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军事医学

军事医学杂志

Military Medical Sciences 군사의학

北大核心期刊
  • 主管单位: 军事医学科学院
  • 主办单位: 军事医学科学院
  • 影响因子: 0.58
  • 审稿时间: 1-3个月
  • 国际刊号: 1674-9960
  • 国内刊号: 11-5950/R
  • 发行周期: 月刊
  • 邮发: 82-757
  • 曾用名: 军事医学科学院院刊
  • 创刊时间: 1956
  • 语言: 英文
  • 编辑单位: 《军事医学》编辑部
  • 出版地区: 北京
  • 主编: 吴祖泽
  • 类 别: 医药卫生综合
期刊荣誉:
  • 芥子气中毒早期肝组织ET-1及ETAR转录表达的研究

    作者:曹霞;张黎明;陈志龙;李正银;辜清

    目的:探讨芥子气中毒早期肝组织内皮素-1(ET-1)、内皮素A型受体(ETAR)的变化和意义.方法:应用免疫组化及RT-PCR技术,观测大鼠芥子气中毒后肝组织ET的含量及ET-1,ETAR mRNA水平的变化,以及该变化与肝组织损伤的关系.结果:中毒后肝组织ET的含量先下降后增加,12 h达峰值;中毒后肝prepro ET-1 mRNA的表达在2~6 h低于对照组,12 h增加达峰值;ETAR mRNA的表达没有明显的变化.结论:ET-1及其受体ETAR在芥子气中毒后肝的病理生理过程中可能起着重要作用.

  • 快速老化小鼠海马抑制消减cDNA文库的构建

    作者:程肖蕊;周文霞;张永祥

    目的:构建快速老化小鼠(senescence-accelerated mouse, SAM)海马抑制消减cDNA文库.方法:以SAM快速老化亚系SAM-prone/8 (SAMP8)海马作为实验组,抗快速老化小鼠亚系SAM-resistance/1 (SAMR1)海马作为对照组,应用抑制消减杂交(SSH)技术,构建SAMP8海马特异表达cDNA抑制消减文库;用蓝白斑筛选,以PCR鉴定文库质量.结果:构建文库的阳性克隆率为96.18%,克隆中cDNA片段介于250~2?000?bp之间.结论:成功构建了SAMP8海马抑制消减文库.

  • HER-2/neu配体结合区蛋白的表达、纯化及复性研究

    作者:徐明;郭宁;施明;胡美茹;沈倍奋

    目的:将HER-2/neu配体结合区(RLD)基因重组,并在大肠杆菌中表达,对以包涵体形式表达的融合蛋白进行变性和复性的研究.方法:采用PCR技术将HER-2/neu RLD的两段基因分别扩增,并利用基因片段末端的共同酶切位点将两段基因相连接,连接产物插入原核表达载体,在大肠杆菌中实现融合蛋白的表达.表达产物经SDS-PAGE和Western印迹检测后,进行蛋白质的变性、纯化和复性等处理.结果与结论:在大肠杆菌中实现了融合蛋白的高效表达,表达产物可被特异性抗体识别.经SDS-PAGE分析,表达产物以包涵体形式存在,通过变性、纯化和复性等处理,获得了含两个RLD的融合蛋白,从而为HER-2/neu肿瘤疫苗的研究打下了基础.

  • 以牛胶原凝胶为支架构建人工真皮的研究

    作者:刘杰;王德文;崔雪梅;张燕;谷庆阳;赵梅兰;胡文华;杨颖颙;于淑贤

    目的:制备成纤维细胞胶原凝胶(即真皮替代物),以研究细胞的生长、分化、增生及与真表皮间的相互作用,为研制大面积创面覆盖物--复合皮奠定基础.方法:①酶消化法培养胎儿成纤维细胞; ②制备细胞胶原凝胶,分为Ca-gel和Cf-gel组,接种后于不同时间观察两组细胞的形态变化和胶原凝胶的收缩情况;③细胞计数;④SEM观测胶原凝胶的表面是否有成纤维细胞附着;⑤HE染色.结果:①成纤维细胞形态及增殖情况:成纤维细胞胶原凝胶形成后呈半透明状,可出现较明显的细胞增殖,并可见凝胶收缩现象,但Ca-gel组较小;人工真皮质地与颜色近似真皮组织,有一定的弹性和抗拉性,不易脆.②细胞计数法所得两组生长曲线基本相似.Ca-gel和Cf-gel组细胞均具有典型的细胞增殖现象,Cf-gel组细胞在后期的增殖略快于Ca-gel组.③扫描显微镜下可见到凝胶表面有梭形的成纤维细胞出现,且成纤维细胞紧密贴附于凝胶上.④HE染色可见胶原呈较均一的淡红色网状分布,成纤维细胞分布于胶原凝胶内部和表面.结论:①培养好的细胞凝胶称之为真皮替代物,是进行皮肤器官型培养和制作复合皮的关键与基础,并可与培养的人工表皮膜片混合移植,起到促进表皮细胞的生长黏附和加速创面愈合的作用.②成纤维细胞在胶原凝胶中有着活跃的生物学特性,因此在研究成纤维细胞在创面愈合中的生物学行为以及在皮肤组织工程学的研究中,以胶原凝胶为支架的三维培养系统较脱细胞基质系统更为科学.

  • 抗甲状腺药物与131I治疗甲亢的疗效关系分析

    作者:方毅;刘剑锋;张秀丽;肖淑萍;张友仁

    目的:探讨Graves′甲亢患者在131I治疗前服用抗甲状腺药物(ATD)及停用ATD不同时间对131I疗效的影响.方法:对99例131I治疗的甲亢患者随访一年(不包括甲亢术后复发及曾行131I治疗的患者),根据治疗前服用ATD与否分为两组:未治组与服药组,比较131I治疗后甲亢的治愈率;对于服用ATD的患者,根据131I治疗前停用时间分为4组:2周、~4周、~8周、>8周,比较131I治疗后4组的甲亢治愈率.结果:未治组与服药组在131I治疗后的甲亢治愈率分别为89.5%,57.5%,应用Fisher精确检验,两组间差异有显著性(P=0.00863);治疗前停用ATD不同时间的4组甲亢患者,其131I治愈率的差别无显著性意义(P=0.627).结论:131I治疗前服用ATD可降低131I的治愈率,即使131I治疗前停用ATD一段时间;对于131I治疗前服用ATD的患者,在停药时间≥2周的情况下,其131I的治愈率并不随着停药时间的延长而升高.

  • D2-43病毒E蛋白在酵母细胞表面的展示

    作者:陈水平;范宝昌;姜涛;秦成峰;邓永强;彭文明;段鸿元;秦鄂德

    目的:在酵母细胞表面展示登革2型病毒43株(D2-43)的E基因,探索利用酵母表面展示系统建立DNA改组筛选平台的可行性.方法:通过RT-PCR扩增获得D2-43的E基因,将该基因亚克隆至T载体后,再克隆至酵母表面展示载体pYD1,于酿酒酵母EBY100中利用半乳糖进行诱导表达.表达产物采用间接免疫荧光法和FACS进行检测.结果:酵母表面展示产物可与D2-43的腹水抗体特异性地结合;在半乳糖诱导后24 h,展示E蛋白的酵母细胞百分数达22.07%.结论:本研究为建立基于酵母表面展示系统的DNA改组筛选平台奠定了基础.

  • BALB/c小鼠sIL-4受体基因克隆及腺病毒载体的构建

    作者:徐勤枝;李强;丁新民;韩一平;刘忠令

    目的:克隆小鼠sIL-4R基因并构建sIL-4R基因腺病毒穿梭质粒,将之包装至重组腺病毒颗粒.方法:从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,应用巢式PCR的方法克隆sIL-4R基因.目的基因经限制性内切酶酶切,定向克隆至腺病毒穿梭载体.利用脂质体将含目的基因的穿梭质粒与腺病毒包装质粒pJM17共同转染腺病毒包装细胞293细胞,PCR方法鉴定重组腺病毒阳性克隆.结果:BALB/c小鼠的sIL-4R cDNA序列与文献报道的小鼠sIL-4R cDNA序列同源性达98%,有9个碱基不匹配,与小鼠IL-4R的同种异型体的膜外区100%同源.293细胞出现特征性细胞病变,PCR鉴定获得重组病毒颗粒.结论:获得了小鼠sIL-4R基因和含sIL-4R基因的腺病毒颗粒,为探讨应用腺病毒介导sIL-4R蛋白治疗过敏性疾病打下了实验基础.

  • 北京市近地层气象要素与大气真菌浓度分布规律的调查研究

    作者:孙振海;李劲松;鹿建春;陈梅玲;姜黎;李宗恺;孙润桥

    目的:分析北京某地区的气象要素和当地大气真菌浓度的分布及变化规律,探讨二者之间的关系.方法:利用气象观测仪器和大气真菌采样仪器,进行现场观测与测量,然后进行理论分析.结果:分析了大量气象观测数据和大气真菌采样结果,主要以图形方式描述它们的变化规律.结论:总体来看,北京大气真菌浓度比较高,1 d内气象要素及真菌浓度均呈周期变化,且二者有一定的相关性.

  • 丙型肝炎病毒核心蛋白不同区段在HEK293T细胞内的定位

    作者:冯晓燕;凌世淦;刘荷中;张贺秋;宋晓国;周涛

    目的:为进一步探讨HCV核心蛋白致癌机制,观察了HCV核心蛋白不同区段在HEK293T细胞内的定位情况.方法:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和不同长度核心蛋白区段融合表达的pEGFP-C1系列重组载体,对HEK293T细胞进行瞬时转染,并在激光扫描共聚焦显微镜下观察核心蛋白不同区段在细胞内的定位.结果:全长核心蛋白定位于细胞质;核心蛋白1~59 aa区段完全定位于细胞核;50~140 aa区段和1~140 aa区段在细胞核和细胞质中均存在;130~191 aa区段完全存在于细胞质中.结论:核心蛋白不同区段在细胞内的定位不同,将导致其参与细胞调节的途径和功能的不同.

  • 贮存温度对携带HGF基因的重组腺病毒Ad-HGF稳定性的影响

    作者:哈小琴;王澜;劳妙芬;吴祖泽

    目的:探讨不同温度对重组腺病毒Ad-HGF保存时间的影响.方法:以含10%甘油的Hanks液保存Ad-HGF(携带人肝细胞生长因子基因)、Ad-GFP(携带绿色荧光蛋白基因),用快速细胞病变(CPE)法、ELISA方法、流式细胞仪分别检测在不同贮存温度(-60℃,-20℃,4℃,25℃和37℃)、不同保存时间的重组腺病毒对其感染滴度、目的基因表达和转染细胞效率的影响.结果:-60℃保存长时间44 个月,其转染效率、HGF蛋白表达、病毒滴度未见明显下降;-20℃保存12个月各指标未见明显变化;4℃冰箱保存2个月,其各项指标已有所下降,但不是很明显,而保存7个月时,其转染效率、HGF蛋白表达量及病毒滴度均明显下降;25℃和37℃保存,除病毒滴度外,其余指标呈逐日下降趋势.结论:该病毒保存于-20℃以下性能是稳定的,可以满足临床贮存和应用条件.

  • A型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆及高效表达

    作者:王景林;王利春;吴东林;康琳;姜永强

    目的:实现产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringens alpha toxin,CPa)基因的克隆与表达.方法:用PCR技术从A型产气荚膜梭菌中扩增出CPa基因,克隆到原核表达载体pQE30中,构建了重组质粒pQE30-CPa,转化E.coli M15获得了CPa的高效表达.结果:序列测定和双酶切表明,CPa基因正确插入载体.序列分析发现CPa基因与GenBank中的4种CPa基因相似率为76.7%~99.9%.工程菌裂解液经SDS-PAGE分析显示在相对分子质量43?000处有一条表达很强的蛋白区带,与CPa相对分子质量相符,约占菌体总蛋白的62.88%,主要以包涵体形式存在.免疫印迹结果表明, 表达的重组CPa蛋白同抗CPa血清有特异性结合.结论:为进一步研究CPa重组疫苗和制备CPa的特异性抗体奠定了基础.

  • 重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆和表达

    作者:王金凤;徐东刚;彭善云;蔡欣;邹民吉;王嘉玺

    目的:克隆人KGF-2基因,并在大肠杆菌中进行表达.方法:通过PCR扩增,从人胎肝cDNA文库中获得编码人KGF-2的cDNA,并将其分别克隆入pBV220,pLEX和pGEX4T-1质粒中,研究其在不同表达质粒和大肠杆菌中的表达情况.结果:克隆得到的KGF-2 cDNA经测序证明与文献报道的序列一致.将其克隆于pBV220质粒中,在E.coli JM109中表达量相对高,约占菌体总蛋白的4%;克隆于pLEX质粒中,在E.coli GI724中的表达量约占全菌总蛋白的5%;克隆于pGEX4T-1中,在E.coli JM109中的表达量可占到全菌总蛋白的20%.结论:采用GST 融合蛋白表达质粒pGEX4T-1对KGF-2进行表达,较pBV220和pLEX具有明显优势,能实现对KGF-2的高效表达,为进一步的功能研究奠定了基础.

  • 长型LRP16基因真核表达载体的构建及在HL60细胞中的表达

    作者:朱宏丽;卢学春;范辉;辛宏;徐周敏;姚善谦

    目的:构建长型LRP16基因开放阅读框架序列的真核表达载体,并观察其在髓系白血病细胞系HL60细胞中的表达情况.方法:采用RT-PCR方法自1例健康献血员外周血单个核细胞中克隆长型LRP16 cDNA;将长型LRP16 cDNA克隆入 pGEM-T载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定;将鉴定过的DNA片段插入真核质粒pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA-LLRP16;脂质体介导法将其转染HL60细胞,培养72 h后用RT-PCR方法检测转染细胞中长型LRP16基因的表达情况.结果与结论:酶切鉴定和序列分析证实,重组质粒含有人长型LRP16基因序列;转染实验表明 LRP16基因能在HL60细胞中过表达,为进一步研究长型LRP16基因功能奠定了基础.

  • Bax反义硫代脱氧寡核苷酸的体外抗辐射效应研究

    作者:曹智刚;袁守军;陈惠鹏;徐兰平;田增月;韩昌明;丁林茂

    目的:Bcl-2/Bax蛋白比值降低是辐射所致细胞凋亡启动的检查点.本研究拟用Bax反义核酸干预Bax基因的表达,提高Bcl-2/Bax蛋白比值,抑制辐射所致凋亡,促进细胞存活.方法:人胚肺成纤维细胞(HELF)和小鼠受γ射线照射后,立即用Bax反义脱氧寡核苷酸处理HELF细胞和小鼠骨髓细胞6?h(终浓度均为100?nmol/L),用MTT法、SRB法和小鼠骨髓中性粒细胞-巨噬细胞系祖细胞(CFU-GM)集落形成法,确定细胞的存活状况.用RT-PCR方法和流式细胞仪检测Bax mRNA的表达状况、细胞周期的变化,分析其作用机制.结果:HELF细胞的存活率分别增加24.4%(MTT法,P<0.01)和12.8%(SRB法,P<0.01);骨髓细胞处理组CFU-GM集落形成数量远高于照射对照(72±17 vs 13±6,P<0.01);RT-PCR检测显示,处理组的目标条带和内标条带的灰度比值(Bax/β-actin)低于对照组(分别为43.9%和68.6%);流式细胞仪检测表明,处理组总S期细胞的比例高于对照组,分别为24.2%和7.7%,提示处理组细胞内Bax mRNA拷贝数量低于对照组,细胞增殖活动较强.结论:靶向Bax mRNA的反义硫代脱氧寡核苷酸,能够促进γ射线辐射后细胞的存活,其机制与破坏靶mRNA分子,继而造成Bax蛋白表达减少,抑制凋亡启动并促进细胞增殖活动有关.

  • 基于802.1x和IAS的宽带用户接入管理

    作者:吴明虎;赵东升

    目的:利用802.1x和IAS技术实现宽带用户接入管理.方法:首先详细讨论了802.1x认证协议及其技术特点,并与PPPOE,WEB/PORTAL的其他认证技术进行了比较.接着介绍了Internet 认证服务的特性和工作原理,后列出了应用802.1x和IAS等技术的宽带用户接入管理的实例.结果和结论:基于802.1x认证协议的用户管理方案,可提高网络运行的安全性、灵活性和实用性,解决了由于用户管理所造成的瓶颈问题.

    关键词: 802.1x Radius IAS
  • 肝癌的肿瘤抗原与特异性细胞免疫

    作者:何竞;凌世淦

    肝癌是常见恶性肿瘤之一,免疫治疗已成为继手术、放疗、化疗后的第4种治疗模式,其中特异性免疫治疗是研究的热点.本文综述了肝癌的AFP,MAGE,NY-ESO-1等肿瘤抗原及其相关的特异性细胞免疫的研究进展.

  • 硫芥中毒损伤作用机制的研究进展

    作者:闫慧敏;应翔宇;丁日高

    硫芥是一种糜烂性毒剂,作用于皮肤产生红斑、水疱、坏死,并能引起眼、呼吸道、消化道黏膜的组织损伤,吸收到体内后出现程度不同的全身中毒.目前尚无特效抗毒剂.研究认为其作用机制可能为:DNA烃化和糖酵解的抑制、蛋白硫醇-Ca2+稳态失调、谷胱甘肽(GSH)的消耗、活性氧(reactive oxygen substances, ROS)的产生等.细胞凋亡也是近年来其毒理作用机制研究的热点.本文综述了近年来该领域的研究进展,以期为我们寻找、制定有效的预防和治疗措施提供一些重要的启示.

  • 纳米科技在生物医学中的应用

    作者:郑俊杰;张英鸽;毛军文;吴乐山

    随着纳米科技的迅速发展,其在生物医学中的应用越来越广泛,几乎涉及到各个领域.本文主要综述纳米科技在基础医学、药学、临床医学和预防医学中的应用.

  • 蛋白质芯片技术及其在肿瘤研究中的应用进展

    作者:贾海威;张伟京

    蛋白质组学是现代科技前沿,蛋白质芯片是20世纪末出现的新一代生物芯片,其高通量、高敏感、高效快捷等优点使其刚刚出现就广泛应用于生命科学的多个研究领域,并取得了一系列突破性进展.本文就蛋白质芯片的基本构成、技术原理、在肿瘤研究中的应用、存在的问题及其应用前景作一简要综述.

  • 糖皮质激素对下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的影响

    作者:刘春丽;周文霞;张永祥

    应激对生殖内分泌系统的影响非常复杂,其作用机制研究也极其困难.为此,我们从应激的后继环节--高浓度的糖皮质激素(GS)着手,综述了近年来GS对代表生殖功能状态的主要轴--下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的影响及其机制的研究进展,藉此探讨应激所致HPG轴功能紊乱的机制,为调节生殖内分泌系统功能策略的制定奠定一定的基础.

  • AMPA受体的代谢

    作者:张和平;周文霞;张永祥

    近年来研究表明AMPA受体和突触可塑性密切相关,了解AMPA受体的整个生命过程有助于进一步认识突触可塑性,进而认识学习记忆的分子机制.AMPA受体在粗面内质网合成,经高尔基体修饰后,更多地分布在树突柄等非突触部位,LTP和CaMKⅡ可以启动AMPA受体的突触插入,之后通过其胞质内C端,由ABP,GRIP和NSF等蛋白介导,锚定于突触后致密斑.PICK1和PKC可以介导突触膜上AMPA受体的胞吞过程,离开突触后,AMPA受体或被重新循环利用,或被溶酶体终降解.

  • PCR在ABO疑难血型鉴定中的应用

    作者:徐华;章扬培

    ABO血型抗原是人类主要的血型抗原, ABO疑难血型的鉴定正成为安全输血的一个重要课题.随着ABO血型基因的成功克隆,PCR分型技术的应用,使ABO型别分析达到了更精细的水平.本文对ABO疑难血型的鉴定现状、PCR鉴定的原理和方法进行了综述.随着分子生物学理论和实验技术的进一步发展,PCR方法在鉴定ABO疑难血型方面将有更广泛的应用前景.

  • 重组人干细胞因子菌种稳定性鉴定

    作者:巩新;吴军;唱韶红;马清钧

    细胞因子(stem cell factor, SCF)是一种对造血细胞有重要作用的因子,它主要作用于早期多能干细胞、祖细胞,同时对晚期成熟血细胞也有作用,在肿瘤放疗和化疗的辅助治疗、体外造血、骨髓移植等方面有着广阔的应用前景[1~3].为了满足临床和科研工作对rhSCF的需求,本所已构建了高效表达rhSCF的工程菌DH5α(pMG604)[4].菌种的稳定性是影响工程菌大规模发酵生产的关键因素之一.为了研究该菌株的稳定性,我们对该菌株在传代过程中的氨苄西林抗性、质粒酶切图谱、目的基因核酸序列以及目的蛋白表达水平等进行了鉴定.

  • 食管贲门癌手术无吻合口瘘临床总结

    作者:黄斌;吴松

    食管贲门癌切除术后吻后口瘘是常见危及患者生命的严重并发症.我院1987年1月~2000年6月进行食管贲门癌切除术计380例,未发生吻合口瘘,现就预防吻合口瘘的有关临床经验进行总结.

  • 一氧化碳中毒后合并挤压综合征1例报告

    作者:陈芝;原新茹;杨红军;张虹;王汉斌

    一氧化碳(CO)中毒在临床上比较常见,但因昏迷致长时间固定体位引起的挤压综合征,常为临床医生所忽视,从而延误了治疗时机.现将我们收治的1例CO中毒后合并挤压综合征结合文献复习报告如下.

  • 钩藤碱抑制小鼠吗啡戒断症状的探讨

    作者:唐省三;马亚珍;陈冬娥

    钩藤碱(rhynchophylline,Rhy)为中药钩藤的主要活性成分,除具有降压、抗心律失常等多种药理作用外,近年来研究表明,钩藤碱具有拮抗Ca2+的作用[1].因传统的钙拮抗剂能够抑制吗啡的戒断症状[2],钩藤碱是否也有类似的作用尚不清楚.鉴于此,我们在吗啡依赖小鼠催促戒断模型上,观察了钩藤碱对吗啡戒断症状的影响,以探讨钩藤碱在戒毒治疗中的应用价值.

  • SARS患者双份血清中抗呼肠病毒和冠状病毒中和抗体的测定

    作者:朱虹;貌盼勇;何君;马静;胡燕;朱雷;黄如统;端青

    我们从北京第1例SARS患者A及其母亲的咽拭子标本中分离到两株呼肠病毒,在其父尸检肺组织样本的分离物中,电镜下发现两种病毒颗粒,一种为有包膜的直径100 nm左右的冠状病毒,另一种为无包膜的直径60~80 nm的空心和实心的呼肠病毒,呈晶格状排列[1],呼肠病毒基因检测阳性.随后我们又从北京佑安医院1例SARS患者尸检肺组织样本中分离到1株呼肠病毒.这几株呼肠病毒的理化特性和抗原性均相同[2].为深入研究呼肠病毒与SARS之间的关系以及呼肠病毒在SARS疫情中的作用,我们对解放军第302医院提供的SARS患者血清进行了双盲试验,同时测定呼肠病毒和冠状病毒的中和抗体.

  • Hp/DNA双参数分析放射损伤小鼠骨髓细胞周期、凋亡和Hp

    作者:董波;陈肖华;王治东;饶亚岚;张军权;张燕;毛秉智

    目的:建立结合珠蛋白(Hp)/DNA双参数流式细胞技术,以探讨放射损伤小鼠骨髓细胞中Hp含量与细胞周期和凋亡的关系.方法:小鼠骨髓细胞经70%乙醇固定后,Triton-X 100破膜,间接免疫荧光技术标记Hp,PI 标记DNA,上流式细胞仪测试.用ModFit软件设双门法分析Hp+和Hp-细胞的细胞周期和凋亡,CELLQuest软件分析Hp+细胞比例.结果:γ射线照射后6?h小鼠骨髓有核细胞中Hp+细胞的比例明显高于未照射对照组,骨髓细胞的凋亡来自于Hp-细胞,Hp+细胞未见凋亡,Hp-细胞发生的G2/M阻滞比Hp+细胞严重.这些信息是单用Western印迹法或单纯DNA分析所不能提示的.结论:Hp/DNA双参数流式细胞技术可用于分析Hp与细胞周期和凋亡的关系,是一种快速、客观的分析方法.

  • 大规模发掘及分型SNP技术平台的建立

    作者:翟芸;周钢桥;董晓佳;张秀梅;贺凤英;汪海建;周凯欣;郝冰涛;朱云平;贺福初

    目的:建立发掘未知单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)和已知SNPs分型的技术平台.方法:运用PCR产物双向大规模测序的方法发掘未知SNPs;运用基于聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction endonuclease digestion, PCR-RFLP)、TaqMan技术对已知SNPs进行分型.结果:建立了基于PCR产物双向大规模测序发掘未知SNP的技术平台,并以此在27个个体的69个乙型肝炎候选易感基因区域检测到592个SNPs,核苷酸变异度为(4.51 ± 1.24)×10-4;建成基于PCR-RFLP和TaqMan的SNP分型技术平台,这两种方法与直接测序法比较,PCR-RFLP的检出率达到100%,错误率几乎为0,并且操作简单,成本低廉;TaqMan分型技术的检出率也可达到100%,与测序结果的一致性达到100%,并且过程简单、易于操作,结果直观,易于判断,也能快速得到结果.结论:基于PCR产物双向大规模测序发掘未知SNPs的技术平台成熟可靠,适于准确、大规模地发掘未知SNPs;PCR-RFLP技术和TaqMan分型技术均适用于今后大规模正常人群和疾病人群的SNPs分型,为进行关联分析以确定疾病相关的SNPs奠定了坚实的技术基础.

  • 激活方法对大鼠-小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响

    作者:谢松涛;杨贵忠;朱德生

    目的:探讨电激活及化学激活对大鼠-小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响.方法:采用血清饥饿法同步化处理的SD大鼠成纤维细胞作为供体细胞,常规超排KM小鼠获得卵母细胞,采用盲吸法去核,显微直接注核法构建重组胚,分别采用6-DMAP+乙醇、放线菌酮、透明质酸酶3种化学激活方法和不同电场强度、脉冲电激活重组胚,CZB培养液中培养,观察重组胚发育.结果:电激活:电场强度(V/cm)/脉冲时间(ms)为:1 000/100,1 500/30,1 800/30,2 400/40时,卵裂率分别为:17.39%,28.07%,26.52%,0.00%.化学激活:使用透明质酸酶、放线菌酮、6-DMAP+乙醇时卵裂率分别为:5.56%,25.00%和33.91%.结论:电激活和化学激活均可有效激活重组胚;电激活时当电压为1 500~1 800 V/cm、脉冲为30~40 ms时,有利于重组胚的发育,电压过高时会将重组胚击碎;本实验所有激活方法中,6-DMAP+乙醇激活法所得卵裂率和桑椹胚率高.

  • 大鼠小肠上皮细胞的体外原代培养

    作者:王莉;段相林

    目的:探讨大鼠小肠上皮细胞原代培养的原理与方法以及培养过程中常见的问题和克服办法.方法:取生后1周SD大鼠的小肠上皮细胞,经分离纯化后进行原代培养.结果与结论:胶原酶Ⅺ型和中性蛋白酶Ⅰ型配合使用,可以分离到形态完整、容易贴壁生长的小肠绒毛细胞团.进一步利用离心技术纯化得到95%以上的小肠上皮细胞.结果显示,常规体外培养的肠上皮细胞是否增殖分化终决定于用酶消化后的结构完整性,如果用0.25%胰酶消化,则细胞受损程度较大,不易贴壁生长.

  • 高效液相色谱法测定人血浆样品中的椒苯酮胺

    作者:牟英;孟志云;高文静;窦桂芳

    目的:建立椒苯酮胺(JBAT)在血浆样品中的高效液相色谱测定方法以满足临床前动物药代动力学研究的需要.方法:血浆样品用乙酸乙酯提取,氮气流吹干,用pH 3.76的0.253?mmol/L磷酸缓冲液80 μl溶解后,取50 μl进样分析.SymmetryShieldTM RP18分析柱,流动相为乙腈、pH 2.8的5?mmol/L磷酸缓冲液和甲醇以一定体积配比,流速1 ml/min;紫外检测波长330?nm.结果:在所用HPLC条件下,生物样品中内源性物质不干扰JBAT的测定.用内标法测定JBAT的血浆浓度在8~20 000 ng/ml范围内线性关系良好,低定量限为8 ng/ml,方法的准确度在-1.0%~5.9%之间,日间精密度为10.8%~13.2%,日内精密度为4.5%~9.6%.方法平均回收率为70.2%.结论:本方法线性范围广、专属性强、准确、稳定.

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