洛铂诱导顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞的凋亡

目的 探讨洛铂体外诱导人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞凋亡及其机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度和时间洛铂对SKOV3/DDP细胞的生长抑制作用,并与其素本细胞SKOV3(敏感株)相比较;进一步通过光镜及透射电镜观察SKOV3/DDP细胞的形态学改变;并采用流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 洛铂作用SKOV3/DDP细胞的增殖呈时间剂量依赖模式受到抑制,与SKOV3细胞相比,差异无统计学意义(P＞0.05);一定浓度的SKOV3/DDP作用一定时间,可诱导SKOV3/DDP细胞发生凋亡;光镜和透射电镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变;流式细胞技术分析发现洛铂作用首先引起细胞周期分布的改变,随用药时间的延长,凋亡率逐渐升高.结论 洛铂通过诱导凋亡而抑制体外培养的SKOV3/DDP细胞生长,其机制可能与细胞G0/G1期阻滞有关.

蛋白酶体抑制剂PS-341诱导U266细胞凋亡与胞浆内[Ca2+]变化的关系

目的 探讨蛋白酶体抑制剂PS-341(Bortezomib)诱导骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡时对其胞浆内[Ca2+]([Ca2+]i)的影响.方法 以浓度梯度的PS-341干预U266细胞4h后收集,荧光显微镜观察细胞凋亡,Annexin V-FITC/PI双参数流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,Fluo-3/AM荧光素标记FCM检测[Ca2+]i.结果 (1)PS-341作用U266细胞4h后荧光显微镜观察到凋亡细胞数随浓度增加而增多;(2)FCM检测凋亡细胞的比例分别为0.56%、7.71%、19.84%、31.10%、40.72%,与PS-341浓度成正比;(3)PS-341作用后U266细胞[Ca2+]i均值分别为403.65 nmol/L、418.20 nmol/L、378.65 nmol/L、356.36 nmol/L、349.21 nmol/L;(4)PS-341诱导U266细胞凋亡时伴随[Ca2+]i的改变,浓度＞50 nmol/L时诱导的细胞凋亡伴随[Ca2+]i下降.结论 蛋白酶体抑制剂PS-341诱导骨髓瘤细胞凋亡呈浓度依赖性;PS-341浓度＞50 nmol/L时下调[Ca2+]i,并由此发挥抗骨髓瘤细胞作用.

新生霉素抑制K562细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系

目的 研究新生霉素(novobiocin,NB)对K562细胞的作用,并探讨该作用是否与热休克蛋白90(Heat shock protein 90,Hsp90)分子伴侣的功能有关.方法 用蛋白免疫印迹法检测Bcr-Abl的含量,采用免疫共沉淀的方法 研究Hsp90分子伴侣的功能.先将Bcr-Abl与其分子伴侣共沉淀下来,然后用免疫印迹法检测沉淀物中与Bcr-Abl结合的Hsp90和Hsp70含量变化.结果 NB能降低K562细胞中Bcr-Abl的蛋白水平,使Bcr-Abl与Hsp90和Hsp70的结合减少.结论 本研究首次证明干扰Hsp90伴侣功能,减少Bcr-Abl与Hsp90和辅伴侣的结合与NB抑制慢性粒细胞白血病(chronic myelog enous Leukemia,CML)相关.

siRNA抑制肝癌细胞DNA修复门控基因表达的实验

目的 本实验旨在研究siRNA抑制DNA修复门控基因Rad52、Ku70和Ku80的效果并筛选出高效的siRNA作用靶位.方法 依据siRNA设计原则,针对每一个门控基因的mRNA序列各选择了2个靶位点并构建了相应的siRNA表达载体(psiRNA1～6).酶切分析及DNA测序鉴定重组质粒构建成功后,将其转染人肝癌细胞株HepG2.RT-PCR和Western Blot分别用来检测psiRNAs在转录水平和翻译水平干扰靶基因的效果.结果 psiRNA1～6作用细胞后明显抑制了靶基因的表达.比较而言,psiRNA1、psiRNA4、psiRNA5干扰效果分别比psiRNA2、psiRNA3、psiRNA6更佳.结论 siRNA为进一步研究DNA修复门控基因Rad52、Ku70和Ku80的功能奠定基础.

人tumstatin基因的克隆表达及其鉴定

目的 重组表达人tumstatin,为人tumstatin的肿瘤受体显像奠定基础.方法 提取HEK293细胞总RNA,通过RT-PCR扩增人tumstatin基因,导入pMD19-T,测序,然后亚克隆至pET28a,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定.结果 提取的总RNA经电泳,有清晰的28S和18S两条带.RT-PCR扩增产物长度与理论值750bp相一致.测序证实tumstatin基因正确插入载体中.重组人tumstatin在大肠杆菌中高效表达,表达量约占菌体总蛋白量的30%.Western blot证实所表达蛋白为目的 蛋白.结论 重组人tumstatin蛋白在大肠杆菌中高效表达,为进一步的tumstatin的肿瘤受体显像奠定基础.

生存素反义核酸联合泰素帝治疗荷耐药结肠癌移植瘤裸鼠的初步观察

目的 探讨生存素(survivin)反义基因与化疗联合应用提高耐药结肠癌疗效的可行性.方法 以泰素帝、survivin反义核酸及survivin反义核酸联合泰素帝分别对荷LoVo/Adr结肠癌鼠模型进行干预治疗,观察肿瘤生长情况,并检测肿瘤组织survivin蛋白表达变化及凋亡变化.结果 单用泰素帝对LoVo/Adr移植瘤无明显抑制作用,survivin反义核酸能有效抑制移植瘤生长,survivin反义核酸联合泰素帝对肿瘤抑制作用明显.泰素帝对肿瘤组织survivin蛋白表达无明显影响,survivin反义核酸能显著降低肿瘤组织survivin蛋白的表达,survivin反义核酸联合泰素帝对肿瘤组织survivin蛋白降低作用为明显.各组肿瘤组织凋亡指数分别为(7.0±1.83)%、(21.50±2.38)%和(43.5±3.87)%,前者与对照组(6.5±1.29)%相比差异无统计学意义(P＞0.05),后两者与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 survivin反义核酸对泰素帝具有明显增效作用,两者联合应用能发挥对耐药结肠癌的协同治疗效应.

前列腺上皮内瘤DNA倍体、细胞周期的分析

目的 探索DNA倍体类型、细胞周期在前列腺上皮内瘤中诊断和鉴别诊断的价值.方法 应用细胞图像分析技术检测前列腺上皮内瘤(PIN)细胞的平均DNA含量、DNA平均倍体值及细胞周期的各个时相的变化.同时与良性前列腺增生症(BPH)、前列腺癌(PCa)比较.结果 PIN组异倍体率为70%,前列腺上皮内瘤DNA平均倍体值、G0/G1期细胞比率、S期细胞比率介于良性前列腺增生症和前列腺癌之间.结论 DNA异倍体、较高S期细胞比率是前列腺上皮内瘤重要生物学特性.对于前列腺上皮内瘤的鉴别诊断具有一定参考价值.

KAI1、MMP-9蛋白表达与胃癌浸润转移的关系

目的 研究胃癌组织中KAI1、MMP-9蛋白表达,探讨它们在胃癌侵袭转移过程中的作用.方法 在71例胃癌组织及20例正常胃粘膜组织中,应用免疫组织化学SP法检测KAI1、MMP-9的蛋白表达,进而分析它们彼此之间的关系及与胃癌临床病理特征之间的关系.结果 KAI1、MMP-9在胃癌中的表达率分别为36.6%、67.6%,而20例正常胃组织中KAI1与MMP-9的阳性表达率分别为90%、45%,两组间差异有统计学意义(P＜0.05);KAI1与MMP-9的表达均与浸润深度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05),此外,KAI1的表达还与TNM分期有关(P＜0.05).经统计分析KAI1与MMP-9呈负相关.结论 KAI1、MMP-9与胃癌的侵袭转移密切相关,可作为评价胃癌的进展与预后的有力指标;KAI1、MMP-9可能通过影响血管生成参与胃癌的进展过程,为临床针对胃癌的抗血管治疗提供了新的思路.

乳腺癌中转录因子AP-2的表达及其与c-erbB-2表达的相关性

目的 探讨转录因子AP-2在乳腺癌中表达及其与c-erbB-2表达的相关性.方法 应用免疫组织化学染色技术(SP法)检测128例乳腺癌组织中AP-2和c-erbB-2的表达.结果 c-erbB-2和AP-2在128例浸润性导管癌中过表达率分别为30.46%(39/128)和34.38%(44/128).对照组乳腺增生病与乳腺癌组织中AP-2的过表达率有显著差异(x2=6.91,P＜0.01).乳腺癌中AP-2的过表达与患者年龄(x2=2.3,P＞0.05)、肿块大小(x2=2.58,P＞0.05)及淋巴结转移(x2=0.32,P＞0.05)无关,而与肿瘤组织学分级有关.在组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级肿瘤组织中AP-2(x2=7.46,P＜0.05)的过表达均有显著差异,且随着组织学分级的增高,AP-2的过表达率也相应增加.128例乳腺癌中c-erbB-2和AP-2的过表达具有相关性(r=0.87,P＜0.01),且呈正相关关系(0＜r＜1).结论 AP-2在乳腺癌组织中存在过表达,与c-erbB-2一样可作为判断预后或选择化疗用药的指标.

原发性和继发性胶质母细胞瘤中p53、p16和Rb的表达及意义

目的 探讨p53、p16和Rb基因在原发性和继发性GBM中的表达差异性及意义.方法 应用RT-PCR和Western-blot检测14例原发性和16例继发性GBM中p53,p16 mRNA和蛋白表达,免疫组织化学法检测Rb表达.结果 Rb免疫组织化学染色显示正常脑组织中无表达,14例原发GBM中有3例表达缺失(21.4%),16例继发GBM中有2例表达缺失(11.1%).RT-PCR和Western blot对比原发和继发GBM中p53和p16的表达,发现所有继发GBM中p53表达强度较原发GBM明显增加,14例原发GBM中有5例缺失(36.0%),继发GBM中仅有1例表达缺失(6.25%).p16表达缺失明显减少.结论 Rb的表达缺失在原发和继发GBM中没有明显的差异.细胞周期调节基因p53在mRNA和蛋白水平表达增加和p16在同样水平表达缺失是原发与继发GBM重要的细胞周期调控基因上的变化,可能是基因治疗GBM的重要靶点之一.

脑星形细胞肿瘤微血管密度和NET-1蛋白的表达及其相关性

目的 探讨脑星形细胞肿瘤组织中微血管密度(MVD)和NET-1蛋白表达的意义.方法 应用免疫组化方法 ,检测65例脑星形细胞肿瘤组织和5例正常脑组织中,NET-1蛋白的表达以及血管内皮细胞表面抗原CD34单抗标记测定MVD,分析NET-1蛋白表达和MVD与脑星形细胞肿瘤分级关系.结果 MVD与脑星形细胞肿瘤分级相关,NET-1阳性组MVD显著高于NET-1阴性组,NET-1表达强度与MVD呈高度正相关(rs=0.668 2,P＜0.05).结论 MVD可以是判断星形细胞瘤恶性程度指标之一,NET-1可能通过促进星形细胞肿瘤组织微血管形成发挥作用.

plexin-B1在乳腺癌组织中的表达及其与淋巴道转移的关系

目的 探讨plexin-B1在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌侵袭、转移的关系.方法 应用免疫组化supervision法分别检测15例正常乳腺组织和85例乳腺癌组织中plexin-B1的表达.结果 plexin-B1在正常乳腺组织中均为阴性表达,在乳腺癌组织中癌细胞和管腔内皮细胞的表达阳性率分别为76.5%(65/85)和70.6%(60/85),其中在有淋巴结转移组分别为87.0%(47/54)和85.2%(46/54),在无淋巴结转移组分别为58.1%(18/31)和45.2%(14/31),两组间的差异有统计学意义(P＜0.001).plexin-B1在乳腺癌组织中表达与雌激素受体(estrogen receptor,ER)的状态高度相关,在肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞的表达呈显著的正相关(r=0.666,P＜0.01)).但其表达与肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移数目无关.结论 乳腺癌组织中plexin-B1的高表达可能与乳腺癌发生及淋巴道转移密切相关.

XRCC1单核苷酸多态性预测晚期NSCLC铂类药物化疗的敏感性

目的 研究XRCC1单核苷酸多态性与晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)对以顺铂(cisplatin,DDP)或卡铂(carboplatin,CBP)为基础药物的化疗敏感性的关系.方法 经病理学确诊的晚期NSCLC患者97例,采用DDP或CBP为基础药物的方案化疗,3个周期后进行疗效评价.以聚合酶链反应(PCR)结合限制性片段长度多态性(RFLP)检测XRCC1 Arg194Trp和Arg399Gln基因型,并比较基因型与化疗敏感性的关系.结果 (1)携带XRCC1 194 Arg/Trp的患者有效率高于携带Arg/Arg、Trp/Trp基因型的患者(P＜0.05);携带至少一个Trp等位基因基因型患者的化疗敏感性是携带Arg/Arg基因型的3.4倍(OR=3.39,95%,CI=1.32～8.70,P＜0.05).(2)携带XRCC1 399Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln基因型患者的有效率分别为36.4%、22.9%、28.6%,差异无统计学意义(P＞0.05).尚未发现XRCC1 Arg194Trp和Arg399Gln基因多态性存在联合作用.结论 XRCC1Arg194Trp单核苷酸多态性可能与晚期NSCLC对铂类药物的化疗敏感性相关.

肿瘤型M2丙酮酸激酶的生物学特性及临床应用

0 引言肿瘤型M2丙酮酸激酶(TU M2-PK)是近年来研究较多的一种新型肿瘤标志物,在恶性肿瘤的早期诊断中显示较好的应用前景.本文主要就肿瘤型M2-PK的生物学特性及临床应用作一综述.

GASC1基因的研究进展

0 引言基因扩增经常发生在肿瘤细胞中,它可以激活原癌基因从而使肿瘤进展.如果癌基因位于扩增区域,所造成的基因过度表达则可导致细胞生长的失控,临床治疗已经对准了那些过度表达某蛋白质产物的基因.

Ⅳa期鼻咽癌治疗中不同化疗周期的疗效分析

目的 对比观察不同化疗周期治疗Ⅳa期鼻咽癌生存率的影响.方法 100例Ⅳa期鼻咽癌患者随机分为两组,两组放疗方式及化疗方案相同,均用标准超分割方式放疗,总DT 72～76.8 Gy.对照组在放疗前、放疗中加用化疗,共化疗2周期;治疗组在放疗前、放疗中及放疗结束后加用化疗,共化疗4周期.结果 治疗组和对照组的5年总生存率分别为50%、40%;两组的无瘤生存率为44%和38%.治疗组和对照组的远地转移率分别为46%和56%.结论 两组生存率和远地转移率无明显差异,放疗结束后继续化疗有可能会提高生存率.

多西紫杉醇联合奥沙利铂、卡培他滨与FOLFOX4方案治疗晚期胃癌疗效比较

目的 观察多西紫杉醇联合奥沙利铂、卡培他滨方案与FOLFOX4方案治疗晚期胃癌的客观疗效,疾病进展时间和毒性反应.方法 治疗组41例晚期胃癌患者接受多西紫杉醇25 mg/m2(d1,d8,d15),奥沙利铂60 mg/m2(d1,d8,d15),卡培他滨每日1 250 mg/m2,分2次口服,d1～14,28 d为1周期,疗程2～6周期.对照组40例晚期胃癌患者接受奥沙利铂85 mg/m2dl,亚叶酸钙200mg/m2(2 h静脉输注)d1～d2,而后5-Fu 400 mg/m2(10 min静脉推注)及5-Fu 600 mg/m2(持续静脉泵入22 h),d1～d2,每14 d重复,2次为1周期.结果 多西紫杉醇联合奥沙利铂、卡培他滨方案治疗组总有效率为58.5%,中位疾病进展时间(TTP)为6.8个月.常见的毒性反应为白细胞和中性粒细胞减低,手足综合征和周围神经毒性反应等.FOLFOX4方案总有效率为47.4%,中位TTP为5.9个月.常见的毒性反应为白细胞和中性粒细胞减低和周围神经毒性反应等.结论 多西紫杉醇联合奥沙利铂、卡培他滨化疗方案治疗晚期胃癌近期疗效显著,耐受性较好.

奥沙利铂联合替加氟持续静脉注射治疗晚期胃癌临床观察

目的 观察奥沙利铂与替加氟持续静脉滴注联合化疗治疗晚期胃癌的临床疗效.方法 21例均为不能手术的Ⅳ期胃癌病人.均接受奥沙利铂130mg/m2,静滴2h,第1天;替加氟600mg/m2,经微量泵持续24h静脉输入,第1～5天,3～4周为一周期,连用2周期后,4周评价疗效.结果 21例患者中,CR0例,PR 12例(57.1%),NC6例(28.6%),PD 3例(14.3%),总有效率57.1%.中位缓解期4.6个月,中位生存期8.3个月,临床受益率85.7%.毒副反应主要是神经毒性、恶心、呕吐和腹泻等.结论 奥沙利铂与替加氟持续静脉滴注联合化疗治疗晚期胃癌可获得较高疗效,毒副反应能耐受,可作为晚期胃癌的有效治疗方案,值得进一步研究.

顺铂时辰给药合并羟基喜树碱治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的 探索顺铂(DDP)时辰给药与常规给药合并羟基喜树碱(HCPT)治疗晚期非小细胞肺癌的疗效和副作用.方法 59例Ⅲb～Ⅳ期非小细胞肺癌患者随机分为两组,顺铂时辰给药合并羟基喜树碱组(时辰化疗组)和顺铂、羟基喜树碱常规给药组(常规化疗组),两组顺铂和羟基喜树碱的剂量相同,顺铂14mg/(m2·d),羟基喜树碱6mg/(m2·d),两药连用5天,21天为1周期,时辰化疗组顺铂在18:00用药,其他用药时间相同.每例连用两周期以上评价疗效.结果 时辰化疗组PR 13例,SD13例,PD 4例,有效率(CR+PR)43.3%,常规化疗组PR 9例,SD 17例,PD 3例,有效率31.0%,两组比较P=0.051.时辰化疗组中位生存期6.62个月,12个月生存率30.4%(9/30例),18个月生存率13.3%(4/30).常规化疗组中位生存期5.06个月,12个月生存率24.1%(7/29),18个月生存率3.4%(1/29);时辰化疗组的有效率和生存期较常规组有优势.血液学毒性和消化系统等副作用两组相仿.结论 顺铂时辰给药合并羟基喜树碱治疗晚期非小细胞肺癌有临床应用价值.

混合性血管内皮瘤1例报告及文献复习

目的 探讨混合性血管内皮瘤临床病理特点及免疫组化表型.方法 对1例混合性血管内皮瘤病理组织学及免疫组化表型中的CD31、CD34、Ⅷ因子、VWF、PCK、Vimentin、EMA进行观察并复习相关文献.结果 巨检:送检骨骼肌带筋膜,肌间见31个灰白色结节,直径0.6～2.5 cm,切面灰白色鱼肉状.镜检:瘤组织成分复杂,有网状型血管内皮瘤、上皮性血管内皮瘤及梭形细胞血管内皮瘤成分.免疫组化表型为血管来源肿瘤.结论 混合性血管内皮瘤属极其罕见低度恶性肿瘤,成分多样.免疫组化表型有助于其诊断分析.

103例胃肠道间质瘤的临床病理与预后分析

目的 探讨胃肠道间质瘤(GISTs)的临床病理、免疫组化特征及预后相关因素.方法 103例胃肠道间质瘤患者接受手术后分析其病理形态学,观察肿瘤大小、细胞核异性型和核分裂相,并根据这些指标进行分型.检测肿瘤组织CD117和CD34免疫学表型.结果 本组103例胃肠道间质瘤中CD117阳性表达93例(90.3%),CD34阳性表达69例(70.0%),不同部位GISTs其CD117和CD34表达无显著差异(P＞0.05).良性肿瘤患者的三年无病生存率显著地高于恶性肿瘤(P＜0.05).结论 CD34和CD117联合使用可协助鉴别诊断GISTs.基于肿瘤大小、细胞异型性以及核分裂相等的组织形态学分型可作为诊断恶性GISTs参考指标.

131I标记血管靶向分子在肿瘤显像中的应用

目的 研究131I标记的血管靶向分子(RGD10、F56、K237)的生物活性及在肿瘤部位的浓聚情况.方法 采用Iodogen法标记血管靶向分子,用Sep-Pak C18柱纯化,通过HUVEC检测它们的免疫活性分数和亲和常数,用手持式γ相机检测和比较它们在荷A549肺腺癌裸鼠肿瘤部位的浓聚情况.结果 131I-RGD10、131I-F56、131I-K237的免疫活性分数(IRF)分别为42.7%、55.1%和44.5%,与HUVEC的亲和常数Ka值分别为9.41×107 L/mol、3.87×107 L/mol和5.98×107 L/mol.3个131I标记的血管靶向分子中,131I-RGD10在肿瘤部位的浓聚效果更为明显.结论 静脉注射131I-RGD10在肿瘤部位聚集,可望成为肿瘤早期核素显像诊断靶向分子.

希罗达联合三维适形放疗在肝癌中的应用

0 引言原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,首选的治疗手段是手术切除病灶,但大多数患者就诊时已经属于中晚期,丧失手术切除机会.

食管胃交界腺癌——食管癌高发区面临的新课题

0 引言1959年河南省林县建立了我国第一个食管癌高发区.本文从高发区流行病学的变化,以及国内对贲门癌研究的现况,结合2000年WHO提出的贲门癌界定标准、消化道上皮内瘤变新概念[1](简称:WHO新书),谈谈对我国食管癌高发区贲门癌高发的认识.

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