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实脾固肾化瘀方对阿霉素肾纤维化大鼠肾组织I型胶原蛋白、转化生长因子β1、层黏连蛋白及α平滑肌肌动蛋白表达的影响
目的：观察实脾固肾化瘀方对阿霉素诱导肾纤维化大鼠I型胶原蛋白、转化生长因子β1（TGF-β1）、层黏连蛋白（LN）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、治疗组、福辛普利组，每组10只。除正常对照组外，其余大鼠均采用尾静脉注射阿霉素（4 mg/kg）制作肾纤维化模型。造模后2周，治疗组和福辛普利钠组分别灌胃给予实脾固肾化瘀方浸膏（43 g/kg）和福辛普利钠溶液（2 mg/kg），正常对照组和模型组灌胃给予等体积生理盐水，均为1次/d。给药30 d后，检测尿蛋白，并采用免疫组织化学法检测肾组织I型胶原蛋白、层黏连蛋白（LN）、转化生长因子β1（TGF-β1）及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达变化。结果治疗组肾组织 I 型胶原蛋白、LN、TGF-β1及α-SMA 表达[分别为（24.64±0.67）、（18.71±0.72）、（14.71±0.68）、（17.64±0.74）]较模型组[分别为（32.86±0.88）、（28.35±0.87）、（18.35±0.96）、（25.86±0.85）]下降（P＜0.01），与福辛普利钠组[分别为（27.33±0.73）、（20.44±0.81）、（15.44±0.85）、（19.33±0.77）]比较差异无统计学意义（P＞0.05）。HE染色结果显示，治疗组大鼠肾小球系膜细胞及基底膜增生程度均较模型组明显改善。结论实脾固肾化瘀方可下调阿霉素诱导肾纤维化大鼠I型胶原蛋白、LN、TGF-β1和α-SMA表达。
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荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠模型PPARγ/c-Ski表达的影响
目的:本研究主要观察荔枝核总黄酮(TFL)对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化大鼠的防治效果,并从PPARγ、c-Ski等信号分子角度探讨TFL抗肝纤维化的作用机制.方法:90只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、TFL(高、中、低)剂量组和秋水仙碱阳性对照组,每组15只.空白对照组不造模,其余各组按2 mL·kg-1腹腔注射0.5％的DMN溶液制作肝纤维化模型(生理盐水稀释,每周前3天,共4周);造模同时TFL高、中、低剂量组分别以TFL 200、100、50mg·kg-1·d-1灌胃给药,秋水仙碱组以秋水仙碱0.1 mg·kg-1·d-1灌胃给药,空白对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,共6周(上述灌胃药物均用适量生理盐水配置成混悬液);6周末处死大鼠,腹主动脉真空负压采血检测天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、转化因子-β1(TGF-β1)血清水平;Masson染色法观察大鼠肝纤维化程度,并进行肝纤维化半定量评分;运用免疫组化检测各组肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)和c-Ski的蛋白相对表达水平.结果:与空白对照组比较,模型组大鼠血清AST、ALT、TGF-β1水平、肝纤维半定量评分和肝组织α-SMA蛋白表达均显著升高(P＜0.05);PPARγ和c-Ski蛋白相对表达明显减少(P＜0.05);与模型组比较,荔枝核总黄酮各组血清AST、ALT、TGF-β1水平、肝纤维半定量评分和肝组织α-SMA蛋白表达均明显减少(P＜0.05);肝组织PPARγ、c-Ski的蛋白相对表达明显增加(P＜0.05),且具有一定量效关系.结论:TFL能够有效地降低DMN诱导的肝纤维化大鼠的肝损伤,改善其肝纤维化的程度;其抗肝纤维化的作用机制可能是通过上调PPARγ/c-Ski表达,下调α-SMA和TGF-β1表达,抑制肝星状细胞活化来实现.
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健脾软肝方对四氯化碳致肝纤维化大鼠α-SMA 及其mRNA表达的影响
目的:明确健脾软肝方对肝纤维化大鼠α-SMA及其mRNA表达的影响,初步探讨健脾软肝方防治肝纤维化的作用机制,为肝纤维化的中医临床治疗提供实验依据.方法:选取Wistar雄性大鼠72只,随机分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊组、健脾软肝方高、中、低剂量组.模型组利用CCl4对大鼠进行腹腔注射,按0.2 mL/100 g腹腔注射30％CCl4与70％橄榄油混合溶液,正常组注射等量生理盐水,2次/周,4周后复制大鼠肝纤维化动物模型,该实验采用免疫组化ABC法检测肝纤维化大鼠α-SMA蛋白的表达水平,采用Real-time PCR法检测肝纤维化大鼠α-SMA mRNA的表达水平,采用H-E染色和Mallory染色观察大鼠肝纤维化的病变程度.结果:模型组α-SMA蛋白表达显著上升(P<0.05);健脾软肝方高、中、低剂量组组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中高、中、低剂量组之间α-SMA蛋白阳性表达逐渐升高,可以呈一定的药物依赖关系.模型组α-SMA mRNA表达显著上升(P<0.05);健脾软肝方高、中、低剂量组组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且高、中、低剂量组之间α-SMA mRNA表达水平逐渐升高,呈一定的药物依赖关系.结论:健脾软肝方抗肝纤维化的作用机制可能与抑制大鼠肝脏内α-SMA及其mRNA的表达有关.
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夏枯草硫酸多糖对CCl4致大鼠肝纤维化及TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞活化的影响
目的:观察夏枯草硫酸多糖(PSSP)对四氯化碳(CCl4)所致的大鼠肝纤维化及转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)的影响,从而初步探讨PSSP抗纤维化的机制.方法:采用CCl4-橄榄油溶液腹腔注射诱导大鼠肝纤维化造模,随机分为5组,分别为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.25 mg·kg-1),PSSP高剂量组(300 mg· kg-1)和PSSP低剂量组(100 mg· kg-1).分别测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),层粘连蛋白(LN),透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ胶原(C-Ⅳ)的含量;采用苏木素-伊红(HE)及天狼猩红染色观察大鼠肝组织病理学改变;体外培养HSC-T6细胞;采用细胞增殖与活性法(CCK-8)测定PSSP对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞增殖的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSC-T6细胞中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA和蛋白的表达.结果:与模型组比较,PSSP可明显降低大鼠ALT,AST,HA,LN,PC-Ⅲ和C-Ⅳ的含量,并减轻大鼠肝纤维化程度(P＜0.01);PSSP可抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的增殖,减少HSC-T6细胞Col-Ⅰ,α-SMA mRNA和蛋白的相对表达量(P＜0.01).结论:PSSP具有很好的抗纤维化作用,其机制可能与抑制肝星状细胞活化及抑制胶原合成与沉积,减少细胞外基质(ECM)的生成并促进其降解有关.
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柴朴汤对支气管哮喘大鼠气道重塑及肺组织中α-平滑肌肌动蛋白表达的影响
目的:观察支气管哮喘大鼠气道重塑和α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA)在哮喘大鼠模型中的动态表达及柴朴汤的干预作用.方法:将70只SD大鼠随机分为对照组、哮喘模型组、柴朴汤干预组,用卵蛋白(OVA)致敏激发建立大鼠哮喘模型,采用HE染色的方法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学方法研究肺组织气道形态学参数的改变及α-SMA的表达.结果:①哮喘2,4,8周组总管壁面积( WAt/Pbm)、内壁面积(WAi/Pbm)及平滑肌面积(Wam/Pbm)均高于对照组(P＜0.05),且随着激发天数的增加,上述指标有增加的趋势,哮喘4周组高于2周组,哮喘8周组高于4周组(均P ＜0.05)；柴朴汤2,4,8周组,哮喘2,4周组WAt/Pbm,WAi/Pbm,Wam/Pbm均低于哮喘8周组(均P＜0.05),但柴朴汤组高于对照组.②哮喘2,4,8周组的α-SMA的mRNA和蛋白水平明显高于柴朴汤2,4,8周组及对照组(均P＜0.05)；α-SMA的mRNA和蛋白水平随激发天数的增加而明显增加(均P ＜0.05)；柴朴汤2周组的α-SMA的mRNA和蛋白水平与对照组相比,差异没有显著性；柴朴汤各周组与哮喘各相应周组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论:哮喘大鼠肺组织α-SMA呈动态过量表达.柴朴汤可通过下调α-SMA表达,抑制气道平滑肌收缩及增生抑制气道重构.
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金匮肾气丸对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的影响
目的:研究金匮肾气丸对腺嘌呤致大鼠肾间质纤维化的保护作用,并探讨其作用机制.方法:96只SD大鼠随机分成正常组、模型组、氯沙坦组(5 mg·kg-1)和金匮肾气丸高、中、低剂量组(2.4,1.2,0.6g·kg-1),采用腺嘌呤灌胃(200 mg·kg-1·d-1)诱导肾间质纤维化大鼠模型,2h后灌胃给予相应药物,造模连续9周;给药连续16周.采用生化法测定血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松(Masson)染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠肾脏组组转化生长因子-β(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),钙黏蛋白(E-cadherin),Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ),Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),基质金属蛋白酶-2(MMP-2),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制剂-2 (TIMP-2) mRNA的表达;以免疫组化法测定大鼠肾脏TGF-β1,α-SMA和E-cadherin的表达.结果:与正常组比较,模型组中SCr和BUN显著升高(P＜0.01),给予金匮肾气丸干预后SCr和BUN水平降低(P＜0.05);HE染色和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组肾间质损伤严重且肾间质胶原物质大量沉积,给予金匮肾气丸干预后肾间质小管损伤减轻,肾间质胶原物质沉积减少;Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组TGF-1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA表达上调(P＜0.05),模型组E-cadherin,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA表达下调(P＜0.05),给予金匮肾气丸干预后E-cadhenn,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA的表达上调(P＜0.05),TGF-1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA的表达明显下调(P＜0.05);免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组E-cadherin蛋白表达下调(P＜0.01),TGF-β1和α-SMA蛋白表达上调,金匮肾气丸干预后E-cadherin蛋白表达上调(P＜0.05),TGF-和α-SMA蛋白表达下调(P＜0.05).结论:金匮肾气丸可有效改善肾间质纤维化并对肾脏有一定的保护作用,其改善肾间质纤维化的机制可能与降低基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1,TIMP-2)活性,TGF-β1蛋白表达,α-SMA蛋白表达,升高基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-2,MMP-9)活性,E-cadherin蛋白表达,从而减少胶原物质的沉积有关.
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四逆散加味抗肝纤维化的作用及机制研究
目的:研究四逆散加味对肝纤维化转化生长因子-β1(TGF-β1)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和基质金属蛋白酶(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的作用及其相关性,探讨其抗肝纤维化的作用机制.方法:70只Wister大鼠随机分为7组:正常对照组、病理模型组、四逆散组、四逆散加味高、中、低剂量组、四逆散预防组.除正常对照组外,其余各组均采用猪血清ip诱发肝纤维化,0.5 mL/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成肝纤维化.预防组于造模同时给药(以四逆散加味7 g·kg-1),各治疗组于造模第6周给药,连续10周.四逆散组4g·kg-1,四逆散加味高、中、低剂量组(14,7,3.5 g·kg-1).采用免疫组化S-P法检测肝组织TGF-β1,p-p38MAPK,α-SMA,MMP-13和TIMP-1蛋白阳性染色吸光度(A).结果:正常组与模型组的TGF-β1依次为[(0.75±0.25)vs(8.67±0.64),P＜0.01],p-p38MAPK[(21.71 ±0.37)vs(80.25 0.53),P ＜0.01],α-SMA[(3.32±0.64)vs(10.55 ±0.34),P ＜0.05]和TIMP-1[(25.57±6.46) vs(200.25±20.36),P＜0.01]蛋白表达均显著减弱.四逆散加味中剂量与模型组比较TGF-β1[(5.19±2.33)vs(8.67±0.64),P ＜0.05],p-p38MAPK[(47.55 ±0.58)vs(80.25 ±0.53),P ＜0.05],α-SMA (6.21 ±0.78)vs(10.55±0.34),P＜0.01)和TIMP-1 [(86.02 ±51.37)vs(200.25 ±20.36),P＜0.01]蛋白表达显著减弱；MMP-13 [(109.59 ±33.21)vs(35.87±6.35),P＜0.01]蛋白表达显著增强.结论:四逆散加味有明显的抗肝纤维化作用.其机制可能经TGF-β/p38MAPK信号转导通路抑制肝星状细胞(HSC)活化,使HSC低表达TIMP-1,高表达的MMP-13促进基质降解有关.
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芪参益气滴丸抗血管新生大鼠心肌缺血动态观察及机制探讨
目的:基于血管新生,探讨芪参益气滴丸对心肌缺血大鼠心肌损伤的保护作用及机制.方法:160只远交群SD大鼠分为假手术组、模型组、芪参益气滴丸高、低剂量组,结扎冠状动脉左前降支复制大鼠心肌缺血模型,术后3,7,14,28 d苏木素伊红(HE)染色检测心脏病理学变化,免疫组织化学染色检测缺血边缘区血管密度,血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),实时荧光定量PCR法检测边缘区血管新生及成熟相关基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,KDR),碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),血小板源性生长因子-B(plateletderived growth factor-B,PDGF-B),血小板源性生长因子受体-β(plateletderived growth factor receptor beta,PDGFR-β),血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1),血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)的表达.结果:大鼠心肌梗死后3d心脏可见明显梗死区,7～28 d左心室扩张,梗死区室壁变薄,3～28 d梗死边缘区均可见新生毛细血管,CD31阳性及α-SMA阳性血管密度较假手术增加.与模型组比较,芪参益气滴丸高低剂量组各时间点可减小心肌梗死面积,促进边缘区血管新生,7～28 d可抑制心室扩张(P＜0.05).PCR结果显示心肌梗死早期血管新生及稳定相关因子均升高,后期新生因子表达降低,血管成熟相关因子升高(P＜0.05).芪参益气滴丸给药3d能促进VEGF,Ang-1 mRNA表达,降低bFGF mRNA表达(P＜0.05);7d能促进VEGF,bFGF mRNA表达(P＜0.05),14 d能促进VEGF,Ang-1,bFGF,PDGFR-β mRNA表达(P＜0.05);28 d能促进bFGF mRNA表达(P＜0.05),降低VEGF,KDR,Ang-1,Ang-2 mRNA表达(P＜0.05).结论:芪参益气滴丸能保护心肌缺血大鼠缺血心肌,减小心肌梗死面积,抑制左心室扩张,其机制与调节缺血后不同阶段缺血边缘区心肌组织中血管新生及成熟相关因子mRNA表达,促进梗死边缘区血管新生及成熟有关.
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补中益气汤对脾气虚症大鼠伤口肌肉组织Hyp,VEGF,α-SMA表达的影响
目的:研究补中益气汤对脾气虚症大鼠伤口愈合的影响和其机制的研究,以验证伤口愈合从脾论治.方法:60只SD大鼠随机分为正常组、脾气虚模型组、补中益气汤组(7 g·kg-1),各组又分为术后3,7d2个亚组.模型组和补中益气汤组每日灌服生大黄(20 g·kg-1),连续灌胃18d,正常组给予等体积蒸馏水.第19天各组均制作手术伤口,当日起补中益气汤组给予灌胃补中益气汤,连续给药至大鼠处死之日.正常组和模型组给予等体积蒸馏水.分别于术后3,7d处死大鼠,制备肌肉组织样本,采用碱水解法检测羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,应用Western blot法检测血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达.结果:模型组的Hyp,VEGF.α-SMA均降低,与正常组的差异有统计学意义(均P＜0.01);与术后3d模型组比较,术后3d补中益气汤组的Hyp,VEGF,α-SMA均升高(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05),但是仍低于术后3d正常组(均P＜0.05);与术后7d模型组比较,术后7d补中益气汤组的Hyp,VEGF,α-SMA均升高(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01),并与术后7d正常组的差异均无统计学意义.结论:补中益气汤通过升高肌肉组织中的Hyp,VEGF,α-SMA,可有效促进伤口的愈合,同时该药用药时间的延长也有助于伤口的愈合.
关键词： 补中益气汤 脾气虚 羟脯氨酸 α-平滑肌肌动蛋白 血管内皮细胞生长因子 -
补阳还五汤对肾间质纤维化大鼠α-SMA的作用
目的:观察补阳还五汤对单侧输尿管结扎肾间质纤维化大鼠模型α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的作用.方法:将SD大鼠随机分为单侧输尿管结扎造模组(UUO)和假手术对照组.造模大鼠再随机分为模型组、补阳还五汤治疗组(中药组)和依那普利组.大鼠分别在第7,14,28天进行肾功能、HE染色、Masson染色和免疫组化检测.结果:与假手术组相比,模型组大鼠肾功能显著下降；依那普利和中药干预后,肾功能显著提高.光镜显示模型组大鼠出现显著间质纤维化,依那普利和中药干预显著减轻了肾小管损害.各个时间点,模型组肾间质损伤指数和α-SMA的表达与假手术组相比,显著升高.通过依那普利和中药干预在第7天时,显著降低肾间质损伤指数(模型组3.88±0.15,依那普利组2.48±0.43,中药组2.54±0.37,P＜0.05)和α-SMA的表达(模型组7 27±1.62,依那普利组5.27±2.18,中药组5 05±1 45,P＜0.05)；用药第14,28天后,可进一步降低肾间质损伤指数(14 d,模型组7.65±0.87,依那普利组4.17±0.39,中药组4.24±0.42,P＜0.01;28 d,模型组10 86±1.49,依那普利组6.19±0.58,中药组6.94±0.77,P ＜0.01)和α-SMA的表达(14 d,模型组17.48±4.16,依那普利组10.15±2.85,中药组10.58±3.19,P＜0.01；28 d,模型组29.68±7.24,依那普利组17.81±0.58,中药组18.04±4.72,P＜0.01).结论:补阳还五汤可改善单侧输尿管结扎大鼠肾功能和肾小管间质纤维化,降低肾间质损伤指数和α-SMA的表达,对拮抗肾间质纤维化有一定的作用.
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丹酚酸B,C分子药对配伍对UUO大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制
目的:研究丹酚酸B,C分子药对配伍对单侧输尿管梗阻(UUO)所致的肾间质纤维化大鼠的保护作用和机制.方法:采用50只健康雄性SD大鼠随机分为5组,即正常组、模型组、丹酚酸B组(12.5 mg·kg-1)、丹酚酸C组(12.5 mg·kg-1)、丹酚酸B,C按1:1配伍组(简称:丹酚酸B+C组,其中B和C各6.25 mg· kg-).除正常组外,其余大鼠均造成UUO模型.造模后第2天各组开始ig给予相应药物治疗14 d.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测尿β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG),N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG)的含量,免疫组化法检测肾组织内Ⅰ型胶原(Col Ⅰ),Ⅲ型胶原(ColⅢ),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果:①各组大鼠肾小管功能测定结果,与正常组比较,模型组尿β2-MG,NAG蛋白水平显著升高(P＜0.05);与模型组比较,各治疗组尿β2-MG,NAG水平显著降低(P＜0.05).②免疫组化检测结果,与正常组比较,模型组Col Ⅰ,ColⅢ,α-SMA平均吸光度A显著升高(P＜0.05);与模型组比较,丹酚酸B,B+C组Col Ⅰ,ColⅢ及各治疗组α-SMA平均吸光度A显著降低(P＜0.05);各治疗组比较,丹酚酸B,B+C组Col Ⅰ的A显著低于丹酚酸C组(P＜0.05),丹酚酸B+C组ColⅢ,α-SMA A显著低于丹酚酸C组(P＜0.05).结论:丹酚酸B,C分子药对配伍对肾间质纤维化大鼠肾脏具有保护作用,可一定程度的改善肾小管功能,降低尿β2-MG,NAG,并在一定程度上减少Col Ⅰ,ColⅢ和α-SMA的表达,从而延缓慢性肾脏病的进展.
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白花丹醌对TGF-β1刺激人肝星状细胞α-SMA表达的影响
目的:研究白花丹醌(plumbagin)对转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的体外培养人肝星状细胞HSC-LX2 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA和蛋白表达的影响.方法:体外培养HSC-LX2,随机设立空白组,TGF-β1刺激的模型组,TGF-β1+白花丹醌2.0 μmol·L-高剂量组,TGF-β1+白花丹醌1.5 μmol·L-1中剂量组和TGF-β1+白花丹醌1.0 μmol·L-低剂量组,各药物与细胞孵育72 h后,采用RT-PCR检测各组HSC-LX2 α-SMA mRNA的表达,采用免疫细胞化学方法(ICC)检测HSC-LX2中α-SMA蛋白的表达.结果:与正常组比较,模型组α-SMA mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.01);与模型组比较,白花丹醌作用72 h后,高、中剂量组HSC-LX2细胞中α-SMA mRNA的表达明显降低(P＜0.01);免疫细胞化学结果显示白花丹醌高、中剂量组对HSC-LX2细胞α-SMA蛋白的表达有显著地抑制作用(P＜0.05),尤以高剂量组更明显(P＜0.叭).结论:白花丹醌能抑制HSC-LX2的活化和增殖,其机制之一可能是从mRNA水平和蛋白水平抑制α-SMA的表达,从而发挥其抗肝纤维化作用.
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益气血祛风湿方对阿霉素肾病大鼠肾组织α-SMA、ROCK1表达的影响
目的:探讨益气血祛风湿方治疗肾脏病的有效作用和细胞生物学机制.方法:采用阿霉素肾病大鼠模型,用益气血祛风湿方水煎剂以及黄芪当归和青藤碱等进行干预治疗4周.实验结束时留取肾脏组织,采用免疫组化、Western-blotting技术观察肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达;采用RT-PCR技术测定肾组织中α-SMA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)等基因表达水平.结果:模型组大鼠肾组织中α-SMA的蛋白表达较正常大鼠显著增多,α-SMA和ROCK1基因表达也显著增高.各治疗组大鼠肾组织中α-SMA的表达均较模型组显著降低,益气血祛风湿方与青藤碱组显著优于芪归治疗组.各治疗组大鼠肾组织中α-SMA、Rock1基因表达水平较模型组显著降低,治疗组间无显著差异.结论:益气血祛风湿方显著降低肾间质纤维化相关分子的表达,在α-SMA方面作用较黄芪当归显著增强.
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抗纤灵方对Ang Ⅱ诱导肾纤维化小鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原的影响
目的:观察抗纤灵方对该模型小鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)的作用,探讨其作用机制.方法:将测得血压＜120mmHg的小鼠随机分为5组,每组12只,其中模型组、蒙诺组、抗纤灵组行单侧肾切除及微渗泵灌注血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ),正常组不做处理,生理盐水对照组行单侧肾切除及微渗泵灌注0.9％氯化钠溶液.各组均自由进食,抗纤灵组抗纤灵方2.3g/100g灌胃,蒙诺对照组蒙诺0.03g/100g灌胃,其余各组自来水灌胃,均为每日1次.上述治疗,4周后检测处死小鼠.将取出的肾组织,免疫组化法观察石蜡切片和冰冻切片α-SMA、Collagen Ⅰ在各组小鼠的表达.用Western blot比较α-SMA、Collagen Ⅰ在各组小鼠的表达.结果:免疫组化检测法显示,与正常组比较,模型组的α-SMA、Collagen Ⅰ的阳性率显著上升(P＜0.01);与模型组比较,抗纤灵组、蒙诺组的α-SMA、Collagen Ⅰ阳性率显著下降(P＜0.05,P＜0.01).Western blot检测法显示,与正常组比较,模型组的α-SMA、Collagen Ⅰ的灰度值显著上升(P＜0.01);与模型组比较,抗纤灵组、蒙诺组的α-SMA、Collagen Ⅰ的灰度值显著下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:抗纤灵方能抑制α-SMA的表达,并减少Collagen Ⅰ的生成,降低肾纤维化发生发展,进而减缓高血压肾损伤后的肾纤维化进程.
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清肾颗粒对慢性肾衰竭湿热证患者血清纤维连接蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的影响
目的:观察清肾颗粒对慢性肾衰竭(CRF)湿热证患者血清纤维连接蛋白(FN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响.方法:70例CRF湿热证患者随机分为对照组和治疗组各35例,实际完成64例(对照组31例,治疗组33例),并选取20名健康体检者作为正常组.治疗组与对照组均给予西医基础治疗,治疗组加用清肾颗粒,每次1袋(10g),每日3次口服,疗程8周.检测两组临床疗效及治疗前后血肌酐(Scr)、肾小球滤过率估算值(eGFR)、FN、α-SMA水平变化情况,并与正常组比较.结果:治疗组临床疾病总有效率为78.79％,中医证候总有效率81.82％,分别优于对照组的54.84％和51.61％(P＜0.05);治疗组治疗后Scr水平较治疗前显著下降,eGFR水平显著升高,且与同期对照组相比有明显差异(P＜0.05);治疗组和对照组患者治疗前的血清FN、α-SMA水平均显著高于正常组(P＜0.01),治疗后两组血清FN、α-SMA水平较治疗前均有显著下降(P＜0.05,P＜0.01),且治疗组的下降幅度大于对照组(P＜0.05).结论:清肾颗粒可以减轻CRF湿热证患者临床症状,改善肾功能,降低血清FN、α-SMA的水平,干预肾纤维化,终延缓CRF进展.
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降脂颗粒改善蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎的小鼠肝纤维化
目的:研究降脂颗粒对小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的肝纤维化的作用.方法:雄性C57BL/6小鼠24只,随机分为正常、蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)和降脂颗粒组.正常组小鼠予普通饲料,其余两组小鼠予MCD饲料,降脂颗粒组同时予降脂颗粒灌胃.6周后,处死各组动物并取肝组织固定或冻存.观察各组小鼠肝组织天狼猩红染色结果,用ELISA方法检测血清纤溶酶原激活物抑制因子-l(PAI-1)含量,应用荧光定量RT-PCR和/或Western blot检测肝组织PAI-1、转化生长因子-β1 (TGF-β 1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原α 1 (COL1A1)表达水平.结果:MCD组的肝组织出现广泛肝细胞脂肪变性,及窦周胶原组织增加,而降脂颗粒组肝细胞周围无明显胶原沉积.MCD组小鼠血清PAI-1含量较正常组小鼠显著升高(P＜0.001),与MCD组比较,降脂颗粒组PAI-1含量下调(P＜0.05).MCD组小鼠肝组织PAI-1、α-SMA、TGF-β 1和COL1A1 mRNA水平均较正常组显著升高(P＜0.01,P＜0.001),在降脂颗粒组中这些促纤维化基因的表达下调(P＜0.05).与正常组比较,肝组织PAI-1和α-SMA蛋白表达水平在MCD组显著升高,与MCD组比较,在降脂颗粒组表达均显著下调.结论:降脂颗粒对MCD饮食诱导的小鼠NASH肝纤维化具有预防作用,其机制可能与调控NASH中肝纤维化相关因子的表达从而抑制星状细胞活化、胶原增生及促进细胞外基质降解相关.
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益肾化瘀方对单侧输尿管结扎大鼠肾组织中α-SMA、E-cadherin表达的影响
目的:动态观察单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达及益肾化瘀方对其影响.方法:将清洁级雄性SD大鼠108只随机分为假手术组,模型组,益肾化瘀方高、中、低剂量组及缬沙坦组,除假手术组外各组采用UUO模型,分别于术后第7、14、28天光镜下观察肾间质病理改变,免疫组化法观察大鼠肾组织α-SMA、E-cadherin的表达变化.结果:造模后7d,大鼠肾组织中o-SMA表达即明显增高,而E-cadherin表达逐渐减少;与模型组相比,各治疗组大鼠α-SMA的表达减弱,E-cadherin的表达增强(P＜0.01,P＜0.05),以益肾化瘀方高剂量组和缬沙坦组变化显著,二者比较无统计学意义.结论:益肾化瘀方可能通过抑制大鼠肾组织中α-SMA的早期高表达,上调E-cadherin的表达,而发挥抗肾间质纤维化作用.
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膈下逐瘀汤对大鼠纤维化肝组织α-SMA和TGF-β1表达的影响
目的:观察膈下逐瘀汤抗猪血清诱导的大鼠肝纤维化作用及其可能的作用机制.方法:采用猪血清腹腔注射诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,VG染色法检测肝组织病理学改变,ELISA检测肝组织TGF-β1含量,定量RT-PCR检测肝组织TGF-β1和α-SMA mRNA表达.结果:与模型组大鼠比较,膈下逐瘀汤可显著降低猪血清诱导的肝纤维化程度,减少肝组织TGF-β1蛋白和mRNA表达,降低肝组织α-SMA mRNA表达.结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能与抑制肝星状细胞活化有关.
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刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠Endoglin等影响
目的:观察刺山柑总生物碱对系统性硬皮病(SSc)小鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、Endoglin及白细胞介素-6(IL-6)水平的影响.方法:BALB/c小鼠90只按随机数字表法分为空白对照组、模型组、青霉胺组及刺山柑总生物碱低、中、高剂量组.除空白对照组外,其余各组小鼠背部皮下注射盐酸博莱霉素建立SSc模型.成模后给药8周,ELISA法测定小鼠皮肤和肺组织α-SMA、皮肤组织Endoglin和血清MMP-1、IL-6水平.结果:与空白对照组比较,模型组小鼠皮肤和肺组织α-SMA、皮肤组织Endoglin和血清IL-6水平升高,血清MMP-1水平降低;与模型组比较,刺山柑总生物碱高剂量组α-SMA、Endoglin和IL-6水平降低,MMP-1水平升高.结论:刺山柑总生物碱可减少SSc α-SMA表达,降低Endoglin和IL-6的异常升高,升高MMP-1水平,改善SSc组织纤维化.
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化瘀泄浊方对肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响
目的:观察化瘀泄浊方对肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响.方法:选用健康、雌性SD大鼠50只,用单侧输尿管结扎方法复制大鼠肾间质纤维化模型,将其随机分为缬沙坦组[予缬沙坦5.3mg/(kg·d)经口灌服]、化瘀泄浊方组[化瘀泄浊方5.7g/(kg·d)经口灌服]、阿魏酸哌嗪分散片组[予阿魏酸哌嗪分散片6.7mg/(kg·d)]与模型组[予同等量生理盐水经口灌服],并设假手术组,每组10只大鼠.行HE、Masson染色观察实验大鼠梗阻侧肾脏组织形态学改变并用免疫组化方法检测实验大鼠梗阻侧肾脏α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及角蛋白(ck)的表达.结果:模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害(P＜0.05),α-SMA的表达也增加(P＜0.05),ck的表达明显减少(P＜0.05).各治疗组与模型组比较,病理损害减轻(P＜0.05),α-SMA表达明显减少(P＜0.05),ck表达明显增强(P＜0.05),治疗各组间比较,化瘀泄浊方组优于阿魏酸哌嗪分散片组(P＜0.05),其他各组间均无明显差异(P＞0.05).结论:输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,这可能与α-SMA蛋白及其mRNA的表达增加有关,化瘀泄浊方对其有一定的抑制作用.
