首页 > 文献资料
-
实脾固肾化瘀方对阿霉素肾纤维化大鼠肾组织I型胶原蛋白、转化生长因子β1、层黏连蛋白及α平滑肌肌动蛋白表达的影响
目的：观察实脾固肾化瘀方对阿霉素诱导肾纤维化大鼠I型胶原蛋白、转化生长因子β1（TGF-β1）、层黏连蛋白（LN）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、治疗组、福辛普利组，每组10只。除正常对照组外，其余大鼠均采用尾静脉注射阿霉素（4 mg/kg）制作肾纤维化模型。造模后2周，治疗组和福辛普利钠组分别灌胃给予实脾固肾化瘀方浸膏（43 g/kg）和福辛普利钠溶液（2 mg/kg），正常对照组和模型组灌胃给予等体积生理盐水，均为1次/d。给药30 d后，检测尿蛋白，并采用免疫组织化学法检测肾组织I型胶原蛋白、层黏连蛋白（LN）、转化生长因子β1（TGF-β1）及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达变化。结果治疗组肾组织 I 型胶原蛋白、LN、TGF-β1及α-SMA 表达[分别为（24.64±0.67）、（18.71±0.72）、（14.71±0.68）、（17.64±0.74）]较模型组[分别为（32.86±0.88）、（28.35±0.87）、（18.35±0.96）、（25.86±0.85）]下降（P＜0.01），与福辛普利钠组[分别为（27.33±0.73）、（20.44±0.81）、（15.44±0.85）、（19.33±0.77）]比较差异无统计学意义（P＞0.05）。HE染色结果显示，治疗组大鼠肾小球系膜细胞及基底膜增生程度均较模型组明显改善。结论实脾固肾化瘀方可下调阿霉素诱导肾纤维化大鼠I型胶原蛋白、LN、TGF-β1和α-SMA表达。
-
结缔组织生长因子促进半月板无血管区损伤愈合
目的：探讨结缔组织生长因子（CTGF）对纤维软骨细胞外基质分泌、VEGF表达及促进半月板无血管区的损伤修复中的作用。方法：将新西兰大白兔半月板白区，经胶原酶消化、离心分离后，提取半月板纤维软骨细胞，培养至第2代。用流式细胞仪鉴定该细胞表面CD31，CD44，CD45和CD105标志物，并用Ⅱ型胶原抗体做免疫细胞化学鉴定，以证明所培养、传代的细胞是纤维软骨细胞。分别将细胞培养在浓度100 ng/ml的CTGF培养基中3、14 d后，通过实时定量聚合酶链反应，检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原和VEGF基因的表达变化情况。造模，在兔半月板中央区，制作长3 mm的纵行撕裂。将45只大白兔随机分为3组，处理方式为：半月板单纯缝合术，缝合术加填充PBS-纤维蛋白胶，缝合术加填充1．5滋g CTGF-纤维蛋白胶。术后第1、4、10周用荧光免疫组织化学分析法显示Ⅰ型、Ⅱ型胶原和VEGF在损伤处的表达与分布情况，直观撕裂处的愈合情况。结果：体外实验第14天，定量RT-PCR结果显示，100 ng/ml CTGF组中的Ⅰ型、Ⅱ型胶原和VEGF mRNA表达比PBS对照组，明显增加。体内实验的荧光免疫组织化学结果显示，在术后第10周，CTGF治疗组中的Ⅰ型、Ⅱ型胶原和VEGF已完全填充撕裂损伤处。 PBS-蛋白胶组中，损伤处仍有明显裂隙。结论：CTGF可促进半月板无血管区重要的细胞外基质（Ⅰ型、Ⅱ型胶原）的合成，同时损伤处VEGF的表达活性明显增强，有利于促进无血管区半月板撕裂损伤的愈合。
-
活血化瘀汤对大鼠骨折愈合过程中血清骨钙素和Ⅰ型胶原表达的影响
目的:研究活血化瘀汤在骨折愈合过程中对骨钙素(bone gamma carboxyglutamate protein,BGP)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)表达的影响,探讨该方在骨折愈合中对软骨内成骨的作用.方法:选用雄性SD大鼠60只,造成左胫骨中段闭合折骨标准的骨折模型,术后采用髓内针固定.随机分成中药组(麻醉苏醒后灌服活血化瘀汤,n=30)和对照组(麻醉苏醒后灌服等量生理盐水,n=30),分别于灌胃后3、5、7、14、21 d腹主动脉取血,然后取骨折端上下各0.5 cm长的一段骨质.应用Elisa技术,动态观察骨钙素和Ⅰ型胶原表达的变化.结果:血清骨钙素、Ⅰ型胶原在骨折愈合过程中表达持续增高,且表达具有一致性;活血化瘀汤组血清骨钙素、Ⅰ型胶原的表达均较生理盐水组明显(P＜0.05).结论:活血化瘀汤能调控骨钙素和Ⅰ型胶原表达,可能通过影响大鼠骨折愈合过程中软骨内成骨,促进骨折愈合.
-
三七透明质酸钠凝胶对家兔椎板切除术后硬膜外瘢痕中胶原成分的影响
目的:探讨三七透明质酸钠凝胶在家兔术后硬膜外瘢痕组织形成过程中对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法:大耳白品系家兔96只,体重2.0～2.5 kg,6月龄,雌雄各半,按照完全随机方法分为生理盐水组(A)、三七组(B)、透明质酸钠组(C)、三七透明质酸钠凝胶组(D),制作家免椎板切除模型,分别在硬膜囊周围涂抹生理盐水、三七浓缩液、透明质酸钠、三七透明质酸钠凝胶各0.5 ml,各组术后1、2、4、8周取材,Masson染色进行胶原生长情况的形态学观察,原位杂交方法分析Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达.结果:Masson染色中胶原纤维的排列,生理盐水组三七透明质酸钠凝胶组比对照组更加规整.Ⅰ型胶原mRNA表达三七透明质酸钠凝胶组在用药4周时明显低于生理盐水组、透明质酸钠组、三七组(P＜0.01);Ⅲ型胶原mRNA表达三七透明质酸钠凝胶组在用药4周时明显高于生理盐水组、透明质酸钠组、三七组(P＜0.01).结论:三七透明质酸钠凝胶对家兔术后硬膜外瘢痕具有改善胶原纤维的排列,降低瘢痕硬度,增加瘢痕弹性的作用.
-
中药干预模拟失重大鼠股骨Ⅰ型胶原表达的研究
目的:研究3周模拟失重对大鼠股骨Ⅰ型胶原表达的影响和中药复方的干预作用.方法:雄性Wiser大鼠,30只,随机分为空白组、悬尾模型组和悬尾中药组;后两组不悬吊适应1周,悬尾吊3用模拟失重,中药组予中药复方(含熟地黄、怀牛膝、黄芪、当归、牡蛎醋酸水解物等)水煎剂灌胃.实验结束取左股骨,免疫组化法观察股骨颈骨组织中Ⅰ型胶原表达.结果:经过3周尾吊模拟失重,与空白组比较,模型组股骨Ⅰ型胶原阳性计数和IOD值均出现显著下降(P<0.001);中药组股骨Ⅰ型胶原阳性计数和IOD值较空白组变化不显著(P>0.05),较模型组则有显著增加(P<0.001).结论:3周模拟失重可造成模型动物股骨Ⅰ型胶原蛋白合成严重障碍,受试中药复方对此有显著的改善作用.
-
改性甲壳素对体外培养人表皮细胞增殖的影响
目的 利用体外细胞培养技术,研究改性甲壳素对人表皮细胞增殖的影响.方法 人表皮细胞株(HaCaT)分别加入含0、10、100、500、1000、2000、5000 mg/L改性甲壳素的培养液,培养1、2、4、8、14 d,观察和检测处理后的细胞,采用MTT法评价改性甲壳素对HaCaT增殖能力的影响,ELISA法检测细胞培养上清人Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量,RT-PCR、蛋白免疫印迹法检测细胞Ⅰ型胶原COⅡA1及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达情况.结果 相同作用时间下,10、100 mg/L浓度的改性甲壳素对HaCaT增殖无明显作用,500、1000、2000、5000 mg/L浓度的改性甲壳素对细胞增殖有明显促进作用(均P<0.05),且随浓度的增加,相对增殖率升高,提示改性甲壳素浓度促进HaCaT增殖作用呈正相关(r=0.8551,P=0.03).含500、1000、2000、5000 mg/L改性甲壳素培养液中培养2 d后细胞相对增殖率即开始升高(均P<0.05),随时间的推移,细胞相对增殖率也逐渐升高(均P<0.05).相同作用时间HaCaT细胞分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原量500 mg/L开始增加(均P<0.05),1000 mg/L之后趋于稳定.在含500、1000、2000、5000 mg/L改性甲壳素培养液中培养2 d后HaCaT细胞分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原量即开始升高(均P<0.05),随时间的推移,Ⅰ型和Ⅲ型胶原量也逐渐升高(均P<0.05).500 mg/L改性甲壳素能明显增加HaCaT细胞中Ⅰ型胶原COⅡA1和PCNA基因mRNA的表达(均P<0.05),并促进细胞合成分泌Ⅰ型胶原COⅡA1及PCNA蛋白(均P<0.05).结论 改性甲壳素可明显促进表皮细胞的增殖,促进Ⅰ型胶原和PCNA蛋白表达,有望在伤口愈合的治疗中发挥重要的平衡修复作用.
-
机械力诱导氧化应激对人子宫旁韧带成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响
目的 探讨机械力诱导氧化应激对人子宫旁韧带成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 选取2014年1月至10月于本院行阴式全子宫切除术患者10例,术中取切除子宫的子宫旁韧带行成纤维细胞原代培养及鉴定.采用四点弯曲细胞力学加载系统对成纤维细胞进行力学加载构建机械力加载模型.使培养板产生形变位移1 mm的加力大小定义为1 333 μstrain.加力大小分别为0 μstrain(0 mm)、1 333 μtstrain(1 mm)、5 333 μstrain(4 mm),加载频率为0.5 Hz,加载时间为4h.同时采用不同浓度H2O2孵育成纤维细胞构建氧化应激模型.H2O2浓度分别为0、0.2、0.4、0.8和1.6 mmol/L,孵育时间均为4h.采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测两种模型中成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达,采用细胞免疫荧光检测机械力模型中细胞氧化损伤产物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平变化.结果 机械力加载模型中,实时荧光定量PCR和免疫印迹显示,与对照组(0μstrain)比较,加载1 333 μstrain机械力后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达均增加,而加载5 333 μstrain机械力后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达均减少(均P＜0.05).细胞免疫荧光检测显示,与对照组(0 μstrain)比较,加载1 333、5 333 μstrain机械力4h后,成纤维细胞内8-OHdG荧光强度明显增强,且后者更为显著.氧化应激模型中,实时荧光定量PCR显示,与对照组(0 mmol/LH2O2)比较,0.2 mmol/L H2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均显著增加(均P＜0.05);0.4 mmol/L H2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达增加(P＜0.05),而Ⅲ型胶原mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);0.8、1.6 mmol/L H2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达均显著下降(均P＜0.05).氧化应激模型中,免疫印迹检测显示,与对照组(0mmol/L H2O2)比较,0.2 mmol/LH2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),而Ⅲ型胶原蛋白表达显著增加(P＜0.05);0.4 mmol/L H2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白表达显著增加(P＜0.05),而Ⅲ型胶原蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);0.8、1.6mmol/L H2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达均显著下降(均P＜0.05).结论 一定范围内的机械力和氧化应激均可抑制子宫旁韧带成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达.机械力可能通过引起盆底支持组织发生氧化应激,导致细胞外基质重构,参与盆腔器官脱垂的发生发展.
-
改性甲壳素对体外培养人成纤维细胞的影响
目的：探讨不同浓度改性甲壳素对体外培养人成纤维细胞的影响。方法使用含0、10、100、500、1000、2000、5000 mg/L改性甲壳素的培养基体外培养人成纤维细胞株HFF，培养0、1、2、4、8、14 d后进行相应检测。采用MTT法评价改性甲壳素的细胞毒性，酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量，反转录（RT）?PCR、免疫印迹法检测Ⅰ型胶原、增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA和蛋白的表达。结果培养0、1、2、4、8、14 d MTT法检测显示，与对照组（0 mg/L改性甲壳素）比较，浓度为10、100 mg/L的改性甲壳素对HFF细胞无明显细胞增殖抑制作用；而浓度为500、1000、2000、5000 mg/L的改性甲壳素对HFF细胞增殖具有明显抑制作用，且具有时间和浓度依赖性（均P<0.05）。ELISA检测显示，500、1000、2000、5000 mg/L的改性甲壳素处理HFF细胞2 d，各组细胞分泌Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量均显著减少，与对照组比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。RT?PCR和免疫印迹检测显示，500 mg/L改性甲壳素处理HFF细胞0~14 d，随着培养时间延长Ⅰ型胶原、PCNA mRNA和蛋白表达均逐渐降低（均P<0.05）。结论改性甲壳素可明显抑制成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原、PCNA表达，有望在疤痕的防治中发挥作用。
-
血清素促进成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成
目的探讨血清素对成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白合成的影响。方法用不同浓度（50、100、200和400 ng／L）的血清素处理人成骨细胞，即时定量PCR（ RT-PCR）观察成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白和赖氨酰氧化酶（ LOX）含量的变化。用LOX siRNA干扰LOX蛋白的表达后，用Western blot法检测干扰效果，用酶联免疫吸附实验检测Ⅰ型胶原蛋白含量的变化。用RT-PCR检测血清素处理成骨细胞后Smad2蛋白、Smad3蛋白表达量的变化和Smad3基因敲除对LOX蛋白表达的影响。结果血清素上调成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白和LOX的表达水平，LOX siRNA可显著抑制Ⅰ型胶原蛋白的表达。此外，血清素上调了成骨细胞中Smad2蛋白和Smad3蛋白的表达，干扰Smad3基因的转录，抑制LOX蛋白的表达。结论血清素通过Smad信号通路上调LOX的表达，并促进成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成。
-
抗纤灵对5/6肾切除大鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原的影响
目的 采用5/6肾切除方法建立慢性肾衰竭动物模型,观察抗纤灵对5/6肾切除大鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组和造模组,造模组以5/6肾切除方法建立慢性肾衰竭动物模型,1周后按血肌酐水平将造模大鼠分为模型组、福辛普利组和抗纤灵组.福辛普利组给予3.3 mg·kg-1·d-1福辛普利灌胃,抗纤灵组给予23 g·kg-1·d-1抗纤灵灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,8周后采用免疫组化、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组大鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原基因和蛋白的表达.结果 模型组大鼠肾组织中肾小管及间质区Ⅰ型胶原及α-SMA表达较假手术组明显升高(P<0.01),抗纤灵组与模型组比较均明显下降(P<0.01);模型组大鼠表达α-SMA mRNA和Ⅰ型胶原mRNA水平较假手术组明显升高(P<0.001),抗纤灵组与模型组比较均明显下降(P<0.01或P<0.05);模型组大鼠表达α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白水平较假手术组明显升高(P<0.001),抗纤灵组与模型组比较均显著下降(P<0.001).结论 抗纤灵可降低肾间质成纤维细胞α-SMA的表达,减少肌成纤维细胞的活化与形成,继而使细胞外基质Ⅰ型胶原生成减少,从而延缓慢性肾衰竭大鼠肾纤维化进程,保护残肾功能.
-
矽肺纤维化发生发展过程中CXCL11功能的实验研究
目的：构建CXC趋化因子11（CXCL11）基因小干扰RNA片段的表达质粒，进而探讨CXCL11在矽肺纤维化发生发展中的作用。方法采用RNA干扰技术，将CXCL11-siRNA表达质粒转染人胚肺成纤维细胞，筛选出佳干扰质粒序列。实验分为4组：空白对照组（C），常规10%胎牛血清MEM培养基培养；刺激组（S），加入经SiO2粉尘刺激的肺泡巨噬细胞培养上清；转染组（T），将筛选的佳干扰质粒转染FB后，再加入经SiO2粉尘刺激的肺泡巨噬细胞培养上清；阴性质粒转染组（N），将阴性质粒转染FB后，再加入经SiO2粉尘刺激的肺泡巨噬细胞培养上清。用Western blot法检测各组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果经肺泡巨噬细胞上清刺激后，S组与C组比较，Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量增加（P＜0.05），T组与S组比较，Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量减少（P＜0.05）。结论抑制CXCL11表达可以下调SiO2引起的人胚肺成纤维细胞的Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达，提示CXCL11表达与矽肺纤维化的发生发展有关。
-
Ⅰ型胶原纤维降解对牙本质粘接耐久性的影响
目的：评价Ⅰ型胶原纤维降解对牙本质粘接耐久性的影响。方法不同粘接系统牙本质试件浸泡于去离子水或人工唾液中24 h、1个月、4个月，以酶联免疫吸附试验定量测定浸提液中Ⅰ型胶原吡啶交联终肽（ICTP）含量，以此衡量Ⅰ型胶原的降解程度，继以万能材料试验机测试微拉伸粘接强度后，以Pearson相关系数分析微拉伸粘接强度与ICTP 释放量之间的相关性。结果3种牙本质粘接系统，随着人工唾液浸泡时间的增长，其粘接强度均有所下降，而各组的胶原降解ICTP释放量均随之增高。ICTP释放量及微拉伸粘接强度数据的散点图决定系数R2＝0.75，表明胶原降解后ICTP释放量与粘接强度值之间具有高度相关性。结论Ⅰ型胶原降解后ICTP释放量与牙本质粘接强度值之间呈负相关关系，牙本质粘接强度值随Ⅰ型胶原降解后 ICTP 释放量的增加而下降，说明Ⅰ型胶原的降解对牙本质粘接耐久性产生了不利影响。
-
纤维溶解酶原激活物抑制剂-1对大鼠胚肺成纤维细胞的影响
目的 研究纤维溶解酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)对大鼠胚肺成纤维细胞增殖、转化及胶原合成的影响,探讨PAI-1在肺纤维化发生中的作用.方法 体外分离培养Wister 待产孕大鼠胚肺成纤维细胞,应用四甲基偶氮唑盐试验观察不同浓度(5、10、20、40、80 μg/L)的PAI-1刺激12、24和48 h后成纤维细胞的增殖率;选用PAI-1适浓度20 μg/L刺激48和72 h后,细胞免疫化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;实时PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原24和48 h时mRNA表达的变化.结果各浓度PAI-1刺激成纤维细胞后,以20 μg/L 12 h增殖率及吸光度值高,分别为62.6%和0.573±0.039.在12 h中,不同浓度组较对照组差异有统计学意义(F=111.112,P=0.000),选择20 μg/L为适浓度.免疫细胞化学法检测20 μg/L PAI-1刺激48、72 h后,PCNA表达的积分吸光度值分别为3685±686和2530±477,较对照组差异有统计学意义(F=7.85,P=0.020).PAI-1刺激成纤维细胞24和48 h后,α-SMA表达上调(230±11)%和(159±9)%,较对照组差异有统计学意义(F=39.92,P=0.000).Ⅰ型胶原表达上调(92±8)%和(65±12)%,差异有统计学意义(F=32.61,P=0.001).结论 PAI-1可以促进成纤维细胞增殖、转化及胶原合成,可能促进肺间质纤维化的发生和发展.
关键词： 成纤维细胞 纤溶酶原激活物抑制物1 细胞增殖 肌动蛋白类 胶原Ⅰ型 -
转录活化子1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺组织中细胞因子和胶原表达的影响
目的 观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸雾化吸入对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原,纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1),转化生长因子-β_1(TGF-β_1)和羟脯氨酸表达的影响.方法 将45只Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、博来霉素组和寡核苷酸组,每组15只,分别在气管内灌注并雾化吸入生理盐水、博来霉素、STAT1反义寡核苷酸.分别于雾化后第7天、第14天和第28天每组各处死5只大鼠.肺组织HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化改变,免疫组织化学SP法测定肺组织中TGF-β_1、PAI-1表达,逆转录PCR测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,肺组织匀浆测定羟脯氨酸含量.样本均数间比较采用单因素方差分析和q检验.结果 寡核苷酸组大鼠各时间点的肺泡炎和肺纤维化程度均较博来霉素组减轻.博来霉素组和寡核苷酸组大鼠肺组织中TGF-β、PAI-1表达水平均明显高于生理盐水组,博来霉素组和寡核苷酸组大鼠雾化后第7天TGF-β、PAI-1的积分吸光度值分别为182±12和169±12、128±11和113±13,明显高于生理盐水组的21±6和27±9,第28天时(68±7和87±7、54±8和57±8)仍高于生理盐水组(22±7和26±7);雾化后第7天、第14天和第28天,寡核苷酸组大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为1.36±0.10、1.19±0.28、1.22±0.24和1.20±0.09、0.62±0.09、0.76±0.12,明显低于博来霉素组(3.29±0.28、2.04±0.25、1.91±0.30和1.63±0.15、1.58±0.13、1.12±0.09),寡核苷酸组大鼠肺组织中羟脯氨酸含量(mg/g)分别为3.02±0.13、3.24±0.31和3.60±0.16,明显低于博来霉素组的3.76±0.10、3.92±0.30和4.62±0.28.结论 STAT1反义寡核苷酸雾化吸入能减轻博来霉素致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化,其机制可能与抑制TGF-β_1、PAI-1的表达,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减少,羟脯氨酸含量降低有关.
关键词： 肺纤维化 STAT1转录因子 胶原Ⅰ型 胶原Ⅲ型 纤溶酶原激活物抑制物1 -
老年高血压左心室肥厚患者心肌胶原纤维的病理改变特点
目的 观察老年高血压左心室肥厚(LVH)患者心肌胶原纤维的病理改变特点.方法 从解放军总医院1954年3月~2001年2月的3520例连续尸体解剖标本中,选取年龄≥ 65岁的126 例的心脏标本,并依据诊断分为高血压组101例,其中LVH 0级15例,LVH Ⅰ级36例,LVH Ⅱ级28例,LVH Ⅲ级22例;对照组25例,对2组标本进行HE、苦味酸天狼星红和Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维免疫组织化学染色,运用光镜和偏振光观察胶原纤维的分布特点,采用全自动图像分析计算心肌间质胶原容积分数(CVF)、Ⅰ型CVF和Ⅲ型CVF及Ⅰ型/Ⅲ型比值.结果 与对照组比较,高血压组LVH 0级心肌胶原纤维无明显改变(P>0.05);与LVH 0级比较,高血压组LVHⅠ级患者心肌CVF 、Ⅰ型CVF显著增高(P<0.01),而Ⅲ型CVF、Ⅰ型/Ⅲ型比值无明显改变(P>0.05);高血压组LVH Ⅱ级和LVH Ⅲ级患者心肌各项指标均显著增高(P<0.01).结论 随着高血压LVH程度的加重,Ⅰ型CVF明显升高,提示舒张功能受损愈重.
-
Toll样受体2在血管紧张素Ⅱ致高血压小鼠心肌纤维化中的作用
目的：探讨Toll样受体（TLR）2在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）所致高血压小鼠心肌纤维化过程中的作用。方法选择SPF级雄性野生型C57小鼠18只，随机分为对照组、AngⅡ组和TLR2阻断组，每组6只。AngⅡ组和TLR2阻断组采用皮下微量泵持续灌注AngⅡ7 d建立高血压模型，小鼠尾动脉套法测血压。TLR2阻断组尾静脉注射TLR2中和抗体后，Masson染色、免疫组织化学染色观察心肌纤维化。结果与对照组比较，AngⅡ组小鼠心肌纤维化明显升高，心肌间质有大量胶原纤维，Ⅰ型胶原蛋白和转化生长因子β蛋白表达显著升高，差异有统计学意义（P＜0．05）；与AngⅡ组比较，TLR2阻断组小鼠心肌间质纤维化面积减少71．2％，Ⅰ型胶原蛋白表达减少75.5％，转化生长因子β蛋白表达下降77．7％，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 TLR2参与AngⅡ所致高血压小鼠心脏纤维化过程。
-
心脏交感神经对自发性高血压大鼠心肌肥厚与心肌纤维化调节作用
目的 观察自发性高血压大鼠心脏交感神经对心肌肥厚和心肌纤维化的调节作用.方法 选择7周龄无特定病原体级同源同系雄性自发性高血压大鼠20只,随机分为对照组10只,手术组(行颈交感神经节切除术)10只,饲养7周.超声心动图检测心脏结构和功能,并计算左心室质量指数.生物医学信号采集处理系统检测血流动力学指标.实时定量PCR检测心肌胶原组织Ⅰ、心肌胶原组织Ⅲ、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和去甲肾上腺素转运蛋白(NET) mRNA.结果 手术组全心质量、左心室质量及左心室质量指数较对照组明显降低(P＜0.05,P＜0.01).手术组室间隔厚度、左心室后壁厚度较对照组明显降低[(1.55±0.14)mmvs(1.84±0.18)mm,P=0.001;(1.52±0.10)mm vs(1.83±0.17)mm,P=0.000].与对照组比较,手术组NETmRNA表达明显升高,心肌胶原组织Ⅲ和CTGF mRNA表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 心脏交感神经对自发性高血压大鼠心肌肥厚和心肌纤维化具有调节作用,这一作用可能与NET表达有关.
-
血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1介导外膜成纤维细胞表型转化
目的 探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)是否参与血管外膜成纤维细胞(AF)表型转化.方法 选取雄性SD大鼠,组织切块法培养胸主动脉AF,将未用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的AF分别作为空白组、对照1和2组,用2.5、5.0、10.0和15.0 ng/ml TGF-β1诱导AF依次为A、B、C和D组;分别用50 μmol/L的EMD638683和SB203580预处理细胞为抑制剂1和2组;用5 ng/ml TGF-β1刺激细胞分别为刺激1和2组.Western blot检测SGK1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白相对表达量.结果 与空白组比较,A、B和C组SGK1表达显著增加(P＜0.05),B组SGK1表达量高;B、C和D组α-SMA表达显著增加(P＜0.05),C组α-SMA表达量高(P＜0.05).与对照1组比较,刺激1组细胞a-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达明显升高(P＜0.05),与刺激1组比较,抑制剂1组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达显著降低(P＜0.05);与对照2组比较,刺激2组细胞SGK1表达明显升高(P＜0.05),与刺激2组比较,抑制剂2组细胞SGK1表达显著降低(P＜0.05).结论 SGK1通过p38促分裂素原活化蛋白激酶参与TGF-β1诱导的血管AF表型转化,参与血管的病理性重构.
-
骨转换生化标志物与老年2型糖尿病患者并发骨质疏松的相关性研究
目的 探讨老年2型糖尿病患者骨质疏松及与骨转换生化标志物的相关关系.方法 应用双能X线骨密度仪分别测定102例老年2型糖尿病(T2DM)患者和42例健康老年人腰椎和股骨骨密度,将糖尿病患者分成骨质疏松组与非骨质疏松组,检测血清中骨转换生化标志物总Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(TPⅠNP)、Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTx)、甲状旁腺素(PTH)及血清钙(Ca)、血清磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、肌酐、血尿素、尿微量白蛋白/肌酐(UA/Cr)、25羟维生素D3[25-(OH)VD3]等相关生化指标,并测量其体质指数,分析引起T2DM患者骨质疏松的相关危险因素.结果 骨质疏松组腰椎及股骨骨密度均值均显著低于对照组(t=9.006、6.347、7.387、5.321,均P＜0.01).骨质疏松组TP Ⅰ NP、β-CTx、PTH、ALP、FBG、HbAlc、肌酐及UA/Cr较对照组升高(t=2.212、4.431、2.215、3.544、0.433、1.629、0.365、5.436,P ＜0.01或P＜0.05),25-(OH)VD3低于对照组(t=2.700,P＜0.01).相关分析显示,TP I NP和骨质疏松患者左侧股骨大转子Troch、Ward’s三角的骨密度呈负相关(r=-0.413、-0.375,P＜0.01);β-CTx和骨质疏松患者左侧股骨大转子Troch的骨密度呈负相关(r=-0.301,P＜0.05).对T2DM骨质疏松患者体质指数超重组TP Ⅰ NP、β-CTx和肥胖组TP Ⅰ NP、β-CTx均高于正常体质量组(F=50.59、51.28,F=96.20、95.71,均P＜0.01);口服二甲双胍(MH)患者TP Ⅰ NP、β-CTx显著高于口服噻唑烷二酮类(TZDs)和磺脲类(SU)患者(F=32.33、33.35,F=31.07、39.18,均P＜0.01);血糖控制不佳组TP Ⅰ NP、β-CTx均高于血糖控制良好组(F=11.32、13.69,均P＜0.01);有并发症发生的患者的TP Ⅰ NP、β-CTx均高于没有并发症发生的患者(F=52.75、70.34,均P＜0.01).结论 老年T2DM患者存在不同程度骨密度下降;联合应用TP Ⅰ NP、β-CTx检测有助于T2DM患者骨质疏松的早期诊断.
-
沙利度胺下调JNK信号通路抑制肺纤维化大鼠Ⅰ型胶原蛋白的过度表达
目的 探讨沙利度胺抑制肺纤维化大鼠Ⅰ型胶原蛋白的过度表达,从而减轻博莱霉素诱导的大鼠肺间质纤维化的机制. 方法 将90只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(N组)、模型组(M组)、沙利度胺组(T组)、SP600125组(SP组)和沙利度胺+SP600125组(T+ SP组).气管内滴注博莱霉素(BLM)5 mg/kg生理盐水诱导肺纤维模型,于造模当日起,各组给予相应药物,第7、14、28天处死大鼠,取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色,光镜下观察肺泡炎和肺纤维化程度;碱水解法检测肺组织羟脯氨酸(Hyp)含量;免疫印迹法(Western blot法)、实时荧光定量PCR法检测肺组织中c-jun氨基末端激酶(JNK)及Ⅰ型胶原蛋白表达水平. 结果 M组第7天肺泡炎性程度严重,第28天形成显著肺纤维化,Hyp含量于第28天达高峰,其p-JNK、Ⅰ型胶原蛋白含量与对照组比较均明显升高(F=277.87、472.51,均P＜0.01);T组、SP组和T+SP组各时间点肺泡炎和纤维化程度均低于M组,p-JNK、Ⅰ型胶原蛋白含量亦低于M组(F=14.77、61.59、101.73,均P＜0.01;F=10.33、79.12、57.48,均P＜0.01);SP组p JNK含量与T+SP组比较差异无统计学意义. 结论 沙利度胺可能通过下调JNK信号通路抑制肺纤维化大鼠Ⅰ型胶原蛋白的过度表达,从而减轻大鼠肺间质纤维化.
关键词： 肺纤维化 胶原Ⅰ型 JNK丝裂原活化蛋白激酶类
