一种用于推算感染时间曲线的非参数极大似然估计方法

目的:研究通过传染病发病时间曲线推算感染时间曲线的方法.方法:采用基于EMS算法的非参数极大似然估计方法,根据传染病的发病资料和潜伏期资料推算感染时间曲线,并用于中国内地SARS感染时间曲线推算.结果:通过Mat-lab编程,所采用的方法可以方便地估计出感染时间曲线,并可平滑个体数据的波动.用于推算中国内地SARS感染时间曲线,发现感染时间曲线平滑稳定,有明显的2个高峰,感染高峰与实际发病高峰间隔5 d左右;发病人数(4 634例)与估计的感染人数(4 633.6例)相差在0.5例以内.结论:基于EMS算法的非参数极大似然估计方法对于感染时间曲线的估计是可靠的,可以用于SARS感染时间曲线的推算.所推算的感染时间曲线有助于干预措施效果评价.

HCV RNA含量与肝脏组织病理学损伤之间的关系

目的:探讨丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA含量和ALT浓度与肝脏组织病理学损伤之间的关系.方法:应用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测681例HCV感染患者血清HCV RNA,电化学发光分析技术检测HBsAg,ELISA检测抗HAV IgM、抗HCV IgG和抗HEV IgM,Bayer全自动生化分析仪检测ALT浓度.H-E染色,光学显微镜观察组织病理损伤程度.结果:681例血清标本中,HCV RNA和抗HCV抗体均阳性和均阴性者分别是150例和420例,HCV抗体阴性而HCV RNA阳性40例,HCV RNA阴性而HCV抗体阳性71例.在排除了甲型、乙型和戊型肝炎病毒感染后,190例HCVRNA阳性患者中,36例患者在HCV RNA检测前后7 d内,曾进行过肝脏组织病理学检测,轻度、中度和重度肝脏病理学损伤患者血清中,HCV RNA浓度及ALT浓度相差均不显著.结论:血清学标志物和病毒核酸都是监测HCV感染的重要指标.HCV RNA浓度、血清ALT浓度与肝脏病理损伤相关性不显著,HCV RNA水平不能反映肝脏病理损伤程度.

TGF-β1启动子基因多态性与中国人自身免疫性肝病的相关性研究

目的:探讨TGF-β1启动子基因多态性与中国人自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)、原发性胆汁性肝硬化(pri-mary biliary cirrhosis,PBC)发病的相关性.方法:采用序列特异性引物PCR(PCR with sequence-specific primers,PCR-SSP)分析44例AIH、95例PBC患者外周血单核细胞基因组DNA TGF-β1启动子-988、-800、-509基因多态性,并与220例正常人比较.结果:PBC组C-988A中CC(88.4%)低于对照组(95.5%)、CA(11.6%)高于对照组(4.0%)(P＜0.05);C-509T中,C(43.2%)明显下降、T(56.8%)明显升高,CT降低、TT升高(P＜0.05);联合分析-988～-800基因表型C-G/A-G(11.6%)显著高于对照组(4.1%)(P＜0.05).AIH组C-988A多态性C(90.9%)下降而A(9.1%)上升,CC降低,CA、AA上升(P＜0.05);其-988～-800基因单体型C-G89.8%降低、A-G(8.9%)升高(P＜0.05);-988～-800基因表型C-G/C-G降低而C-G/A-G(13.6%)显著高于对照组(P＜0.05).结论:PBC、AIH与-988位点、-509位点多态性相关,且与-988～-800的基因表型相关;其作用机制可能均是通过干扰机体正常的免疫调节功能,致使机体对自身抗原的免疫耐受能力降低或丧失.

甲状旁腺激素对慢性肾衰血透患者残余肾功能的作用

目的:探讨甲状旁腺激素(iPTH)对慢性肾衰血透患者残余肾功能(RRF)影响及影响机制.方法:回顾性分析120例慢性肾衰维持性血透患者iPTH及其同期RRF(Ccr)、血压、血钙、血磷、钙磷乘积、三酰甘油、胆固醇、左心室心肌质量指数之间的相关性.结果:120例患者中95.9%(115/120)存在继发性甲旁亢.高iPTH血症患者较非高iPTH血症患者Ccr明显下降(P＜0.05).iPTH与收缩压、舒张压、钙磷乘积、三酰甘油、左心室心肌质量指数呈正相关,与内生肌酐清除率、KT/V呈负相关;RRF与KT/V呈正相关,与收缩压、舒张压、三酰甘油、胆固醇、血钙、血磷、钙磷乘积、左心室心肌质量指数呈负相关.结论:维持性血透患者常伴iPTH升高,iPTH可通过影响钙磷、脂质代谢、血压等加剧RRF损害,导致RRF下降.

部分细胞因子基因多态性与自身免疫性肝炎的相关性研究

目的:探讨IL-1、IL-6、IL-10基因多态性与中国人自身免疫性肝炎(AIH)发病的相关性.方法:采用限制性片段长度多态性分析法(RFLP-PCR)和序列特异性引物PCR(SSP-PCR)分析62例AIH患者及160例健康对照外周血单核细胞基因组DNA IL-1(+3953)、IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)、IL-6启动子(-174)、IL-10启动子(-592、-819、-1082)基因多态性,并进行对比分析.结果:在所分析的基因多态性位点中,AIH组的等位基因频率分布与正常对照组均无统计学差异.结论:IL-1B、IL-1RN和IL-6、IL-10启动子基因多态性可能与中国人发生AIH的易感性无关.

细胞外基质蛋白1在肿瘤中的表达及意义

目的:探讨细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)在肿瘤组织中的表达及意义.方法:应用免疫组织化学EnVision法,检测肝脏、乳腺、直肠组织(正常组织和肿瘤组织)中ECM1的表达,比较正常组织和肿瘤组织淋巴结转移肿瘤和淋巴结未转移肿瘤之间的ECM1表达差异.结果:ECM1的表达如下:正常肝组织阳性率20.0%(4/20),肝癌组织阳性率85.4%(70/82);正常乳腺组织阳性率9.1%(1/11),乳腺癌组织阳性率60.0%(18/30),其中淋巴结(-)者为37.5%(6/16),淋巴结(+)者为85.7%(12/14);正常直肠组织阳性率11.8%(2/17),直肠癌组织阳性率54.5%(18/33),其中淋巴结(-)者为33.3%(6/18),淋巴结(+)者为80.0%(12/15).统计分析表明,对ECM1的表达,肿瘤组织高于正常组织,淋巴结转移性肿瘤高于非转移性(P＜0.01).结论:ECM1在肿瘤组织中过表达,并且与肿瘤的转移相关.

基因扩增法快速检测阴沟肠杆菌Amp C β-内酰胺酶

目的:建立检测阴沟肠杆菌Amp C β-内酰胺酶(简称Amp C酶),尤其是持续高产Amp C酶的快速方法.方法:合成阴沟肠杆菌amp C和amp D引物,扩增标准及临床分离的阴沟肠杆菌中amp C和amp D的基因片段,判断待检阴沟肠杆菌是否产Amp C酶,尤其是否产持续高产Amp C酶,并用头孢西丁三维试验加以证实.结果:临床分离的214株阴沟肠杆菌中193株amp C基因扩增阳性,其中amp D扩增阴性者为16株;头孢西丁三维试验阳性18株,其中16株amp C基因扩增阳性而amp D扩增阴性,另有2株amp C和amp D均阳性.去阻遏持续高产型标准菌株amp C扩增阳性、amp D扩增阴性,野生型标准菌株amp C和amp D均扩增阴性.结论:用amp C和amp D引物扩增法可检出18株持续高产Amp C酶的阴沟肠杆菌中的16株,阳性率为88.89%.该方法可用于检测阴沟肠杆菌是否产持续高产Amp C酶.

人线粒体肌酸激酶广泛型亚型的原核表达、抗体制备及其临床应用意义

目的:在大肠杆菌中克隆表达人线粒体肌酸激酶广泛型亚型(uMtCK)的蛋白,免疫家兔制备抗uMtCK的多克隆抗体,检测胃肠肿瘤组织中uMtCK的表达.方法:采用RT-PCR从培养的肿瘤细胞(HeLa细胞)中成功扩增出1 062 bp的uMtCK基因片段,构建重组质粒pQE30-uMtCK,转化大肠杆菌表达酶融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE、Western印迹鉴定及酶活性测定.纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备了抗uMtCK多抗.免疫组化法检测59例胃及直肠肿瘤组织切片中uMtCK的表达.结果:RT-PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因;在大肠杆菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达.免疫家兔制备的抗uMtCK多抗经Western免疫印迹分析适合作uMtCK的进一步分析.免疫组化检测临床病理标本结果显示,59例胃及直结肠肿瘤标本uMtCK的阳性率为76.5%.结论:成功克隆了人uMtCK的编码基因,并将其在大肠杆菌中成功表达;制备了抗uMtCK多抗,免疫组化检测临床病理标本的结果提示uMtCK有助于胃肠肿瘤的诊断.

人源抗-HBs Fab与IFN-α融合蛋白的克隆与原核表达

目的:构建人源单克隆抗-HBs Fab-IFN-α表达载体,探讨该融合蛋白原核表达的可行性及其生物学活性.方法:用PCR体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBsFab基因的载体,插入点位于轻链基因3'未端,利用酶切、PCR鉴定筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠杆菌,挑选单克隆表达、纯化目的蛋白,用ELISA方法检测融合蛋白IFN-α的抗原性及其抗体亲和性,用WISH细胞检测IFN-α生物学活性.结果:利用插入了人源抗-HBs Fab基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的λ轻链与IFN-α的融合蛋白,其既具有与抗-HBs Fab相近的HBsAg的亲和力,又具有干扰素的活性.结论:λ轻链与IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达某些特异抗体和其介导的部分生物活性因子,是一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了线索.

细胞外基质蛋白1对MCF-7和HUVEC增殖影响的研究

目的:探讨细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)对乳腺癌细胞株MCF-7和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖的影响.方法:构建ECM1-pEGFP-N2真核表达载体,采用PCR方法,扩增出ECM1基因,用BglⅡ和Kpn Ⅰ双酶切ECM1基因和pEGFP-N2载体,连接酶切目的片段,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆酶切、测序鉴定;利用脂质体介导的转染技术转染MCF-7细胞,药物G418筛选稳定转染细胞株,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,免疫组化检测ECM1蛋白表达.用MTT比色法分析ECM1对MCF-7和HUVEC增殖的影响.结果:成功构建了ECM1-pEGFP-N2真核表达载体,并在MCF-7中稳定表达;MTT比色法检测MCF-7增殖结果显示未转染组、空载体转染组和ECM1转染组的D570值分别为0.95±0.07、0.97±0.09和1.03±0.12,三者无明显差异;MTT比色法检测HUVEC增殖结果示培养液组、空载体转染上清组、ECM1转染上清组HUVEC D570值分别为0.89±0.06、0.92±0.09和1.39±0.10,差异具有显著性意义(P＜0.01).结论:ECM1对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖无影响,但能显著促进血管内皮细胞体外增殖.

TGF-β1基因多态性对乙肝肝纤维化的影响

目的:探讨TGF-β1基因-509C＞T多态性与乙肝肝纤维化的关系及其对血浆TGF-β1浓度的影响.方法:应用ARMS-PCR结合测序的方法,测定92例健康对照组和93例乙肝患者(肝纤维化组)TGF-β1基因-509位点的单核苷酸多态性,并确定其基因型和等位基因频率的分布;ELISA法检测血浆中TGF-β1和Ⅳ型胶原的浓度,放射免疫法检测血浆中透明质酸和Ⅲ型前胶原N端肽的浓度.结果:TGF-β1-509位点基因型及等位基因分布频率在肝纤维化组和正常对照组中并无显著差异,-509CC基因型在肝纤维化程度比较高的Child-Pugh C级组中的分布频率明显高于TT基因型(P＜0.05).肝纤维化组中的血浆TGF-β1、Ⅳ型胶原、透明质酸及Ⅲ型前胶原N端肽的浓度显著高于对照组(P＜0.05).在对照组中,血浆TGF-β1浓度在-509位点两种基因型之间并无明显差别;而在肝纤维化组中,-509CC基因型者血浆TGF-β1浓度显著高于TT基因型者(P＜0.01).结论:TGF-β1基因-509 C＞T多态性与肝纤维化的发生没有密切关系,但与肝纤维化的进展程度相关;该多态性影响肝纤维化患者血浆中TGF-β1的浓度.

原发性胆汁性肝硬化与HLA-DRB1等位基因的相关分析

目的:探讨原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者人群与人类白细胞抗原(HLA)-DRB1等位基因的相关性,评估易感基因与一些临床及实验室特征的相互关系.方法:利用序列特异性引物PCR(SSP-PCR)对65例确诊为PBC的患者和431例健康人进行HLA-DRB1等位基因以及有关基因亚型分析.结果:PBC患者DRB1*07的频率为29.2%,与正常人的13.9%相比存在显著性差异(Pc＜0.05,相对危险度OR为2.55,95%CI:1.4～4.6),所有DRB1*07阳性患者经亚型分析均为DRB1*0701;其余DRB1的等位基因频率与正常人比较无显著性差异.DRB1*0701阳性患者群体与阴性患者在一些临床、实验室指标上无显著差异.结论:中国人群PBC与HLA-DRB1*0701基因相关,与南美、北美、北欧甚至日本等其他国家PBC患者的易感基因明显不同,为进一步作针对PBC患者的免疫治疗提供线索.

重组人纤维连接蛋白羧基端细胞结合域单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备人纤维连接蛋白(fibronectin,FN)羧基端细胞结合域的单克隆抗体,并以该抗体检测心脏瓣膜基质蛋白中FN蛋白的表达情况.方法:用RT-PCR方法获取人FN羧基端细胞结合域基因序列,通过pET32质粒表达获得TRX融合蛋白.并以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠后,按常规方法制备成单克隆抗体,获得分泌抗FN单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果:蛋白电泳结果显示,所获TRX融合蛋白条带与理论计算值相符,免疫动物后获得2株分泌抗FN羧基端细胞结合域不同位点单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型为IgG2a,免疫组化显示该抗体能特异性地结合人心脏瓣膜基质中的FN.结论:成功制备了分泌抗FN单克隆抗体,为FN结构、功能和机制的研究提供了有效工具.

表皮生长因子受体蛋白酪氨酸激酶的表达、纯化及活性测定

目的:采用原核表达体系对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)受体型酪氨酸激酶(recep-tor tyrosine kinase,RTK)进行体外表达、纯化及活性鉴定.方法:以包含EGFR cDNA的pRK5质粒为模板,PCR选择扩增编码EGFR-RTK的cDNA片段,插入pQE30质粒后转染大肠杆菌M15.IPTG诱导表达融合蛋白,包涵体蛋白经复性后亲和层析法纯化,ELISA方法测定蛋白活性.结果:成功地将933 bp的EGFR-RTK cDNA片段插入载体pQE30中,构建了表达载体pQE30-RTK.经诱导在原核表达系统中以包涵体形式高效表达了相对分子质量为37 000的EGFR-RTK融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的65.2%.复性、纯化后的EGFR-RTK蛋白经ELISA检测,结果发现随着加入蛋白量的增加,酶促反应产物磷酸化酪氨酸的量也逐渐增加,两者具有线性关系.结论:本实验成功地利用原核表达系统表达了具有生物学活性的EGFR-RTK,较传统的昆虫细胞表达系统更为简便、经济.

HPV16E7蛋白和Rb 蛋白在人喉鳞状细胞癌中的表达及相关性研究

目的:探讨HPV16E7蛋白和Rb蛋白在人喉鳞状细胞癌(鳞癌)组织中的表达及其在喉鳞癌发生和发展过程中的相互关系.方法:用免疫组织化学方法检测78例喉鳞癌、26例喉癌前病变、24例声带息肉和10例癌周正常喉组织标本中HPV16E7蛋白和Rb蛋白的表达.结果:癌周正常喉组织、声带息肉、喉癌前病变和喉鳞癌组织中HPV16E7蛋白的阳性表达率分别为0(0/10)、4.1%(1/24)、27.0%(7/26)和43.6%(34/78),Rb蛋白的阳性表达率分别为80.0%(8/10)、79.2%(19/24)、61.5%(16/26)和50.0%(39/78);HPV16E7蛋白和Rb蛋白的阳性表达率在癌周正常喉组织、声带息肉与喉鳞癌组之间均有显著性差异(P＜0.05),HPV16E7蛋白表达呈明显升高趋势,而Rb蛋白表达呈明显下降趋势.HPV16E7蛋白的阳性表达率,喉鳞癌病理Ⅲ级明显高于Ⅰ级或Ⅱ级(P＜0.05),临床Ⅲ～Ⅳ期明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05);而Rb蛋白的表达正相反,肿瘤病理Ⅲ级明显低于Ⅰ级或Ⅱ级(P＜0.05),临床Ⅲ～Ⅳ期明显低于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05).结论:HPV16E7蛋白的表达升高和Rb蛋白的表达下降可能会导致人喉鳞癌的发生和发展;检测HPV16E7蛋白和Rb蛋白的表达可用于喉鳞癌恶性程度的评定.

B细胞激活因子水平ELISA检测方法的建立及临床初评

目的:建立血清B细胞激活因子(Blymphocyte stimulator,BlyS)水平的ELISA检测方法,并初步探讨其临床价值.方法:以商品化的抗人BlyS单克隆抗体、生物素化抗人BlyS多克隆抗体,采用双抗夹心法自行建立BlyS血清水平的ELISA检测方法;并对80例风湿性疾病患者[50例系统性红斑狼疮(SLE)、20例类风湿关节炎(RA)、10例干燥综合征(SS)]、60例自身免疫性肝病患者[35例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、25例自身免疫性肝炎(AIH)]和40例正常人的血清BlyS水平进行检测.结果:成功建立血清BlyS水平的ELISA检测法且重复性较好,80例风湿性疾病患者的血清BlyS水平为(8.23±1.42)ng/ml,60例自身免疫性肝病患者为(3.40±0.79)ng/ml,40例正常人的血清BlyS水平为(3.19±0.88)ng/ml.与正常人相比,风湿性疾病组的BlyS血清水平明显升高(P＜0.01),而自身免疫性肝病组的BlyS血清水平升高则不明显.结论:本研究所建立的BlyS血清水平ELISA检测方法简便、可靠、准确,为后续研究BlyS与自身免疫性疾病尤其是风湿性疾病的关系奠定了基础.

腰椎小关节病变在腰痛中的作用(附516例前瞻性研究)

目的:观察腰椎手术中不同方式处理小关节对腰痛的影响,探讨腰椎小关节病变在腰痛中的作用.方法:对516例退变性腰椎疾病手术患者随机分为两组,每组258例,分别采取不同方式处理腰椎小关节突.其中实验组术中电刀环状烧灼小关节囊,破坏关节面;对照组保留小关节囊.分别于术后6个月、1年和2年观察腰椎活动度,随访腰痛改善情况.结果:两组腰椎活动度无显著差异.实验组腰痛完全消失172例,明显缓解64例,无变化16例,术后腰痛加重6例.对照组腰痛完全消失114例,明显缓解108例,无变化28例,加重8例.两者经统计分析结果有显著差异(x2=26.63,P＜0.001).结论:术中环状烧灼小关节囊,破坏关节面有利于减轻或缓解术后腰痛,进一步证实了腰椎小关节病变与腰痛有明显关系.术后腰痛加重与小关节的处理与否无关.

TGF-β1基因多态性与肝炎后肝纤维化的相关性研究

目的:探讨TGF-β1基因多态性与肝炎后肝纤维化的关系.方法:以实时荧光PCR结合熔点曲线分析,建立可高通量检测TGF-β1编码区3个单核苷酸多态性(SNPs)位点的LightCycler方法,这3个位点分别为Leu10Pro(T＞C)、Arg25Pro(G＞C)、Thr263Ile(C＞T),并对亚洲人群中HBV感染导致的肝纤维化患者(90例)及高加索人群中HCV感染导致的肝纤维化患者(210例)进行SNP分析,并分别与104例亚洲人群和50例高加索人群正常献血员进行比较.结果:亚洲人群中病患组与正常对照组TGF-β1编码区第25、263位氨基酸皆无基因多态性,与高加索人群的检测结果有显著差异;而亚洲人群第10位氨基酸基因多态性出现频率相对较高,病患组(T/C=0.444/0.556)较正常对照组(T/C=0.514/0.486)突变频率稍高,但无显著差异.在高加索人群HCV感染导致的肝纤维化患者中第10、25位氨基酸基因多态性出现的频率与肝纤维化发展程度(average METAVIR-Score)密切相关.结论:提示TGF-β1基因多态性与高加索人群肝炎后肝纤维化的发生具有重要相关性;与亚洲人群肝炎后肝纤维化发生的相关性有待进一步研究.

医院感染中非发酵菌的检出率及其耐药性分析

目的:了解非发酵菌在我院医院感染中的分布和检出情况以及非发酵菌的耐药性.方法:应用VITEK-AMS鉴定细菌,K-B法作体外药敏试验,统计分析非发酵菌的检出率和药敏情况.结果:非发酵菌的阳性检出率为14.29%,占总感染率的35.24%,其中,铜绿假单胞菌为常见(构成比为44.22%),其次为鲍曼不动杆菌(32.17%)和嗜麦芽窄食单胞菌(9.23%).不同感染部位非发酵菌的感染率各不相同,以呼吸系统(痰或咽拭子标本中)的阳性率高,而中枢神经系统(脑脊液标本中)的阳性率低.铜绿假单胞菌对多种抗生素表现为较高的耐药率(45.21%),尤其对舒他西林和复方磺胺甲噁唑的耐药率高(92.18%和82.65%);鲍曼不动杆菌对多种抗生素也表现为较高的耐药率(47.85%),尤其对氨曲南、头孢哌酮和庆大霉素耐药率高(78.56%、77.19%和70.21%).嗜麦芽窄食单胞菌的平均耐药率高达64.02%,对亚胺培南全部耐药,对庆大霉素、美罗培南和氨曲南的耐药率也很高(97.61%、92.83%和91.63%).结论:我院医院感染中非发酵菌的检出率较高.为及时控制非发酵菌感染并防止耐药菌株的产生,治疗非发酵菌感染应根据体外药敏试验结果选用敏感的抗生素或及时调整抗菌药物.

膜结合型抗大鼠FcεRIα单克隆抗体制备及活性鉴定

目的:建立抗鼠FcεRI单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为靶向诱导肥大细胞凋亡创造条件.方法:大鼠嗜碱性粒细胞细胞系RBL-2H3免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,ELISA筛选鼠血清和融合细胞产生的抗体,有限稀释克隆化培养.SDS-PAGE胶电泳、免疫扩散鉴定抗体性质,IgE竞争结合、组胺释放检测抗体生物活性,125I-细胞膜抗体复合物免疫沉淀放射自显影鉴定抗体识别抗原成分.结果:获得2株抗FcεRIα McAb生产细胞株ER-E5.3、ER-C7.4,均为IgG1.培养上清和小鼠腹水获得的抗体效价均大于10-5.流式细胞术分析抗体与RBL-2H3结合率均大于95%,与大鼠胸腺细胞和外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)无交叉反应,并能竞争性抑制IgE与肥大细胞结合.抗体触发RBL-2H3脱颗粒,组胺释放效应与抗原特异性IgE对肥大细胞的激活效应相同.酶切的Fab片段能与RBL-2H3结合,也能竞争抑制IgE与肥大细胞的结合,但不致RBL-2H3脱颗粒.抗体结合的细胞膜成分为α亚单位.结论:大鼠肥大细胞免疫小鼠与骨髓瘤细胞融合得到2株抗体产生杂交瘤克隆ER-E5.3和ER-C7.4,抗体效价和功能活性达到了实验要求,抗原识别成分为膜FcεRIα.

中小剂量环磷酰胺间隙疗法治疗重症肌无力

目的:观察中小剂量环磷酰胺间隙疗法治疗重症肌无力的疗效和不良反应.方法:选择综合治疗效果不佳的ⅡB型或Ⅳ型难治性重症肌无力患者15例,给予环磷酰胺0.2 g/d静脉滴注,6 d为1个疗程,间隔1～3个月重复1次,共3～6个疗程,随访0.5～3年.结果:15例患者治疗1个月后症状开始改善,治疗3个月后疗效评价:显效8例,有效7例.随访0.5～3年,不良反应少而轻微,仅少数患者用药时出现恶心,用药后短期脱发,均不需特殊处理.结论:中小剂量环磷酰胺间隙疗法治疗重症肌无力疗效可靠,无严重不良反应,值得进一步观察试用.

TGF-β与原发性开角型青光眼

TGF-β作为一种多功能细胞因子,具有多种生物学效应.它能调控小梁细胞外基质的合成与分泌及小梁细胞的收缩而影响房水流出阻力,促进青光眼滤过术后结膜瘢痕形成.TGF-β可能在原发性开角型青光眼(POAG)的发病机制中起重要作用,TGF-β抑制剂可能成为青光眼滤过术后抗结膜瘢痕化的辅助药物.

Wnt信号转导与人类肿瘤

Wnt信号转导途径对控制胚胎发育起十分重要的作用,其异常可导致胚胎发育异常和细胞的恶性转化.近年来的研究表明,Wnt信号通路的紊乱与多种人类肿瘤的发生密切相关.Wnt信号转导途径异常的核心机制是游离的β-连接蛋白在细胞内积累,并通过其下游途径引发特异靶基因的表达.本文就Wnt信号途径的组成、结构特点、转导途径及其调控,以及与人类肿瘤发生的关系作一综述.

以脾梗死为主要表现的急性早幼粒细胞白血病一例报告

1临床资料患者男性,20岁.因左上腹痛伴发热6 d于2004年4月6日收入我院普外科.既往无传染病史,1个月前在当地医院诊断为"白细胞减少症",当时骨髓检查未见明显异常,2周前复查血常规正常.查体:T 38.1 C,皮肤黏膜无淤点、淤斑,浅表淋巴结无肿大,心肺(-),腹平坦,左上腹压痛明显,肝肋下未及,脾肋下约0.5 cm可触及,腹水征(-).

腹腔镜手术在女性易性癖患者性再赋手术中的应用价值

目的:介绍腹腔镜下女性内生殖器官全切除的手术方法,探讨腹腔镜手术在性再赋手术中的应用价值.方法:2000年1月至2004年5月因女变男易性癖行腹腔镜下女性内生殖器官全切除手术患者24例,腹腔镜手术应用改良的开放式穿刺进腹,常规镜下全子宫及双附件切除操作,注水分离阴道壁,钝、锐性剥离,切开子宫直肠陷凹达阴道直肠间隙,翻出子宫及附件,保留尿道下方部分阴道壁后,切除全子宫、双附件及大部分阴道,封闭阴道穴腔.结果:24例患者均成功完成手术.手术平均时间为(91.3±17.2)min,出血量为(254.6±84.5)ml,腹部切口愈合时间为(3.4±0.7)d,进食时间为术后(12.2±11.8)h.其中有6例患者同期完成性再赋,余为2期手术完成.结论:用本方法进行女性易性癖患者腹腔镜下女性内生殖器官全切除手术,创伤小,术后恢复快,腹部切口瘢痕美观,有利于1期完成性再赋手术,有较大的应用价值.

食物过敏原特异性IgG检测的临床意义探讨

IgE介导的食物过敏反应为一速发过程,症状突出且与食物摄入显著关联,多次发作后患者也能自我诊断,而且其诊断方法也日臻完善.1982年发现IgG主要是IgG4参与了过敏反应,它与IgE分别作用于过敏反应的速发相和迟发相[1].然而,由于检测手段的滞后、诊断方法不普及、IgE介导的过敏反应在医生和患者中的主导地位导致IgG介导的食物过敏反应尚未被临床充分认知,使得这一领域几为空白.新近由于对IgG介导的食物过敏反应的逐步认识和深入研究,特别是其诊断方法的改进使得一些与IgG相关的过敏反应性疾病得以正确诊断,进而能够获得有效的防治.

抗坏血酸、胆红素和血红蛋白对临床生化指标检测的影响

目的:探讨血清标本中抗坏血酸、游离胆红素、结合胆红素和血红蛋白等物质对临床生化指标检测的干扰和影响.方法:健康志愿者复合血清加入不同浓度梯度的上述干扰物质后,用全自动生化分析仪检测血糖(G1u)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、总胆固醇(TCH)和三酰甘油(TG)的水平.结果:抗坏血酸、游离胆红素和结合胆红素浓度与Glu水平呈负相关(r=-0.999 46,-0.997 79,-0.999 38,P＜0.05),与Cr、UA和TCH的水平无明显相关性.血红蛋白与TG呈负相关(r=-0.962 63,P＜0.05),与UA正相关(r=0.995 37,P＜0.05),与其余指标无明显相关性.结论:抗坏血酸、游离胆红素、结合胆红素和血红蛋白等物质会对临床生化指标构成干扰,在解释检验结果时应考虑到上述因素.

显微喉镜下手术治疗声带白斑27例疗效分析

目的:探讨显微喉镜下手术治疗声带白斑的临床效果.方法:对27例声带白斑患者在显微喉镜下行手术治疗,术前及术后进行嗓音参数对比分析.所有患者随访1～4年.结果:术后定期随访,1例1年后癌变行垂直半喉切除术,3例复发再次手术后无复发,余23例至今无复发.术前及术后嗓音参数具有显著性差异(P＜0.05).结论:对声带自斑患者早期行显微喉镜手术,既可减少它的复发率及恶变率达到根治的目的,又可保留其声音功能.

肾移植术后110例淋巴细胞表型的检测及其临床意义

目的:探讨监测肾移植患者淋巴细胞亚群变化的临床意义.方法:110病例选自首次尸肾移植,肾功能在术后1周内恢复,免疫抑制剂使用统一方案.抗凝外周血以CD3/CD25、CD4/CD45RA、CD8/CD28和CD95/CD95L单克隆抗体标记,流式细胞术(FCM)分析它们在淋巴细胞中表达的变化与患者移植后时间、环孢素谷值(CsA-LT)浓度、肌酐(Cr)浓度、患者年龄、性别和排斥发生等的关系.结果:肾功能稳定的受者CD4+/CD45RA+、CD8+/CD28+、CD28、CD25和CD95L随术后时间延长、年龄增加和CsA-LT增高而减低.术后3.5年以上、年龄大于55岁和CsA-LT大于400 ng/ml者与术后1.5年以内、年龄30岁以下和CsA-LT 200 ng/ml以下者相比差异显著(P＜0.05).CD95表达随年龄的增加、术后时间的延长逐渐增多,随CsA-LT的增加逐渐下降(P＜0.05).结论:CD4+/CD45RA+、CD8+/CD28+、CD28、CD25和CD95L表达降低,CD95表达增加是肾移植患者免疫系统稳定的表现,结合患者年龄、术后时间、CsA-LT和肾功能检查可以作为免疫抑制剂应用和排斥监测的简便、可靠指标.

新辅助治疗对非小细胞肺癌手术及术后恢复的影响

目的:了解新辅助治疗对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)手术及术后恢复的影响.方法:本院2000年1月到2003年7月收治的80例NSCLC患者,随机分为常规手术组和新辅助治疗组各40例,新辅助治疗采用CTX+DDP+ADM方案,治疗后3～4周进行手术.比较两组手术切除情况及术后并发症、住院天数、胸管拔除时间.结果:新辅助治疗组手术全切切除率明显优于常规手术组(P＜0.05),但住院天数、拔除胸管时间、术后感染的发生率明显高于对照组(P＜0.01).结论:新辅助治疗对于患者术后恢复存在一定的影响,明显延长了患者的恢复时间,增加了术后感染的发生可能.

乳腺癌术前快速活检定性诊断方法及其应用

目的:借助乳腺旋切技术,探索建立一种新的乳腺癌术前定性诊断方法.方法:利用Mammotome乳腺微创旋切活检系统,对26例临床诊断为乳腺癌的患者进行乳腺肿块旋切,标本送病理学冰冻检查;另一组26例乳腺癌患者采用常规手术切除后送病理学冰冻检查,对两种方法的操作时间、送检标本病理学冰冻检查时间、病理学检查的阳性率、假阴性率及根治手术全身麻醉时间进行比较.结果:新的快速活检方法操作仅需(8.2±2.3)min,而传统的手术活检方法需(26.8±4.1)min,二者间有显著性差异(P＜0.05).病理学诊断的阳性率均为100%.送检标本病理学冰冻检查时间及根治手术全身麻醉时间两组间无明显差异.结论:乳腺癌术前施行旋切快速定性诊断方法操作时间短,阳性率高,无痛苦,明显减少手术时的全身麻醉时间,有良好的应用前景,值得推广.

M蛋白阳性患者2007例的体液免疫特征分析

目的:分析2 007例M蛋白阳性患者血尿免疫学特征.方法:通过免疫固定电泳、血清蛋白电泳、免疫球蛋白定量以及尿本周蛋白检测,对2 007例M蛋白阳性患者体液免疫特征进行综合分析.结果:在2 007例M蛋白阳性患者中,IgG型所占比例大(47.1%),IgD型小(5.3%);血清蛋白电泳后,IgA型M带主要分布于β区,游离κ型M带约一半分布于β区、一半分布于γ区,其他类型M带均主要分布于γ区;IgG、IgA和IgM型患者对应Ig的血清浓度均显著增高,IgA型患者的IgG浓度明显低于正常,IgG和IgM型患者非对应Ig的血清浓度在正常范围内,IgD型患者非对应Ig的血清浓度明显低于正常,LC型患者各类Ig的血清浓度均显著降低;游离κ型患者κ轻链的血清浓度在正常范围内,λ轻链低于正常;其他各型患者对应轻链的血清浓度均显著增高,非对应轻链除IgM型外,均低于正常;各类型患者血清κ/λ均明显异常.结论:应用免疫固定电泳结合血清蛋白电泳及免疫球蛋白定量等方法可以比较敏感地检测出M蛋白,并对其进行分类、分型,为临床诊断和治疗提供重要依据.

卵巢上皮癌组织及腹腔液中CK7 mRNA表达的意义

目的:探讨CK7 mRNA在检测卵巢上皮癌腹腔液微转移的价值.方法:用RT-PCR法检测39例卵巢上皮癌组织及腹腔液中CK7 mRNA的表达,腹腔液常规作细胞学检查;同时检测26例良性卵巢上皮性肿瘤及16例正常卵巢组织及腹腔液作对照.结果:癌组织及其腹腔液中的CK7 mRNA的阳性率分别为100%和89.7%,两者差异无显著性,与腹腔液细胞学检查结果(61.5%)具有显著差异(P＜0.05);Ⅰ～Ⅱ期卵巢上皮性癌腹腔液的CK7 mRNA的阳性率为84.6%,明显高于其细胞学检查结果(30.8%,P＜0.05)及良性肿瘤组(26.9%,P＜0.01);Ⅲ～Ⅳ期卵巢上皮性癌腹腔液的CK7 mRNA的阳性率为92.3%,高于其细胞学的阳性率(76.9%,P＜0.05).结论:卵巢上皮癌腹腔液中CK7 mRNA的表达是检测腹腔液中癌细胞微转移的有效方法,结合腹腔液的细胞学检查,更有助于诊断.

甲泼尼龙冲击治疗原发性肾病综合征(附31例报告)

目的:探讨甲泼尼龙(MP)治疗原发性肾病综合征(PNS)的近期疗效及安全性.方法:回顾分析近7年MP用量≥0.5 g/d,至少连续3 d冲击治疗的PNS 31例患者的临床资料.结果:1周内完全缓解率48.4%(15/31),部分缓解率41.9%(13/31),总缓解率90.3%;相关不良反应出现率25.8%(8/31),但无严重不良反应出现.结论:MP冲击治疗对PNS来说不失为一种有效及相对安全的疗法.

小儿原发性肾病综合征36例临床分析

目的:探讨小儿原发性肾病综合征的临床特点.方法:原发性肾病综合征患儿36例,其中男31例、女5例,平均年龄(8.9±6.1)岁,病程9个月至5年,单纯性肾病28例、肾炎性肾病8例.另选择15例健康儿童作为对照组.分别检测两组血胆固醇、载脂蛋白、血浆清蛋白、纤维蛋白原、24 h尿蛋白定量、尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性,并进行比较.对28例单纯性肾病根据血纤维蛋白原定量分组,分别使用及不使用小分子肝素抗凝治疗,观察尿蛋白转阴时间改变.结果:原发性肾病综合征患儿血胆固醇、载脂蛋白、血浆清蛋白、纤维蛋白原、24 h尿蛋白定量、尿NAG与对照组比较差异显著(P＜0.01),血胆固醇与血浆清蛋白呈负相关(r=-0.543 4,P＜0.01).使用小分子肝素治疗的纤维蛋白原增高组与未使用小分子肝素治疗的纤维蛋白原增高组比较,尿蛋白转阴时间有明显差异(P＜0.01).结论:肾病患儿体内存在免疫损伤,治疗过程中及时控制免疫反应、抗凝、抗炎及其重要.

人源抗-HBs Fab表达系统的转换与效果

目的:重新克隆抗-HBs Fab基因于pBAD载体,改变诱导方式与表达条件,提升原核表达人源抗体片段的经济性与实用性.方法:经3次基因扩增,分步克隆,将Fd、Lc与pBAD/Lc基因先后插入到pBAD载体中,形成单载体双启动、定向表达形式.筛选双重插入菌落,阿拉伯糖诱导表达,PAGE和Western印迹鉴定抗-HBs Fab的表达效果.结果:酶切克隆载体,琼脂糖电泳证实Fd和pBAD/Lc基因的正确插入;PAGE可见明显的相对分子质量近50 000的蛋白区带,Western印迹显示该区带确为Fab;HBsAg特异印迹表明表达产物具有抗原结合活性.结论:比较原pComb3表达系统,改变后的pBAD表达系统明显提高了抗-HBs Fab的表达量(可达70 mg/L)并保持了抗体活性,为该抗体的批量制备与临床应用提供了条件.

奇蒿不同溶剂提取物对大鼠烧伤创面愈合的作用

目的:研究奇蒿对伤口愈合的影响,以证实其在创面愈合过程中所起的重要作用.方法:将奇蒿不同溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇)提取物应用于大鼠背部深Ⅱ度烫伤模型,通过不同时间创面愈合的肉眼观察、计算机图像分析、活检标本的细胞DNA周期分析及创面组织病理切片等方法观察上皮愈合的情况.结果:奇蒿氯仿提取物组创面平均愈合时间为(15.01±1.00)d,空白组为(21.12±1.34)d(P＜0.01);氯仿组创面羟脯氨酸(伤后5、10、15 d)及S期细胞百分比(伤后10、20 d)明显高于对照组(P＜0.01),提示其有促进创面愈合的疗效.结论:奇蒿氯仿提取物有明显的促进创面愈合的作用.

环氧合酶2在慢性乙型肝炎肝组织中的表达

目的:观察环氧合酶2(COX-2)在慢性乙型肝炎(乙肝)肝组织中的表达情况,以进一步认识其临床意义.方法:采用免疫组化ABC法,检测33例慢性乙肝及4例正常肝组织标本COX-2的表达;同时检测患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)及HBV DNA等血清学指标.结果:正常肝组织中COX-2表达阴性;33例慢性乙肝组织COX-2表达阳性者31例(93.9%).COX-2阳性表达程度在轻、中、重度肝炎间有显著性差异(P＜0.05),并随肝脏炎症程度的加重而表达加强.随着COX-2阳性表达程度增加,患者血清ALT水平也显著升高(P＜0.05),血清HBV DNA水平则无明显改变.结论:COX-2在慢性肝炎组织中表达增加,且与病情轻重有关.提示可将其作为反映肝脏炎症程度的一项指标.

HLA-A*0201/BSP融合基因的构建与表达

目的:克隆表达HLA-A*0201 α链胞外区与BirA酶底物肽(Bir A substrate peptide,BSP)的融合蛋白.方法:采用PCR技术从人HLA-A*0201 α链cDNA库中克隆基因的胞外区,拼接可生物素化的BSP片段序列后,经双酶切插入载体pET28a(+)后在E.coli BL21(DE3)诱导高效表达,并对表达产物进行纯化与复性.结果:成功地扩增出HLA-A*0201/BSP基因并测序证实,构建了融合表达载体pET-HLA-A*0201,并获表达与纯化.结论:成功构建了HLA-A*0201/BSP融合基因,为进一步体外构建特定的HLA-A*0201四聚体,标记相应特异性CD8+T细胞提供物质基础.

人外周血单个核细胞BLyS127-285的克隆、表达和纯化

目的:从人外周血单个核细胞中克隆出B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)胞外区片段BLyS127-285,并进行表达和纯化.方法:采用RT-PCR技术,从人外周血单个核细胞中扩增BLyS127-285,测序后构建原核表达载体,经IPTG诱导表达及Ni-NTA纯化,以SDS-PAGE和Western印迹法进行鉴定.结果:RT-PCR扩增出一个480 bp的DNA片段,序列分析与GenBank中报道的人BLyS127-285的cDNA序列一致,该胞外区片段在大肠杆菌中得到高效表达,表达量可达菌体总蛋白的49.8%,纯化后纯度可达97.0%.结论:成功地从人外周血单个核细胞中扩增出人BLyS127-285,并获得高效表达,其纯化产物为进一步研究其功能、开发与临床应用奠定了基础.

《第二军医大学学报》2004年第25卷总目次

慢性肝病发病机制的基础研究有待深入

随着科学的发展,衡量一个学科的学术水平,直接的是学术论文,尤其是有层次的、有梯度的、在某一领域的探索性的系列论著,能代表这个学科的发展水平,也能得到同行的承认.近几年来,研究基金的申请以及重点学科的评审,主要看学科水平,其中重要的是有无专科特色、有无研究基础、个人有无专长,系列论文无疑是直接的衡量条件.因此,作为学科研究论文专题在本刊集中刊出,既是一种对学术水平的检阅,对该学科也将是一个很大的鞭策;同时也促进了学科的发展,对其他学科起到示范作用.