大鼠孤束核内儿茶酚胺能神经元接受面口部深层组织伤害性信息并向臂旁核投射的形态学研究

为了探讨孤束核(NTS)内儿茶酚胺能神经元是否与面口部深层组织的伤害性信息有关并向臂旁核投射,本研究运用荧光金(FG))逆行追踪,福尔马林刺激咬肌和免疫荧光技术相结合的三重标记方法,在荧光显微镜下观察了大鼠NTS内酪氨酸羟化酶(TH)阳性并表达FOS蛋白的神经元向臂旁核的投射.将2%FG注入一侧臂旁外侧核后,向同侧咬肌内注射2%福尔马林溶液,并行TH和FOS免疫荧光组织化学染色,荧光显微镜下在同侧NTS内的连合、内侧、中间内侧和腹侧亚核中可见重叠分布的FG、FOS、TH单标神经元以及FG/TH、FOS/TH、FOS/FG双标和FG/FOS/TH三标神经元.FG/TH和FOS/TH双标神经元分别占同侧NTS内TH阳性神经元总数的28.6%和34.8%;FOS/FG双标神经元占同侧FG逆标神经元总数的26.4%;FG/FOS/TH三标神经元分别占同侧TH阳性神经元和FG逆标神经元总数的23.7%和8.4%.本结果提示大鼠NTS中的部分儿茶酚胺能神经元接受面口部深层组织的伤害性信息并向臂旁外侧核传递.

急、慢性铁负载大鼠黑质内铁及TH样阳性细胞变化的相伴关系

许多研究证实Parkinson病(PD)患者黑质内铁含量显著增高,并伴有铁代谢的改变,由于铁的细胞毒作用和它能够促进羟自由基产生的能力,使其在PD中的作用不容忽视.本实验用葡聚糖铁建立急慢性铁负载模型大鼠,采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学技术和Perls铁染色技术分别观察了黑质中多巴胺能神经元的存活情况以及黑质中铁含量的变化.结果显示:(1)急性铁负载模型组:黑质中TH阳性细胞数明显减少,而铁染色阳性细胞数明显增多,与正常对照组相比差异有高度显著性(P＜0.05);(2)慢性铁负载模型组:黑质中TH阳性细胞数明显减少,铁染色阳性细胞数则明显增多,与正常对照组相比差异有高度显著性(P＜0.05);(3)慢性组与急性组相比,黑质内TH阳性细胞数的减少和铁染色阳性细胞数的增多更为明显,差异有高度显著性(P＜0.05).上述结果提示,葡聚糖铁铁负载模型可引起黑质内铁增多,过量铁可导致黑质内多巴胺能神经元变性死亡,慢性铁负载对多巴胺能神经元的损伤作用大于急性铁负载损伤.

新生大鼠脊髓少突胶质细胞体外培养与鉴定

本研究探索利用新生大鼠脊髓培养和纯化少突胶质细胞的方法.取新生大鼠全脊髓,胰酶消化并吹打分散细胞,用含20%胎牛血清的DMEM培养液原代混合细胞培养,细胞铺满瓶底后传代培养.用抗半乳糖脑苷脂抗体和抗胶质原纤维酸性蛋白抗体进行细胞分类免疫组化鉴定.结果显示:少突胶质细胞纯度可达98%以上,表明新生大鼠脊髓是少突胶质细胞体外培养的理想取材部位.本操作简单易行,可以在短时间内获得足量的纯化的少突胶质细胞.

Kv3.1和Kv3.2钾离子通道蛋白在大鼠神经系统的分布

本研究用免疫组织化学方法观察了Kv3.1和Kv3.2钾离子通道蛋白在大鼠神经系统的分布状况.结果显示,两种蛋白在神经系统内具有区域性的分布特点.Kv3.1免疫阳性神经元主要见于大脑皮层、海马锥体细胞层、纹状体、丘脑网状核、下丘脑、腹侧耳蜗核、桥核等脑区Kv3.2阳性神经元主要分布于大脑皮层深层、海马始层、Calleja岛、外侧丘系腹侧核、背侧耳蜗核、小脑皮层Purkinje细胞层、前庭核等处.Kv3.1和Kv3.2阳性胞体在某些脑区如大脑皮层、海马、耳蜗核、外侧丘系核等处呈现"互补"性的分布特点.另外,在一些脑区还观察到了Kv3.1和Ky3.2免疫阳性纤维和终末.Kv3.1和Kv3.2在神经系统内广泛的分布,提示它们可能参与了多种生理功能.

胎鼠大脑皮质神经元的体外培养及鉴定

为了建立SD大鼠大脑皮质神经元的分离、培养及免疫细胞化学鉴定技术,本研究通过分离孕1 5 d SD胎鼠大脑皮质组织,经机械吹打后,加入含有5%马血清、5%小牛血清的MEM培养基接种在24孔培养板中进行原代培养,并于第3 d在培养基中加入阿糖胞苷抑制胶质细胞的生长,于第9 d将细胞固定后采用免疫细胞化学技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达.结果表明从孕15 d SD胎鼠大脑皮质分离的神经元纯度高,生长旺盛,形态典型,90%以上表达NSE免疫阳性.该结果提示我们建立的培养大鼠大脑皮质神经元的方法易于标准化操作,结果稳定,值得推广应用.

大鼠束缚后脑内星形胶质细胞的反应

为了探讨束缚后大鼠脑内星形胶质细胞的反应,本实验将大鼠束缚于小的塑料桶内1、3或6 h,于解束后30 min处死,正常大鼠不被束缚作为对照.脑组织进行抗glialfibrillary acidic protein(GFAP)免疫组织化学染色.结果显示:在正常大鼠脑内有少数散在静止状态的星形胶质细胞,表现为胞体小、突起细、GFAP淡染、缺乏机能定位分布特点;束缚后脑内星形胶质细胞表现为胞体肥大、突起变粗、GFAP深染、形成激活状态,其分布有明显的机能定位特点,表达于与应激反应调节相关的核团,主要有(1)端脑:扣带回、新皮质(尤其是第Ⅲ和Ⅴ层)、隔外侧核、杏仁中央核;(2)间脑:丘脑室旁核、外侧膝状体、内侧膝状体、下丘脑的视上核、室旁核、第三脑室室周区、弓状核;(3)脑干:中脑的上丘浅层、中脑导水管周围灰质、下丘的皮质部;脑桥的臂旁外侧核、蓝斑、A5区;延髓的耳蜗核、延髓内脏带(MVZ)等处.反应性星形胶质细胞表达的时程变化是束缚1 h高,3 h次之,6 h少.本文结果表明,大鼠被束缚后全脑多处核团的星形胶质细胞发生不同程度的改变,随着束缚时间的延长,动物产生适应性,星形胶质细胞表达减少.

雌激素对卵巢摘除大鼠心内神经节细胞Bcl-2和Bax表达的影响

本实验建立了去卵巢和雌激素替代疗法动物模型,用免疫组织化学SABC法结合图象分析方法,观察大鼠心内神经节细胞中Bcl-2和Bax的变化,探讨雌激素对卵巢摘除大鼠心内神经节细胞中Bcl-2和Bax表达的影响.去卵巢(OVX)大鼠心内神经节细胞中Bcl-2的表达较正常对照组明显减弱(P＜0.05),雌激素替代治疗组大鼠心内神经节中Bcl-2的表达与正常对照组相比无显著性差异(P＞0.05),而较卵巢摘除组显著增高(P＜0.05);卵巢摘除后同时给予特异性雌激素受体阻断剂(TAM)和17β-雌二醇(OVX+TAM+ERT)组大鼠心内神经节中Bcl-2的表达较正常对照组显著减弱(P＜0.05),但与OVX组无显著性差异(P＞0.05).各组中Bax的表达无显著性差异(P＞0.05).实验结果提示雌激素能上调大鼠心内神经节细胞中Bcl-2的表达,但对Bax的表达无影响.

神经营养素高亲和力受体在脊髓损伤大鼠运动神经末梢的分布

为了探讨脊髓损伤对运动神经末梢中神经营养素受体TrkA、TrkB和TrkC分布密度的影响,本实验采用改良的Allen氏重击法损伤成年SD大鼠T12节段脊髓,应用免疫组织化学方法分别观察T12脊髓损伤4、12、48 h后,下肢肌肉中运动神经末梢内TrkA、TrkB和TrkC受体样免疫反应强度的变化.结果显示:大鼠脊髓T12段损伤48 h后运动终板处即有TrkA、TrkB和TrkC受体样免疫反应产物分布,其中以TrkA免疫反应强.而正常成年大鼠下肢肌肉中未见其免疫阳性反应产物.本研究结果提示脊髓损伤可刺激运动神经元表达神经营养素受体,并将受体输送至运动终板处的神经末梢,以摄取靶源性神经营养素.本结果为临床上肌肉注射外源性神经营养素治疗脊髓损伤提供了形态学资料.

AT1受体在脑胆碱能刺激引起的孤束核TH-IR变化中的作用

本工作选用清醒SD雄性大鼠,利用免疫组织化学方法,观察大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱后孤束核内儿茶酚胺能神经元活性的变化以及阻断脑AT1受体对上述变化的影响.免疫组织化学结果显示:侧脑室注射氨甲酰胆碱(0.5 μg)后40 mm,孤束核内酪氨酸羟化酶(TH)免疫反应阳性神经元数目明显增多(P＜0.05),免疫染色强度明显增强(P＜0.05).losartan(20 μg)预处理后孤束核内TH免疫反应活性明显下降(P＜0.05).上述结果提示,侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱对孤束核内儿茶酚胺能神经元具有兴奋作用,阻断脑血管紧张素能AT1受体可部分抑制氨甲酰胆碱在孤束核诱导的上述变化.

Baclofen对机械分离的大鼠海马锥体细胞GABA-激活电流的抑制作用

在机械分离的海马锥体细胞上,应用全细胞膜片钳技术.证明大多数细胞(88.5%,46/52)对GABA敏感.10-5～10-3mol/L的GABA引起一剂量依赖性、有明显去敏感作用的内向电流.预加3×10-5 mol/L baclofen(GABAB受体的特异性激动剂)30 s后再加GABA,84.8%(39/46)的细胞GABA-激活电流被抑制,其中仅有一个细胞(2.2%,1/46)GABA-激活电流幅值增强,13%(6/46)的细胞GABA-激活电流幅值无变化.预加baclofen后,GABA-激活电流量-效曲线明显下移.预加baclofen前后IGABA量效曲线的Kd值非常接近(1.0X10-4 vs1.4×10-4mol/L).经saclofen预处理可消除baclofen对GABA-激活电流的抑制.这与我室以往在外周神经元上的研究结果一致.本文结果不仅证明了GABAA和GABAB受体在海马锥体细胞上的共存,而且也证明了GABAB受体激活后对GABAA受体功能抑制这一现象无论在外周或中枢神经系统均具有普遍性.

癫痫发作敏感大鼠T区κ型阿片受体和NR2B表达变化

为探讨前深梨状皮层T区(AT)κ型阿片受体与N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚型(NR2B)表达在红藻氨酸(KA)诱导的癫痫发作敏感性长期增强中的作用.本研究采用颞叶癫痫(KA)模型,制备癫痫发作敏感大鼠,以免疫组化方法检测前深梨状皮层T区κ型阿片受体与NR2B表达变化,并结合行为学观察,与经蝎毒处理后癫痫发作敏感性明显降低的大鼠进行比较.结果显示,与对照组比较,癫痫发作敏感动物前深梨状皮层T区κ型阿片受体与NR2B免疫反应阳性细胞数目均明显减少,染色强度明显降低(P＜o.05),以剂量为100 mg/(kg@d)的蝎毒(SV)给予动物连续灌胃4周,可明显降低其癫痫发作敏感性(P＜0.05),而脑内前深梨状皮层T区κ型阿片受体与NR2B免疫反应活性未见明显变化.以上结果提示:前深梨状皮层T区κ型受体免疫反应活性长期降低很可能是癫痫发作敏感性长期增强的重要原因之一,而NR2B免疫反应活性长期降低可能是一种对脑内神经元过度兴奋的代偿性内源性保护机制.

人神经营养素-4成熟蛋白基因克隆

本研究的目的是克隆人神经营养素-4成熟蛋白基因(mhNT-4)并进行序列分析.应用PCR技术,以正常人血淋巴细胞染色体DNA为模板,扩增出人神经营养素-4(hNT-4)成熟蛋白编码基因.将所得基因片段重组于pGEM-TEasy质粒,筛选得到含人mhNT-4基因的阳性克隆.采用Sanger单链末端终止法测出全部的核苷酸序列.所得到的序列与国外文献所报道的结果(GenBank,M86528)完全相同.mhNT-4成熟蛋白基因的成功克隆,为研究其在原核细胞中的表达提供了有利条件.本文结果也提示不同人种间及不同个体间hNT-4成熟蛋白基因是相对保守的.

人参银杏复方制剂对缺氧复氧后大鼠海马CA1区NOS表达的影响

本文旨在观察预防性应用人参银杏复方制剂对缺氧24 h,复氧0、24、72 h时段海马CA1区锥体细胞层神经元Nissl染色变化及海马CA1区一氧化氮合酶(NOS)阳性细胞变化的影响.应用低压氧舱仿海拔8000米高空缺氧模型,以Nissl染色及还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学方法并结合图像分析等技术进行研究.结果表明:人参银杏复方制剂能防止缺氧24 h、复氧72 h海马CA1区锥体细胞层神经元的丢失,并能减少缺氧24 h、复氧0、24、72 h时段NOS阳性细胞数量.本研究结果提示:人参银杏复方制剂对缺氧复氧后海马CA1区神经元具有保护作用,其保护作用可能与抑制缺氧复氧后海马CA1区NOS表达有关.

黄体酮对戊四唑致痫大鼠海马内GABA能神经元影响的形态学研究

本实验采用免疫组织化学方法,研究了黄体酮对戊四唑(PTZ)致痫大鼠的发作情况和海马内γ-氨基丁酸(GABA)能神经元的影响,旨在从形态学角度探讨黄体酮对抗癫痫作用的可能机制.实验中采用成年去卵巢(OVX)雌性SD大鼠,随机分成空白对照、实验对照和实验给药3组.空白对照组和实验对照组经腹腔注射生理盐水(NS),实验给药组经腹腔注射黄体酮,每天一次.3 d后,空白对照组经腹腔注射NS,实验对照和实验给药组经腹腔注射PTZ致痫.注射PTZ 1 h后,灌流固定,取脑,做振动切片.取含背侧海马的脑片,ABC法免疫组化染色.图象分析计数海马齿状回门区内GABA免疫阳性细胞数.结果;(1)实验给药组大鼠均未出现癫痫发作;(2)三组间齿状回门区内GABA免疫阳性细胞数存在显著差异(P＜0.01);实验给药组的GABA免疫阳性细胞数明显增加(P＜0.05).结果显示,黄体酮可对抗PTZ致痫的行为发作和门区GABA能中间神经元的损伤,并提示黄体酮可能具有增强GABA能系统的作用.

LPS对大鼠下丘脑视上核nNOS和c-fos表达的影响

为探讨下丘脑视上核(SON)在神经免疫调节中的作用,本实验应用免疫组化技术观察了腹腔注射脂多糖(LPS)后大鼠下丘脑视上核nNOS和c-fos表达的变化.结果表明:LPS可使大鼠视上核内nNOS和c-fos阳性细胞的OD值显著增高,且视上核内部分神经元可同时表达nNOS和c-fos.结果提示,视上核可能为免疫调节的高级整合中枢之一,可能通过NO和/或c-fos途径调节免疫功能.

Nogo受体(N-20)在大鼠视神经损伤后视网膜的表达

观察Nogo受体(NgR)在Wistar大鼠视神经(ON)损伤后视网膜各层的表达变化及分布规律,为Nogo蛋白抑制中枢神经再生的理论提供形态学依据.本实验各组动物均采用眶内眼球后2 mm ON切断术,术后动物分别存活3 d和7 d后取视网膜固定、冰冻后做水平切片,用免疫组织化学的方法观察NgR的表达情况.结果显示:NgR在正常对照组视网膜内3层有表达;在切断ON后实验各组有强烈表达;各组在损伤ON和移植神经组织后存活3 d时也有强烈表达,至7 d时表达有所下降.以上结果表明:NgR在大鼠ON损伤后视网膜的表达位于节细胞层、神经纤维层和内网层;其表达程度与移植物的种类有关,并可随存活时间的延长而下降.

雌二醇对去卵巢大鼠下丘脑5-HT1A和5-HT2A受体亚型mRNA表达的影响

观察17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对去卵巢大鼠下丘脑5-HT1A和5-HT2A受体mRNA表达的影响的时间效应.实验动物分为假去卵巢对照组(OVX+S组)和去卵巢组(OVX).去卵巢组大鼠又分为雌激素处理组(OVX+E+组)和无雌激素处理组(OVX+E-组),分别在处理后3、6、9和12 d时,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法观察5-HT1A和5-HT2A受体mR-NA在大鼠下丘脑的表达.结果显示:5-HT1A和5-HT2A受体mRNA在所有大鼠下丘脑均有表达;5-HT1A受体mRNA在3、6和9 d的OVX+E-组大鼠下丘脑的表达水平明显高于同时间点的OVX-E+组,而5-HT2A受体mRNA在6、9和12 d的OVX+E-组下丘脑的表达量也显著高于同时间点的OVX+E+组.本文结果表明去卵巢后大鼠下丘脑5-HT1A和5-HT2A受体亚型mRNA7表达水平升高,17β-雌二醇可下调两种受体的表达.

骨髓基质细胞与神经性疾病的治疗

骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)又名成纤维细胞样克隆形成单位(fibroblast colony-forming units,CFU-F)、间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)、间质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPCs).本文统一用BMSCs这一概念,重点对BMSCs的生物学特性及其神经损伤修复作用进行综述.

背索核的研究进展

背索核(DCN)由薄束核(NG)和楔束核(NC)两部分组成,传统上认为DCN属于躯体感觉核,负责机体的精细触觉和本体感觉.近年来,大量的研究资料以及临床治疗学的经验对此观念提出修正:DCN不仅是躯体感觉核,还是重要的内脏感觉核,即该核为躯体内脏信息的整合中枢.除此之外,离体与在体相结合的研究以及膜片钳、分子生物学等新技术的广泛应用也加深并拓宽了我们对DCN功能的认识.

全麻药的分子和细胞机制

传统的观点认为,全麻药是通过破坏神经膜脂质部分的"单一"机制起作用的,但是现有证据表明,全麻药是直接与蛋白质结合而起效的,不同的麻醉剂有不同的靶位,并能通过不同途径作用于中枢神经系统,包括大脑皮质、海马、丘脑、脑干和脊髓,产生同一效果-麻醉[1].自创用"麻醉"一词起,麻醉的定义有过数次的变迁和争议,1993年Kissin提出:麻醉的两个主要目标是催眠和阻断躯体对伤害性刺激的运动反应[2].虽然全麻药确切的作用位点仍有争议,但脊髓无疑是产生麻醉作用的重要部位之一,因为以往的大量研究结果提示,挥发性麻醉剂如氟烷、恩氟醚和异氟醚等,静脉麻醉剂如巴比妥类、异丙酚和乙咪酯等,不仅能镇静、催眠,并且兼具一定的镇痛作用,而脊髓可能是其发挥镇痛作用的主要位点[3-5].本文旨在从以下几方面综述全麻药分子和细胞机制的研究现状,并结合这些可能的作用靶位在脊髓的分布阐述其脊髓作用.

ATP及其P2X受体在疼痛机制中的作用

目前,ATP已被认为是中枢和外周神经系统的协同递质或调质.其受体根据分子结构和信号传导机制分为两类:离子通道型P2X受体和代谢型P2Y受体.近年来的研究显示,ATP及其P2X受体(主要是P2X3)可能在伤害性信息传递上具有重要作用.本文将首先介绍P2X受体在神经系统中的研究近况,然后讨论ATP及其受体P2X(主要是P2X3)在疼痛发生机制中的作用.

膜片钳技术在神经干细胞领域的研究现状及应用展望

膜片钳技术(patch-clamp technique)是1976年由Nehetr和Sakmann在电压钳的基础上发展而来的一种记录细胞膜离子通道电生理活动的技术.其突出优点是能够在维持细胞兴奋过程中膜电位恒定的同时,直接记录离子通道电流,反映单一的(或多个的)离子通道分子活动.此技术的出现将细胞水平和分子水平的生理学研究联系在一起,同时又将神经科学的不同领域融汇成一体,是对生理科学和神经科学研究的重大变革.

R.Granit在1963年诺贝尔生理/医学奖授奖仪式上的讲话