明显下降.本结果提示,Nogo-A基因可能与细胞凋亡有关.
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SD大鼠急性分离下丘脑神经元温度敏感性及其发育过程的研究
为探讨出生后SD大鼠急性分离下丘脑神经元的自发性放电及其温度敏感特性,本研究采用电流钳技术对其进行了观察.实验结果表明:在不同鼠龄的神经元中,具有自发性放电神经元的比率没有明显不同;在这些具有自发性放电的神经元中,约30%具有温度敏感性,属于初级热敏神经元,其他属于温度不敏感神经元;同时我们也观察到在神经元的发育过程中,中等斜率的温度不敏感神经元比率逐渐增加,而低斜率的温度不敏感神经元比率则呈现为相反的变化.这些结果与在脑片和培养神经元记录到的结果具有明显的差异.本研究结果可以为神经元温度敏感性的形成机制提供有意义的线索.
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前列腺素E2诱导培养的大鼠脑皮质星形胶质细胞CREB及GABABR2磷酸化
前列腺素E2(PGE2)是一种致炎因子;星形胶质细胞中CREB和γ-氨基丁酸B受体(GABABR)的磷酸化,在神经系统炎症中起重要作用.为探讨PGE2对星形胶质细胞中CREB和GABABR2磷酸化的作用,本实验对体外培养的大鼠脑皮质星形胶质细胞以10 μmol/L PGE2刺激后,用免疫组织化学和Western blot等方法研究了星形胶质细胞中CREB和GABABR2(Ser892)磷酸化水平在多个时相中的变化.结果显示:正常星形胶质细胞中存在着基础水平上的磷酸化的CREB和GABABR2(Ser892),经PGE2刺激培养,CREB和GABABR2(Ser892)磷酸化水平增高,并呈时间依赖趋势.结果提示,10 μmol/L的PGE2能诱导大鼠脑皮质星形胶质细胞转录因子CREB发生磷酸化,也能诱导GABABR2(Ser892)发生磷酸化而影响细胞功能.由此,本文研究的结果说明PGE2可能在星形胶质细胞参与神经系统炎症的过程中发挥重要作用.
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神经性痛和炎性痛大鼠伏核内CGRP mRNA表达的变化
为了研究神经性痛和炎性痛大鼠伏核内CGRP mRNA表达的变化,本研究分别制备神经性痛及炎性痛大鼠动物模型,并运用实时定量逆转录聚合酶链式反应(PCR)技术,观察大鼠伏核内CGRP mRNA含量的改变.实验中以β-actin 为内参,记录大鼠伏核内CGRP mRNA表达产物的CT值,并计算每一样品对应其内参的相对含量,分析随时间变化致痛因素对大鼠伏核内CGRP mRNA表达产物含量的影响.结果显示:神经损伤组5、10、20、30 d及炎症组3 d,CGRP mRNA的表达比正常对照组明显增高(P<0.05);而在炎症组7 d时,CGRP mRNA的表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05).以上结果提示CGRP作为一种神经递质或调质参与痛觉的调制过程,其主要是在炎症早期发挥作用.
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低氧预适应鼠脑内核糖体S6激酶磷酸化水平和蛋白表达量的变化
探讨核糖体S6激酶(ribosomal S6 kinase, RSK) Ser221(PDK1磷酸化位点)和Thr359/Ser363(ERK1/2磷酸化位点)的磷酸化水平以及总RSK蛋白表达量在小鼠脑低氧预适应发生发展过程中的变化.将成年雄性BALB/c小鼠(18~22 g)随机分为正常对照(H0)和重复性低氧1~4次(H1~H4)等5组(每组n=6).应用蛋白凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)技术,定量检测整体低氧预适应小鼠海马和皮层组织内Ser221位点(p-Ser221 RSK)和Thr359/Ser363位点(p-Thr359/Ser363 RSK)的磷酸化水平以及总RSK蛋白表达量.结果表明,随着低氧暴露次数增加,小鼠海马和皮层组织内p-Ser221 RSK磷酸化的水平显著增高(P<0.05, n=6),伴随着p-Thr359/Ser363 RSK磷酸化的水平明显降低(P<0.05, n=6);而RSK总蛋白的表达量则无明显改变.结果提示,Ser221 RSK磷酸化水平增高和Thr359/Ser363 RSK磷酸化水平降低可能参与了小鼠脑低氧预适应的发生发展过程.
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大鼠脊神经后根切断后脊髓和背根神经节CGRP的表达变化
为观察大鼠脊神经后根切断后相应背根神经节(DRG)和脊髓节段CGRP的表达变化,本研究采用25只健康成年SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和L4、5后根切断后3 d、7 d和14 d组(n=5),用免疫组织化学方法结合图像分析技术检测各组相应DRG和脊髓节段内CGRP的表达变化.结果如下:后根切断后3 d、7 d和14 d伤侧DRG内CGRP表达较对照组和对侧明显增强;后根切断后3 d脊髓后角CGRP免疫阳性纤维减少,7 d、14 d时进一步减少;后根切断后3 d脊髓前角运动神经元内CGRP表达增加,免疫阳性细胞数增多,7 d和14 d时表达进一步增强.以上结果提示,脊神经后根切断后DRG和脊髓CGRP表达变化呈现一定的时空模式,可能参与了神经损伤后的再生过程.
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蜂毒肽抗风湿作用及对大鼠脊髓后角Fos表达的影响
运用蜂毒进行抗风湿治疗在传统的中医学上已有近千年的历史,然而对它的主要抗风湿活性成分及其机制还不十分清楚.蜂毒肽占蜂毒干重的50%,是蜂毒的主要活性成分.本研究以SD大鼠为研究对象,以完全弗氏佐剂注入右侧后足垫皮内诱导建立跖关节类风湿关节炎模型,然后分别用蜂毒、蜂毒肽和生理盐水对模型动物进行治疗研究.通过测量跖关节肿胀度、缩足逃避反射时间以及脊髓后角内Fos的表达变化来评价疗效.结果显示:模型动物接受蜂毒肽与蜂毒治疗后,关节肿胀缓解,缩足逃避反射时间显著延长,脊髓后角内Fos的表达明显下降.本结果提示蜂毒肽可能是蜂毒治疗类风湿性关节炎的主要成分.
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应用载体介导的RNA干扰技术抑制Nurr1基因在PT67细胞中的表达
本研究应用载体介导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术特异地干扰孤儿核受体1(nuclear related factor1,Nurr1)基因的表达,以建立稳定的RNAi技术及用于下一步的Nurr1基因治疗研究.我们筛选了四对Nurr1基因的特异性序列 shRNA(short hairpin RNA),构建相应的载体(psilencerTM3.1-H1neo shRNA1, 2, 3, 4).分别将这4种质粒瞬时转染入已转染了逆转录病毒质粒pLNCX2-Nurr1并稳定表达Nurr1 基因的PT67细胞中.在转染后24、48和72 h分别采用免疫荧光、免疫组化、免疫印迹以及Real-time PCR的方法检测细胞中Nurrl蛋白及基因的表达水平.结果显示,转染psilencerTM3.1-H1neo shRNA 2、3号24 h和48 h后,经免疫荧光和免疫组化检测,Nurr1在PT67细胞中表达显著降低;免疫印迹结果也显示,Nurr1蛋白量明显低于阴性对照组.psilencerTM3.1-H1neo shRNA 1、4对Nurr1蛋白表达没有明显影响.Real-time PCR 相对定量结果也同样证实2、3号转染后Nurr1基因表达的干扰效果明显,而1、4号结果相对较弱.通过本实验,我们筛选出了两段Nurr1特异性siRNA序列,且干扰效果在转染后24 h至48 h时效果为明显.
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大鼠坐骨神经夹伤后SSeCKS的表达变化
为了探讨大鼠坐骨神经夹伤后SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C底物)在神经中的表达变化及其意义,本研究制备了成年SD 大鼠坐骨神经夹伤模型,通过Western blotting和免疫组织化学方法检测坐骨神经夹伤后SSeCKS表达的时空变化.Western blotting结果显示:大鼠坐骨神经夹伤后,SSeCKS的表达迅速升高,伤后6 h即达到高峰, 之后逐渐下降.免疫组织化学染色结果表明SSeCKS在神经夹伤两端高表达,以近端明显,呈簇状聚集.夹伤远端表达较近端稍低.远离夹伤处及相应对侧,SSeCKS的表达水平有所下降且分布较为均一.免疫荧光组织化学双标记结果显示:夹伤两端SSeCKS与S100和NF200的共存不明显,但可见部分SSeCKS与GAP43双标纤维.本研究提示大鼠坐骨神经夹伤可引起SSeCKS的表达变化,该变化可能参与周围神经损伤后某些伤害性刺激信号分子的转导并与损伤后神经的再生及功能修复有关.
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嗅鞘细胞联合神经干细胞脑内移植改善Parkinson病大鼠行为的观察
为了观察嗅鞘细胞(OECs)联合神经干细胞(NSCs)脑内移植对Parkinson病(PD)的治疗作用,首先将6-OHDA注射至左侧黑质致密部和腹侧被盖区制备PD大鼠.将成功制备的PD大鼠随机分为5组,即0.9%生理盐水对照组、单纯移植 NSCs 或OECs组、OECs+NSCs 共移植组和PD模型对照组.将培养并传至第3代的NSCs、OECs和OECs+NSCs分别移植到PD大鼠的纹状体内,于移植后7、14、30、60 d 检测 PD 大鼠旋转行为变化后处死,取脑做冰冻切片,行BrdU、酪氨酸羟化酶(TH)、p75 免疫荧光和TH免疫组织化学检测.移植后21 d 以内,各组大鼠的旋转行为无明显变化;30 d 和 60 d 时,单纯移植NSCs或OECs组和OECs+NSCs共移植组与生理盐水和模型对照组相比,旋转行为有较明显的改善(P<0.05),其中 OECs+NSCs 共移植组的旋转行为改善更为显著.在移植后30 d 和 60 d,单纯移植NSCs或OECs组在移植区可见少数 TH 阳性神经元,而OECs+NSCs 共移植组的TH 阳性神经元明显多于单纯移植NSCs或OECs组(P<0.05).上述结果表明:OECs能促进胚鼠中脑来源的NSCs向TH阳性神经元分化;单纯移植NSCs或OECs和OECs+NSCs共移植,均能不同程度地改善PD大鼠的旋转行为,但联合移植优于单纯移植.
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冷酶消化法在分离和培养新生大鼠Schwann细胞的应用
Schwann细胞(SCs)是公认的周围神经组织工程的种子细胞,在周围神经损伤后的再生中扮演着重要的角色.为了快速分离和培养大量的SCs,本研究采用冷酶消化法对Wister乳鼠坐骨神经的细胞进行分离和培养,结果得到的细胞数量超过106,经S-100蛋白免疫组化染色鉴定,SCs的纯度超多了90%.从培养细胞的形态和生长曲线可见,冷酶消化法是一种简单快捷地分离SCs的方法,使用该法得到的SCs具有良好的生物学特性,并在细胞的分离时间、数量、纯度以及生物活性等方面,均达到了实用要求.
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突触后密度蛋白-95在大鼠坐骨神经损伤后的表达
为了探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在周围神经损伤过程中的表达变化,本实验建立大鼠坐骨神经夹伤模型,采用荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blotting对PSD-95 mRNA及其蛋白水平进行定量检测,应用免疫荧光双标技术观察PSD-95与神经型一氧化氮合酶(nNOS)的共定位情况.结果显示,PSD-95 mRNA及其蛋白在正常坐骨神经中度表达,损伤后迅速下降;PSD-95 mRNA从损伤后2 d开始表达上调;而其蛋白水平于损伤后1周明显升高.免疫荧光双标染色证实在坐骨神经损伤后1周PSD-95与nNOS共定位于Schwann细胞上,而与神经丝蛋白NF-200共定位不明显.本研究结果提示PSD-95通过nNOS参与了周围神经损伤修复过程.
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体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元
骨髓间充质干细胞(BMSCs) 是存在于骨髓中的非造血干细胞,在体外一定条件下可向神经细胞分化.本实验通过密度梯度离心获取人骨髓中的单个核细胞,贴壁培养纯化BMSCs,并用脑源性神经营养因子(BDNF)、forskolin(FSK)和多巴胺(DA)联合对BMSCs进行诱导,电子显微镜观察诱导后细胞是否具有成熟神经元的超微结构特点;免疫细胞化学和RT-PCR检测DA能神经元分化过程中的标志物酪氨酸羟化酶(TH)的表达以及转录因子Nurr1、Ptx3、和Lmx1b的表达.结果显示:诱导2周后,电镜下可见细胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体,以及神经丝.RT-PCR结果显示NSE(neuron specific enolase)、Nurr1、Ptx3、Lmx1b和TH的mRNA均有表达;免疫细胞化学表明诱导2周后TH阳性细胞的表达较诱导3 d后明显提高.上述结果表明BDNF、FSK和DA可以在体外诱导人BMSCs定向分化为DA能神经元.
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大鼠脊髓背角CGRP、IB4阳性终末与GABA能神经元之间的联系及GABABR1阳性终末的超微结构观察
背根神经节小型神经元初级传入末梢上的GABAB受体在脊髓背角接受中间神经元的突触前抑制,是脊髓水平痛觉调节的途径之一.为研究大鼠脊髓背角胶状质中背根神经节神经元传入纤维末梢同脊髓背角GABA能中间神经元之间的联系,本实验用免疫组织化学法,通过激光共聚焦显微镜观察了正常大鼠CGRP阳性和IB4阳性背根节神经元的中枢突同脊髓背角GABA能中间神经元之间的联系.同时,用免疫电镜(IEM)技术研究了脊髓背角GABABR1阳性的背根神经节神经元中枢突末梢形成突触的特点.结果显示:CGRP阳性和IB4阳性背根节神经元的中枢突和脊髓背角GABA能中间神经元之间形成密切联系;电镜下许多脊髓背角胶状质中突触小球的中央末梢为GABABR1免疫阳性,并作为突触前或突触后成分与周围末梢之间形成对称性和非对称性突触.提示脊髓背角GABA能中间神经元可能通过分布在背根节神经元初级传入末梢上的GABAB受体产生突触前抑制,参与脊髓水平的痛觉调制.
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脊髓水平环氧合酶-1在术后疼痛大鼠痛觉超敏中的作用
为研究脊髓水平环氧合酶(COX)-1在术后疼痛形成和维持中的作用,运用免疫组化和免疫蛋白印记法观察切口痛模型大鼠腰段脊髓中COX-1蛋白在术前和术后2 h,4 h,6 h,12 h、1 d、2 d,3 d、5 d和7 d的表达.通过测定机械刺激引起的缩足反射阈值(PWT)分别在术前、术后2 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d观察术后痛觉超敏情况,并通过术后即刻或术后2 h, 24 h鞘内给予非选择性COX抑制剂(ketorolac)、选择性COX-1抑制剂(SC-560)和选择性COX-2抑制剂(NS-398)观察其镇痛作用.结果表明:术后COX-1免疫反应阳性细胞主要集中在脊髓背角浅层,COX-1蛋白表达增加,4 h达高峰,并且持续增加至12 h.术后鞘内给予SC-560和ketorolac均能明显减轻皮肤切开诱发的机械性痛觉超敏,然而NS-398却无任何镇痛作用.本研究表明脊髓COX-1参与术后痛觉超敏的形成和维持的过程,鞘内给予COX-1抑制剂具有抗切口痛大鼠痛觉超敏的作用.
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银杏叶提取物神经保护作用中Snk-SPAR途径机制探讨
为观察银杏叶提取物EGb761的神经保护作用与突触活化过程中Snk (serum-induced kinase)-SPAR (spine-associated Rap guanosine triphosphatase (GTPase) activating protein)途径之间的相关性,本研究采用RT-PCR、蛋白质免疫印迹及免疫荧光双重标记方法观察了EGb761对谷氨酸刺激后诱导的体外培养海马神经元中Snk、SPAR表达水平及分布变化的影响.结果表明,无论在mRNA水平还是蛋白质水平,EGb761均能明显阻断突触活化后Snk-SPAR途径的激活,并对谷氨酸刺激后神经元突起上Snk分布增多及其所导致的SPAR分布减少有明显的干预作用.以上结果说明,对树突棘内结构蛋白的调节以及对树突棘结构的稳定作用是EGb761神经保护作用的一个重要靶点.
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低氧/复氧刺激对体外培养的胎鼠脊髓OPCs内NRG-1表达的影响
为明确脊髓少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)内neuregulin-1(NRG-1)的表达情况,并探讨脊髓缺血后OPCs中NRG-1的表达变化,本实验采用胎鼠(E11~13)脊髓神经干细胞定向诱导分化所获得的OPCs为实验材料,用免疫组织化学和Western blot方法,比较观察了正常培养和低氧/复氧培养的OPCs中NRG-1的表达.结果显示:(1) 正常培养的OPCs中有基础性NRG-1的表达;(2) 经低氧/复氧培养后,OPCs中NRG-1的表达2 h内骤降,4 h时陡升,表达量显著高于其他各时点,此后较迅速地下降,24 h后趋于消失.由此推测,脊髓损伤后,OPCs能在缺血缺氧的较早期高表达NRG-1,这可能对于损伤组织的保护和修复有重要意义.
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Cuprizone介导的急性脱髓动物模型髓鞘脱失及再生的机制
本研究通过在饲料中掺入cuprizone饲育小鼠,建立髓鞘可再生的急性脱髓动物模型,并利用髓鞘染色和原位杂交后免疫组化双标技术,检测髓鞘脱失和再生状况以及少突胶质前体细胞的改变.结果表明,给予cuprizone 6周后,动物胼胝体严重脱髓鞘,少突胶质前体细胞在髓鞘脱失区域集聚,且增殖活跃;恢复正常饲料饲养4周后,髓鞘基本恢复正常形态.由此推测,在cuprizone介导的急性脱髓动物模型髓鞘脱失和再生过程中,少突胶质前体细胞的增殖活化为髓鞘再生提供了基础.
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慢性复合应激对大鼠学习和记忆的影响
本文观察慢性复合应激对海马长时程增强(LTP)和一氧化氮合酶1(NOS1)表达变化的影响,并探讨了其在学习与记忆中的作用.将Wistar大鼠随机分为对照组和慢性复合应激组,每组各10只.应激组动物采用4种应激原无规律、交替性地进行长达6周的慢性复合应激试验.实验过程中测定动物血清皮质酮(CORT)水平,采用Morris水迷宫和Y迷宫测试大鼠学习和记忆成绩,记录海马齿状回LTP群体峰电位(PS)幅值的变化,同时观察海马CA1及齿状回区NOS1阳性神经元数目的变化.结果显示:(1)与对照组比较,慢性复合应激组动物在应激第4周和第6周时,血清皮质酮浓度的比值显著增高(P<0.05,P<0.01);(2)高频刺激(HFS)后各时间点的PS幅值增高更为明显(P<0.01);(3)Morris水迷宫和Y迷宫实验后慢性复合应激组动物的学习和记忆成绩优于对照组(P<0.05,P<0.01);(4)慢性复合应激组和对照组大鼠海马齿状回NOS1阳性神经元个数分别为8.80±3.91和5.44±1.14,两者间有统计学差异(P<0.05).以上结果提示,慢性复合应激对大鼠的学习和记忆有一定的影响,可能与齿状回群体峰电位幅值增强和NOS1表达增强有关.
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神经干细胞和脊髓损伤
Preface1. Concept of neural stem cellsStem cells are multipotential cells that have the capacity to proliferate in an undifferentiated state, to self-renew, and to give rise to all the cell types of a particular tissue.
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骨髓基质干细胞移植在脊髓损伤中的应用
1.概述脊髓损伤是一种严重的中枢神经系统的创伤性疾病,病情严重的患者往往面临终生瘫痪.只有损伤较轻的患者才有机会恢复脊髓功能,多数患者的治疗效果很不理想,患者失去损伤节段以下的运动和感觉能力,严重影响患者的生活质量,给家庭和社会带来沉重负担.近年来细胞移植成为脊髓损伤治疗的研究热点,尤其是骨髓基质干细胞能够取材于成人自身的骨髓,避免了胚胎干细胞和神经干细胞所带来的伦理学和免疫排斥问题,并且容易增殖,这些优点使得骨髓基质干细胞成为极有前景的移植材料.
年 | 期数 |
2019 | 01 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 |
2002 | 01 02 03 04 |
2001 | 01 02 03 04 |
2000 | 01 02 03 04 |