抗原修复在陈旧石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化检测中的应用

目的：探索一种简便有效的抗原修复方法，用于陈旧切片的人乳腺珠蛋白（human mammaglobin，hMAM）免疫组化检测。方法将乳腺癌患者陈旧乳腺组织石蜡切片脱蜡至水，按常规免疫组化步骤进行检测。其中，实验组直接将切片浸入pH 3．5的柠檬酸盐缓冲液中室温修复10～15 min；同时以微波和高压加热修复法处理相应患者石蜡切片作为对照，后以SP检测系统检测抗原修复及与抗体反应的效果。结果实验组与高压组和微波组比较，修复效果较好，且无组织脱片与折损现象。结论建立了一种利用陈旧组织切片检测乳腺珠蛋白的简便、有效的抗原修复方法，并能很好地防止脱片现象发生。

白藜芦醇对曲格列酮诱发HepaRG细胞氧化损伤的影响

目的：探讨白藜芦醇对曲格列酮诱发HepaRG细胞氧化损伤的影响及可能作用机制。方法实验分组包括：正常对照组（含有0．1％DMSO的RPMI 1640培养基）、50μmol／L曲格列酮组、白藜芦醇3种浓度（3．75，7．5，15μmol／L）与50μmol／L曲格列酮的共处理组。 MTT法检测曲格列酮、白藜芦醇以及白藜芦醇与50μmol／L曲格列酮共同作用对HepaRG细胞的增殖抑制作用。以上各组作用48 h后检测各组细胞内活性氧（ reactive oxygen spe－cies， ROS）的含量，脂质过氧化（ lipid peroxidation ）和细胞凋亡程度，细胞的总抗氧化能力，以及细胞内过氧化氢酶（catalase， CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase， GSH－px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase， SOD）的活性。结果曲格列酮能明显导致HepaRG细胞产生氧化应激现象。与正常对照组相比，曲格列酮处理组ROS和脂质过氧化产物丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平以及细胞凋亡和坏死率均显著升高（P＜0．05），总抗氧化能力大幅降低（P＜0．05），CAT、GSH－px、SOD的活性均降低（P＜0．05）。加入不同浓度白藜芦醇共同作用后， ROS和MDA生成量有所下降（P＜0．05），细胞凋亡和坏死率也相应下降（P＜0．05），细胞总抗氧化能力以及以上3种抗氧化物酶的活性均有所提高（P＜0．05），且有一定的剂量依赖关系。结论曲格列酮能引起HepaRG细胞产生明显的氧化应激作用，白藜芦醇能够显著改善由曲格列酮对 HepaRG细胞所造成的氧化损伤。

温肾生精饮对环磷酰胺致小鼠睾丸氧化损伤的保护作用

目的：研究温肾生精饮（主要由鹿茸、人参、锁阳、大云、黄芪、淫羊藿和当归等15味药材组成）对环磷酰胺致小鼠睾丸氧化损伤的保护作用及其机制。方法将8周龄的昆明种雄性小鼠随机分组，正常对照组腹腔注射生理盐水，模型组、西药组和中药组连续5 d腹腔注射80 mg／（ kg? d）的环磷酰胺，然后将正常对照组和模型组小鼠灌胃生理盐水，西药组和中药组小鼠分别灌胃克罗米芬或温肾生精饮30 d。检测各组小鼠附睾精子密度和精子活率；观察睾丸生精上皮的发育；检测睾丸组织中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPH－Px）和过氧化氢酶（CAT）的水平；免疫组织化学法检测睾丸生精小管中生存素（survivin）的表达；TUNEL法检测生精细胞的凋亡。结果与模型组和西药组比较，温肾生精饮显著提高了生精障碍小鼠的精子密度和精子活率，促进了生精小管上皮的发育，显著提高了生精障碍小鼠睾丸内GSH－Px和CAT的活性，降低了睾丸组织中MDA水平，且上调了生精细胞中生存素的表达水平，降低了生精小管和生精细胞的凋亡指数。结论温肾生精饮能显著修复环磷酰胺致小鼠睾丸生精功能损伤，其修复机制可能与提高睾丸组织中的抗氧化水平、减少生精细胞凋亡有关。

血管紧张素Ⅱ2型受体重组腺病毒的扩增及其在INS－1细胞中的转染

目的：利用人胚肾（HEK）293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）基因的重组腺病毒，并在大鼠胰岛素瘤细胞INS－1细胞株中进行转染，构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和对照病毒Ad－CMV－EGFP，并测定病毒滴度。在INS－1细胞中瞬时转染后利用实时PCR、Western 印迹以及免疫荧光和激光共聚焦技术检测细胞中AT2R与AT1R的表达。结果扩增后得到重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和Ad－CMV－EGFP的滴度分别为9×109和8×109 pfu／ml。在INS－1细胞中转染Ad－G－AT2R－EGFP后，AT2R mRNA的表达随病毒感染复数（multiplicity of infection，MOI）值的增加呈剂量依赖性增加。当MOI值为10时，AT2R mRNA的表达达到峰值（P＜0．05），同时AT2R蛋白的表达明显高于转染了Ad－CMV－EG－FP的细胞和未转染细胞，但AT1R的表达无显著变化。结论成功扩增并得到高滴度且携带有AT2R基因的重组腺病毒载体，并将其转染入INS－1细胞中构建出AT2R高表达的胰岛β细胞模型，为下一步探讨AT2R在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。

盐度和温度对副溶血弧菌运动能力的影响

目的：研究盐度和温度调节副溶血弧菌（ Vibrio parahaemolyticus）的运动能力。方法将副溶血弧菌接种于不同盐度（0．5％、1．0％、2．0％和4．0％）的爬动和泳动平板上，37℃静置培养4．5 h后，通过比较不同盐度条件菌苔直径的差异来判定盐度对运动能力的影响。接种副溶血弧菌至含2．0％盐的爬动和泳动平板上，并分别置于37℃和26℃静止培养4．5 h后，通过比较不同温度下菌苔直径的差异来研究温度对运动能力的影响。结果与结论副溶血弧菌爬动不受盐度的影响，而其泳动与盐度呈正相关，2．0％时达到极值，4．0％时稍微下降；与26℃培养的结果相比，37℃培养时爬动和泳动均显著增强。这些结果表明盐度和温度能够调节副溶血弧菌的运动能力。

原发性高尿酸血症与载脂蛋白E基因多态性的关联性研究

目的：探讨宁夏回、汉民族原发性高尿酸血症与载脂蛋白E基因多态性的关联性，为疾病的预防控制提供理论依据。方法采用病例对照方法，收集某体检机构病例组和对照组的各450例血标本及体检记录，利用连接酶反应法检测载脂蛋白E基因多态性。结果与结论病例组和对照组病例不同民族血尿酸水平差异无统计学意义。肌酐、空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯和体质指数为高尿酸血症的危险因素。在病例组和对照组中，载脂蛋白E基因型和等位基因频率在不同民族、不同性别之间差异均无统计学意义。尚不能认为原发性高尿酸血症与载脂蛋白E基因多态性有关。

人CDK7基因真核表达载体的构建与鉴定

目的：构建带Myc标签的细胞周期蛋白依赖性激酶7（cyclin－dependent kinase 7， CDK7）的真核表达载体，获得其表达产物，并验证该激酶与已知相互作用蛋白P53之间的相互作用。方法应用PCR技术从人乳腺文库中扩增出CDK7全长编码区基因，将其克隆到pXJ－40载体中；继而重组质粒转染人胚肾293 T细胞，以SDS－PAGE和Western印迹鉴定表达情况；免疫共沉淀检测Myc－CDK7与FLAG－p53的相互作用。结果双酶切和基因测序鉴定显示，Myc－CDK7真核表达质粒克隆构建成功；SDS－PAGE和Western印迹结果表明，Myc－CDK7转染人胚肾293T细胞后成功表达；免疫共沉淀显示，重组Myc－CDK7与已知相互作用蛋白P53在蛋白质水平上具有相互作用，证实其具有生物学活性。结论成功构建Myc－CDK7的真核表达载体，为进一步探讨Myc－CDK7对细胞周期的调控奠定了实验基础。

人白介素－6受体小分子拮抗剂高通量筛选模型的建立

目的：建立新的白介素－6受体（ interleukin－6 receptor， IL－6R）小分子拮抗剂高通量筛选模型。方法PCR扩增IL－6R胞外区基因，将其克隆至真核表达载体构建重组质粒pABHis－IL6R，瞬时转染HEK293T细胞进行分泌表达。利用Western 印迹实验、受体配体结合实验对表达产物进行活性验证。利用二者的相互作用以及Fc片段与酶标二抗结合的特性建立基于ELISA法的IL－6R拮抗剂筛选模型，并用Z′－因子检测与已知拮抗剂ab47215对该模型的稳定性与可靠性进行评估。结果成功构建了真核表达载体pABHis－IL6R，并对IL－6R进行了分泌表达。所表达的IL－6R能够被特异性抗体识别，能够与其配体rhIL－6特异性地结合，并表现出良好的量效关系。经测算得出，该模型的Z′－因子为0．53，满足高通量筛选的要求。 ab47215能够剂量依赖性地阻断IL－6R与其配体的结合，其IC50＝（0．55±0．11）μg／ml。结论建立了一种新颖而简便的IL－6R拮抗剂筛选模型，为寻找高效、低毒的小分子拮抗剂奠定了基础。

超滤截留狂犬疫苗残留DNA的工艺优化和机制探讨

目的：通过优化生产工艺来控制以VERO细胞为载体的狂犬疫苗生产中的残留DNA。方法采用双抗体夹心ELISA法检测评估抗原回收率，通过DNA探针杂交法检测残留DNA。采用检测抗原回收率和DNA残留率对狂犬疫苗生产中的核心环节－超滤的3个关键因素：超滤膜包的选择、超滤压力以及浓缩倍数进行评估，并评价鱼精蛋白预处理超滤液对于上述两指标的影响。结果与结论综合抗原回收率、DNA去除率以及生产层面的因素，获得了超滤工艺的优条件，即以截留相对分子质量为7．5×105的超滤膜包、20倍浓缩和15 psi的超滤压力作为超滤工艺的核心参数。通过鱼精蛋白的预处理，初步探明超滤截留是通过分子筛的模式截留DNA，而鱼精蛋白的加入可以结合碎片化的DNA，形成较大的分子片段，从而更利于超滤截留。

一种新的用于宫颈癌粘连细胞图像分割的分水岭算法

目的：探讨一种能有效分割宫颈癌粘连细胞图像的算法，完成各粘连细胞边缘的准确分割。方法利用水平集算法从背景区域中提取目标细胞图像，应用极小值的距离变换算法将图像归一化后与感兴趣区域的梯度图像点乘来抑制无用的梯度信息，然后运用标记分水岭算法对粘连细胞图像进行分割。结果与结论实验结果表明，该算法实现了染色不均的粘连宫颈癌细胞的有效分割，在粘连细胞的边缘建立了较传统的分水岭分割方法更准确的分割线，具有显著的临床应用价值。

重组尿激酶原治疗对大鼠肺血栓栓塞症后血浆纤溶因子的影响

目的：观察重组尿激酶原（ recombinant prourokinase ，rPro－UK）治疗大鼠肺血栓栓塞症（ pulmonary trombo－embolus，PTE）后血浆纤溶因子的变化及其意义。方法雄性SD大鼠28只，颈外静脉注入加热125－碘（125 I）标记纤维蛋白原（ Fib）自体血栓，复制大鼠PTE模型，随机分组如下：①正常对照组；② PTE 5 d组，即在造模成功后观察5 d活杀；③Pro－UK溶栓治疗组：分为多次给药亚组（ PTE造模成功后第3天，予Pro－UK 1 mg／kg，后连续2 d给予Pro－UK 0．25 mg／kg，后1 d给药2 h后与PTE 5 d组大鼠同时活杀）和单次给药亚组（ PTE造模成功后第3天给予Pro－UK 1 mg／kg，后连续2 d给予生理盐水，活杀时间同PTE 5 d组大鼠）。每组7只，在实验结束时经颈动脉放血活杀动物，留取血浆标本测定尿激酶型纤溶酶原激活物（ u－PA）、尿激酶型纤溶酶原激活物受体（u－PAR）、Fib的水平和α2－抗纤溶酶（α2－AP）的活性。结果①多次给药亚组血浆u－PA、u－PAR水平较PTE 5 d组（Pu－PA ＜0．05， Pu－PAR ＜0．01）及单次给药亚组（Pu－PA ＜0．01，Pu－PAR ＜0．05）明显升高，与血栓溶解率正相关（ru－PA ＝0．766，P＜0．05；ru－PAR ＝0．785，P＜0．05）。② rPro－UK溶栓治疗后血浆Fib浓度和α2－AP活性与PTE 5 d组比较无显著差异（ P＞0．05）。结论①rPro－UK溶栓治疗可促进内皮细胞合成和分泌u－PA、u－PAR，有助于血栓溶解，这可能是rPro－UK的一个重要的溶栓机制。②rPro－UK多次给药方案治疗大鼠PTE没有引起继发全身纤溶激活，具有纤维蛋白特异性。

面向传染病监测的互联网情报动态追踪系统的设计与实现

目的：围绕我军生物安全及传染病防控的要求，研究开发了面向传染病监测的互联网情报动态跟踪系统。方法利用网络信息抓取模块对互联网传染病相关信息进行自动采集、整理、分析，实现互联网传染病监测情报信息的实时发布、自动关联分析、可视化展示和分类导航。结果该系统实现了对于互联网传染病监测信息的抓取，构建了互联网传染病监测情报信息知识库。结论该系统的使用不仅提高了传染病监测情报研究的效率，而且保障了我军传染病防控的情报需求。

血清TNF－α和HSP70表达水平与回汉族2型糖尿病关系的研究

目的：探讨血清肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor－α，TNF－α）、热休克蛋白70（heat shock protein 70， HSP70）表达水平对宁夏回、汉民族2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）发病的影响。方法采用病例对照研究设计，按照纳入与排除标准，于2011年10月至2012年10月在宁夏医科大学第二附属医院与教学医院（吴忠市人民医院）内分泌科确诊的225例T2DM患者及同期健康检查人群中确定的600例健康人作为研究对象。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定血清中TNF－α与HSP70蛋白表达水平。结果病例组回、汉族合计人群和回族人群血清TNF－α表达水平明显高于对照组（ t＝－3．512，－3．791，均P＜0．01）；病例组汉族人群TNF－α表达水平及回、汉民族中不同组间HSP70表达水平的差异均无统计学意义（ t＝－0．565，－0．020，－1．251，－0．809，均P＞0．05）；TNF－α水平高表达人群的发病风险明显高于低表达人群（OR＝1．500，95％CI：1．075～2．093，P＝0．017）。回族合计人群、回族病例及回族对照人群血清TNF－α表达水平均显著低于汉族合计人群、汉族病例及汉族对照人群，差异均有统计学意义（t＝9．373，2．223，9．734，均P＜0．01或0．05）。TNF－α表达水平与血糖水平呈正相关（r＝0．110，P＝0．001），HSP70表达水平与血糖水平间无明显相关关系（r＝0．023，P＝0．504）。多因素Logistic回归分析显示，性别和腰臀比（waist－to－hip ratio，WHR）为TNF－α高表达的危险因素（P＜0．01或0．05），HSP70和民族为保护因素；收缩压（systolic blood pressure，SBP）和WHR为HSP70高表达的危险因素（均P＜0．01），TNF－α为保护因素（P＜0．05）；HSP70、TNF－α、性别、家族史、BMI、SBP、甘油三酯（triglyc－erides，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（ low－density lipoprotein cholesterol ，LDL－C）、丙氨酸氨基转移酶（ alanine trans－ami－nase，ALT）、心理应激为T2DM发病的危险因素（P＜0．01或0．05），高密度脂蛋白胆固醇（high－density lipoprotein cholesterol，HDL－C）为保护因素。结论血清TNF－α表达水平增高与血糖水平的升高及T2DM的发病密切相关，高表达患者T2 DM的风险明显增加；回族人群血清TNF－α表达水平明显低于汉族人群，可能与民族遗传有关；血清HSP70表达水平可能与T2DM的发病有关。

肾透明细胞癌碳酸酐酶9表达程度与肿瘤复发关系初探

目的：探讨碳酸酐酶9（ carbonic anhydrase 9，CA9）在肾透明细胞癌组织中表达程度与疾病预后之间的相关性。方法收集军事医学科学院附属医院泌尿外科2011年9月～2014年1月接受手术的53例肾透明细胞癌患者术后癌组织标本，并对患者进行随访，统计患者肿瘤复发情况与无疾病生存率（ DFS）。通过免疫组化检测石蜡切片中CA9的表达并将其与随访结果进行整合分析。结果在随访53例肾透明细胞癌患者中，11例非转移性肾癌患者术后出现了复发病灶， DFS长为22个月，短为4个月，中位DFS为10个月。肿瘤复发组与对照组的免疫组化图像累积光密度值（IOD）分别为230879．84±64878．72和444993．31±146946．27，差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论肾透明细胞癌组织中CA9的低表达可能与疾病不良预后相关，可作为判断肾癌预后的指标。

救援机器人研究起源、发展历程与问题

在城市武装冲突、反恐与突发公共卫生事件救援行动中，救援环境通常会给救援人员带来巨大的危险。利用救援机器人对伤病员实施搜寻、后送等任务，已经成为当前机器人技术研究的一大热点，在民用、军用领域都有广阔的应用前景。该文简要阐述了救援机器人的研究起源、发展历程和分类；并就执行伤员撤离任务的救援后送机器人发展现状与美军未来发展方向进行了重点探讨；后提出了此类机器人发展过程中存在的问题与关键技术难点，对促进和发展救援机器人研究方法与设计理论、推进救援机器人的社会应用具有重要的意义。

肿瘤干细胞及肿瘤发生与转移新进展

肿瘤干细胞（tumor stem cells，TSC）是肿瘤组织中具有自我更新、分化潜能的一组细胞。 TSC不仅在肿瘤的发生、发展中具有重要的作用，而且与肿瘤的侵袭、转移、异质性以及化学治疗的耐药性密切相关，TSC的深入研究已经成为当前研究的热点。该文从TSC的形成、TSC与微环境的关系、TSC的微环境模型以及TSC的信号通路及调节因子等方面进行了综述。

宿主microRNA靶向介导的减毒活疫苗研究进展

疫苗是预防病毒性传染病的有效手段，包括减毒活疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗和基因工程疫苗等。减毒活疫苗模拟了病毒的感染过程，能有效诱导机体产生体液和细胞免疫应答，在临床上得到广泛应用。传统的减毒活疫苗一般通过连续传代获得，研发成本高。微小RNA（ microRNA，miRNA）靶向调节是新近发现的宿主调控基因表达的重要手段，具有明确的组织特异性和种属特异性。通过反向遗传学技术能够将特异的宿主miRNA靶向序列有效整合入病毒基因组，从而实现对病毒生物学特征的有效调节，在减毒活疫苗设计与研发领域有着良好的应用前景。该文综述了miRNA靶向介导的减毒策略及其在疫苗设计中的研究进展。

高功率微波辐射损伤防护药物研究进展

随着科技的进步，微波被广泛运用到各个领域，给人类带来便利的同时，其潜在的健康损害普遍受到各国政府和科研人员的关注。高功率微波（ high power microwave ，HPM）在高新技术武器和新概念武器中的应用，使得部队官兵暴露于HPM环境下的概率增加。已有研究明确证实，特定条件的微波辐射对神经系统、免疫系统、心血管系统以及生殖系统存在不同程度的损伤效应。因此，在做好物理防护的同时，积极有效的医学防护，对于减小HPM损伤效应、提高部队官兵作战能力具有重要的意义。该文针对微波辐射损伤效应的机制特点，对近年来微波辐射损伤防护药物的研究进展进行综述，为更加安全有效的新药研发提供依据。

电脑中频治疗仪配合超声波治疗骨折术后皮肤瘢痕的疗效观察

瘢痕组织是人体组织创伤修复过程中的一种必然产物，创伤修复后病理性瘢痕的形成无论发生在体表或内脏诸器官，都会产生各种功能障碍或导致形态的破坏。当瘢痕生长超过一定的限度，就会引发各种并发症，如瘢痕挛缩、组织粘连、气管狭窄等，出现增生性瘢痕或瘢痕结节，并因此而产生相关的症状、容貌的破坏、生理运动功能的障碍，甚至丧失生活自理能力［1］。骨折术后瘢痕在骨科康复学亦是难以解决的问题之一。本文对2011年9月至2012年4月在解放军309医院就诊的64例骨折术后康复患者运用电脑中频治疗仪或配合超声波进行治疗，收到较满意疗效，现报告如下。

BRCA1基因真核表达载体的构建及其功能验证

目的：构建人乳腺癌易感基因BRCA1的真核表达载体，并对其生物学功能进行初步检测。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人BRCA1基因，将其克隆到pXJ-40-myc载体中，酶切和测序验证后转染到乳腺癌ZR75-1细胞中，通过Western印迹检测其表达情况，并用CCK8法测定细胞生长曲线。结果从人乳腺文库中扩增获得大小为5600 bp的DNA片段，并成功克隆至pXJ-40-myc载体上，经测序与目的序列完全一致；转染乳腺癌ZR75-1细胞后目的基因成功表达；细胞生长曲线结果显示，转染myc-BRCA1的乳腺癌细胞较空载体细胞生长缓慢；划痕实验说明，转染myc-BRCA1的乳腺癌细胞较空载体细胞迁袭缓慢。结论成功构建了带myc标签的人BRCA1真核表达载体，为进一步研究BRCA1在乳腺癌发生发展中的功能奠定了基础。

2015年《中国消毒学杂志》征订启事

《中国消毒学杂志》是军事医学科学院1984年创办的国家级消毒学理论与应用性刊物。本刊主要介绍国内外有关消毒与灭菌的科研成果、工作经验和理论知识。主要栏目有：实验研究、调查研究、综述、专题讲座、疫源地消毒、医院感染控制、医院消毒与灭菌、消毒监测、卫生防疫消毒、信息交流、经验交流等。内容注重科学性、实用性和针对性，适合广大卫生防疫人员，高、中级医护人员，以及从事科研、教学、食品、制药与兽医等工作同志阅读参考。《中国消毒学杂志》编委为全国科研、教学和实践中有经验的专家。本刊自创刊以来，以其较高的学术水平和丰富的科技信息深受读者欢迎。

参考文献类型及其标识

医学名词术语使用规范

外国人名的正确书写

军事医学（月刊）