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RNAi重组体抑制胃癌细胞AGS中DNMT1基因的表达
目的:利用RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术,以DNMT1(DNA methyltransferase I)为靶基因,设计构建重组体,研究其对胃癌细胞AGS中DNMTl表达的抑制作用.方法:设计有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pTZU6+1中构建重组体,经鉴定正确后,转染胃癌细胞AGS,后使用RT-PCR法定性分析DNMT1的mRNA水平和Western blot法分析DNMTl的蛋白表达水平.结果:成功地构建了靶向DNMT1基因RNAi的重组体,将其有效转染到胃癌细胞AGS中去后,出现了DNMT1的蛋白和mRNA水平的明显下降,转染后48h的相对抑制率为73%左右.结论:DNMT1靶向RNA干扰重组体转染到胃癌细胞中可抑制DNMT1的表达.
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微小RNA与恶性淋巴增殖性疾病相关性的研究进展
真核生物中存在两种主要的非编码RNA(non-coding RNA),并发挥重要作用.一类为小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),另一为微小RNA(microRNA,miRNA).miRNA是一种大小19~25核苷酸(nt)、非编码蛋白的单链小分子RNA,由具有发夹结构的70~90个碱基大小的前体microRNA(pre-microRNA)经过Dicer酶剪切加工而形成的[1].它广泛存在于真核生物中,其本身不具有开放阅读框(ORF).现就目前miRNA与恶性淋巴增殖性疾病的研究进展作一综述.
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miRNA在肾脏纤维化中的研究进展
小RNA(microRNA,miRNA)是一类普遍存在的参与转录后水平基因表达调控的小分子RNA,近年来关于miRNA在细胞增殖、分化和凋亡等方面研究很多,本文主要对miRNA研究中涉及肾脏纤维化的机制进行简要概述.1 miRNA的产生和作用机制1.1 miRNA的定义miRNA是一类具有21~25个核苷酸的单链小RNA,由具有发夹结构的约70~90个碱基大小的单链RNA前体经过酶加工后生成,是一些非编码小分子,靶向性的作用于mRNA参与基因转录后表达的调控,对生命过程中的一系列重要进程有决定性意义.
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miR-155调控T细胞分化与功能的研究进展
miRNA是在真核生物中发现的一类内源性具有免疫调控功能的非编码小分子RNA,长约19~24个核苷酸,由具有发夹结构的约70~90个碱基大小的单链RNA前体经Dicer酶加工而成,在转录后水平调控基因表达。 miRNA主要通过与特定的靶信使RNA( mRNA)的3′非编码区直接结合,降解靶RNA或抑制其翻译,进而影响目的基因的表达[1-3]。
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MicroRNAs与冠心病发生发展关系的研究进展
microRNA(miRNA)是一类长约21-25个核苷酸的小分子非编码RNA,是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成双链RNA[1],双链miRNA被引导进入沉默复合体中,一条成熟单链miRNA保留其中,另一条被降解.miRNA分子在3'端非编码区域(3'UTR)与靶基因mRNA分子互补配对后,可以降低mRNA分子的稳定性并使mRNA发生翻译抑制从而影响靶基因的表达调控[2-4].miRNA具有集体功能的特点,单一miRNA难以替代[5].研究发现多种miRNAs与冠心病相关,例如:miRNA-208、miRNA-1、miRNA-133影响心肌凋亡、心肌肥厚等,miRNA-126、miRNA-92a调控血管生成,miRNA-320、miRNA-21、miRNA-499等参与心肌缺血-再灌注损伤,miR-208、miR-29、miR-133、miR-30和miR-21等参与心肌纤维化,miRNA-1、miRNA-133参与心梗后心律失常等.现就其在冠心病中的作用进行系统分析和综述.
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microRNA 在心房颤动中调控作用的研究进展
心律失常是心血管疾病中重要的一组疾病,尽管大多数心律失常不会引起严重的问题,但心房颤动(房颤)与心力衰竭、缺血性脑卒中的发生关系密切,因此有着较高的发病率和病死率[1]。自1993年,LEE等[2]第1次发现microRNA起,microRNA就逐渐被证实参与各种疾病的调控,包括心血管疾病。microRNA是一类长度大约21~23个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,通过与靶mRNA结合,参与RNA降解或转录后翻译抑制,进而调控靶基因的表达[3]。 microR-NA基因通常在核内由RNA聚合酶Ⅱ转录,由具有约100 nt的发夹结构经核酸酶Ⅲ Drosha处理形成前体pre-microR-NA,pre-microRNA经核输出蛋白5转移到细胞质,由另一类核酸酶ⅢDicer剪切形成成熟microRNA[4]。本文主要就特定的microRNA在电重构和结构重构上的相关作用,来阐释其与房颤的关系。
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RNA干扰能有效抑制SARS相关冠状病毒复制
基于RNA干扰可抑制HIV等病毒的事实[1],本课题组构建了针对SARS病毒的、能表达小发夹结构RNA的siRNA质粒,利用RNA干扰有效抑制了该病毒的复制.