APP17肽和救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马PP-1表达的影响

为探讨 APP17肽及救脑益智胶囊水提液对D半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1(PP-1)表达的影响.本研究将昆明小鼠随机分为5组:正常对照组、D半乳糖对照组、APP1 7肽治疗组、小剂量中药治疗组、大剂量中药治疗组,每组动物8只.用D半乳糖制备脑老化模型,并皮F注射APP1 7肽或救脑益智胶囊水提液灌胃对D半乳糖脑老化小鼠进行治疗,3个月后取脑组织做PP-1免疫组织化学染色.结果显示:D-半乳糖小鼠和大剂量救脑益智胶囊水提液治疗组小鼠海马PP 1阳性细胞数目少,染色淡;而正常小鼠、APP17肽保护和救脑益智胶囊水提液小剂量治疗的D半乳糖小鼠海马阳性反应神经元数目多,胞浆与突起深染.结果提示:抑制凋亡的PP 1在D-半乳糖小鼠海马表达降低.APP1 7肽和小剂量救脑益智胶囊水提液治疗能影响D半乳糖脑病小鼠脑内PP-1的表达,使之接近正常.而大剂量救脑益智胶囊水提液治疗无此作用.

RAM 7,一种新的核蛋白分子在小鼠中枢神经系统的表达

Notch信号途径参与动物多种组织和器官尤其是神经系统的发育调节.RBP-Jk是Notch信号途径中的关键分子,RAM7是近年通过酵母双杂交技术发现的与RBP Jk相互作用的蛋白.本实验表达RAM7 C-末端60 kD的多肽片段,并制备特异性的多克隆抗体.检测RAM7在小鼠中枢神经系统的分布.结果显示:RAM7主要呈细胞核染色,在中枢神经系统中广泛分布;尾壳核、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、室周核等核团内没有RAM7阳性神经元.但存在着一定数量的RAM7阳性神经纤维;另有相当多RAM7胞浆染色的细胞和神经元以及一些胶质细胞,局限在脑室和脑室周围的神经组织中.RAM7分子的分布对其可能的生理功能有一定的提示作用.

IL-6受体的多抗制备及其在正常大鼠脑内的分布

IL6是神经免疫通讯的主要信息分子之一,获得其受体的抗体并研究该受体在脑内的分布对探讨IL-6在脑内的功能是重要的基础工作.本研究用原核表达的大鼠IL6受体(IL-6R)蛋白免疫新西兰大白兔制备了其多克隆抗体,经ELISA、Western blot和免疫细胞化学染色等疗法进行了鉴定,并且将之用于免疫组织化学染色,观察了IL6R在正常成年大鼠脑内的表达.结果表明:所获得的IL-6R多抗具有较高的效价、特异性和亲和力;IL-6R在脑内的分布广泛,其中大脑皮质的颗粒细胞层和锥体细胞层、外侧隔核、海马、齿状;回、下丘脑视上核、弓状核、小脑Purkmje细胞以及延髓后区都有浓染的IL6R阳性细胞;纹状体、下丘脑视前区、丘脑背侧核群、下丘脑室旁核、中脑导水管周围灰质和蓝斑等部位染色较淡;另外,胼胝体、视束和海马伞等白质内有许多胶质细胞也呈现IL6R阳性染色.本文观察到的IL6R在脑内的广泛分布表明,IL-6在中枢神经系统内可能具有重要的神经生物学意义.

神经原性因素对小鼠比目鱼肌胞吞作用的影响

本文报道用辣根过氧化物酶(HRP)酶标生化方法探讨神经原性因素对小鼠比目鱼肌胞吞作用的影响及其与肌萎缩的关系.坐骨神经鞘内注射秋水仙索诱发比目鱼肌去神经样改变,再用脑提取液处理秋水仙素小鼠比目鱼肌;用河豚毒素(TTX)毛细管埋藏坐骨神经鞘内;另将变性神经提取液注入正常及人工冬眠小鼠的比目鱼肌间隙.测定比目鱼肌HRP摄取的相对含量及肌肉湿重和总蛋白量.结果表明,脑提取液可完全消除秋水仙索引起的胞吞摄取增加和肌肉湿重及总蛋白量的减少.河豚毒素比秋水仙素对肌肉的去神经样影响要小,变性神经提取液对正常及人工冬眠小鼠的肌肉胞吞摄取明显增强,但肌肉湿重及总蛋白量无显著改变,提示在生理情况下,脑源性神经营养性生物大分子是维持肌肉胞吞稳态的首要因素,正常神经支配的肌肉,变性神经产物显著诱导胞吞增强,但片不引起肌萎缩.

cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在单眼剥夺弱视大鼠视皮层中的表达研究

目前已对突触可塑性的基本特性有了相当程度的认识,但对其发育中神经元可塑性的内在分子机制尚待进一步阐明.不少研究提示,cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在学习、记忆和长时程增强(LTP)过程中参与长时程突触的可塑性调节,推测其在视觉系统可塑性中也发挥着重要作用.本研究通过建立幼年大鼠单眼剥夺弱视模型,应用免疫组织化学方法,对视觉发育关键期末(P45)大鼠和成年(P90)大鼠视皮层中CREB和pCREB的免疫反应性进行观察、比较和分析.结果:视觉发育关键期内进行单眼视觉剥夺对大鼠视皮层内总CREB的蛋白表达没有产生显著影响,而pCREB在P45大鼠的剥夺眼对侧视皮层单眼反应区的Ⅱ/m、Ⅳ层中的蛋白表达较剥夺眼同侧视皮层的相应区域弱,该差异在该年龄大鼠的双眼反应区及成年后大鼠视皮层内不存在.结论:CREB可能通过该磷酸化形式在视觉系统可塑性中发挥作用.

β-淀粉样蛋白诱导大鼠行为学改变及星形胶质细胞变化

为了探讨不同剂量β-淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25一35)诱导老年性痴呆(AD)大鼠动物模型中星形胶质细胞变化与大鼠行为学改变之间的关系,在大鼠双侧海马内注射不同剂量Aβ25 35(2.5、5、10和20 μg)制作大鼠AD模型,注射一周后采用胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色、NOS组化染色及NOS组化和GFAP双重染色分析大鼠海马GFAP与NOS的表达.结果发现海马内注射Aβ2-35剂量≥10μg时,模型组大鼠出现学习记忆减退,海马星形胶质细胞增生、肥大,数目明显多于对照组(P＜0.05);海马NOS阳性神经元数较对照组显著减少(P＜0.05);并出现NOS阳性星形胶质细胞.结论:星形胶质细胞参与Aβ神经毒性导致NOS阳性神经元损伤,间接导致大鼠学习记忆能力下降,在AD模型大鼠早期学习记忆功能减退中起重要作用.

cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在正常发育大鼠视皮层的表达研究

正常视觉信息输入对初期视皮层的发育和修饰至关重要.视觉发育的特点是存在一个关键期,在此期内控制信息输入将导致皮质联系的显著变化.转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在多种有机体的信号传导通路中的枢纽作用和其参与长时程突触可塑性的生理活动提示,它可能参与了在视皮层发育中发挥重要作用的分子机制.本研究应用免疫组织化学方法和Western blot技术,对P14、P22、P30、P45和P90年龄组Sprague Dawley大鼠视皮层内CREB的免疫反应性进行观察和分析.结果证明,CREB在视皮层各层内的蛋白表达时程与视觉发育的关键期一致,其免疫反应性在P22至P45期间达到高水平,成年后的蛋白表达出现下调.结论:视觉可塑性降低的同时存在CREB表达的显著改变,但该蛋白表达改变与突触传递和可塑性的关系尚待阐明.

慢性复合应激对大鼠学习与记忆及海马NMDA受体亚基NR2A和NR2B表达的影响

为了观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和海马内NMDA受体亚基NR2A、NR2B表达的变化.本研究将成年雄性Wistar大鼠分为实验组和对照组,实验组动物每天交替暴露于复合应激原环境中达6周,用Morris水迷宫和Y迷宫作业测试其空间学习与记忆成绩,再采用免疫组织化学和图像处理方法分析海马CAl、CA3、齿状回区的NR2A和NR2B的表达.结果显示:(1)Morris水迷宫测试:慢性复合应激组大鼠寻找平台的潜伏期较对照组明显缩短,Y迷宫测试:慢性复合应激组大鼠学会躲避电击的正确次数较对照组明显增多;(2)慢性复合应激组海马内NMDA受体亚基NR2B表达水平较对照组明显上调,NR2A表达水平无显著变化.结论:慢性复合应激可增强学习与记忆能力,NMDA受体表达变化可能是影响学习与记忆的机制之一.

N-糖链合成相关β-1,4-半乳糖基转移酶在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化

为了分析与N糖链合成相关β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ(β-1,4 galactosyltransferase Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ,β-1,4 GalT-I,Ⅱ,Ⅴ)mRNA在正常和损伤坐骨神经组织的表达变化.本研究采用RT-PCR方法,分析β-l,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在小鼠坐骨神经中的表达存在.以扩增的cDNA片断标记探针,Northern blot分析β-l,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ mRNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的表达变化.结果表明:通过RT-PCR方法,检测到β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在小鼠坐骨神经中的表达存在;采用Northern blot方法,发现β-1,4GalTⅠ、Ⅱ、Ⅴ在正常大鼠坐骨神经中有表达,并在坐骨神经损伤后发生表达变化,但三种同功酶的表达变化各不相同.结论:本实验发现β-1,4 GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在坐骨神经有表达,并在坐骨神经损伤后发生表达变化.提示与N-糖链合成相关的蛋白修饰调节在周围神经损伤后再生和退变过程中可能发挥一定的作用.

人胚脑神经干细胞的分离培养、克隆和分化

探讨从人胚脑分离培养的神经干细胞在增殖和分化方面的生物学特点.用无血清培养技术从4月龄人胎中脑组织中分离培养出神经干细胞.用有限稀释法获得单细胞克隆球.消化后用含BrdU的培养液培养,待形成神经干细胞球后,进行BrdU和nestin免疫荧光检测.取第4代神经干细胞球用含10%FBS的培养液诱导分化,3周后分别进行神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞特异性标记物MAP-2(FAP和CNP免疫荧光检测.结果显示,单细胞悬液培养2周后可形成神经干细胞球;神经球Br-dU和nestii免疫荧光检测均呈阳性;神经干细胞分化后呈MAP-2、GFAP和CNP阳性的三种类型细胞,但分化的神经元数量较少、胞体较小、突起较少.提示从人胚中脑组织中分离得到的神经下细胞具有增殖和自我更新能力,并具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的多分化潜能;与啮齿类动物相比,人神经于细胞增殖速度较慢,分化的神经元较少且稍欠成熟.

逆转录病毒载体ex vivo途径表达TH和GDNF基因

为了通过逆转录病毒载体ex vivo途径高效表达TH和GDNF基因.本实验构建有TH和GDNF基因的重组逆转录病毒载体pLHCX/TH和pLNCX2/(DNF,分别转染包装细胞PA317和PT67中;经筛选、RT-PCR、免疫组化等鉴定得到产毒细胞PA317/TH和PT67/GDNF.培养COS 7细胞,以两种产毒细胞的上清分别感染COS-7细胞,筛选后,免疫组化、原位杂交检测基因的表达量,将基因改造的细胞移植到大鼠纹状体内,免疫组化检测体内移植的TH、GDNF基因的表达.结果表明:TH和GDNF基因可在靶细胞表达,且筛选后基因表达阳性细胞显著增加;TH阳性率达50%,GDNF阳性率达70%.在体内实验中,可以观察到这两种外源基因可同时在大鼠脑内移植区表达.以上结果提示,TH和GDNF基因改造细胞,可通过ex vivo途径在脑内移植区高效表达.这一实验结果将对Parkinson病复合性基因治疗提供依据.

APP17肽对IRS-1在糖尿病小鼠脑内分布的影响

为了观察APP17肽对糖尿病小鼠胰岛素受体底物1(IRS-1的影响,本研究用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射APP17肽(β淀粉样肽前体蛋白319～335)给予治疗,4周后取脑组织进行IRS-1免疫组化染色.结果显示,糖尿病组IRS-1阳性反应细胞广泛分布于皮层、海马、丘脑、下丘脑等部位,而正常对照组及APP1 7肽治疗组仅在皮层、海马见有阳性反应细胞,且着色淡.以上结果表明:糖尿病小鼠脑内多个区域的神经元存在较多的IRS-1阳性细胞,APP1 7肽能使IRS-1阳性反应细胞出现的部位和数量正常化,从而改善糖尿病小鼠海马神经元的退行性变.

免疫磁珠体外纯化人胎脑中CD133阳性干细胞的实验研究

为了探讨免疫磁珠体外纯化人胎儿脑内CD133阳性细胞的可行性,本研究取人胎儿脑室下区并制备单细胞悬液,采用磁珠分选法选择CD133阳性细胞群,台盼蓝染色观察活力并采用流式细胞仪鉴定纯化前后CD133的阳性表达率.结果显示,分选后所得细胞纯度为(85.57±1.66)%,回收率为(62.3±18)%,纯化前后细胞活力无显著性差异(P＞0.05).结论:联合应用CD133表面标志及免疫磁珠分选系统可有效地从人胎儿脑组织中直接分离得到高纯度的CD133阳性干细胞,细胞活力不受影响.

小鼠杏仁内侧核中白细胞介素1β的表达调控依赖于雌激素受体α

研究雌激素受体(ER)敲除小鼠脑内，ERa和ERβ在介导内侧杏仁核中白细胞介素1β(IL-1β)表达的作用。IL-1β表达有显著的性别差异，并且在ER敲除小鼠含量减少。细菌脂多糖(LPS)或卵巢切除能够促进野生型和ERβ敲除小鼠(BERKO)IL-1β表达，但对ERa敲除小鼠(ERKO)无作用。相似的是.外源性雌激素能抑制野生型和BERKO小鼠IL-1β表达，后者时间稍有延搁，但对ERKO IL-1β表达没有影响。结果表明，ERα是内侧杏仁核IL1β表达调节的重要机制，提示ERs可作为选择性靶基因治疗和预防神经功能失常。

CGRP和NGF对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质 Caspase-3蛋白表达的影响

为了探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质Caspase-3蛋白表达的影响,在全脑缺血后再灌注模型上,应用免疫组织化学结合显微图象分析方法检测了Caspase 3蛋白表达.结果发现,假手术组大鼠纹皮质未见Caspase-3表达;缺血组较假手术组Caspase-3表达显著增加(P＜0.01);CGRP组和NG组Caspasc-3表达均弱于缺血组(P＜005);CGRP和NGF合用组Caspase-3表达明显弱于缺血组(P＜00.01).分别弱于CGRP组(P＜0.05)和 NGF组(P＜0.005).缺血组缺血后再灌注3hCaspase-3开始表达.1 d达高峰.31时减弱.CGRP和NGF合用组Caspase-3表达随着缺血后再灌注时间的延长而逐渐减弱.以上结果提示:CGRP和NGF分别抑制全脑缺血后大鼠纹皮质Caspase3蛋白表达,联合应用州能显著抑制全脑缺血后大鼠纹皮质Caspase-3蛋白表达.二暂对保护缺血神经元可能有协同作用.

OTSUKA-LONG-EVANS-TOKUSHIMA FATTY 糖尿病大鼠周围神经的结构蛋白改变

为了解Otsuka-Long Evans-Tokushima Fatty(OLETF)糖尿病大鼠周围神经的结构蛋白改变,使用OLETF大鼠10只/Long Evans-Tokushima Otsuka(LETO对照大鼠6只,于糖尿病发病后6个月取坐骨神经,制成冰冻切片和单纤维贴片,进行神经结构蛋白的免疫组织化学染色.在光镜下观察到OLETF大鼠周围神经部分区域有结构异常.轴索结构中,Ranvier结区的钠离子通道蛋白密度降低并向结旁区移位,近结旁段的钾离子通道蛋白(Kv1.1)向Ranvier结区和节间段弥散,神经丝着色浅淡且不均匀.髓鞘结构中,结旁段的髓鞘相关糖蛋白着色不均匀并向节间段弥散,致密髓鞘层的髓鞘碱性蛋白和Schwann细胞表面的半乳糖脑苷脂基本正常.上述结果提示Ranvier结区的轴膜和结旁段的髓鞘是OLETF糖尿病大鼠周围神经的起始损害位点.

Neurturin和NGF对老年性痴呆模型鼠海马突触素表达的影响

为了探讨联合应用Neurturin和神经生长因子对老年性痴呆模型鼠海马突触素的影响,本研究采用切断成年SD大鼠左侧穹窿海马伞,建立隔海马胆碱能系统损害的痴呆模型,损伤4周后.用免疫组化和图象分析技术等方法对大鼠海马突触素进行定量分析.结果显示,损伤对照组损伤侧海马CA1区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素含量分别减少子42.60%、46.04%、57.36%和55.22%,损伤对照组与正常对照组之间有高度显著性差异(P＜0.01);NGF治疗组损伤侧海马CA1区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素含量分别只减少了33.64%、38.25%、38.42%和27.64%,NGF治疗组与损伤对照组之间有显著性差异(P＜0.05);联合治疗组损伤侧海马CA1区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素含量分别只减少了9.97%、8.05%、14.70%和4.28%,联合治疗组与损伤对照组之间有高度显著性差异(P＜0.01).结论:联合应用neurturin和NGF促使老年性痴呆模型鼠海马突触素含量增多的效果较单用NGF治疗好.

细胞因子信号转导抑制蛋白SOCS-3在成年大鼠脑内的基础表达

采用免疫组织化学方法,探讨细胞因子信号转导途径抑制蛋白SOCS-3在大鼠脑内的基础表达与细胞定位.结果显示:SOCS-3免疫阳性细胞在脑内分布广泛,阳性产物主要分布在神经元核内;部分神经元的胞浆、神经纤维、胶质细胞及血管内皮细胞也呈SOCS 3免疫阳性.结果表明:SOCS-3蛋白在脑内具有广泛的基础表达,并且以核蛋白为主要存在方式.

Nogo-A蛋白的研究进展

目前已确认的中枢神经髓鞘来源的抑制因子至少有以下三种:Nogo-A、髓鞘相关性糖蛋白(MAG)和少突胶质细胞蛋白多糖(OMgp)[1].1988年,Caroni等[2]分离大鼠CNS髓磷脂蛋白,获得两种对神经突生长具有强烈抑制作用的蛋白,分子量分别为35 kD和250 kD,命名为神经突生长抑制因子(neurite growth inhibitor,NI).这两种蛋白分别被称为NI35/NI250.1998年Spillmann等[3]从牛脊髓中提取纯化相当于大鼠NI250的牛的同源物bNI220,两者即Nogo-A.

辣椒素受体VR1在局部炎症状态下的敏化机制

疼痛作为炎症四大主征(红、肿、热、痛)之一,一直受到研究者的重视,辣椒素受体VR1(vanilloid receptor 1)由于其特异地表达和分布于外周伤害性感受器而倍受关注.VR1是TRPV(vanilloid family of transient receptor potential)家族的成员,国际标准命名为TRPV1,主要表达于辣椒素敏感的中、小型DRG(dorsal root ganglion)神经元,属伤害性热敏非选择性阳离子通道,能被伤害性热刺激(＞43 C)、酸性pH值(pH＜5.9,室温)和生物碱性刺激物辣椒素激活[1,2],很可能参与介导外周局部炎症时伤害性初级传人纤维的敏化过程,进而在自发痛、痛敏、异常痛敏的诱导和持续慢性化过程中起重要作用.随着分子生物学技术的快速发展及其与膜片钳全细胞记录技术、免疫荧光检测技术的完美结合,VR1在局部炎症时敏化机制的分子生物学基础已逐步被认识.

成年齿状回神经生发影响因素的研究进展

三十多年前,Altman等[1]首次报道成年海马存在神经生发,近年来的研究证实了这一现象.目前认为,成年齿状回(DG)的神经前体细胞主要产生于颗粒细胞层(gcl)的边缘即颗粒细胞下区(SGZ),并分化为神经元和神经胶质细胞,终迁移人gcl[2].本文就调节或影响着DG新生细胞产生与存活的众多因素(激素、神经递质、生长因子、环境)作一综述.

神经科学历史人物传略连载(八)

John Carew Eccles在获诺贝尔奖时的讲演