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肌钙蛋白Ⅰ(28~110aa)-C复合物的表达纯化及抗体制备
心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)是诊断急性心肌梗死的"金标准"[1-2].心肌损伤时,外周血中90%以上的cTnI以I-C复合物形式存在[3-4],而28~110间的肽段与C形成复合物稳定,我们根据患者血清中cTnI存在形式,通过引物设计构建pGEX4T-3-cTnI(28~110aa)-C原核表达系统,在大肠杆菌中实现cTnI(28~110aa)-C复合物的稳定可溶性高表达.然后,用该融合蛋白抗原制备抗cTnI单克隆抗体及多克隆抗体,为建立检测方法,提高检测灵敏度做前期准备.
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RNAi重组体抑制胃癌细胞AGS中DNMT1基因的表达
目的:利用RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术,以DNMT1(DNA methyltransferase I)为靶基因,设计构建重组体,研究其对胃癌细胞AGS中DNMTl表达的抑制作用.方法:设计有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pTZU6+1中构建重组体,经鉴定正确后,转染胃癌细胞AGS,后使用RT-PCR法定性分析DNMT1的mRNA水平和Western blot法分析DNMTl的蛋白表达水平.结果:成功地构建了靶向DNMT1基因RNAi的重组体,将其有效转染到胃癌细胞AGS中去后,出现了DNMT1的蛋白和mRNA水平的明显下降,转染后48h的相对抑制率为73%左右.结论:DNMT1靶向RNA干扰重组体转染到胃癌细胞中可抑制DNMT1的表达.
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应用CRISPR-CAS9技术制备miR-155基因敲除小鼠
目的:探讨利用typeⅡbacterial CRISPR/CAS9系统构建miR RNA-155基因敲除小鼠的可行性。
方法:首先,利用软件设计构建识别靶定靶序列的sgRNA,构建致靶基因切割的CRISPR/Cas9载体质粒;然后体外鉴定sgRNA/Cas9的活性检测;设计构建基因敲进的打靶载体;体外转录sgRNA/Cas9 mRNA;小鼠受精卵注射sgRNA/Cas9 mRNA和打靶载体;后miR-155基因敲除F0代C57/BL6小鼠的可遗传性检测,并剪鼠尾提DNA进行鉴定。 -
骨组织工程支架及相关问题研究进展
概述组织工程学,是应用细胞生物学和工程学原理及其技术,以生物材料为载体,研究开发、设计构建与重建,改善损伤组织形态和功能的生物替代物,维护人体细胞组织生长的一门新兴交叉学科,在临床医学尤其外科领域具有广阔的应用前景.组织工程学技术的研究已有重大突破,创伤后组织缺损、功能损害的有关组织工程学的研究进展快.由于运动系统的组织结构相对简单,软骨与骨组织结构相对单一[1],而软骨与骨缺损在临床上又较为常见,因此骨组织工程学在骨科领域可能会率先进入临床应用阶段.
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基因突变致β细胞KATP通道超敏感性可致新生鼠严重糖尿病
β细胞中葡萄糖升高致ATP/ADP比值升高,从而关闭K通道导致细胞去极化,Ca2+内流使胰岛素分泌而降低血糖。因而人们推测基因突变致β细胞中KATP通道对ATP/ADP升高的敏感性降低,继而胰岛素分泌不足而致糖尿病。 方法与设计构建突变KATP基因质粒重组子,分别为Kir 6.2亚单位N端2-30缺失(Kir 6.2[△N2-30])及Kir 6.2亚单位N端2-30缺失合并185点突变(Kir 6.2[△N2-30,K185Q])。将两种突变基因于C端与绿荧光蛋白(GTP)融合(以利于检测),使其与KATP磺脲类受体1亚单位DNA共同表达形成功能性KATP。将构建质粒注入C57B16*CBA鼠卵中,使其在胰岛素启动子1控制下于胰岛β细胞中表达。培养基因突变小鼠。 结果在60只新生鼠中未检测到1只携有Kir 6.2[△N2-30,K185Q]基因,而检测到5只携带Kir 6.2[△N2-30]基因。将这5只鼠与CD-1系鼠繁殖建立5种转基因鼠系。结果5种鼠系中有4系原代鼠均血糖正常且发育正常,而其所有F1代鼠均有严重高血糖、低胰岛素血症、血D-3-羟丁酸水平显著升高,且大多于5 d内死亡,或者体重显著降低而需胰岛素维持。另外1系F1代小鼠同样携带Kir 6.2[△N2-30]基因,但研究发现其胰岛中受累β细胞非常少,因而其血糖正常。同时,研究还发现所有小鼠胰岛的形态、胰岛素的定位,β细胞的分布均正常。 结论研究证实KATP通道的高敏感性,也即对ATP/ADP升高的反应性降低可以抑制胰岛素的分泌,导致严重糖尿病发生。
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生物技术发展对医学本科教育的影响
生物技术也称生物工程,是人们以现代生物科学为基础,利用生物体的特性和功能,运用工程技术手段,设计构建具有预期性状的新物种或新品系,为社会提供商品和服务的一个综合性技术体系.生物技术的研究领域十分广泛,它包括所有对生物进行干预的技术手段:基因重组技术、基因治疗、生物制药技术、克隆技术、基因芯片技术等.生物技术包含许多方面的内容,其中基本的是:蛋白质工程、基因工程、酶及发酵工程.
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常见病中药治疗方案的设计与实现
中国医药学是一个伟大的宝库,蕴藏着我国人民几千年来与疾病作斗争的丰富临床经验,为开发中药方剂治疗疾病的宝库,用现代化媒体代替传统资料传播方式,我们应用计算机数字化技术和互联网技术,设计构建了面向医药行业、上网用户的<常见病中药治疗方案>(消化、呼吸系统疾病)(以下简称<治疗方案>),旨在为大众提供中药药疗方案咨询服务.