食管鳞癌中p16基因启动子区甲基化及其表达

目的 探讨食管鳞癌(ESCC)p16基因甲基化的状况及其表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系.方法 采用甲基化特异性PCR方(MSP)分别检测75例食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态.采用Envision免疫组化法检测食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达.结果 75例标本中,食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因甲基化率分别为41.3%(31/75)、13.3%(10/75)和6.67%(5/75).癌组织和癌旁组织P16蛋白的阳性表达率分别为29.3%(22/75)和56.7%(17/30).31例癌组织p16基因甲基化阳性标本中有2例(6.4%)检测到P16蛋白的表达,而44例癌组织p16基因甲基化阴性标本中有20例(45.5%)检测到P16蛋白的表达.食管癌组织p16基因甲基化率显著高于癌旁组织和切缘组织(P＜0.01),P16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关.p16基因启动子区甲基化与食管癌的组织学分级、肿瘤部位无明显相关,与临床分期、淋巴转移密切相关.结论 p16基因甲基化在食管癌发生发展中起着重要作用,食管鳞癌的分期和淋巴结转移与p16基因甲基化之间有密切关系.

TFPI-2基因克隆及其在胰腺癌细胞中的表达

目的 克隆人TFPI-2基因全长cDNA,构建其真核表达载体,并将其转染到人胰腺癌细胞Panc-1中,检测其表达.方法 用RT-PCR法从人胎盘组织中扩增人TFPI-2基因,并将其与真核表达栽体pEGFP-C1连接,构建真核表达载体pEGFP-C1-TFPI-2.将构建的重组载体转染到人胰腺癌细胞系Panc-1细胞,Western blot检测TFPI-2在Panc-1细胞中的表达.结果 RT-PCR成功的扩增出一条约708bp的片断,扩增片断与载体连接后,经限制性内切酶酶切电泳分析和DNA序列测定证实该基因已经成功构建到裁体上,转染Panc-1细胞后,荧光显微镜观察到稳定转染细胞发出较强绿色荧光,Westem blot技术证明TFPI-2基因能在Panc-1细胞中稳定表达.结论 成功构建了人TFPI-2基因的真核表达载体pEGFP-C1-TFPI-2,获得了稳定表达TFPI-2的Panc-1细胞,证实TFPI-2基因能够在人胰腺癌细胞系Panc-1中高效、稳定的表达,为进一步研究其胰腺癌迁移、浸润及转移中的作用打下基础.

PP2药物抑制乳腺癌细胞侵袭与增殖的机制

目的 以PP2[-4-Amino-5-(4-Chloro-Phenyl)-7-(t-Butyl)Pyrazolo [3,4-d]Pyrimidine]药物(src激酶抑制剂)处理乳腺癌细胞,检测src激酶及E-cadherin蛋白表达水平的变化,观察PP2对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响,并探讨其可能的机制.方法 PP2处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,Western blot检测src及其相关蛋白的表达;Boyden小室实验检测细胞侵袭能力;MTT检测细胞的增殖能力.结果 PP2处理MDA-MB231细胞后,src表达水平明显降低,E-cadherin表达水平升高;细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制,剂量越高抑制作用越明显(P＜0.05).结论 PP2通过提高细胞粘附分子E-cadherin的表达,从而抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和侵袭能力.

ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5'侧翼区序列转录活性的鉴定

目的 检测ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5'侧翼区序列的转录活力,探讨ezrin基因在癌细胞的表达调控机制.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测ezrin基因在食管癌细胞EC109、EC171、EC8712、SHEEC,胃癌细胞N87、BGC823,肺癌细胞A549、95D,肝癌细胞HepG2,白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa中的mRNA和蛋白表达水平;采用PCR法构建以ezrin基因翻译起始位点上游-1444/+134序列为启动子的真核细胞表达质粒pGLB-hE(-1444/+134);采用双荧光素酶报告基因分析系统检测-1444/+134序列在EC109、Hela、A549和BGC823细胞中的转录活力.结果 ezrin基因在食管癌等几种癌细胞中均有高表达,其5'侧翼区-1444/+134序列具有较强的转录活力.结论 ezrin基因5'侧翼区序列的转录活性可能对ezrin基因的几种癌细胞中的高表达起重要作用.

趋化因子受体CXCR4在鼻咽癌中的表达及意义

目的 探讨趋化因子受体CXCR4在人鼻咽癌中的表达及临床意义.方法 采用Real-timeRT-PCR法检测鼻咽癌细胞株中CXCR4 mRNA的表达,应用免疫组织化学法并结合组织阵列检测正常鼻咽组织、鼻咽癌和鼻咽癌淋巴结转移石蜡组织标本中CXCR4蛋白的表达情况.结果 在7种鼻咽癌细胞株中,CXCR4基因在高成瘤、高转移潜能的5-8F细胞中表达水平高,在无转移能力的610B细胞中表达低.CXCR4蛋白在正常鼻咽组织、鼻咽癌和鼻咽癌淋巴结转移组织中表达差异具有统计学意义(P=0.002);鼻咽癌组织中CXCR4表达高于正常鼻咽组(P=0.029);伴发转移的鼻咽癌组织比未发生转移的鼻咽癌组织CXCR4表达增强,差异具有统计学意义(P=0.008);淋巴结转移癌组织CX-CR4表达比鼻咽癌组织高(P=0.013).结论 本研究提示CXCR4表达与鼻咽癌转移存在密切关系,CXCR4表达可作为鼻咽癌转移过程中一个有价值的指标.

survivin在人宫颈癌前病变和宫颈浸润癌组织中的定量分析及其临床价值的评估

目的 检测survivin在人宫颈癌前病变和宫颈浸润癌组织中的表达,探讨其与宫颈癌发生发展的关系,评估其临床应用价值.方法采用免疫组化技术和实时荧光定量PCR技术检测30例宫颈浸润癌、15例癌前病变和10例宫颈炎组织中survivin的表达.结果 (1)survivin蛋白和survivin mRNA在宫颈炎组织中仅微量表达,在宫颈癌前病变和宫颈癌组织的表达依次显著增强(P＜0.05和P＜0.01),survivin mRNA在宫颈癌前病变和浸润癌组织中的表达量分别是宫颈炎组的11.0倍和22.6倍.(2)在宫颈癌前病变、宫颈浸润癌组织中survivin mRNA和蛋白两者的表达量均呈正相关(P=0.02和P=0.01),而在宫颈炎组织中两者无明显相关性.结论 survivin与宫颈癌的发生发展密切相关,是一个具有重要临床意义的特异性肿瘤标记物,应用实时荧光定量PCR技术检测survivin可做为宫颈癌早期诊断的可靠方法.

胆囊腺癌中KAI-1mRNA、Kiss-1mRNA表达的临床病理意义

目的 研究胆囊腺癌、慢性胆囊炎和胆囊结石组织中KAI-1 mRNA和Kiss-1 mRNA表达水平及其临床病理意义.方法 108例胆囊腺癌、15例慢性胆囊炎和20例胆囊结石组织标本常规制作石蜡包埋切片,KAI-1 mRNA和Kiss-1 mRNA染色方法为原位杂交染色法.结果 胆囊腺癌组织中KAI-1mRNA和Kiss-1 mRNA阳性表达率明显低于慢性胆囊炎和胆囊结石组织(P＜0.05,P＜0.01);腺瘤癌变或高分化腺癌、肿块大径≤3 cm、无淋巴结转移及未侵犯周围组织的病例KAI-1 mRNA和Kiss-1mRNA阳性表达率明显高于低分化腺癌或粘液腺癌、肿块大径＞3 cm、淋巴结转移及侵犯周围组织的病例(P＜0.05,P＜0.01).结论 KAI-1 mRNA和Kiss-1 mRNA表达可能是反映胆囊腺癌发生、进展、转移或侵袭潜力及预后的重要生物学标记物.

过氧化物酶体增殖物激活受体γ在大肠肿瘤中的表达及意义

目的 在蛋白及mRNA水平确定过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxiome proliferator-acti-vated receptor-γ,PPARγ)在大肠肿瘤中的表达.方法 结肠镜下活检标本,分为正常大肠粘膜组、大肠腺瘤组及大肠癌组,免疫组化及RT-PCR方法检测各组PPARγ的表达.结果 正常大肠粘膜中表达PPARγ蛋白的细胞主要是接近肠腔,分化良好的腺上皮细胞;而在大肠腺瘤中,PPARγ阳性的细胞呈弥漫分布.PPARγ蛋白及mRNA在大肠癌中的表达显著增加,明显高于大肠腺瘤和正常大肠粘膜(P＜0.05).PPARγ蛋白及mRNA在正常大肠粘膜及腺瘤中的表达无差异(P＞0.05).PPARv mRNA在重度异型增生腺瘤中的表达高于正常大肠粘膜(P＜0.05),接近于在大肠癌中的表达(P＞0.05).结论 大肠腺瘤先发生PPARγ表达部位的变化,PPARγ在重度异型增生的大肠腺瘤及大肠癌中的表达水平较高,表明PPARγ可能在早期即参与大肠癌的发生发展.

中期因子在胃癌中的表达及其意义

目的 探讨中期因子(midkine,MK)蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测88例胃癌及其相应癌旁组织中的MK表达情况,并结合临床病理进行统计学分析.结果 MK在胃癌组织中高表达(表达率为77.3%),且明显高于癌旁组织.MK的表达与肿瘤分化程度、浸润深度及临床分期具有统计学意义上的相关性,与胃癌肿瘤的大小、淋巴结转移无统计学意义上的相关性.结论 MK可能与胃癌的发生、发展有关,能反映出胃癌组织的恶性程度及侵袭能力.

食管癌DNA倍体及增殖活性与病理特征的关系

目的 探讨食管癌组织DNA含量(DI)、合成期细胞比例(SPF)、增殖指数(PI)与临床病理特征间的关系.方法 应用流式细胞仪测定98例新鲜食管癌组织细胞的DI、SPF、PI值,研究其和食管癌临床病理的关系.结果 (1)异倍体率、DI、SPF、PI等指标在以患者性别、肿瘤大体类型、分化程度、TNM分期等病理特征为分组对象的各组间没有发现差异有统计学意义;(2)食管组织淋巴结阳性组的SPF明显大于淋巴结阴性组(P=0.03).结论 (1)食管组织一旦癌变后其细胞DNA的改变和临床分期等病理指标没有明显关系;(2)食管癌淋巴结转移和食管癌组织合成期细胞比例(SPF)有关.

子宫内膜癌和宫颈癌中CT抗原精子蛋白17的异常表达

目的 人精子蛋白17(sperm protein 17,Sp17)正常情况下局限表达于睾丸,近年发现在上皮性卵巢癌等恶性肿瘤中异常表达,已被列入CT(cancer/testis)抗原家族.我们研究该蛋白在不同病理类型的子宫内膜癌和宫颈癌中的表达频度、分布类型以及与肿瘤临床分期分级的关系,旨在探讨Sp17是否可能成为相关妇科肿瘤诊断标志和治疗靶标.方法 用免疫组化技术检测81例石蜡包埋的妇科恶性肿瘤组织标本中Sp17的表达,其中包括50例子宫内膜癌(腺癌44例、腺鳞癌6例)和31例宫颈癌(鳞癌17例、腺癌14例).结果 子宫内膜癌组织Sp17的阳性率为66%(33/50),其中腺癌29例阳性,腺鳞癌4例阳性,表达模式呈异质性,Sp17表达与肿瘤分化程度和临床分期均无相关性.宫颈癌组织Sp17总阳性率32.2%(10/31),鳞癌23.5%(4/17),腺癌42.8%(6/14).结论 Sp17在子宫内膜癌和宫颈腺癌中呈高水平异常表达,尽管其表达与肿瘤分化程度和临床分期无明显相关,仍有可能作为肿瘤体内显像诊断和免疫治疗的分子靶标.

晚期非小细胞肺癌患者外周血DC亚型与NK细胞的关系

目的 探讨非小细胞肺癌患者外周血树突状细胞亚群(DC1/DC2)和机体NK细胞含量之间的关系及其临床意义.方法 采用流式细胞术检测40例肺癌患者外周血DE亚群(CD11c+ DC/DC1和CD123+DC/DC2)、NK细胞含量及血浆IL-12的浓度,并以10例健康受试者作为对照.结果 肺癌患者外周血CD11c+ DC百分率为(0.66±0.24)%,比对照组(1.38±0.18)%明显降低(P＜0.01),CD123+DE百分率(0.28±0.17)%与对照组(0.27±0.11)%相比,差异无统计学意义(P＞0.05);肺癌患者与健康人比较,NK细胞含量及IL-12的浓度均降低(P＜0.05).NSCLC患者NK细胞的含量与CD11c+百分数及血浆IL-12浓度均呈正相关(P＜0.05),与CD123+百分数呈负相关(P＜0.01).DE各亚型百分率同患者的卡氏评分、化疗史有关联(P＜0.01),NK细胞的含量与年龄相关(P＜0.05).结论 非小细胞肺癌患者DC1功能低下,IL-12分泌能力障碍,从而影响了NK细胞的活性.DC亚型与NK细胞含量之间以及它们与临床生物学行为之间都有一定关系.

蛋白激酶C-α、CyclinD1和Cdk4在大肠癌中表达的相关性及临床意义

目的 探讨PKC-α,CyclinD1和Cdk4在大肠癌中表达的相关性及其与临床病理学特征的关系.方法 应用免疫组化SP法对83例大肠组织中PKC-α,CyclinD1和Cdk4的表达进行检测.结果 PKC-α在大肠癌组织中阳性表达31/47(66.0%)与正常组织3/15(20.0%)及腺瘤10/21(47.6%)相比差异有统计学意义(P＜0.05),与大肠癌分化程度,Dukes分期,淋巴结转移及CEA水平明显相关(P＜0.05).Cy-clinD1和Cdk4在大肠癌中阳性表达分别为26/47(55.5%)、28/47(59.6%),与正常组织中2/15(13.3%)、1/15(6.70%)及腺瘤组织中8/21(38.1%)、9/21(42.9%)相比呈递增趋势(P＜0.05).大肠癌中CyclinD1阳性表达与肿瘤分化程度,Dukes分期,淋巴结转移呈正相关(P＜0.05),而与CEA水平关系不大(P＞0.05);CAk4阳性表达则与分化程度,Dukes分期有关(P＜0.05),与淋巴结转移及CEA水平关系不密切(P＞0.05).PKC-α与CydinD1呈正相关关系(r=0.348,P＜0.05),CyclinD1和Cdk4呈正相关关系(r=0.393,P＜0.05),PKC-α和Cdk4则无明显相关性(r=0.167,P＞0.05).结论 蛋白激酶C-α与CyclinD1及Cdk4的过表达在大肠癌的发生、发展中起着重要的协同作用.三者的过表达与大肠癌的分化程度,Dukes分期密切相关.

结直肠神经内分泌癌研究进展

0 引言神经内分泌细胞遍布全身,主要分布于胃肠道、胰腺、肺、甲状腺、肾上腺以及其他许多器官.结直肠神经内分泌癌(Neuroendocrine Carcinoma,NEC)是一类以神经内分泌细胞构成的恶性肿瘤,以具有独特的激素合成和分泌功能以其分化差、侵袭性强、转移早等恶性潜能而逐渐为人们所重视[1].

胃癌靶向药物研究进展

0 引言晚期胃癌的治疗一直是一个研究热点,随着靶向药物在乳腺癌、恶性淋巴瘤等恶性肿瘤治疗中获得成功,人们对晚期胃癌的靶向药物治疗也开始进行一些有益的尝试.

晚期转移性结直肠癌内科治疗进展

0 引言结直肠癌的发病率在世界各国尤其是发达国家中明显上升,近20年来在我国尤其是在大城市,结直肠癌的发病率已占消化道癌的第二位[1].2000年,世界范围内,结直肠癌新发病例940 000,其中死亡254 000例.

乳腺癌根治术后芬太尼、曲马多与吗啡病人自控镇痛的比较

目的 观察比较乳腺癌根治术后芬太尼、曲马多病人自控静脉镇痛(PCIA)与吗啡病人自控硬膜外镇痛(PCEA)临床镇痛效果与副作用.方法 选择乳腺癌根治病人180例.ASA(美国麻醉医师协会)分级Ⅰ～Ⅳ级,年龄28～70岁,随机分三组:F(芬太尼)组60例,芬太尼1.0 mg+咪达唑仑10 mg+阿扎司琼10 mg+0.9%生理盐水至100 ml PCIA;T(曲马多)组60例,曲马多1000 mg+氟哌利多5 mg+0.9%生理盐水至100 ml PCIA;M(吗啡)组60例,吗啡5 mg+氟哌利多5 mg+布比卡因150 mg+0.9%生理盐水至100 ml PCEA.采用韩国奥美泵AUTOMEN2300,设定持续榆注2 ml/h,单次PCA剂量0.5 ml,锁定时间15 min.术后48小时观察病人药物用量、镇静评分(SS)镇痛评分(VAS),满意水平及副作用.结果 F组48小时芬太尼用量(1.0±0)mg,按键次数(8±1.5)次,T组48小时曲马多用量(908.2±59.7)mg,按键次数(6.5±1.5)次;M组48小时吗啡用量(5.0±0)mg,按键次数0次.镇痛效果:VAS及SS评分无显著性差异,优良率＞97%.满意度无显著性差异.副作用:F组与T组病人恶心、呕吐发生率明显低于M组(P＜0.05),M组皮肤瘙瘁发生率25%,恶心,呕吐发生率28%.呼吸循环变化三组无明显差异(P＞0.05).结论 芬太尼、曲马多PCIA与吗啡PCEA镇痛效果确切,但在副反应方面芬太尼、曲马多PCIA相对较少.

多西他赛联合低剂量顺铂治疗晚期高龄非小细胞肺癌的临床研究

目的 探讨多西他赛联合低剂量顺铂治疗晚期高龄非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效及毒副反应.方法 对31例晚期高龄NSCLC患者用多西他赛40 mg/m2,静脉滴注,每周1次,连续2周;顺铂14 mg/m2,静脉滴注,每天1次,连用5次;以上化疗方案每4周重复1次,每例进行2周期化疗.结果 全组31例,总有效率32.3%(10/31),其中PR10例,SD16例,PD5例,无CR病例,中位生存时间10.3个月.Ⅲ～Ⅳ度的中性粒细胞减少发生率为29.0%(9/31),非血液学毒性主要为疲劳乏力等(14/31,占45.2%).结论 周剂量多西他赛联合低剂量顺铂是治疗晚期高龄NSCLC较好的化疗方案

细胞块免疫细胞化学在确定转移腺癌原发灶中的意义

目的 探讨细胞块免疫细胞化学在诊断转移腺癌原发灶中的临床价值.方法 选取手术后有病理组织学结果对照,并且淋巴结穿刺后已做细胞块的肿瘤患者150例,其中肺腺癌30例、卵巢癌30例、肠癌30例、胃癌30例、乳腺癌30例.用细针穿刺淋巴结获取标本,用血浆凝血酶的方法制成细胞块,抗体组选择TTF-1、CA125、CDX2、Villin、GCDFP-15 5种抗体.结果 肺腺癌的淋巴结中TTF-1阳性率达90%,卵巢癌的淋巴结中CA125阳性率达90%,肠癌的淋巴结中CDX2阳性率达93%,Villin阳性率达76%,胃癌的淋巴结中CDX2阳性率达50%,Villin阳性率达63%,乳腺癌的淋巴结中GCD-FP-15阳性率达86%.结论 用血浆凝血酶的方法做成的细胞块常规切片,再与免疫细胞化学相结合,不仅能确定肿瘤性质,组织学类型,解决了一些疑难病例,而且还能够对原发灶较小,比较隐匿,而以淋巴结转移为首发症状的肿瘤患者,提示确定原发灶,帮助临床制定合理治疗方案及判断预后.

成人膀胱横纹肌肉瘤2例报告并文献复习

目的 探讨成人膀胱横纹肌肉瘤的病变特点及临床诊治方法.方法 回顾性分析2例成人膀胱横纹肌肉瘤患者的临床资料.结果 本组2例均经手术治疗,术后经免疫组化及病理检查证实为膀胱横纹肌肉瘤.术后2例患者均给予VAC方案规则化疗及放疗,恢复良好.其中例1随诊2年,未见复发;例2八个月后死于脑血管意外.结论 成人膀胱横纹肌肉瘤属少见病,恶性程度高且症状不典型,确诊需要靠免疫组化及病理证实,以手术为主的综合治疗方式效果较好.

基质金属蛋白酶1、9基因多态性与成人脑星形细胞瘤的易感性

目的 本研究旨在探索MMP-1、MMP-9基因启动子区单核苷酸多态性(Single nucleotide poly-morphism,SNPs)与脑星形细胞瘤易感性的关系.方法 以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法,检测236例成人星形细胞瘤及366例健康对照的MMP-1-1607 2G/1G及MMP-9-1562 C/T多态性的基因型.结果 (1)MMP-1-1607 2G/1G SNP等位基因型及基因型总体分布在星形细胞瘤患者组和健康对照组之间有显著性差异(P值分别为0.002和＜0.001).与2G/2G基因型相比,1G/1G基因型可显著降低该肿瘤的发病风险(校正OR=0.58,95%CI=0.42～0.79),而2G/1G基因型对该肿瘤的易感性无显著影响(校正OR=0.74,95%CI=0.51～1.08).根据性别、发病年龄(≤45岁或＞45岁)进行的分层分析显示了相似的结果.(2)MMP-9-1562 C/T的等位基因型及基因型总体分布在肿瘤患者组和健康对照组之间差异无统计学意义(P值分别为0.926和0.818).与C/C基因型相比,C/T+T/T基因型不能改变星形细胞瘤的发病风险(校正OR=1.09,95%CI=0.73～1.64).根据性别、发病年龄、病理分级进行的分层分析,也未发现MMP-9 SNP与星形细胞瘤的发病风险相关.结论 MMP-1-1607 2G/1G多态性与星形细胞瘤的易感性有关,而MMP-9-1562 C/T多态性可能不是该肿瘤的独立易感因素.

p16基因C540G和C580T多态与高发区食管癌和贲门癌发病风险的关联

目的 探讨p16基因第3外显子3'端非编码区C540G和C580T两个单核苷酸多态与河北省高发区食管鳞状细胞癌(ESCC)和贲门腺癌(GCA)遗传易感性的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析265例ESCC患者、238例GCA患者和246名健康对照的p16基因C540G和C580T多态住点的基因型.结果 p16基因C540G三种基因型(C/C、C/G、G/G)的频率分布在ESCC、GCA患者和对照组相比均无显著差异;p16基因C580T三种基因型(C/C、C/T、T/T)的频率在对照组和ESCC、GCA患者组间也无显著差异(P均＞0.05).单体型分析显示,对照组540C/580C、540C/580T、540G/580C和540G/580T单体型的频率分别为80.1%、10.4%、8.5%和1.0%,ESCC组单体型频率(80.8%、9.6%、8.7%和0.9%)和GCA组的单体型频率(80.2%、9.2%、9.5%和1.1%)与之相比均无显著差异(P均＞0.05).结论 p16基因C540G和C580T多态可能与河北省高发区ES-CC和GCA的易感性无关.

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