第二军医大学学报杂志
Academic Journal of Second Military Medical University 제이군의대학학보
- 主管单位: 第二军医大学
- 主办单位: 第二军医大学
- 影响因子: 0.74
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0258-879X
- 国内刊号: 31-1001/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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机器人辅助与开放前列腺癌根治术切缘阳性情况比较
目的 比较单术者应用机器人辅助与开放前列腺癌根治术两种手术方式进行前列腺癌切除时肿瘤切缘阳性情况.方法 2009年1月至2017年5月期间,我院单术者分别应用开放前列腺癌根治术治疗的81例前列腺癌患者及机器人辅助前列腺癌根治术治疗的306例前列腺癌患者入组本研究.术后病理切缘阳性定义为前列腺癌根治标本切缘墨染标记处可见肿瘤细胞.通过我科前列腺癌随访数据库提取所有患者的年龄、术前前列腺特异抗原(PSA)水平、术后病理Gleason评分、病理T分期、上下切缘阳性情况等资料,使用倾向评分匹配法对两种术式的数据进行配对以保证其一致性,比较两种术式切缘阳性情况的差异.采用多因素logistic回归分析明确切缘阳性的独立影响因素.结果 将两组患者的年龄、术前PSA水平、术后病理Gleason评分、病理T分期作为预测变量进行倾向评分匹配后成功配对81对病例,开放前列腺癌根治术组和机器人辅助前列腺癌根治术组上切缘阳性率分别为22.2% (1S/81)、18.5%(15/81),下切缘阳性率分别为29.6%(24/81)、30.9% (25/81),总切缘阳性率分别为38.3%(31/81)、38.3%(31/81),两组间差异均无统计学意义.多因素logistic回归分析术前PSA水平及病理T分期是切缘阳性的独立影响因素(P=0.011,P=0.000).结论 机器人辅助前列腺癌根治术能够提供不亚于开放手术的肿瘤切除的完整性.
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猪脊髓栓系综合征神经轴性牵拉模型的建立
目的 探讨建立猪脊髓、神经根轴性牵拉损伤模型模拟脊髓栓系综合征的方法.方法 将18只成年家猪随机分为3组,每组6只.假手术组:暴露L1~5脊髓;对照组:暴露L1~.脊髓后于L1~5双侧椎弓根置入螺钉;实验组:暴露L1~5脊髓并于双侧椎弓根置入螺钉后,均匀撑开L1~5椎间隙.于各时间点对3组动物行X线片、后肢行为学、尿流动力学、体感诱发电位、激光散斑血流成像及组织病理学检查并对结果进行比较分析.结果 假手术组和对照组术前、术后L1~5椎体间高度、后肢运动神经功能评分、尿流动力学、体感诱发电位及激光散斑血流成像检查结果均无明显变化,组织学观察脊髓、神经结构基本正常.实验组动物撑开后L1~s的椎体间高度较撑开前增高,后肢运动神经功能评分降低,体感诱发电位P波的潜伏期延长、波幅下降,脊髓表面的血流减少(P<0.05);撑开后出现低顺应性膀胱、逼尿肌括约肌协同功能障碍;脊髓组织可见不同程度的神经细胞坏死,胞质内可见颗粒变性和空泡变性;神经根组织可见组织水肿、细胞结构疏松,部分神经束膜损伤.结论 通过松解猪腰椎后柱结构均匀撑开椎间隙的方法可以建立脊髓、神经根轴性牵拉损伤模型,该模型能够模拟临床脊髓栓系综合征患者的下肢感觉、运动功能和括约肌功能障碍,为深入探讨脊髓栓系综合征的病理机制以及手术治疗方式奠定了实验基础.
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石菖蒲、安息香和苏合香挥发油促进罗丹明123的肠吸收作用及其机制
目的 研究石菖蒲、安息香和苏合香挥发油促进罗丹明-123 (Rho-123)的肠吸收作用及其机制.方法 制作大鼠肠外翻模型,向肠囊内注入1.0 mL K-R营养液,将肠囊悬浮于45.0 mL 37℃的K-R溶液中.向肠囊外溶液中分别加入浓度均为60 μg/mL的石菖蒲、安息香和苏合香挥发油,孵育30 ain后加入Rho-123,用高效液相色谱-荧光检测法测定肠囊内Rho-123的含量.培养人结肠癌细胞Caco-2,分别加入浓度均为80 μg/mL的石菖蒲、安息香和苏合香挥发油作用48 h,应用流式细胞术检测P糖蛋白(P-gp)的表达;采用qPCR检测P-gp基因MDR1 mRNA的表达.结果 石菖蒲、安息香和苏合香挥发油均可增加大鼠空肠和回肠Rho-123的吸收速率常数和表观通透系数(P<0.01),降低P-gp及其基因MDR1 mRNA的表达(3者作用的降低率分别为53.15%、55.10%、61.86%及55.41%、16.24%、38.46%;P<0.01).结论 抑制P-gp及其基因的表达可能是石菖蒲、安息香和苏合香挥发油促进Rho-123肠吸收的主要机制之一.
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下颈椎椎弓根前入口及前半四壁皮质厚度的影像学测量及应用分析
目的 对下颈椎椎弓根前入口及椎弓根前半的四壁皮质厚度行CT影像学测量,为前路椎弓根钉准确置入提供参考.方法 对10例正常新鲜尸体的颈椎标本进行CT扫描并重建图像.用AutoCAD 2007软件的“对齐标注”测量下颈椎椎弓根前人口上(SAE)、内(MAE)、下(IAE)和外(LAE)以及椎弓根前半上(SPA)、内(MPA)、下(IPA)和外(LPA)的皮质厚度(精确度0.1 mm),并对测量结果进行比较分析.结果 C3~7左侧和右侧的平均SAE、MAE、IAE、LAE、SPA、MPA、IPA及LPA厚度分别为(1.9±0.6)和(1.9±0.5)mm、(1.9±0.7)和(1.9士0.4) mm、(2.4±0.6)和(2.4±0.5) mm、(0.9±0.5)和(0.9±0.6) mm、(2.3±0.9)和(2.3±0.7)mm、(2.1士0.5)和(2.1±0.6) mm、(2.2±0.8)和(2.2±0.7) mm及(1.0±0.7)和(1.0士0.6)mm.同一颈椎同一测量指标的左、右侧比较差异均无统计意义(P>0.05).对同一颈椎同侧的不同测量指标行单因素随机区组方差分析,结果示LAE与LPA薄,均薄于其他6个测量指标,差异有统计学意义(P均<0.01),而LAE与LPA厚度之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 下颈椎椎弓根LAE及LPA较其他侧壁皮质菲薄,如皮质厚度与抵抗外力强度一致,则LAE和LPA抵抗外力的强度小.提示颈前路椎弓根螺钉固定寻找前入口时应避免靠近LAE,在螺钉置入过程中应避免靠近LPA.
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小鼠脑组织中单胺类神经递质含量测定方法的建立与比较
目的 比较高效液相色谱(HPLC)-紫外光(UV)、HPIC-荧光(FLD)和HPLC-质谱(MS)3种检测方法测定小鼠不同脑组织中单胺类神经递质含量的优劣性,并应用优方法测定血管性抑郁小鼠不同脑组织中单胺类神经递质的含量.方法 分别采用HPLC仪器搭配UV、FLD和MS检测器建立小鼠不同脑组织中多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)的含量测定方法,并进行系统的方法学验证,采用HPLC-FLD法对血管性抑郁小鼠不同脑组织中单胺类神经递质DA、NE和5-HT含量进行测定.结果 HPLC-UV法的定量限分别为DA 103.5 ng/mL、NE 107.5 ng/mL、5-HT 93.6 ng/mL;HPLC-FLD法的定量限分别为DA 10.35 ng/mL、NE 10.75 ng/mL、5-HT9.36 ng/mL;HPLC-MS法的定量限分别为DA 10.35 ng/mL、NE 32.25 ng/mL、5-HT 9.36 ng/mL.HPLC-FLD和HPLC-MS法对DA和5-HT的测定优于HPLC-UV法,HPLC-FLD法对于NE的测定优于HPLC-MS法,而HPLC-MS法存在较强的基质效应.HPLC-FLD法检测结果示血管性抑郁小鼠海马组织中DA含量低,大脑皮质中5-HT含量低,而不同脑组织中NE含量没有明显差别.结论 与HPLC-UV法和HPLC-MS法相比,HPLC-FLD法更适用于小鼠脑组织中单胺类神经递质(DA、NE、5-HT)的含量测定.DA和5-HT可以用作血管性抑郁症疾病的诊断标志物.
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超高分辨率CT靶扫描对肺结节的诊断价值
目的 探讨1 024超高分辨率CT靶扫描对直径8mm以下肺结节的诊断价值及其对随访方案的影响.方法 前瞻性分析2015年7月-2016年8月于同济大学附属上海市肺科医院影像科门诊进行1 024超高分辨率CT靶扫描的57例患者的67个肺结节资料.肺结节平均直径为(5.97±1.34) mm.对其中32个结节进行手术切除,病理结果提示2个结节为良性,9个结节为不典型腺瘤样增生(AAH),14个结节为原位腺癌(AIS),7个结节为微浸润腺癌(MIA);16个结节怀疑恶性但未手术;19个结节随访或考虑良性病灶.对67个肺结节均行常规CT扫描和1 024超高分辨率CT靶扫描,由3位有3~10年工作经验的影像科医师阅片,评价图像质量、判断结节类型、评估诊断信心、给出诊断结果和处理方案,并对阅片结果进行统计学分析.结果 1 024超高分辨率CT靶扫描在显示肺结节内部混杂密度、结节边缘、分叶征等方面优于常规CT检查(P<0.05),两种扫描图像对判断纯磨玻璃结节和混杂密度结节的差异有统计学意义(P<0.05).与常规CT比较,1 024超高分辨率CT靶扫描的诊断正确率增高(P<0.01),医师诊断信心提高(P<0.05),且基于两套图像给出的处理方案差异有统计学意义(P<0.05),其差异主要体现为随访例数减少、手术例数和无需随访例数增加.结论 1 024超高分辨率CT靶扫描对直径8mm以下肺结节可较常规CT检查提供更好的图像质量.对通过常规CT检查难以确诊或诊断信心不充足的结节,可采用1 024超高分辨率CT靶扫描进一步检查.
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脓毒症早期恒定自然杀伤T细胞活化对预后的影响
目的 探讨脓毒症早期外周血恒定自然杀伤T (iNKT)细胞活化对炎症及病情的影响.方法 取健康雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,分别为假手术组、盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症模型组和CLP模型+CD1d阻断性抗体预处理组(抗-CD1d组).CLP术后24 h应用流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏、胸腺iNKT细胞水平,ELISA法后检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、干扰素γ(IFN-γ)和IL-4等细胞因子水平,分析iNKT细胞与细胞因子的相关性,检测外周血和腹腔灌洗液中的细菌菌落数.观察各组小鼠CLP后10 d生存率.选取脓毒症确诊患者及健康志愿者各20例,年龄18~70岁,检测脓毒症患者及健康志愿者外周血iNKT细胞比例及细胞因子水平,分析iNKT细胞与细胞因子及急性生理和慢性健康(APACHEⅡ)评分的相关性.结果 脓毒症模型组小鼠的iNKT细胞和TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-4水平均高于假手术组(P<0.05,P<0.01),外周血及腹腔中细菌菌落数高于假手术组(P<0.01),术后7d内小鼠全部死亡;与脓毒症模型组小鼠相比,给予抗-CD1d抗体预处理后,抗-CD1d组小鼠外周血、脾脏、胸腺的iNKT细胞比例下降(P<0.05,P<0.01),外周血TNF-α、IL-6、IFN-y和IL-4水平及外周血和腹腔液中细菌菌落数减少(P<0.05,P<0.01),术后第10天时小鼠仍存活4只.脓毒症患者的iNKT细胞及细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-y和IL-4水平相比健康对照组增加(P<0.05,P<0.01),且iNKT细胞与IFN-γ、IL-4水平及APACHEⅡ评分呈正相关(P<0.05).结论 脓毒症早期外周血iNKT细胞水平明显增加并与脓毒症病情严重程度及预后有一定关系,提示iNKT细胞可能在脓毒症炎症反应中起重要调节作用.
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MicroRNA-484通过靶向肝星状细胞中Fis1调控肝纤维化进程
目的 探讨微RNA-484 (miR-484)对肝纤维化发生和发展过程中关键细胞肝星状细胞(HSC)的作用和影响.方法 以前期芯片筛选结果为基础,通过细胞转染人为干预miR-484在HSC-T6细胞株中的表达.利用qPCR、蛋白质印迹法检测肝纤维化及凋亡相关指标的表达变化;以Annexin V-FITC/PI双染细胞后,用流式细胞仪检测miR-484对细胞凋亡的影响.结果 与对照组相比,人为下调miR-484在HSC-T6细胞株中的表达后,其靶基因Fis1及促凋亡因子caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达均升高(P<0.05),凋亡抑制因子Bcl-2表达下降(P<0.05);流式细胞仪检测到HSC-T6细胞凋亡率升高[(32.81±3.21)% vs (57.54±6.76)%,P<0.05];同时肝纤维化相关指标α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05).结论 miR-484通过靶向Fis1抑制HSC凋亡、促进其活化,从而促进肝纤维化的发生和发展.
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骨硬化蛋白与绝经后妇女脆性骨折的相关性
目的 了解绝经后跌倒骨折妇女及跌倒无骨折妇女人群血液循环中骨硬化蛋白与血清骨代谢标志物、骨密度之间的关系,探讨骨硬化蛋白是否可作为一种新的预测脆性骨折的生化标志物.方法 采用横向前瞻性研究,对50例健康的未绝经女性(A组)、50例绝经后跌倒股骨颈骨折妇女(B组)及50例绝经后跌倒无骨折妇女(C组)进行评估,评估内容包括血清骨硬化蛋白水平、骨代谢标志物及骨密度.结果 骨代谢标志物如Ⅰ型胶原交联C-端肽(CTX)、CTXⅡ、骨特异性碱性磷酸酶(b-ALP)、前胶原1型N端前肽(P1NP)、核因子出受体激活因子(RANK)和核因子出受体激活因子配体(RANKL)在3组间差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);相较于A组,B组及C组的骨硬化蛋白水平升高(P<0.05,P<0.01)、骨钙素水平降低(P<0.01),但B、C两组间骨硬化蛋白水平和骨钙素水平差异无统计学意义.股骨颈、全髋、转子间及L1~L4部位的骨密度在3组之间差异有统计学意义(P<0.01),B组中骨密度较A、C两组降低(P<0.01).在所有研究对象中,骨硬化蛋白水平与股骨颈骨密度(r=-0.228,P=0.004)、转子间骨密度(r=-0.199,P=0.002)和全髋骨密度(r=-0.273,P<0.001)均呈负相关.结论 绝经后妇女中骨折人群与未骨折人群血清骨硬化蛋白水平差异无统计学意义,提示血清骨硬化蛋白水平无法预测脆性骨折风险.
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高效液相色谱法测定白龙解郁颗粒中橙皮苷和甘草苷的含量
目的 采用高效液相色谱法(HPLC)测定白龙解郁颗粒中橙皮苷和甘草苷的含量.方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,使用Agilent SB-ZOBAX C18柱(250mm×4.6mm,5μm)行HPLC.橙皮苷的测定:乙腈-0.1%磷酸溶液(22∶78)为流动相,柱温30℃,检测波长为283nm,进样量10μL;甘草苷的测定:乙腈-0.1%磷酸溶液(18:82)为流动相,柱温30℃,检测波长为276nm,进样量10μL.结果 HPLC测定橙皮苷和甘草苷的精密度、重复性、稳定性的范围均符合相关规定;橙皮苷在35.64~178.20 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 8),甘草苷在13.55~216.80 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 9);加样回收率分别为:橙皮苷99.30%,RSD为1.0%(n=9);甘草苷98.60%,RSD为1.5%(n=9).结论 HPLC快捷、简单、稳定可靠,可用于白龙解郁颗粒的质量控制.
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新型直接口服抗凝药物与胃肠道出血的研究进展
2010年,一类新型直接口服抗凝药(DOAC)被批准用于非瓣膜性心房颤动患者预防血栓性脑卒中及治疗静脉血栓栓塞症(VTE)/肺栓塞(PE).与传统口服抗凝药维生素K拮抗剂(VKA)相比,DOAC的抗凝效果确切,安全性更好、服用更方便,且更少引起颅内出血事件,但可能会增加胃肠道的出血风险.由于DOAC的半衰期短,大多数胃肠道出血无需特殊处理,但在出血危及生命或急诊手术时需给予逆转剂抵抗DOAC的抗凝作用.本文旨在对DOAC相关胃肠道出血的发生率、预防治疗及DOAC特异性逆转剂等作一综述.
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PD-1/PD-L1信号通路及其在肿瘤免疫治疗中的作用
抑制性共刺激分子程序性死亡因子1(PD-1)/程序性死亡因子配体1(PD-L1)是重要的负性免疫调节分子,在机体适应性细胞免疫中发挥着重要作用.表达PD-L1的肿瘤细胞可与T细胞表面受体分子PD-1特异性结合,从而影响T细胞的活化与分化,并抑制T细胞的抗肿瘤免疫杀伤活性.目前,已有多种靶向PD-1/PD-L1免疫检查点的药物应用于临床,并在不同类型的肿瘤治疗中显示出良好疗效.本文就PD-1/PD-L1的分子结构、表达特点、上调影响因素,以及其在促进肿瘤生长、免疫逃逸、肿瘤免疫治疗中的作用等方面的研究进展作一综述.
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正交设计法优化炭疽杆菌表面糖抗原关键中间体二糖化合物的合成工艺
炭疽杆菌表面糖抗原(图1)是炭疽杆菌细胞荚膜的主要成分[1],炭疽杆菌表面糖抗原的人工合成对炭疽疫苗的研发具有重大意义[2].1-叔丁基二苯基硅烷基-2-叠氮-3-O-(α-四-O-苄基-1-氧代-β-D-吡喃半乳糖基)-4,6-O-对甲氧基苄基-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)是化学合成炭疽杆菌表面糖抗原的重要中间体.同类β-硫苷糖基化得到的1,3位连接的二糖产物为α、β构型混合物,α构型产率基本维持在17%~54%[3-5],由于本研究中单糖受体上的保护基位阻较大,导致路线(图2)中的二糖化合物(1)的预实验产率仅为21.1%,大大阻碍了后续合成工作的进展.文献报道用硫苷作供体的苷化反应,其立体化学结果受多重因素影响,即温度、溶剂、受体及反离子等的改变都可能会大大改变α与β的构型比[6].本研究拟采用正交试验设计探寻其佳反应条件,从而提高产率.
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2037名驻高原官兵认知功能降低情况及其危险因素分析
研究发现,高原环境会对人的认知功能,如短时记忆、注意广度及注意转换能力、思维判断能力等均有显著影响,会使高原军人的认知功能下降,对其心理知觉和心理运动能力产生影响,降低作业绩效[1-2].不同海拔高度[3]、睡眠质量[4]及环境改变[5]等因素均会影响高原地区军人认知情况.本研究对2 037名驻高原官兵进行调查和分析,系统了解驻高原官兵的认知状况及其影响因素,为高原环境下军人认知功能的防护和健康服务研究提供科学有效的数据参考.
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美军战伤编码研究进展
战伤编码的研究和制定对战伤伤情的准确判断、医疗文书记录、卫生资源配置、卫勤决策支持以及卫勤信息化建设具有重大意义.由于战伤具有伤员批量产生、伤情复杂、致伤机制多、伤道感染严重等特殊性,民用创伤编码系统不完全适用于战伤数据.本文综述了国外民用创伤编码系统和美军战伤编码系统,探讨其对我军战伤编码研究的借鉴意义.
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《原发性肝癌诊疗规范(2017年版)》更新要点解读
我国于2011年发布的《原发性肝癌诊疗规范》有效提高了肝癌的综合诊治水平.新发布的《原发性肝癌诊疗规范(2017年版)》在2011年版的基础上,首次引入了循证医学证据等级,规范了肝癌病理取材方法,引入了微血管侵犯的概念作为病理常规报告项目,通过实体瘤疗效评价标准修订版(mRECIST)评价抗肿瘤治疗疗效,并根据我国实际情况,提出了我国的肝癌临床分期和治疗路径.本文试对《原发性肝癌诊疗规范(2017年版)》的更新要点进行解读,供同行参考.
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腺相关病毒介导的肝细胞核因子1α过表达改善四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化
目的 探讨特异性上调肝细胞中肝细胞核因子1α(HNF1α)表达对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化的影响.方法 取18只C57/B6小鼠随机分为正常组、AAV8-TBG-Ctrl组和AAV8-TtBG-HNF1α组,每组6只.应用CCl4诱导制备小鼠肝纤维化模型,造模后AAV8-TBG-HNF1α组小鼠通过尾静脉注射带有甲状腺素结合球蛋白(TBG)启动子驱动表达HNF1α的腺相关病毒AAV8-TtBG-HNF1α特异性上调肝细胞中HNF1α的表达,AAV8-TBG-Ctrl组小鼠注射对照病毒AAV8-TBG.采用免疫组织化学法及qPCR检测各组小鼠HNF1α的表达,苏木素-伊红(H-E)染色、天狼猩红染色检测肝组织的病理改变及胶原沉积,免疫组化法检测旷平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并对Ⅰ型胶原(COL1A1)及α-SMA的表达进行软件定量分析;qPCR法检测小鼠肝组织中纤维化相关基因(α-SMA和COL1A1)、上皮指标(E-cadherin和Plakoglobin)及间质指标(Vimentin,Slug和Twist1)的mRNA水平;免疫组化法及TUNEL法检测上调HNF1α对纤维化肝脏中细胞增殖、凋亡的影响.结果 与正常组小鼠相比,CCl4造模可促进小鼠肝脏胶原沉积及α-SMA的表达,且在肝纤维化发生过程中HNF1α的表达下降(P<0.01);与AAV8-TBG-Ctrl组相比,应用AAV8-TBG-HNF1α特异性上调肝细胞HNF1α的表达可抑制纤维化肝脏中的COL1A1及α-SMA的水平(P<0.01).上调肝细胞HNF1α表达对纤维化肝脏中E-cadherin、Vimentin等上皮间质转换指标的表达无明显影响(P>0.05),也不影响肝细胞的增殖与凋亡(P>0.05).结论 特异性上调肝细胞HNF1α表达可显著改善CCl4诱导的小鼠肝纤维化.
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肝脏干细胞研究与应用存在的问题及对策
干细胞是目前生物医学的研究热点之一.近年研究发现肝脏中存在多种具有不同标志物的干细胞,在肝脏再生中具有重要作用;自体及异体干细胞移植治疗终末期肝病也取得了一定进展.但肝干细胞的来源及标志物尚未完全阐明,肝干细胞的增殖和分化调控机制仍有待深入研究.随着谱系追踪技术、干细胞分离和培养体系的发展与成熟,肝于细胞的来源及其在肝再生中的作用将会进一步明确,肝病干细胞治疗有望成为现实.
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含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶1在肝脏疾病中的研究现状
蛋白酪氨酸磷酸化修饰广泛存在于真核细胞内,作为一种基础调节机制参与调节细胞的增殖、凋亡、分化、迁移等多个生命过程.蛋白酪氨酸磷酸化改变可影响肝脏炎症、肝纤维化、肝癌等多种肝脏疾病.含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶I(SHP-1)属于非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶,是维持体内蛋白酪氨酸磷酸化水平的关键因子.近年来SHP-1在肝脏疾病中的研究取得了重大进展,本文主要就SHP-1在肝脏疾病中的研究现状作一综述.
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基于报告基因系统的肝细胞核因子4仅活性检测体系的建立
目的 建立一个基于荧光素酶报告基因系统的肝细胞核因子4α(HNF4α)活性检测系统,筛选可调控HNF4α活性的小分子化合物.方法 采用亲和层析法纯化HNF4α蛋白,行蛋白热迁移实验检测相关DNA片段及小分子化合物与HNF4α蛋白的直接相互作用.分别构建含有3个拷贝和9个拷贝的Ninjurin 1(NINJ1)基因启动子区HNF4α反应元件的荧光素酶报告基因质粒pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p,转染肝癌细胞,采用荧光素酶报告基因法检测肝癌细胞内HNF4α转录活性的改变,qPCR检测小分子化合物木犀草素或阿尔维林处理后肝癌细胞中HNF4α及下游基因的表达情况,荧光素酶报告基因法检测小分子化合物处理后细胞内HNF4α转录活性的改变.结果 蛋白热迁移实验证实,NINJ1基因启动子区HNF4α的DNA结合片段可与HNF4α蛋白结合.在过表达HNF4α的肝癌细胞中,pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p均可检测到肝癌细胞中HNF4α活性的改变,且pGL3-NINJ1-9p较pGL3-NINJ1-3p的检测灵敏度更高(P<0.01).木犀草素和阿尔维林与HNF4α蛋白存在直接相互作用,分别下调和上调HNF4α靶基因;pGL3-NINJ1-9p可检测到木犀草素和阿尔维林对HNF4α转录活性的影响.结论 利用报告基因载体pGL3-NINJ1-9p成功建立了HNF4α活性的检测系统,为筛选调控HNF4α活性的小分子化合物等提供了基础工具.
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隐匿性肝性脑病诊治目前存在的问题及对策
隐匿性肝性脑病定义为有神经心理学和(或)神经生理学异常但无定向力障碍、无扑翼样震颤的肝硬化患者.West-Haven分级标准将肝性脑病分为0~4级,2011年SONIC分级标准将轻微型肝性脑病(0级)和1级肝性脑病合称为隐匿性肝性脑病.隐匿性肝性脑病的临床表现不明显,诊断较为困难,治疗方案尚无统一意见.本文就隐匿性肝性脑病的诊断和治疗进行综述,旨在为临床医师对该病的诊治提供指导.
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MicroRNA-544在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响
目的 明确微RNA-544(microRNA-544,miR-544)在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、凋亡、克隆形成及成球能力的影响,探讨其在肝癌发生、发展中的作用.方法 利用qPCR法检测二乙基亚硝胺(DEN)造模的大鼠肝组织和人肝癌组织与癌旁组织以及成球培养后肝癌干细胞球中miR-544的表达;肝癌细胞株Hep3B转染miR-544mimic或miR-544 inhibitor后,利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,平板克隆形成实验观察细胞克隆形成能力,碘化丙啶(PI)染色后流式细胞仪检测细胞凋亡情况.肝癌细胞转染miR-544mimic后成球培养观察细胞形成肿瘤干细胞球能力的变化.结果 MiR544在DEN造模大鼠肝组织及人肝癌组织中的表达分别较未造模大鼠肝组织(P<0.05)和癌旁组织(P<0.01)下调.过表达miR-544可抑制肝癌细胞的增殖(P<0.05,P<0.01)和平板克隆形成能力(P<0.05),并促进细胞凋亡(48 h和72 h,P<0.01);而在肝癌细胞中抑制miR-544的作用可促进肝癌细胞的增殖(P<0.01)和克隆形成能力(P<0.05).在富集肝癌干细胞的成球培养中,miR-544的表达下调(P<0.05);而过表达miR-544可抑制肝癌细胞形成干细胞球(P<0.05).结论 MiR-544在肝癌组织中表达下调,且可抑制肝癌细胞的多种恶性生物学行为,提示其可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌作用.
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