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三七透明质酸钠凝胶对家兔椎板切除术后硬膜外瘢痕中胶原成分的影响
目的:探讨三七透明质酸钠凝胶在家兔术后硬膜外瘢痕组织形成过程中对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法:大耳白品系家兔96只,体重2.0～2.5 kg,6月龄,雌雄各半,按照完全随机方法分为生理盐水组(A)、三七组(B)、透明质酸钠组(C)、三七透明质酸钠凝胶组(D),制作家免椎板切除模型,分别在硬膜囊周围涂抹生理盐水、三七浓缩液、透明质酸钠、三七透明质酸钠凝胶各0.5 ml,各组术后1、2、4、8周取材,Masson染色进行胶原生长情况的形态学观察,原位杂交方法分析Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达.结果:Masson染色中胶原纤维的排列,生理盐水组三七透明质酸钠凝胶组比对照组更加规整.Ⅰ型胶原mRNA表达三七透明质酸钠凝胶组在用药4周时明显低于生理盐水组、透明质酸钠组、三七组(P＜0.01);Ⅲ型胶原mRNA表达三七透明质酸钠凝胶组在用药4周时明显高于生理盐水组、透明质酸钠组、三七组(P＜0.01).结论:三七透明质酸钠凝胶对家兔术后硬膜外瘢痕具有改善胶原纤维的排列,降低瘢痕硬度,增加瘢痕弹性的作用.
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雷公藤多苷下调脂肪因子Chemerin在梗阻性肾病中的表达
目的 探讨脂肪因子Chemerin在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化模型中的表达及意义,以及应用免疫抑制剂雷公藤多苷(TWP)的干预效果.方法 清洁级健康雄性SD大鼠72只,随机分为A、B、C、D 4组:A:假手术组、B:UUO模型组、C:UUO模型低剂量雷公藤多苷干预组及D:UUO模型高剂量雷公藤多苷干预组.自造模当日起,C组给予雷公藤多苷(10 mg·kg-1·d-1)灌胃,D组给予雷公藤多苷(20 mg·kg-1·d-1)灌胃,余两组给予等量生理盐水灌胃.各组大鼠分别于术后第3天、7天、14天随机抽取6只处死,留取肾组织行相关检查.HE及Masson染色观察肾组织病理变化;免疫组化法及Western印迹检测Chemerin在各组造模侧肾脏的表达情况.结果 HE及Masson染色结果显示,A组肾脏结构正常,肾小管及肾间质无明显病理改变;与同期A组相比,B组肾小管扩张明显且数量增多,肾间质大量炎性细胞浸润,间质宽度增加,出现纤维化改变,增宽的间质区域胶原纤维着色增多.免疫组化及Western印迹结果显示B组Chemerin、TGF-β1表达量多(P<0.05),各组间差异均有统计学意义(P<0.05).C、D组,肾组织小管间质损害及Chemerin表达水平与同期B组相比较均有显著下降(P<0.05),但仍高于同期A组中(P<0.05);同期C、D两组比较,D组肾组织小管间质损害及Chemerin表达水平较C组显著下降(P<0.05).结论 脂肪因子Chemerin参与UUO致肾间质纤维化的发展过程,并且其表达随着肾间质损伤程度加重逐渐增加,提示其可能有促进肾间质纤维化作用;雷公藤多苷可能通过下调Chemerin在肾小管间质中的表达,进而抑制TGF-β1通路而发挥保护肾脏保护作用,从而有效减轻肾间质纤维化;短期观察雷公藤多苷的治疗效果呈剂量依赖性.
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改性甲壳素对体外培养人表皮细胞增殖的影响
目的 利用体外细胞培养技术,研究改性甲壳素对人表皮细胞增殖的影响.方法 人表皮细胞株(HaCaT)分别加入含0、10、100、500、1000、2000、5000 mg/L改性甲壳素的培养液,培养1、2、4、8、14 d,观察和检测处理后的细胞,采用MTT法评价改性甲壳素对HaCaT增殖能力的影响,ELISA法检测细胞培养上清人Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量,RT-PCR、蛋白免疫印迹法检测细胞Ⅰ型胶原COⅡA1及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达情况.结果 相同作用时间下,10、100 mg/L浓度的改性甲壳素对HaCaT增殖无明显作用,500、1000、2000、5000 mg/L浓度的改性甲壳素对细胞增殖有明显促进作用(均P<0.05),且随浓度的增加,相对增殖率升高,提示改性甲壳素浓度促进HaCaT增殖作用呈正相关(r=0.8551,P=0.03).含500、1000、2000、5000 mg/L改性甲壳素培养液中培养2 d后细胞相对增殖率即开始升高(均P<0.05),随时间的推移,细胞相对增殖率也逐渐升高(均P<0.05).相同作用时间HaCaT细胞分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原量500 mg/L开始增加(均P<0.05),1000 mg/L之后趋于稳定.在含500、1000、2000、5000 mg/L改性甲壳素培养液中培养2 d后HaCaT细胞分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原量即开始升高(均P<0.05),随时间的推移,Ⅰ型和Ⅲ型胶原量也逐渐升高(均P<0.05).500 mg/L改性甲壳素能明显增加HaCaT细胞中Ⅰ型胶原COⅡA1和PCNA基因mRNA的表达(均P<0.05),并促进细胞合成分泌Ⅰ型胶原COⅡA1及PCNA蛋白(均P<0.05).结论 改性甲壳素可明显促进表皮细胞的增殖,促进Ⅰ型胶原和PCNA蛋白表达,有望在伤口愈合的治疗中发挥重要的平衡修复作用.
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机械力诱导氧化应激对人子宫旁韧带成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响
目的 探讨机械力诱导氧化应激对人子宫旁韧带成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 选取2014年1月至10月于本院行阴式全子宫切除术患者10例,术中取切除子宫的子宫旁韧带行成纤维细胞原代培养及鉴定.采用四点弯曲细胞力学加载系统对成纤维细胞进行力学加载构建机械力加载模型.使培养板产生形变位移1 mm的加力大小定义为1 333 μstrain.加力大小分别为0 μstrain(0 mm)、1 333 μtstrain(1 mm)、5 333 μstrain(4 mm),加载频率为0.5 Hz,加载时间为4h.同时采用不同浓度H2O2孵育成纤维细胞构建氧化应激模型.H2O2浓度分别为0、0.2、0.4、0.8和1.6 mmol/L,孵育时间均为4h.采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测两种模型中成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达,采用细胞免疫荧光检测机械力模型中细胞氧化损伤产物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平变化.结果 机械力加载模型中,实时荧光定量PCR和免疫印迹显示,与对照组(0μstrain)比较,加载1 333 μstrain机械力后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达均增加,而加载5 333 μstrain机械力后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达均减少(均P＜0.05).细胞免疫荧光检测显示,与对照组(0 μstrain)比较,加载1 333、5 333 μstrain机械力4h后,成纤维细胞内8-OHdG荧光强度明显增强,且后者更为显著.氧化应激模型中,实时荧光定量PCR显示,与对照组(0 mmol/LH2O2)比较,0.2 mmol/L H2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均显著增加(均P＜0.05);0.4 mmol/L H2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达增加(P＜0.05),而Ⅲ型胶原mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);0.8、1.6 mmol/L H2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达均显著下降(均P＜0.05).氧化应激模型中,免疫印迹检测显示,与对照组(0mmol/L H2O2)比较,0.2 mmol/LH2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),而Ⅲ型胶原蛋白表达显著增加(P＜0.05);0.4 mmol/L H2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白表达显著增加(P＜0.05),而Ⅲ型胶原蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);0.8、1.6mmol/L H2O2孵育4h后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达均显著下降(均P＜0.05).结论 一定范围内的机械力和氧化应激均可抑制子宫旁韧带成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达.机械力可能通过引起盆底支持组织发生氧化应激,导致细胞外基质重构,参与盆腔器官脱垂的发生发展.
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Ⅲ型胶原肾小球病的临床病理学特点
目的：分析Ⅲ型胶原肾小球病的临床病理特点并探讨其相关病因、发病机制及预后。方法收集北京大学医学部病理学系从2005年至2014年收集的5例Ⅲ型胶原肾小球病的肾活检病例，进行常规光学显微镜（ HE、PASM、PAS、Masson染色）、免疫荧光（免疫球蛋白、补体的多种标记）、Ⅲ型胶原免疫组织化学染色及透射电镜检查，分析其病变及临床特点。结果Ⅲ型胶原肾小球病患者多表现为大量蛋白尿或肾病综合征；病理特点为肾小球系膜基质增生，基底膜增厚，并可出现系膜结节状硬化，各种免疫球蛋白和补体阴性，仅免疫组织化学出现Ⅲ型胶原阳性，透射电镜检查可见肾小球系膜区和基底膜大量Ⅲ型胶原沉积。其病因、发病机制不明，可能与Ⅲ型胶原代谢的基因异常有关。结论Ⅲ型胶原肾小球病较罕见，其病因和发病机制可能为Ⅲ型胶原代谢的基因异常，确诊的依据是在肾小球内发现大量Ⅲ型胶原沉积，目前缺乏有效的治疗方法，预后较差。
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矽肺纤维化发生发展过程中CXCL11功能的实验研究
目的：构建CXC趋化因子11（CXCL11）基因小干扰RNA片段的表达质粒，进而探讨CXCL11在矽肺纤维化发生发展中的作用。方法采用RNA干扰技术，将CXCL11-siRNA表达质粒转染人胚肺成纤维细胞，筛选出佳干扰质粒序列。实验分为4组：空白对照组（C），常规10%胎牛血清MEM培养基培养；刺激组（S），加入经SiO2粉尘刺激的肺泡巨噬细胞培养上清；转染组（T），将筛选的佳干扰质粒转染FB后，再加入经SiO2粉尘刺激的肺泡巨噬细胞培养上清；阴性质粒转染组（N），将阴性质粒转染FB后，再加入经SiO2粉尘刺激的肺泡巨噬细胞培养上清。用Western blot法检测各组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果经肺泡巨噬细胞上清刺激后，S组与C组比较，Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量增加（P＜0.05），T组与S组比较，Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量减少（P＜0.05）。结论抑制CXCL11表达可以下调SiO2引起的人胚肺成纤维细胞的Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达，提示CXCL11表达与矽肺纤维化的发生发展有关。
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干扰素α-2b对胰腺纤维化大鼠Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响
目的 观察干扰素α-2b对大鼠实验性胰腺纤维化Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白合成的影响.方法 采用每周2次腹腔内注射二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithio carbamate,DDC)1 000 mg/kg体重诱导健康雄性Wistar大鼠胰腺纤维化.干扰素α-2b治疗组(n=10)在造模日起每天1次皮下注射干扰素α-2b 100 000 U,连续6周.对照组(n=10)注射等容积生理盐水.6周末处死大鼠,取新鲜胰腺组织,10%甲醛溶液固定,常规石蜡包埋切片,观察病理改变.免疫组织化学染色检测Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白.结果 干扰素α-2b治疗组腺泡细胞炎症反应和纤维化程度较对照组减轻;干扰素α-2b治疗组Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白量分别为88.14±42.58和2.37±1.56,较对照组的59.95±25.50和1.50±0.31显著减少(P＜0.05).结论 干扰素α-2b可能通过减少胰腺组织内Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白的合成起到治疗胰腺纤维化的作用.
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转录活化子1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺组织中细胞因子和胶原表达的影响
目的 观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸雾化吸入对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原,纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1),转化生长因子-β_1(TGF-β_1)和羟脯氨酸表达的影响.方法 将45只Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、博来霉素组和寡核苷酸组,每组15只,分别在气管内灌注并雾化吸入生理盐水、博来霉素、STAT1反义寡核苷酸.分别于雾化后第7天、第14天和第28天每组各处死5只大鼠.肺组织HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化改变,免疫组织化学SP法测定肺组织中TGF-β_1、PAI-1表达,逆转录PCR测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,肺组织匀浆测定羟脯氨酸含量.样本均数间比较采用单因素方差分析和q检验.结果 寡核苷酸组大鼠各时间点的肺泡炎和肺纤维化程度均较博来霉素组减轻.博来霉素组和寡核苷酸组大鼠肺组织中TGF-β、PAI-1表达水平均明显高于生理盐水组,博来霉素组和寡核苷酸组大鼠雾化后第7天TGF-β、PAI-1的积分吸光度值分别为182±12和169±12、128±11和113±13,明显高于生理盐水组的21±6和27±9,第28天时(68±7和87±7、54±8和57±8)仍高于生理盐水组(22±7和26±7);雾化后第7天、第14天和第28天,寡核苷酸组大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为1.36±0.10、1.19±0.28、1.22±0.24和1.20±0.09、0.62±0.09、0.76±0.12,明显低于博来霉素组(3.29±0.28、2.04±0.25、1.91±0.30和1.63±0.15、1.58±0.13、1.12±0.09),寡核苷酸组大鼠肺组织中羟脯氨酸含量(mg/g)分别为3.02±0.13、3.24±0.31和3.60±0.16,明显低于博来霉素组的3.76±0.10、3.92±0.30和4.62±0.28.结论 STAT1反义寡核苷酸雾化吸入能减轻博来霉素致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化,其机制可能与抑制TGF-β_1、PAI-1的表达,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减少,羟脯氨酸含量降低有关.
关键词： 肺纤维化 STAT1转录因子 胶原Ⅰ型 胶原Ⅲ型 纤溶酶原激活物抑制物1 -
老年高血压左心室肥厚患者心肌胶原纤维的病理改变特点
目的 观察老年高血压左心室肥厚(LVH)患者心肌胶原纤维的病理改变特点.方法 从解放军总医院1954年3月~2001年2月的3520例连续尸体解剖标本中,选取年龄≥ 65岁的126 例的心脏标本,并依据诊断分为高血压组101例,其中LVH 0级15例,LVH Ⅰ级36例,LVH Ⅱ级28例,LVH Ⅲ级22例;对照组25例,对2组标本进行HE、苦味酸天狼星红和Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维免疫组织化学染色,运用光镜和偏振光观察胶原纤维的分布特点,采用全自动图像分析计算心肌间质胶原容积分数(CVF)、Ⅰ型CVF和Ⅲ型CVF及Ⅰ型/Ⅲ型比值.结果 与对照组比较,高血压组LVH 0级心肌胶原纤维无明显改变(P>0.05);与LVH 0级比较,高血压组LVHⅠ级患者心肌CVF 、Ⅰ型CVF显著增高(P<0.01),而Ⅲ型CVF、Ⅰ型/Ⅲ型比值无明显改变(P>0.05);高血压组LVH Ⅱ级和LVH Ⅲ级患者心肌各项指标均显著增高(P<0.01).结论 随着高血压LVH程度的加重,Ⅰ型CVF明显升高,提示舒张功能受损愈重.
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心脏交感神经对自发性高血压大鼠心肌肥厚与心肌纤维化调节作用
目的 观察自发性高血压大鼠心脏交感神经对心肌肥厚和心肌纤维化的调节作用.方法 选择7周龄无特定病原体级同源同系雄性自发性高血压大鼠20只,随机分为对照组10只,手术组(行颈交感神经节切除术)10只,饲养7周.超声心动图检测心脏结构和功能,并计算左心室质量指数.生物医学信号采集处理系统检测血流动力学指标.实时定量PCR检测心肌胶原组织Ⅰ、心肌胶原组织Ⅲ、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和去甲肾上腺素转运蛋白(NET) mRNA.结果 手术组全心质量、左心室质量及左心室质量指数较对照组明显降低(P＜0.05,P＜0.01).手术组室间隔厚度、左心室后壁厚度较对照组明显降低[(1.55±0.14)mmvs(1.84±0.18)mm,P=0.001;(1.52±0.10)mm vs(1.83±0.17)mm,P=0.000].与对照组比较,手术组NETmRNA表达明显升高,心肌胶原组织Ⅲ和CTGF mRNA表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 心脏交感神经对自发性高血压大鼠心肌肥厚和心肌纤维化具有调节作用,这一作用可能与NET表达有关.
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持续快速心房起搏对犬肺静脉及心房组织连接蛋白43和Ⅲ型胶原的影响
目的探讨持续快速心房起搏对犬肺静脉和心房组织连接蛋白43(Cx43)和Ⅲ型胶原的影响.方法 16只杂种犬,随机分为持续快速心房起搏组(8只)和正常对照组(8只),前者以400次/min的频率持续起搏10周,建立心房颤动(房颤)动物模型.分别取两组犬的左上肺静脉、左房游离壁和右心耳等部位的心肌组织进行Cx43的免疫荧光半定量分析和Ⅲ型胶原纤维定量分析.结果10周后快速心房起搏组所有犬均可诱发出持续性房颤.快速心房起搏组犬肺静脉、左房游离壁和右心耳部位的Cx43水平显著高于正常对照组犬各相应的部位(肺静脉:3370.91±275.11与1405.82±90.38, P<0.05;左房游离壁:2448.68±272.10与1467.12±147.93,P<0.05;右心耳:2331.96±199.61与1288.27±216.22, P<0.05).快速心房起搏组犬肺静脉Cx43的水平显著高于左心房游离壁和右心耳(P<0.05),而左心房和右心耳部位的Cx43水平差异无统计学意义 (P>0.05).持续快速心房起搏组犬肺静脉、左房游离壁和右心耳等部位的Ⅲ型胶原含量显著高于正常对照组犬各相应部位(肺静脉:3301.97±309.70与1404.56±178.02, P<0.05;左房游离壁:2477.86±190.43与1479.20±187.17, P<0.05;右心耳:2045.92±139.43与1417.07±139.43,P<0.05).持续快速心房起搏组犬肺静脉的Ⅲ型胶原含量显著高于左房游离壁(P<0.05),后者又显著高于右心耳(P<0.05).结论持续快速起搏心房可使肺静脉和心房组织的Cx43和Ⅲ型胶原纤维的水平增加,其中以肺静脉增加为明显,提示其在房颤的维持机制中具有关键作用.
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腹股沟疝的胶原代谢紊乱及影响因素分析
目的 探讨腹股沟疝患者的胶原蛋白临床表达及代谢.方法 选取2012年6月至2017年6月间于承德市鹰手营子矿区铜城人民医院接受手术治疗的成年男性腹股沟疝患者89例,其中直疝组48例,斜疝组41例.另外选取同期体检正常人群40例作为对照组.参与实验的人员中经常抽烟者共68例,其中直疝组30例,斜疝组24例,对照组14例;非经常抽烟者61例.在手术结束时收集与试者的下腹壁腹直肌前鞘组织,应用免疫组织化学方法测量腹直肌前鞘组织中Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白含量,将各组间Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白含量差异性进行对比分析.结果 直疝组和斜疝组的Ⅰ型胶原蛋白含量明显低于对照组,Ⅲ型胶原蛋白含量高于对照组,Ⅰ型:Ⅲ型胶原蛋白比值均低于对照组,差异有统计学意义(F=8.053、7.331,χ2=5.163,P<0.05、<0.05、0.036).经常抽烟组的Ⅰ型胶原蛋白表达低于非经常抽烟组,Ⅲ型胶原蛋白表达高于非经常抽烟组,Ⅰ型:Ⅲ型胶原蛋白比值低于非经常抽烟者,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成年腹股沟疝患者下腹壁腹直肌前鞘组织中胶原蛋白代谢紊乱可能是导致腹股沟疝患者患病的重要原因;直疝型患者胶原蛋白代谢紊乱程度大于斜疝型患者;经常抽烟者胶原蛋白代谢紊乱程度大于非经常抽烟者,吸烟是导致腹股沟疝发生的重要原因.
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痔核上方直肠壁组织形态学研究
目的 探讨痔核上方直肠黏膜下组织中是否存在病理改变及其形态特征和临床意义.方法 利用特殊染色和免疫组织化学染色技术(Elivision两步法),对比研究21例Ⅲ～Ⅳ度内痔患者的痔上黏膜环切术标本(包括痔上远和近端)直肠黏膜下组织中平滑肌和Ⅲ型胶原纤维,并以7例(非痔)直肠上段癌患者肛垫上方组织作为对照,观察其形态改变特征.结果 肛垫(痔核)上方直肠黏膜肌层和血管壁平滑肌纤维断裂、松散、走行紊乱,其近端直肠壁平滑肌改变与更远端直肠壁组织以及非痔患者相对正常肛垫上方组织比较具有统计学意义(P<0.05).痔核上方直肠黏膜下组织中Ⅲ型胶原纤维增生,并取代平滑肌纤维.结论 痔的病理改变范围超过了肛垫自身,痔核上方的直肠黏膜下组织中平滑肌松散、断裂及被增生的Ⅲ型胶原纤维增生所取代.
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白芷活性提取物对成纤维细胞生物学特性的影响
目的 体外观察白芷活性提取物对人皮肤成纤维细胞(Fb)生物学特性的影响,探讨其促进创面愈合的可能机制.方法 分离培养人正常Fb,按照随机数字表法分白芷活性提取物不同浓度组,以体积分数0.25％的新生牛血清DMEM为对照组.采用噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度白芷活性提取物对体外培养的Fb增殖作用的影响.通过流式细胞仪、real-time PCR分别检测白芷活性提取物适浓度培养条件下Fb的细胞周期变化以及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达情况.结果 白芷活性提取物在5×10 -4～5×10- 2g/L浓度范围内可显著促进Fb增殖,呈剂量依赖性,不同浓度白芷活性提物培养液组测得吸光度(A)值分别为0 346±0.055、0.387±0.043和0.310±0.026,与对照组(0.273 ±0.042)比较,差异有统计学意义(t=3.36、5.79和2.49,P＜0.05),其中在5×10-3 g/L浓度时测得A值高,促增殖作用为显著,为白芷活性提取物促进Fb增殖的适合浓度.此浓度条件下白芷活性提取物可明显促进Fb通过G1/S及S/G2期限制点,S期(26.6±2.6)及G2/M期(7.4±1.3)细胞与对照组相比明显增多,G0/G1期细胞(66.3±4.5)与对照组相比明显减少(t=11.2、5.69、2.44,P ＜0.05).5×10 -3g/L白芷活性提取物组与对照组比较Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达明显上调(分别为1.61 ±0.26比1.00±0.16和3.36 ±0.40比1.00 ±0.14),差异有统计学意义(t=6.69、7.64,P＜0.01).结论 白芷活性提取物能显著促进Fb增殖,加快Fb细胞周期进程,同时可上调Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达.可能与白芷促进创面愈合的机制有关.
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三种波长激光对成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响
目的 探讨595 nm,755 nm和1064 nm 3种波长激光照射对体外培养的成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达水平的影响.方法 将体外培养昆明小鼠成纤维细胞分成595 nm组、755 nm组、1064 nm组和无激光照射组(对照组).应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达水平.结果 1064 nm组Ⅰ型前胶原mRNA表达水平比755 nm组、595 nm组与对照组高(P＜0.05);755 nm组和595 nm组的表达水平高于对照组(P＜0.05);但是755 nm组与595 nm组间差异无统计学意义(P＞0.05).1064 nm组Ⅲ型前胶原mRNA表达水平比755 nm组、595 nm组与对照组高(P＜0.05);755 nm组比595 nm组和对照组表达高(P＜0.05);但是595 nm组与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3种波长激光可直接促进成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA的表达.595 nm激光主要促进Ⅰ型前胶原mRNA增加,755 nm激光比595 nm激光促进更多的Ⅲ型前胶原mRNA表达,1064 nm激光促进Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达多.
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皮肤滚针联合聚桂醇对皮肤毛细血管网作用的实验研究
目的 探讨皮肤滚针联合聚桂醇对毛细血管畸形的作用特点.方法 1.5 ～2.0 kg雄性莱航鸡24只,随机分为3组,每组8只.A组:皮肤滚针+聚桂醇;B组:皮肤滚针+生理盐水;C组:正常鸡冠.分别在皮肤滚针联合聚桂醇干预鸡冠后的第7、14、21、28天切取实验区域的鸡冠组织,制作病理切片后行HE染色、免疫组化染色和维多利亚蓝-丽春红染色,分别计算毛细血管数目和Ⅰ型、Ⅲ型胶原的纤维面积、弹力纤维面积.结果 肉眼观察:鸡冠组织的颜色随时间的推移而变浅;HE染色显示:A组毛细血管数目随时间的延长明显减少;Ⅰ型胶原纤维及Ⅲ型胶原纤维面积百分比计算结果:B组与A、C组对比,差异有统计学意义(P＜0.05);特殊染色结果显示:B组弹力纤维的表达有增生趋势.结论 动物实验显示,皮肤滚针联合聚桂醇干预鸡冠组织后可以有效地破坏、栓塞毛细血管网,且不导致局部组织的纤维化;单独应用皮肤滚针可以刺激真皮层弹力纤维轻度增生,可以延缓皮肤衰老的自然过程.
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压力性尿失禁患者尿道周围结缔组织中核心蛋白聚糖mRNA表达水平与Ⅲ型胶原含量的相关性研究
目的探讨压力性尿失禁(SUI)患者尿道周围结缔组织中,核心蛋白聚糖(DCN)mRNA表达水平及Ⅲ型胶原含量变化及其相关性.方法将43例绝经前后妇女根据是否存在SUI 分为SUI组(20例)和对照组(23例).应用免疫组化法检测两组妇女尿道周围结缔组织中Ⅲ型胶原含量(以免疫组化指数表示);RT-PCR法检测DCN mRNA表达水平[以DCN与β肌动蛋白吸光度(A)值的比值表示].结果 SUI组患者尿道周围组织中DCN mRNA表达水平为0.76±0.16,对照组为0.76±0.16, 两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);SUI组患者Ⅲ型胶原含量为23±4,对照组为34±6,两组比较,差异也有统计学意义(P<0.05).SUI组患者尿道周围组织中Ⅲ型胶原含量与DCN mRNA表达水平呈显著负相关(r=-0.720,P<0.05).结论 (1)尿道周围结缔组织中Ⅲ型胶原含量减少,可能是SUI发生的原因之一;(2)SUI患者尿道周围结缔组织中Ⅲ型胶原含量减少可能是由于局部DCN mRNA表达增强所致;(3)DCN mRNA表达增强,可能通过影响结缔组织的胶原含量和弹性性能参与SUI的发生.
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机械牵张损伤后的大鼠子宫韧带成纤维细胞对大鼠骨髓间充质干细胞定向分化的影响
目的 探讨与机械牵张损伤后的大鼠子宫韧带成纤维细胞间接共培养,对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)定向分化的影响.方法 利用细胞牵张损伤模型,对大鼠子官韧带成纤维细胞施以10%牵张变形(1 Hz,连续12 h单向机械牵张)后与大鼠BMSC间接共培养(牵张损伤组)3、6、12 d,采用SP法检测问接共培养后BMSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平(以平均灰度值表示);实时定量PCR技术检测间接共培养后BMSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平(以其与磷酸甘油醛脱氢酶的比值表示),以BMSC自身共培养为对照组.结果 (1)蛋白表达情况:牵张损伤组细胞间接共培养3 d后,BMSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平分别为82.4±3.4和76.8±2.5,与对照组(分别为80.2±2.6和74.6±1.1)比较,差异无统计学意义(P>0.05);细胞间接共培养6 d后,牵张损伤组BMSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平分别为126.6±2.2和118.6±1.4,与对照组(分别为82.7±3.0和76.2±1.3)比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞间接共培养12 d后,牵张损伤组BMSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平分别为135.3±3.4和128.7±2.6,与对照组(分别为86.6±1.3和81.8±1.4)比较,差异也有统计学意义(P<0.05).(2)mRNA表达情况:牵张损伤组细胞间接共培养3 d后,BMSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为2.10±0.20和1.20±0.30,与对照组(分别为2.01±0.12和1.13±0.21)比较,差异无统计学意义(P>0.05);细胞间接共培养6 d后,牵张损伤组BMSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为5.60±0.21和2.61±0.20,与对照组(分别为3.70±0.33和1.82±0.14)比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞间接共培养12 d后,牵张损伤组BMSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为5.91±0.31和2.92±0.23,与对照组(分别为4.04±0.21和2.04±0.13)比较,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 机械牵张损伤后的大鼠子宫韧带成纤维细胞与BMSC间接共培养,可以促进BMSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的合成,并诱导其分化为成纤维细胞.
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铜及赖氨酰氧化酶与胎膜早破的相关性研究
目的探讨孕妇血清铜(Cu)、羊膜Cu、羊膜赖氨酰氧化酶(LOX)、羊膜Ⅲ型胶原的水平之间的相关性,以及与胎膜早破的关系.方法 100例胎膜早破孕妇作为胎膜早破组,其中妊娠37～42周40例、34～36周+6 40例、28～33周+6 20例;与胎膜早破组孕周、例数相对应的100例非胎膜早破孕妇作为对照组.应用火焰原子吸收法检测两组孕妇血清Cu和羊膜Cu水平,荧光发光法检测羊膜LOX水平,免疫组化法和图像分析法检测羊膜Ⅲ型胶原水平.将不同孕周孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX、羊膜Ⅲ型胶原测定结果进行直线相关分析,并比较胎膜早破组与对照组在这些指标上的差异. 结果 (1)妊娠37～42周:两组孕妇血清Cu与羊膜Cu水平呈正相关,r为0.82(P<0.001),其他各指标均无相关关系.(2)妊娠34～36周+6和28～33周+6:两组孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX、羊膜Ⅲ型胶原水平之间均呈正相关(P<0.01).(3)妊娠37～42周:两组孕妇血清Cu水平与羊膜Cu比较,差异无统计学意义(P>0.05);胎膜早破组及对照组孕妇羊膜LOX水平分别为(0.53±0.10)和(0.75±0.10)μg/g(P<0.01),羊膜Ⅲ型胶原吸光度(A)值分别为0.36±0.01和0.37±0.01(P<0.05);(4)妊娠34～36周+6:胎膜早破组及对照组孕妇血清Cu水平分别为(115.23±9.56)、(139.03±10.59)mg/L,羊膜Cu水平分别为(0.19±0.04)、(0.29±0.04)μg/mg,羊膜LOX水平分别为(0.54±0.10)、 (0.70±0.13)μg/g,羊膜Ⅲ型胶原A值分别为0.36±0.01、0.37±0.01.胎膜早破组以上各指标均低于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01).(5)妊娠28～33周+6:胎膜早破组及对照组孕妇血清Cu水平分别为(120.31±8.04)、(136.40±8.21)μg/L,羊膜Cu水平分别为(0.21±0.04)、(0.26±0.03)μg/mg, 羊膜LOX水平分别为(0.62±0.09)、(0.72±0.09)μg/g,羊膜Ⅲ型胶原A值分别为0.35±0.01、0.38±0.01.胎膜早破组以上各指标均低于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论足月妊娠的胎膜早破孕妇,其羊膜LOX和羊膜Ⅲ型胶原水平下降不受血清Cu水平的影响,这可能与羊膜的退行性变加快有关;未足月妊娠的胎膜早破孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX和羊膜Ⅲ型胶原的水平降低则与胎膜早破的发生直接相关.
关键词： 胎膜早破 铜 蛋白赖氨酸6-氧化酶 胶原Ⅲ型 -
血清透明质酸等四项指标在重型β地中海贫血肝纤维化诊断中的价值
目的探讨血清肝纤维化指标透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和层粘蛋白(LN)在重型β地中海贫血(简称β地贫)肝纤维化诊断中的价值.方法检测49例重型β地贫患儿和41例正常小儿血清HA、PCⅢ、CⅣ、LN水平,其中45例地贫患儿行肝组织学检查,进行肝纤维化的对比研究.结果β地贫组血清HA、PCⅢ、CⅣ、LN四项指标水平均显著高于正常小儿组(P＜0.01),HA、PCⅢ水平与纤维化分期呈低度正相关(r＝0.379、0.455,P均＜0.05),CⅣ及LN水平与纤维化分期无显著性相关(r＝0.312、0.310,P均＞0.05).四项指标联合诊断肝纤维化的判别函数为:0.002 HA+0.003 PCⅢ+0.002 CⅣ+0.006 LN-1.859.判断的准确率为82.16%, 诊断的灵敏度、特异度、阳性预测价值和阴性预测价值分别为93.88%、68.29%、77.97%和90.32%.HA、PCⅢ水平的升高与肝脏铁含量有一定的相关性(r＝0.342、0.305,P均＜0.05).结论血清HA 、PCⅢ在重型β地贫肝纤维化诊断中的价值高于CⅣ及LN,四项指标联合检测可提高临床诊断的准确性和可靠性.
