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核糖开关在逆转细菌耐药性机制中的潜在应用
核糖开关(riboswitch)为一种不需要蛋白质参与,能够直接结合代谢物或其他小分子物质并控制相关基因表达的RNA[1唱3]。目前在三域生物中均发现有核糖开关的存在。随着对其结构和功能的深入研究,发现其作用不仅是一种简单的“开/关”功能,更是一种具有复杂功能的基因调节器[4唱5]。目前关于细菌核糖开关结构、功能及作为药物靶点等的研究正不断深入,但尚无核糖开关与细菌耐药机制及其逆转耐药性的系统报道,本文就目前研究中核糖开关影响细菌耐药的具体机制,以及核糖开关在耐药机制新策略中的潜在应用做一综述,以期为进一步的综合研究打下基础。
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慢性丙型病毒性肝炎肝脏脂肪变的机制及其意义
全世界有1.7亿人感染丙型肝炎病毒(HCV),HcV感染引起的疾病包括肝脏疾病、B细胞淋巴瘤和冷球蛋白血症等.肝脏脂肪变是慢性丙型病毒性肝炎的突出的病理学表现,一半以上的慢性丙型肝炎患者同时表现肝脏脂肪变.男性患者较女性患者为重,HcV 3a型患者合并肝脏脂肪变更为明显.慢性HcV感染者血清中脂蛋白、载脂蛋白水平发生显著改变,且与血清中HCV RNA是否阳性有关.HcV结构蛋白和非结构蛋白与脂蛋白、载脂蛋白之间的直接结合,导致肝细胞脂类代谢障碍是肝脏脂肪变发生的主要机制.甚至HcV RNA本身也具有结合脂蛋白、载脂蛋白的作用,是肝脏脂肪变形成的重要机制.临床上去脂治疗可显著降低慢性HcV感染者血清中HcV病毒载量,是否合并肝脏脂肪变显著影响对干扰素抗病毒治疗的疗效应答,因此,慢性丙型病毒性肝炎合并肝脏脂肪变的研究具有重要的实际应用前景.
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乙型和丙型肝炎病毒与肝细胞相互作用的分子生物学基础
编者按乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染肝细胞之后,首先要借助肝细胞中的一些成分完成其复制和表达的生活周期,主要是肝细胞中的一些调节蛋白与这2种肝炎病毒调节基因序列之间的结合,并对于肝炎病毒的复制和表达过程进行调节,肝细胞中一些特有的调节蛋白在肝炎病毒的生活周期中具有十分重要的调节作用,这也是肝炎病毒相对嗜肝细胞特性的分子生物学基础.同样,肝炎病毒的蛋白,或者通过与肝细胞蛋白之间的直接结合,或者通过与DNA的结合以及肝细胞的信号转导途径影响肝细胞的基因表达类型和基因表达水平,或者改变肝细胞基因表达谱的时空规律,影响肝细胞的细胞周期、细胞凋亡、生长分化、信号转导、恶性转化等过程.这是HBV和HCV感染肝细胞之后引起慢性肝脏疾病的重要的分子生物学基础,一直是人们关注的焦点.
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HCV干扰素敏感决定区"基因盒"的构建,体外表达及功能探讨
目的:构建对干扰素敏感和不敏感的丙型肝炎患者的干扰素敏感决定区(ISDR)基因;在体外表达含ISDR的丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白,探讨表达的NS5A蛋白是否通过ISDR与干扰素诱导的RNA蛋白激酶(PKR)结合来影响干扰素的抗HCV作用.方法:采用合成寡核苷酸,PCR,分子克隆等方法构建ISDR基因"盒",包括3个对干扰素敏感的丙肝患者ISDR及1个对干扰素耐受的丙肝患者ISDR,将含不同ISDR的NS5A基因克隆进原核表达载体PRSET,转染BL21(DE3)细胞后由IPTG诱导表达,获得蛋白过柱纯化及透析去掉高盐后,与经体外转录和翻译系统获得的PKR进行蛋白结合试验.结果:经测序证实获得4个不同ISDR基因,包括1个对干扰素不敏感基因和3个对干扰素敏感基因;体外表达的含ISDR的NS5A蛋白约58 000,体外试验初步证实,无论对干扰素敏感或不敏感的ISDR均可与PKR结合.结论:体外构建的含不同ISDR的NS5A蛋白能在原核细胞系统中获得较好表达;研究显示,ISDR影响干扰素抗病毒作用可能不是由ISDR与PKR直接结合导致的.
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新型抗凝药物的研究展望
目前临床上常使用的抗凝药物包括普通肝素(UFH)、低分子量肝素(LMWH)、华法林等,这些药物的临床价值已得到许多大型临床试验的证实而广泛应用于临床实践.而一系列新型静脉抗凝药物包括磺达肝癸钠(fondaparinux)、比伐卢定(bivalirudin)等凭借各自的特点,在欧美国家已经开始应用于动静脉系统血栓的防治[1].利伐沙班(Rivaroxaban)是一种新型口服抗凝药物,它们的抗凝活性不依赖抗凝血酶Ⅲ,可直接结合于Xa因子的活性部位而抑制Xa因子的抗凝活性,已完成的一些研究充分显示了利伐沙班在静脉系统血栓防治方面的巨大潜力,有望成为静脉血栓栓塞症(venous thromboembolism, VTE)防治的新标杆[2-4].正在进行的研究将进一步验证其在房颤及急性冠脉综合征(acute coronary syndrome, ACS)方面的应用价值.
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泰索帝放射增敏作用的动物实验研究
研究表明泰索帝以浓度依赖性的、可逆性的与细胞内微管上的β-亚基N端第31个氨基酸直接结合,从而将细胞周期阻断在G2+M期[1-3],提示它可能具有潜在的放射增敏效应.为此,通过动物肿瘤模型来观察泰索帝对C57BL/6小鼠Lewis肺癌放射敏感性的影响.
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逆转录酶抑制剂依曲韦林可致严重皮肤反应
依曲韦林(etravirine)于2008年1月18日经优先审批程序获得批准上市,是FDA近10年来批准的第一个新型1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI),它可与HIV-1逆转录酶直接结合,阻滞HIV病毒复制所需的关键酶--逆转录酶,通过破坏酶催化部位而阻断RNA及DNA依赖的DNA聚合酶活性.终发挥抗HIV病毒效应.
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微小RNA表达在糖尿病视网膜病变中的作用研究进展
微小RNA(microRNA)是一类进化中高度保守基因编码的内源性小分子RNA ,长度小于30个碱基。它可通过与靶基因的3'端结合,或直接与靶基因结合,或通过碱基互补配对抑制mRNA,在转录后水平调控目的基因的表达。 microRNA 调节靶基因mRNA主要通过降解或直接结合抑制其翻译。数据显示,人类基因组编码的microRNA估计有1100多种,它们可调节哺乳动物约60%的蛋白质编码[1]。自1993年microRNA 被首次从线虫发现,关于它的研究日益广泛深入,被证明在细胞的生长分化、增殖凋亡、生物的发育及物质代谢等方面均发挥作用。microRNA作为一个生物学标志物,是可以衡量的客观指标,可以反映特定疾病状态的发生和发展,并可以被有效测量。它在糖尿病诱导的视网膜病变动物模型中能够被有效监测,更准确地反映疾病病理状态的变化,这对于糖尿病视网膜病变的诊断、治疗及判断预后具有重要的意义。现就其在糖尿病视网膜病变发生发展中的作用进行综述。
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自体骨移植在种植牙技术中的应用
口腔种植技术的骨结合理论认为:种植牙应当在负载的种植体表面与周围发育良好的骨组织间形成结构和功能上的直接结合[1].达到良好的骨结合的必要条件是保证植入区有足够的牙槽骨.然而许多原因会导致缺牙区骨量不足,影响了种植牙的应用和效果.尤其在因牙周病而拔牙的病例中,牙槽骨会逐渐变平、变低和变窄[2],这种骨量不足的部位主要见于上颌窦、下颌管、鼻腔底等部位.目前,解决这一问题的骨重建以及骨移植的方法有许多种.自体骨移植技术自1810年首次报道以来,凭借其独特的优点,至今仍广为应用,在口腔种植领域的研究更是如火如荼,其效果被誉为骨代用品中的"金标准".本文就自体骨移植在口腔种植技术的进展作一概述.
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miR-155调控T细胞分化与功能的研究进展
miRNA是在真核生物中发现的一类内源性具有免疫调控功能的非编码小分子RNA,长约19~24个核苷酸,由具有发夹结构的约70~90个碱基大小的单链RNA前体经Dicer酶加工而成,在转录后水平调控基因表达。 miRNA主要通过与特定的靶信使RNA( mRNA)的3′非编码区直接结合,降解靶RNA或抑制其翻译,进而影响目的基因的表达[1-3]。
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一种将低分子量半抗原直接结合在酶标板上的方法
在酶联免疫吸附试验(ELISA)中固定半抗原通常采用与蛋白分子相偶联或共价结合到固相载体上。
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白藜芦醇在肿瘤放疗增敏机制中的研究进展
放射治疗是目前恶性肿瘤的重要治疗手段,提高肿瘤放疗敏感性可以提高放疗患者依从性,改善预后,是当前研究的热点。白藜芦醇(Resveratrol,Rev)是一种非黄酮多酚类化合物,具有抗氧化、抗衰老、抗凋亡的作用,Rev 在放射治疗中具有阻断肿瘤的发生和进展的特性,其分子机制的得到广泛的研究。Rev 对活性氧系统的功能具有二像性,一方面可以对等地生成苯酚和间苯二酚相关的2个峰,对多种肿瘤细胞具有显著的杀伤作用,另一方面可以强有力地清除氧自由基保护正常组织;Rev 可以与 DNA 直接结合,生成具有遗传毒性、可代谢的活性氧(reactive oxygen species,ROS),调节 DNA 代谢、维持和修复系统,抑制末端转移酶端粒和拓扑异构酶;此外,Rev 还能通过多种途径促进肿瘤细胞凋亡。
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管理会计在医院内部管理中的作用
1 医院的管理会计在医院管理循环中的作用管理会计是管理与会计的直接结合,为医院内部管理决策提供依据,它是利用医院的财务会计资料和其他资料,利用会计的、统计的、数学的方法,对未来的经营管理进行预测和决策,确定目标,编制计划(预算),在执行过程中加以控制和考核,目的是调动医院的各种积极因素,取得佳的经济效益.
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下肢假肢骨整合生物力学的动物实验
骨整合(osseointegration)的概念初是由Branemark于20世纪50年代提出,是指活骨组织与种植体在结构上和功能上的直接结合.从生理角度来看,骨整合形成后,骨组织与种植体之间不存在纤维性组织,而只存在骨性连接.基于骨整合的植入式假肢与传统的接受腔式假肢相比有显著的优越性,如病人更容易控制假肢的活动,以及病人肢体残端不会出现压疮等.然而,对于下肢假肢种植体,载荷对骨整合影响的生物力学问题尚缺乏深入、系统的研究.本文对骨整合形成初期,种植体在较大生理载荷(体重量级)和外部载荷情况下的骨整合发展,进行了初步的动物实验研究.
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法尼酯衍生物X受体与肝纤维化
法尼酯衍生物X受体(FXR)是一种在肝肠系统等组织器官表达的胆汁酸受体,属于激素核受体超家族的一员,在胆汁酸代谢及胆固醇代谢中发挥重要作用.当FXR配体与FXR羧基末端配体结合区(LBD)直接结合后,核受体空间构象发生改变并与视黄醛衍生物受体(RXR)形成异源二聚体,后与靶基因特定FXR DNA反应元件结合从而调节靶基因的转录.初级胆汁酸鹅脱氧胆酸是FXR有效的配体,次级胆汁酸石胆酸和脱氧胆酸也可以激活FXR.目前还有合成FXR配体(如6-ECDCA、GW4064等),其与FXR结合力比天然配体强数倍.FXR的主要靶基因包括胆盐输出泵(BSEP)、小异源二聚体伴侣受体(SHP)等,FXR通过和这些基因启动子上的FXR反应元件(FXRE)结合从而调控这些基因的表达.但如胆固醇7α羟化酶(CYP7α1)等主要FXR调控基因的启动子序列中没有典型FXR结合反应序列,FXR则是间接通过诱导转录抑制因子SHP表达,然后SHP与CYP7α1启动子肝受体同源物1(LRH-1)形成抑制性复合物,从而阻断CYP7α1和其它LRH-1靶基因转录.由于FXR在胆汁酸及胆固醇代谢中的重要作用,这将使其和肝脏相关疾病关系日益受到关注[1,2].
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锌指蛋白ZBTB20是调控肝脏甲胎蛋白基因转录的关键抑制因子
甲胎蛋白(AFP)在胎肝中高表达,出生后不久就快速下调至很低水平.有关肝脏AFP基因出生后的转录抑制机制一直是未解之谜.AFP基因的增强子、抑制区域和启动子等顺式调控元件可能参与其转录抑制的调节,但有关的关键性转录抑制因子尚不明确.我们发现了一种新型锌指蛋白ZBTB20,为研究其体内的生理功能,我们利用条件打靶技术,建立了ZBTB20的组织特异性基因敲除小鼠模型,发现肝细胞特异性ZBTB20基因敲除小鼠出生后的肝脏AFP基因一直维持近乎胎肝的高水平表达,而其肝细胞处于正常的静息状态.生化分析显示,ZBTB20具有转录抑制活性,体外可有效抑制AFP启动子的转录活性;染色质免疫沉淀和EMSA实验结果显示ZBTB20 体内和体外能直接结合AFP启动子.在小鼠肝脏的发育过程中,ZBTB20基因被渐进激活,与AFP基因的表达水平呈负相关,提示激活的ZBTB20参与了AFP基因的转录抑制.上述结果表明ZBTB20是调控AFP基因表达的关键转录因子,由此我们认为肝脏ZBTB20基因出生后的表达上调及其发挥的转录抑制作用是导致AFP基因出生后快速下调的主要原因.
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糖皮质激素受体与炎症反应
糖皮质激素( glucocorticoid,GC)是由肾上腺皮质束状带分泌的一类甾体激素,具有调节糖、脂、蛋白质合成与代谢,抑制免疫应答,抗炎、抗应激等重要作用。目前临床上广泛使用GC治疗炎症和免疫性疾病,如类风湿性关节炎、支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、炎症性肠病、器官移植后等[1]。 GC 在体内的作用主要是通过糖皮质激素受体( glucocorticoid receptor, GR)介导的。 GR属于核受体超家族成员,其本质是配体依赖的转录因子,活化后的 GR 在细胞核内通过与DNA上的反应元件直接结合或作用于其他转录因子来促进或抑制靶基因转录,后者通过阻断炎症和免疫反应过程中相关靶基因的转录,抑制炎性细胞因子表达,在抗炎、调节免疫中具有重要作用[2]。临床中GC治疗存在许多不良反应,如高血压、糖代谢异常、骨质疏松等[3?4]。因此,深入了解GR及其对靶基因的调控机制,尤其是转录抑制机制,将为改善GC治疗效果,减少其不良反应提供新的思路。
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Smads家族在肝纤维化中的作用
转化生长因子β(TGF-β)及其下游信号传导通路是目前国际上信号传导研究的一个热点.从正常和转化的细胞中分泌的TGF-β以前体的形式存在,需经过活化才有生物学活性,活化的TGF-β直接结合转化生长因子受体Ⅱ(TBRII),或通过B-多聚糖间接结合TBRII,从而形成TGF-β/TBRII复合物并迅速导致转化生长因子受体Ⅰ(TBRI)的磷酸化,磷酸化的TBRI可以活化受体特异性Smad(Smad2或Smad3)使其磷酸化,并与通用型Smad(Smad4)结合形成异源复合物,转位到核内,调节靶基因的转录.
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氯磷定和碘解磷定抢救AOPP几个问题的商讨
目前我国用于抢救急性有机磷农药中毒(AOPP)的药物仅生产氯磷定(PAM.Cl)和碘解磷定(PAM.I),两种药物均为肟类化合物.肟类化合物除直接结合体内蓄积的有机磷化合物生成磷酰化肟类化合物外,还能和磷酰化胆碱酯酶结合,形成磷酰化肟类化合物,使胆碱酯酶(ChE)游离出来,恢复其水解乙酰胆碱活性.
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软骨寡聚基质蛋白--天然的凝血酶抑制剂
凝血酶是血液凝固过程中的核心凝血因子。细胞外基质软骨寡聚基质蛋白( COMP)属于凝血酶敏感蛋白( TSP)家族成员,同家族的TSP-1已知参与血小板功能和凝血过程,而COMP对血小板及血液凝固的作用还没有报道。本课题旨在研究COMP在血小板激活及血液凝固中的作用及可能的相关机制。我们首先筛查了野生型和COMP敲除小鼠的凝血功能,发现COMP缺陷能缩短出血时间、凝血时间和损伤诱导的血栓形成时间,提示COMP敲除可能增强了凝血酶功能。接着我们发现COMP纯化蛋白特异性地抑制血小板聚集、释放以及血块收缩。通过表面等离子共振我们确定了凝血酶与COMP的直接结合,并且证实COMP与凝血酶exosite I和II双位点结合;而COMP的EGF样重复序列被证实是其与凝血酶结合位点。我们还证明了血小板可以表达并分泌COMP,通过骨髓移植与血小板输注实验证实血小板源的而非血管壁源的COMP在抑制血液凝固中起了主要作用。综上所述,本研究证实COMP通过与凝血酶结合抑制其活性,能够抑制生理性止血和血栓形成。鉴于COMP对凝血酶功能的抑制作用,其具备作为抗凝药物的临床应用潜能。