代谢型谷氨酸受体I组在成年大鼠脑的神经生发区SVZ的表达

成年哺乳动物侧脑室外侧壁的脑室下带(SVZ)具有持续性的神经生发功能.但其受哪些物质调节还不清楚.本研究采用原位杂交和免疫组织化学方法,显示了代谢型谷氨酸受体1组的mGluRl和mGluR5在SVZ及其邻近室管膜细胞有明显表达,mGluR5还在侧脑室内侧壁室管膜细胞表达.本研究结果提示,脑室下带细胞可能受谷氮酸的调节.

肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时p53表达的影响

本研究目的是观察缺氧时肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元p53蛋白表达的影响.从成鼠和胎鼠骨骼肌中提取MDNF.在胎鼠脊髓运动神经元培养第7 d时将其分成对照组和实验组(包括成鼠MDNF组和胎鼠MDNF组),取100 μl MDNF(0.1 μg/ml)加入培养大鼠脊髓运动神经元的培养液中,对照组加入等量的PBS.然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤,缺氧3 d后,应用Nissl染色、原位末端标记、免疫组化方法,对损伤的大鼠脊髓运动神经元进行检测.结果表明:培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧3 d后,经MDNF孵育可使脊髓运动神经元TUNEL、p53表达均较对照组明显减弱,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且胎鼠MDNF的效果更好.提示:大鼠脊髓运动神经元缺氧后可出现神经细胞凋亡,但胎鼠MDNF较成鼠MDNF更能减弱缺氧时脊髓运动神经元p53的表达,抑制缺氧后神经元的死亡.

NGF在成年猴脑的分布

为了解NGF在成年猴脑的分布,采用免疫组化SP法对成年猴脑多个冠状位切片进行免疫组化反应.结果证明,NGF阳性反应神经元主要分布于大脑皮质Ⅲ、V层,小脑Purkinje细胞,海马,齿状回,纹状体,脑干网状结构等处.此外,在黑质、舌下神经核、迷走神经背核、前庭神经核、三叉神经核、疑核、下橄榄核也出现NGF阳性反应.在大脑和脑干还观察到NGF阳性胶质细胞.本实验结果表明,在成年猴脑的多个脑区有NGF表达,提示NGF可能涉及猴脑某些神经元及胶质细胞的生理过程.

大鼠癫痫敏感性增强过程中c-jun与GFAP基因表达的关系

本文利用免疫细胞化学技术研究了海人酸(KA)致大鼠癫痫敏感性长期增强过程中,原癌基因c-jun的表达规律及其与星形胶质细胞增生、星形胶质细胞的标志物-神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)基因表达的关系.一次性给予惊厥剂量(10mg/kg,i.p.)的KA后,海马CA1区出现c-jun的一过性高表达,之后呈持续表达状态直至给予KA后6个月.c-jun的表达明显地早于给予KA 2 d后方开始出现的海马内CAi区锥体细胞层神经元的死亡和C-JUN免疫反应阳性的星形胶质细胞的增生.星形胶质细胞GFAP基因的表达与其细胞内的c-jun表达的时间和部位一致.结果提示,c-jun在癫痫敏感性长期增强过程中持续表达,并可能参与介导神经元死亡和维持星形胶质细胞增生以及调控其细胞内GFAP基因的表达.

p53基因在RA诱导SH-SY5Y细胞分化后低表达

全反式维甲酸(RA)的抑制肿瘤细胞生长和调控细胞分化的作用是一项重要的研究课题.而p53基因是一个重要的肿瘤抑制基因,在RA的作用中是否涉及到p53的作用尚有待阐明.本文用低浓度的RA(10 μmol/L)作用于SH-SY5Y细胞,每2d换一次液,在作用9 d后,用光学显微镜观察SH SY5Y细胞的形态学变化,并提取细胞质总RNA进行RT-PCR反应半定量检测p53基因表达.结果显示,SH-SY5Y细胞经RA诱导后,细胞生出较长的突起,具有神经元的形态;而对照组保持成纤维细胞的形态、无明显的形态学变化.RT-PCR半定量显示,在细胞诱导后,p53基因表达明显下调.本文结果提示,RA的作用可能独立于p53基因途径,p53基因的表达变化可能是继发于RA的作用.

部分背根切断对备用DRG神经元和胶质细胞NGF表达上调的影响

本研究目的在于探讨部分背根切断后备用背根节(DRG)中各类细胞NGF及其mRNA的量变状况.将成年雄猫10只分为正常组、单侧部分背根切断后7天组等2组,每组5只.实验组切除一侧L1～L5,L7～S2DRG,保留L6 DRG为备用根.取正常组一侧和术后7天组手术侧的L6 DRG制成20 μm厚冰冻纵切片,分别用NGF抗体及其cRNA探针进行免疫组织化学及原位杂交反应.观察NGF及其mRNA在DRG各类细胞的分布,测定NGF及其mRNA的光密度值以反映其相对含量.结果表明,在正常组,L6DRG中仅存在少量的NGF及其mRNA阳性神经元,此外,一些胶质细胞也呈阳性反应.在手术组,各类神经元及胶质细胞内NGF及其mRNA的光密度值较正常者显著升高(P＜0.05).结论:部分背根切断导致备用DRG神经元和非神经元表达NGF增多,提示NGF可能有利于促进备用背根生芽.

大鼠脑的神经干细胞的体外培养、增殖和分化

采用无血清培养基分离和培养大鼠脑的神经干细胞,并通过免疫荧光细胞化学技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定.鉴定结果表明,所分离培养的细胞为大鼠神经干细胞,具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖和较长期培养,可经诱导分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞,是进行诱导分化的良好细胞模型.本文讨论了神经干细胞传代培养中应予以注意的问题和对策.

功能性SDF-1受体在非洲爪蟾胚胎发育中的表达研究

本文目的在于探索骨髓基质细胞源因子-1(SDF-1)的功能性受体在非洲爪蟾胚胎发育过程中的表达状况,进而探讨SDF 1在胚胎发育中的作用.采用胚胎细胞分散培养及钙成像技术对不同发育时期及胚胎不同部位的分散培养细胞进行了检测,结果证明:在主要由神经板、神经嵴细胞和基板迁移而来的胚胎头部组织中,其功能性受体表达量远高于背部及尾部组织(P＜0.001),并从胚胎14～2l期呈上升趋势,在2l～35期保持高表达率.结果提示,此功能性受体在胚胎期的表达密度与成体相应区域的器官结构复杂程度呈正相关,说明SDF-1及其受体在爪蟾的生长发育中起作用.

大鼠脑组织中p75基因克隆及其探针制备

为了克隆大鼠p75基因并制备地高辛标记的p75 cDNA探针(dig-p75 cDNA),本研究采用RT-PCR法,从大鼠脑组织mRNA中扩增p75基因mRNA部分片段,克隆入T载体,并经序列测定.以dig-p75 cDNA为探针,采用原位杂交方法观察成年SD大鼠海马组织中p75 mRNA的表达.结果:RT-PCR法扩增出一种特异产物与预期长度386 bp相符,T载体克隆测序与p75基因100%同源.原位杂交结果显示,阳性信号出现在成年大鼠海马组织中.结论:采用RT-PCR和T载体技术获得了大鼠脑组织p75基因克隆,dig p75 cDNA探针原位杂交显示正常SD大鼠海马组织中表达p75 mRNA.

5-HT1受体各亚型mRNAs在大鼠脊髓不同节段背角和腹角的表达

为进一步了解5-HT受体在中枢感觉和运动机能中的作用,本研究利用反转录PCR方法比较了5-HTiA,5-HT1B,5-HT1D,5-HT1E和5 HT1F受体亚型mRNAs在脊髓不同节段的背角、腹角的表达.结果显示:5-HT1A,5-HT1B,5-HTiD受体亚型mRNA的表达水平在胸、腰、骶段脊髓的背角明显高于腹角;而颈段背角内的表达仅略高于腹角.脊髓内未检测到5-HT1E受体亚型;5-HT1F受体亚型在脊髓各节段的背角和腹角都有较高水平的表达.5-HT1受体家族各亚型mRNA在脊髓背角和腹角表达水平的差异可能提示它们在中枢感觉和运动功能中发挥不同的作用.

SchWann细胞表达β1,4半乳糖基转移酶-I对神经元轴突生长的影响

为了探讨周围神经Schwann细胞中不同β1,4半乳糖基转移酶-I(β-1,4-GalT-I)表达水平对神经元轴突生长的影响,本实验首先构建了正、反义β-1,4-GalT-I表达质粒,然后将构建的不同浓度的正、反义表达质粒超表达于分离、纯化的大鼠Schwann细胞,后将转染的Schwann细胞与分离的大鼠背根神经节共培养;根据共培养神经元轴突延伸的数目和面积,分析Schwann细胞中不同β1,4-GalT-I表达水平对神经元轴突生长的影响.结果发现:转染正义β-1,4-GalT-I的Schwann细胞能促进共培养神经节神经元轴突的长出和延伸.在一定的转染浓度内,这种促神经生长作用随转染浓度增大而增强,而转染反义β1,4-GalT-I却有相反的作用.提示周围神经Schwann细胞中表达β-1,4-GalT-I可能在维持正常神经的功能和促进损伤神经的修复发挥重要作用.

RNA剪接因子SC35在大鼠脑内的定位研究

用Wistar系大鼠观察了RNA剪接因子SC35在大鼠脑内的定位状况.采用免疫酶以及免疫电镜技术对RNA剪接因子SC35从组织学分布到超微结构定位进行了系统研究.在光镜水平,SC35或SC35样蛋白免疫阳性细胞广泛存在于大鼠脑内神经元,并且存在核团差异性;SC35或SC35样蛋白免疫阳性物质在脑神经元细胞核内呈斑点状分布.在电镜水平,SC35或SC35样蛋白主要分布在染色质间颗粒簇和染色质周边纤维上,也证明它存在于核仁的致密纤维组分(DFC).

体外培养大鼠皮质神经元兴奋性对Agrin表达的影响

本文目的在于观察体外培养神经元在兴奋性改变状况下其Agrin表达的变化,藉以了解Agrin与神经元发育的关系.采用高钾和低钾培养基培养皮质神经元,用免疫组织化学方法观察这些神经元Agrin表达的变化程度.结果表明,与正常组相比,高钾培养的皮质神经元在形态上无明显改变,神经元胞体的大小、突起的长短都与对照组接近;低钾培养神经元也仍能保持正常的形态,未发现明显的形态改变.免疫细胞化学结果提示,在高钾和低钾培养的皮质神经元中Agrin表达都明显增强,但高钾组的表达程度较低钾组为高.结论:神经元培养液中钾离子浓度所致的神经元活动是影响Agrin表达的重要因素.

Nogo(N-18)在大鼠脑干及小脑分布的免疫组织化学研究

采用免疫组织化学方法(SP法),研究了Nogo(N-18)在大鼠脑干及小脑的分布并探讨其存在的意义.结果表明,Nogo(N-18)在正常大鼠脑干以及小脑的神经核团有广泛的表达,阳性物质很强地表达于神经元的胞核内,神经元胞体、突起内表达较弱.结论:Nogo(N-18)在脑干及小脑的神经核团广泛表达提示其作为一种髓鞘源性神经突生长抑制因子在中枢神经系统中的存在,可能在正常的神经活动中起重要作用.

TNFα刺激的星形胶质细胞条件培养液对海马神经元的兴奋作用

为了探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNFα)刺激的星形胶质细胞对神经元的作用,本研究将体外纯化培养的大鼠海马星形胶质细胞,用反相高效液相法测定TNFα刺激后细胞培养液内谷氨酸的含量;将TNFα刺激后的星形胶质细胞条件培养液(astrocytic conditioned medium,ACM)作用于培养的海马神经元,运用免疫细胞化学方法和图像分析技术研究神经元NF κBp65和谷氨酸的表达.结果表明:(1)TNFα可明显促进星形胶质细胞释放谷氨酸,(2)ACM作用15 min即可诱导神经元NFκBp65的核表达,30 min达高峰,180 min恢复至对照水平,(3)ACM作用60 min可使谷氨酸免疫反应阳性神经元平均光密度明显升高,持续至240 min.提示,TNFα刺激的星形胶质细胞可通过释放谷氨酸等可溶性物质使神经元快速激活、兴奋性升高.

自发性高血压鼠脑底动脉降钙素基因相关肽能神经纤维的分布

应用免疫组织化学ABC法和神经交点计数技术,观察了10只自发性高血压大鼠和l0只正常血压大鼠脑底动脉降钙素基因相关肽(CGRP)能神经纤维的分布.结果证明:在自发性高血压鼠的大脑前动脉、大脑中动脉、大脑后动脉和基底动脉壁上均可见CGRP免疫反应阳性纤维,纤维呈细曲线状,多呈网状走行;与正常血压鼠脑底血管同名动脉比较,其密度明显减少.正常血压鼠脑底血管CGRP能神经纤维多呈环形走行.高血压鼠的CGRP能神经纤维的分布随着高血压的发生而明显减少,提示CGRP能神经纤维的减少与高血压的发生、发展具有一定的关系.

海马CA1区锥体细胞内钙离子释放与突触传递的可塑性

为分析海马CA1区锥体细胞内钙离子释放与突触传递长时程增强以及长时程抑制的关系,采用全细胞膜片钳和细胞内钙成像技术,观察了不同参数的突触前刺激引起大鼠海马锥体细胞内钙离子释放的状况.结果为:100 Hz、50 Hz、20 Hz频率,分别用50、25、15、10、5脉冲的突触前刺激均可引起锥体细胞内钙的释放,10脉冲以上的刺激引起细胞内钙释放的成功率为100%,而5脉冲的刺激引起细胞内钙的释放率为57%.100 Hz 3脉冲的刺激可引起少数锥体细胞内钙释放,而5 Hz各脉冲的刺激均不能引起锥体细胞内钙的释放.结果提示,长时程抑制时细胞内钙的升高并非来自于细胞内钙库的钙释放;引起长时程增强的刺激参数与引起锥体细胞内钙释放的参数相似.本文又分析了两者的异同处.

成年大鼠及猴骨髓基质细胞的体外培养及向神经元的分化诱导

为了探讨成年动物骨髓基质细胞的体外培养和神经元诱导及其不同培养时程对外源基因的转染率,本实验采用直接和间接两种方法分离、培养成年大鼠和猴的骨髓基质细胞.在体外进行神经元诱导,用免疫细胞化学方法进行鉴定;用携带酪氨酸羟化酶基因的逆转录病毒载体转染体外培养第1～10代大鼠骨髓基质细胞,经免疫细胞化学鉴定并计算转染率.结果显示,成年大鼠和猴骨髓基质细胞以未分化状态至少可持续培养20余代,部分细胞表达干细胞的标志蛋白nestln,经BrdU孵育后呈BrdU抗体免疫阳性;经诱导后细胞具有典型的神经元形态,表达神经元的特异性蛋白NeuN;培养第3代至6代的骨髓基质细胞对外源性基因的转染效率较其他时程明显增高.实验结果说明,骨髓基质细胞可以在体外培养并被诱导成为神经元,它还可携带外源性治疗基因.

脑源性神经营养因子与脊髓损伤

Spinal cord injury (SCI) is such a serious disease that it would bring heavy burdens of both health and economy to the victims as well as the society.

GDNF的研究进展

1993年Lin等从大鼠B49胶质细胞系中分离、纯化并成功克隆了一种新的神经营养因子即胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derlved neurotrophic factor,GDNF).初,因其对多巴胺能神经元具有特异性营养活性而被广泛重视.

轴突生长诱向因子(Netrin)基因家族研究进展

在神经系统发育过程中,神经与其靶细胞之间精确联系的形成是依靠多种细胞外诱向因子介导实现的.这些因子通过作用于轴突生长锥上的相应受体而诱导或排斥轴突生长,从而决定了轴突的生长路线以及轴突与特定靶细胞的功能联系.

环氧合酶及其在病理性痛中的作用

环氧合酶(Cyclooxygenase,COX)是以花生四烯酸为底物生成前列腺素(prostaglandins,PGs)途径中的关键酶.花生四烯酸是细胞膜上的卵磷脂,在磷脂酶A 2(phospholipaseA2,PLA 2)或磷脂酶C(phosphollpase C,PLC)作用下生成,其代谢途径如图1所示.

Adrian的生平简介

Adrian在获诺贝尔奖时的讲演

神经科学历史人物传略连载(四)

三代神经科学工作者的共同心声