军事医学杂志
Military Medical Sciences 군사의학
- 主管单位: 军事医学科学院
- 主办单位: 军事医学科学院
- 影响因子: 0.58
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1674-9960
- 国内刊号: 11-5950/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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伯氏考克斯体新桥株感染BALB/c小鼠的实验研究
目的:分析伯氏考克斯体新桥株对BALB/c小鼠的感染性.方法:用伯氏考克斯体新桥株腹腔接种感染小鼠,于感染后7,14,21,28 d分别处死小鼠,采用伯氏考克斯体特异的荧光定量PCR检测感染小鼠肝、脾、肺组织样本中伯氏考克斯体含量.采用间接免疫荧光法检测感染小鼠血清特异性抗体水平.结果:感染后28 d内,小鼠肝、脾、肺组织中均检出大量伯氏考克斯体,第7天检出量高,脾的含量显著高于肝和肺,肝的含量显著高于肺.随着感染时间延长,伯氏考克斯体检出量呈下降趋势,但血清特异性抗体水平则不断升高.结论:伯氏考克斯体新桥株为强毒株,可以引起BALB/c小鼠较长时间的稳定感染;BALB/c小鼠可以用作伯氏考克斯体感染模型.
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小鼠sidt2基因的可变剪接验证
目的:验证小鼠基因sidt2中sidt2(l)和sidt2(s)为同一基因经可变剪接所得的结果.方法:对小鼠sidt2基因进行生物信息学分析及基因组PCR,确定其基因组定位情况;通过提取总RNA、RT-PCR,了解sidt2在小鼠多种组织中的表达情况;构建可变剪接报告载体,转染小鼠肝癌细胞Hepa1-6,并提取细胞总RNA、RT-PCR,检测其在细胞中的剪接行为,验证该基因存在可变剪接. 结果及结论:证实小鼠sidt2存在可变剪接,其两条序列sidt2(l)和sidt2(s)为可变剪接的产物.
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两株大肠杆菌烈性噬菌体的分离与生物学特征研究
目的:以大肠杆菌285为宿主菌从医院污水中分离噬菌体,对其生物学特点进行研究,并与f2噬菌体的生物学特点进行比较.方法:四步法污水分离噬菌体;单、双层平板噬菌斑实验筛选烈性噬菌体并观察噬菌斑形态;纯化后2%磷钨酸染色电镜观察;利用双层平板噬菌斑实验测定佳感染复数;紫外线照射观察耐受时间.结果:成功分离出大肠杆菌285烈性噬菌体2株(EcP1、EcP2), EcP1噬菌斑直径3~5 mm(培养12 h), 逆光观察噬菌斑呈全透明状,该噬菌体有一个长多面体立体对称的头部,头长径(L)约47 nm,头横径(W)约35 nm,L/W=1.34,无囊膜,有一短尾,尾长约20 nm;EcP2噬菌斑直径约1 mm(培养12 h),逆光观察噬菌斑呈全透明状,该噬菌体有一个长多面体立体对称的头部,头长径(L)约89 nm,头横径(W)约54 nm,L/W=1.65,无囊膜,有一长尾,有尾鞘,尾长约81 nm.EcP2可噬大肠杆菌8099形成直径约1 mm的圆形噬菌斑.f2噬大肠杆菌285形成圆形直径2~3 mm的噬菌斑, 逆光观察噬菌斑呈全透明状,f2呈微球形,直径51~113 nm.EcP1和EcP2佳感染复数分别为10和0.1,在紫外灯(光强221 μW/cm2)下暴露8和4 min可全部失活.结论:按照国际病毒分类委员会分类标准,所分离的两株噬菌体分属于短尾噬菌体科(EcP1)和肌尾噬菌体科(EcP2)烈性噬菌体,按照Bradley和Ackermann形态分类法分属于C2亚群和近似A2亚群;其中EcP2为一株宽噬噬菌体.两株噬菌体头部大小较呼吸道病毒中流感病毒、副黏病毒、冠状病毒都小.
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基孔肯雅病毒中和表位的筛选及表达
目的:寻找基孔肯雅病毒中和表位,并将其表达为重组融合蛋白.方法:对噬菌体展示12肽库进行了生物淘洗,随机挑取噬菌体克隆,使用 ELISA方法筛选并鉴定阳性克隆,分析阳性克隆的DNA序列,将其翻译成氨基酸序列进行同源性比较.将其中一个表位连同M13噬菌体PⅢ蛋白结构域Ⅰ~Ⅱ的编码序列用PCR技术扩增后插入原核表达载体pQE30,用IPTG诱导融合蛋白表达.结果与结论:从经过3轮淘洗的噬菌体中随机挑选123个克隆,从中筛选到20个阳性克隆,其中包含7种不同的氨基酸序列,这些序列缺乏同源性,表明该单抗表位应为构象型表位.在室温培养条件下成功地在大肠杆菌周质腔表达了一种可溶性的表位融合蛋白,经亲和层析得到了纯化的表位融合蛋白.
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抗磷脂酰乙醇胺结合蛋白反义核酸的设计与筛选
目的:设计与筛选能有效下调磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine binding protein,PEBP)表达量的反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynuclecotide,ASODN).方法:应用Sfold、Mfold、RNAstructure等软件设计针对PEBP编码序列(CDS)的ASODN,并进行结构与能级评价;以PC12细胞为实验对象,应用RT-PCR和Western 印迹方法筛选可有效下调PEBP基因与蛋白表达量的ASODN.结果与结论:实验结果表明,使用200 nmol/L ASODN转染PC12细胞24 h可有效下调PEBP基因和蛋白表达;ASODN对PEBP蛋白表达量的下调作用可持续至48 h,蛋白表达可下调至细胞对照组的38.3%.
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米诺环素与牛血清白蛋白相互作用的研究
目的:研究人体生理条件下米诺环素与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用机制.方法:利用荧光光谱法,并以Stern-Volmer方程确定药物与蛋白的作用类型.结果:根据不同温度下米诺环素对BSA的荧光猝灭作用,证明两者间为单一的动态猝灭过程,根据Stern-Volmer方程求出了米诺环素与牛血清白蛋白(BSA)的猝灭常数,并根据Fǎrster能量转移理论确定了生理条件下药物与蛋白的结合距离为3.03 nm.结论:在人体生理条件下米诺环素对牛血清白蛋白具有荧光猝灭作用且为动态猝灭过程.同步荧光技术确定米诺环素对BSA构象有一定的影响.
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炭疽保护性抗原与炭疽毒素受体结合特征分析
目的:建立检测炭疽毒素保护性抗原(PA)与靶细胞受体(ATR)结合能力的Binding-ELISA方法,并对两者结合特征进行分析.方法:以ELISA实验为基础,建立PA与ATR结合的体外模型,并对实验中的反应条件进行优化.采用Binding-ELISA方法,通过测定不同包被蛋白、不同二价阳离子条件下的D450以及相对饱和度等参数,分析PA与两种ATR的结合特征.结果与结论:以重组PA作为包被抗原时灵敏度更高,包被浓度为2 μg/ml;二价阳离子浓度为5 mmol/L.两种受体与PA的亲和力不同,其中CMG2与PA的结合能力更强;并且两者与PA结合时离子依赖特征不同,PA与TEM8的结合能力在Mn2+存在时强,PA与CMG2的结合能力在Ca2+存在时强.这一结果与国外报道相符,进一步说明Binding-ELISA方法用于定性分析炭疽毒素与其受体结合能力的可行性,为评价以抑制PA与ATR结合为靶点的毒素抑制剂提供了有效的手段.
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注射用紫杉醇纳米乳剂和紫杉醇注射液在比格犬体内的药代动力学比较
目的:建立高效液相-质谱联用法测定比格犬血浆中紫杉醇的浓度,评价和比较注射用紫杉醇纳米乳剂和市售紫杉醇注射液在比格犬体内的药代动力学性质.方法:采用随机、双周期、自身交叉实验设计,比格犬分别匀速静脉滴注40 mg/犬注射用紫杉醇纳米乳剂和紫杉醇注射液.高效液相-质谱联用法测定血浆中药物浓度,并测定药代动力学数据.结果:分别静脉滴注紫杉醇两种制剂后, 比格犬的血药浓度速率下降较快, 两种制剂均为二室模型.注射用紫杉醇纳米乳剂与紫杉醇注射液两种制剂的主要药代动力学参数如下:t1/2z 为(5.07±1.30)和(4.62±0.976)h;Clz为(15.1±2.43)和(10.1±2.35)h·L-1;Vz为(111±38.8)和(65.8±16.4)L;Cmax为(1 416±162)和(2 231±519)μg·L-1;AUC0-680 min为(2 442±535)和(3 753±771)μg·h·L-1; AUC0-∞为(2 725±559)和(4 163±922)μg·h·L-1.结论:两种制剂主要药代动力学参数中AUC,Clz,Vz和Cmax间存在显著性差异(P<0.05),紫杉醇纳米乳剂与紫杉醇注射液的平均AUC之比(纳米乳剂/紫杉醇注射液)为0.665±0.146.
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HER-2反义寡核苷酸对靶基因抑制作用的时相变化与微观分布研究
目的:研究靶向HER-2基因、具有不同活性的反义硫代寡核苷酸(S-ODNs)在SK-BR-3细胞内的微观分布差异,以及与靶基因转录和翻译抑制作用的关系.方法:运用实时定量PCR和Western印迹方法检测反义寡核苷酸对细胞靶基因转录和翻译抑制的时相性变化,用激光扫描共聚焦显微镜(LSM)观察6-羧基荧光素标记S-ODNs在靶细胞内的分布.结果:反义S-ODNs能够在mRNA与蛋白水平抑制HER-2的表达.不同序列的抑制活性各不相同,但大抑制强度均出现于转染后48~72 h之间,此后靶基因表达逐渐恢复.高活性序列主要均匀分布于细胞核,且持续时间长,低活性序列呈点状分布于胞质,少量分布于细胞核且持续时间短.结论:活性不同的S-ODNs亚细胞分布有显著区别,且分布变化与对靶基因的抑制效应具有对应关系.
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免疫组化检测14-3-3ζ在临床肺癌中的表达
目的:探讨14-3-3ζ与肺癌转移的关系.方法:以免疫组织化学染色检测14-3-3ζ在临床肺癌标本原发灶与转移灶的表达情况,探讨14-3-3ζ与肿瘤转移的相关性.结果:在所有的肿瘤标本中均检测到14-3-3ζ的表达,其中15例标本原发灶14-3-3ζ的表达水平高于转移灶.结论:14-3-3ζ与肺癌转移具有一定的相关性.
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6-氨基己醇新亚磷酰胺单体在寡核苷酸-肽缀合物合成中的应用
目的:发展一种基于6-氨基己醇的新亚磷酰胺单体,用于寡聚脱氧核苷酸(ODN)-肽缀合物的连接臂合成.方法:利用正交保护法,将6-氨基己醇的氨基以4,4′-二甲氧基三苯甲基(DMT)保护,合成亚磷酰胺单体6,并研究其在ODN-肽缀合物合成中的效率.结果:利用新单体6获得了预期的ODN7以及ODN-肽缀合物8~10,得到了1H-NMR 、32P-NMR 和MALDI-TOF的确证.结论:基于6-氨基己醇的亚磷酰胺单体6适合ODN固相合成的条件,收率较高,为合成ODN-肽缀合物和对ODN进行其他修饰提供了一种选择.
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红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因eryK的克隆及原核表达
目的:探讨红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因eryK在大肠杆菌中的佳表达条件.方法:将eryK基因克隆到表达质粒pET-22b(+),使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并对装液量、接种量、诱导时间、IPTG浓度和FeCl3浓度等表达条件进行优化.结果与结论:SDS-PAGE电泳显示,在相对分子质量44×103处有EryK蛋白条带,其含量占菌体总蛋白的58%以上.证明高GC含量的红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因EryK可以在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地表达,为体外研究EryK酶学相关性质以及大规模发酵奠定了基础.
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大肠杆菌细菌菌蜕的制备及初步研究
目的:利用温度控制噬菌体PhiX174裂解基因E的表达,制备大肠杆菌细菌菌蜕,鉴定其裂解效率并观察其形态.方法:利用PCR技术扩增分离了噬菌体PhiX174裂解基因E并构建其表达质粒,并将质粒转化大肠杆菌DH5α构建工程菌.工程菌培养温度从28℃突升至42℃,每15 min检测菌液D600值,诱导后4 h收集菌体.体外菌落计数计算裂解效率,并通过电镜观察菌蜕结构.结果:获得273 bp的PhiX174裂解基因E全长基因及表达质粒.菌液D600在温度突升至42℃后30 min开始持续下降,2 h后基本维持不变.4 h后收集菌体测得裂解效率为99.99%.电镜观察菌蜕为具有完整外膜结构的细菌空壳,并且无细胞毒性.结论:本研究成功利用噬菌体PhiX174裂解基因E实现了大肠杆菌细菌菌蜕的制备,为进一步的疫苗及递送系统研究奠定了基础.
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重组人瘦素融合蛋白在大肠杆菌中的低温自诱导表达、纯化和活性鉴定
目的:建立低温自诱导表达重组人瘦素(leptin)融合蛋白的系统方法,经体外纯化获得大量具有生物活性的瘦素蛋白.方法:从cDNA文库中扩增瘦素编码区,克隆到pGEM-T easy载体,测序正确后亚克隆到A1.3表达载体,转入BL21(DE3),低温自诱导表达.用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定表达产物.对低温自诱导表达产物rMBP-10His-Leptin进行纯化和酶切,获得可与瘦素单抗发生特异性反应的瘦素蛋白.用Km小鼠减肥实验检验其生物学活性.结果:在22×103处有明显的新增蛋白带,含量超过总蛋白的40%,Western印迹证实为瘦素蛋白.Km小鼠减肥实验证实其具有生物学活性.结论:成功建立了低温诱导表达rMBP-10His-Leptin的系统方法,获得大量瘦素蛋白,经验证表达产物具有免疫活性和生物学活性,可供进一步基础及临床研究应用.
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长链胰岛素样生长因子1在毕赤酵母中的表达、纯化及活性分析
目的:在毕赤酵母KM71中分泌表达长链-Arg3-胰岛素样生长因子1(LR3IGF-1),并探讨其体外生物活性.方法:人工合成LR3IGF-1基因,构建表达载体pCαA-LR3IGF-1,转化毕赤酵母KM71.筛选重组工程菌株,经诱导表达并从上清中纯化目的蛋白,鉴定其生物活性.结果:诱导上清中存在一8×103 左右的条带,经初步鉴定为目的蛋白条带.每升培养基经纯化后能得到40 mg目的蛋白.纯化后的目的蛋白具有明显的体外刺激NIH 3T3细胞增殖的作用.结论:建立了LR3IGF-1在毕赤酵母 KM71中表达及纯化方法,该方法能获得具有生物学活性的高纯度LR3IGF-1,为LR3IGF-1的后续研究及临床应用奠定了基础.
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小肽促进α-突触核蛋白正常折叠的研究
目的:在大肠杆菌中研究小肽促进α-突触核蛋白(α-synuclein, α-Syn)(Α53T, S129Α)的正常折叠.方法:利用分子生物学和生物信息学技术,以α-Syn的疏水区域为基础,设计了4种小肽(Pn:P1~P4);构建融合蛋白α-Syn-GFP,使α-Syn基因位于GFP上游,各种小肽以双顺反子方式与α-Syn-GFP共同表达;以文献报道的有效促进α-Syn正常折叠的小肽Pc(MGGΑVVTGR)为对照,利用融合蛋白折叠在细菌中可视化技术研究小肽Pn影响α-Syn(Α53T, S129Α)的正常折叠的效果.结果:4种小肽均能更好地促进α-Syn(S129A)的正常折叠;和对照Pc相比,小肽P2(MRGGΑVVTGR)使α-Syn(A53T)正常折叠提高了10%,小肽P4(MRVGGΑVVR)使α-Syn(S129A)正常折叠提高了83%.结论:在大肠杆菌中,小肽可以不同程度的促进α-Syn(Α53T, S129Α)的正常折叠.
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α1,3-半乳糖转移酶及其相关糖基转移酶的研究进展
糖基化作用是重要的翻译后修饰之一.多种多样的半乳糖化反应使得生物体可以表达极其多样的寡糖结构.α1,3-半乳糖转移酶(GGTA1)、ABO血型抗原合成酶及异红细胞糖苷酯合成酶(iGb3s)均催化半乳糖在α1,3糖苷键之间的转移.前两者合成的抗原在异种移植(Galα1,3-Gal抗原,简称αGal)和同种异基因移植(ABO抗原)的免疫排斥反应中发挥重要的作用.本综述主要讨论这些转移酶的特性、其合成的抗原及其在移植中的意义.
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Mx蛋白抗病毒研究进展
Mx蛋白属于大GTP酶的动态蛋白( dynamin)超家族,在体内由Ⅰ型IFN诱导.大多数的脊椎动物有1~3个不同细胞内定位的Mx蛋白异构体,一般定位于核内或胞质中.Mx蛋白具有广谱的抗病毒能力,对RNA病毒,如流感病毒、水泡性口炎病毒、托高土病毒、汉坦病毒和狂犬病毒等有作用,甚至对DNA病毒(如乙型肝炎病毒)也有一定的作用.本文论述了Mx蛋白的结构,并探讨了各个种属来源的Mx蛋白抑制不同病毒的作用及机制.
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Mage-D1的结构与生物学功能
Mage-D1是黑素瘤相关抗原MAGE家族Ⅱ类的一个成员,不仅具有该家族所共有的MAGE保守序列MHD结构域,其N端还包含MHD2结构域和WQXPXX多肽重复结构域.与MAGEⅠ类成员不同的是,Mage-D1的功能并不限于胚胎发育、生殖细胞发育和肿瘤发生上.近年研究表明,Mage-D1是p75NTR,UNC5H1,XIAP,Dlx/Msx,Ror2等分子的相互作用蛋白,它在细胞存活、凋亡以及细胞周期和分化中发挥重要调节功能.更为重要的是,MAGE家族Ⅱ类另一个主要成员源自神经分化EC细胞蛋白necdin促进神经元和肌细胞分化的功能,是通过Mage-D1调节Dlx/Msx家族成员的转录活性实现的.本文主要就近年关于Mage-D1结构和生物学功能的研究进行综述和分析.
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红细胞生成素:一种新的神经保护剂
红细胞生成素(erythropoietin, EPO)作为细胞因子超家族中的一员,在体内和体外均显示出显著的神经保护功能.该作用可能主要通过抗凋亡、抗氧化、促进血管再生等机制实现.大剂量EPO能通过血脑屏障并发挥神经保护作用.EPO经人工改造后可消除造血系统不良反应.EPO的临床应用有望对神经系统疾病的预后及治疗提供新的思路.
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P53负调控分子PACT的研究进展
睾丸P53相关细胞蛋白(P53 associated cellular protein-testes derived,PACT),又称为相关增殖潜能蛋白(proliferation potential protein related,P2P-R)和成视网膜瘤结合蛋白6(retinoblastoma binding protein 6,RBBP6),是为数不多的能够同时与生物体内重要的两种抑癌基因p53和Rb结合的蛋白之一,参与细胞分化、前体mRNA剪接、周期阻滞、凋亡等一系列重要的细胞事件.自其不同形式的同源体被发现至今,不同实验室对其在不同角度进行了研究,一些功能已经初见端倪.本实验室近期制备了PACT基因敲除的小鼠模型,揭示了PACT在胚胎发育中的不可或缺性,进一步明确了PACT对P53调控机制.本文通过总结不同实验室对PACT的研究工作,确定了PACT的主要结构区域,综述了当前其主要研究方向和进展.
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新药非临床安全评价研究中血液生化检验的质量管理
血液、尿液和骨髓等体液的实验室检验是新药非临床安全评价研究中动物毒性试验的重要组成部分.在检验分析的分析前、中、后三个阶段中,分析前的质量管理是保证实验动物体液检验质量的重要而薄弱的环节.本文着重就实验动物血液生化检验分析前的质量管理作一综述.
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生物样品中多肽药物质谱定量分析方法研究进展
质谱(MS)在药代研究中起非常重要的作用.液质联用技术,由于其特异性好和灵敏度高,被认为是生物样品定性和定量的有效分析手段.药物研究领域正在开发能够对肽类药物进行绝对定量分析的新技术方法.基于多肽药物的结构及理化性质,本文综述了利用LC-ESI-MS技术对生物基质中多肽药物进行定量分析的特点与难点,重点讨论在药物定量分析中的多种样品处理技术、多肽色谱分离、ESI-MS的重要特点、质谱检测模式的选择、内标的选择以及现代质谱技术等.
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microRNA与细胞周期调控
microRNA(miRNA)是一类长度为22~25个核苷酸的小RNA,这类非编码的小RNA分子在转录后水平上特异性地调节基因的表达.研究表明,miRNA可调控在细胞周期进程中直接或间接发挥作用的蛋白质分子;其表达水平的改变会使得细胞周期进程失去控制从而导致肿瘤的发生.此外,miRNA可分别作为癌基因和抑癌基因发挥作用从而参与细胞周期进程的调控,尤其是对细胞周期检查点的调控;它们通过协同调控多个靶基因参与细胞周期进程.
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蛋白转导结构域在抗原交叉提呈中的应用进展
大量实验证明,蛋白转导结构域可高效携带多种类型的物质穿越细胞膜进入细胞质.因此,将蛋白转导结构域与外源抗原连接(融合)可以促进外源抗原的交叉提呈,递送外源抗原进入MHC-Ⅰ型途径进行加工提呈,从而诱导CTL应答.本文综述了蛋白转导结构域在抗原交叉提呈中的应用进展.
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典型大疱性鼓膜炎1例
1 病例资料患者为男性,26岁.因左耳剧痛2 d,于2007年11月8日就诊.查体结果:全身一般情况好,体温37℃.专科检查:左耳廓正常,左外耳道通畅,鼓膜充血,中央部有3个圆形大疱,呈白色、透明;右耳正常.双鼻腔及咽部正常,颈部淋巴结未触及.
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彩色多普勒超声诊断胎儿心脏复杂畸形1例
1 临床资料孕妇,24岁,孕1产0,早孕期曾患感冒,用药不详.孕5月余来我院检查.彩色超声检查:单胎,双顶径60 mm,羊水深49 mm,胎盘位于前壁,厚约40 mm,四肢显示清晰,未见脐带绕颈现象.胎儿心脏检查结果:①胎儿心脏在胸腔位置异常,心胸比例增大,房室腔比例异常,右心室增大(图1),右心室横径14 mm,左心室发育小,左心室横径5 mm;
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胰岛素泵在16例妊娠糖尿病患者中的疗效观察
妊娠糖尿病(GDM)指妊娠期发生或首次发现的不同程度的糖耐量异常,约占糖尿病孕妇的90%.妊娠糖尿病使妊娠过程变的复杂并对母婴均会产生不良影响,孕妇血糖的水平与并发症及其严重程度成正比关系,因此应尽早发现并采取有效的措施将血糖控制在理想水平,减少母婴并发症的发生率.
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锰剂无法延长肠型放射病小鼠存活时间
迄今为止,肠型放射病几无有效的治疗措施.不过,有几种低等生物天然具有超强的对抗电离辐射损伤的能力,例如,耐辐射奇球菌经10 kGy剂量的急性照射后依然能够自我修复[1].
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军事医学发展中的自组织与他组织现象分析
自组织与他组织是系统科学的一对重要概念,军事医学系统在长期的演化发展过程中同时具备自组织和他组织演化动力.本文从防化医学、军事作业医学、军兵种军事医学3个不同角度分析了军事医学发展的自组织现象,从科研管理的角度分析了军事医学的他组织机制.通过对军事医学系统内外影响因素的分析,有助于深刻认识军事医学的演化历程,进而为军事医学发展战略研究奠定坚实的理论基础.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 |
2001 | 01 02 03 04 |
2000 | 01 02 03 04 |