军事医学杂志
Military Medical Sciences 군사의학
- 主管单位: 军事医学科学院
- 主办单位: 军事医学科学院
- 影响因子: 0.58
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1674-9960
- 国内刊号: 11-5950/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人突变型TRAIL在大肠杆菌中的表达及诱导多种肿瘤细胞的凋亡
目的:研究突变型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)的表达及体外诱导多种恶性肿瘤细胞的凋亡作用,为TRAIL临床治疗恶性肿瘤提供实验依据.方法:分段合成TRAIL寡核苷酸,并改变其中90个碱基,然后全长拼接,克隆入原核表达载体pGEX-2T,转化E.coli DH 5α,丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达,亲和层析分离纯化融合蛋白,凝血酶酶切得到TRAIL蛋白.MTT法和流式细胞仪定量分析纯化产物对多种肿瘤细胞的诱导凋亡作用.结果:突变型TRAIL表达产物为可溶性,对人BGC823胃腺癌、A549肺腺癌、H69小细胞肺癌、KB鼻咽癌、A172人脑胶质细胞瘤、SKNSH人成神经细胞瘤株有明显的诱导凋亡作用.结论:原核表达突变型TRAIL具有明显的诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡的作用.
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肠毒素性大肠杆菌菌毛抗原CS6和霍乱毒素B亚基在人伤寒沙门菌中的共表达及其免疫学效果观察
目的:构建表达肠毒素性大肠杆菌菌毛抗原基因CS6和霍乱毒素B亚基(CTB)基因的细菌性腹泻基因工程多价疫苗.方法:以基因工程减毒的人伤寒沙门菌为抗原载体,利用基于asd基因功能互补的宿主染色体-质粒平衡致死表达系统,实现了在没有抗生素选择压力的条件下,CS6和CTB在人伤寒沙门菌中的稳定表达.结果与结论:检测结果表明,CS6和CTB的表达虽对宿主菌的生长有一定影响,但经过一段时间的培养,重组菌株仍可达到高密度生长.动物免疫结果显示,重组菌株在家兔体内均可诱生相应抗体,但从诱生的抗体效价、抗体持续时间方面评价,单独表达CS6与CTB的重组菌株的免疫学效果均好于两者共表达的重组菌株,提示在以后的疫苗研究实践中,可以考虑将分别表达CS6与CTB的重组菌株按一定比例混合,组成联合疫苗,用于细菌性腹泻的免疫预防.本研究结果对于细菌性腹泻基因工程多价疫苗的构建有指导意义.
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光谱测定法检测蛋白质S-亚硝基化修饰
目的:探讨用光谱测定法对蛋白质的S-亚硝基化修饰进行检测.方法:以牛血清白蛋白(BSA)作目标蛋白,在酸性条件下用亚硝酸盐使BSA发生S-亚硝基化修饰,Hg2+离子解离亚硝基化蛋白的NO基团,所生成的NO与磺胺形成的重氮化物,再与乙二胺形成显色产物,其光密度值在一定的范围内与NO基团的浓度成线性关系,用亚硝酸盐所制作的标准曲线可定量检测目标蛋白的S-亚硝基化修饰.结果与结论:亚硝酸盐在4.0×10-3~6×10-2 mmol/L浓度范围与显色产物的光密度值存在良好线性关系,在总体蛋白中可检测到的S-亚硝基化蛋白的比率为1/10.光谱测定法是检测蛋白质S-亚硝化修饰的一种简便易行的方法.
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部分结构特殊多肽的纳升电喷雾串联质谱测序分析
目的:测定用Edman降解方法不能测序的结构特殊多肽的序列.方法:用纳升电喷雾四极杆-飞行时间串联质谱的de novo测序方法进行测序.结果:测定了亮丙瑞林、胸腺五肽及EPD等的多肽序列,这些多肽用Edman降解方法未能测定出序列.结论:串联质谱测序法是Edman降解测序法的好补充,且具有灵敏、快速和样品用量少的优点.
关键词: 纳升电喷雾四极杆-飞行时间串联质谱 氨基酸序列 -
LRP16基因启动子的克隆及荧光素酶报道重组子的构建
目的:克隆LRP16基因启动子及构建LRP16基因启动子-pGL3-Basic载体.方法:①以LRP16基因全长作为探针,在NCBI的人类基因组数据库中搜索并下载LRP16基因5′端3 kb基因组DNA序列.②以健康献血员基因组DNA为模板进行PCR扩增目的片段,将分离纯化的PCR产物用T4 DNA连接酶与pGEM-T Easy载体相连,转入JM109感受态化大肠杆菌,筛选阳性克隆并测序,进行Kpn Ⅰ和 BamH Ⅰ双酶切和巢式PCR鉴定.③将LRP16启动子-pGEM-T Easy载体再次酶切,纯化回收鉴定过的目的DNA片段,构建LRP16基因启动子-pGL3-Basic载体.结果与结论:长度为2.7 kb的LRP16基因启动子克隆成功,并构建了LRP16基因启动子-pGL3-Basic载体.充分利用因特网上人类基因组数据库的生物信息资源,搜索已知基因的启动子序列,可实现快速、经济和准确地克隆已知基因启动子分子和构建启动子载体的目的.
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高功率微波对大鼠心肌组织结构损伤及凋亡相关基因表达的研究
目的:研究高功率微波(high power microwave ,HPM)对心肌组织结构、超微结构和凋亡相关蛋白表达的影响,以探讨HPM对心肌损伤的剂量效应关系、基本病变规律和分子病理机制.方法:5个不同功率密度的HPM辐照大鼠,于伤后1 h,6 h,24 h,7 d,14 d及28 d采取心肌组织,通过光镜、电镜观察其病变规律,免疫组化检测Bax,Bcl-2,c-Fos和P53蛋白的表达.结果:HPM 辐照后心肌纤维早期出现细胞水肿、水变性,中后期可见收缩带、透明样变,肌纤维断裂,灶性坏死.Bax,c-Fos,P53表达明显增强,Bcl-2表达一过性增强.结论:HPM可对心肌造成严重损伤,损伤存在剂量效应关系.bcl-2/bax,c-fos和p53参与了HPM引起的心肌细胞凋亡.
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登革3型病毒NS1基因重组质粒DNA的构建及其免疫原性观察
目的:构建登革3型病毒NS1基因的真核重组表达质粒,观察其免疫原性,为登革新型疫苗的研究提供依据.方法:从感染鼠脑中提取登革3型病毒RNA,经RT-PCR获得NS1基因片段,然后将其克隆到真核表达载体中.用电穿孔法将重组质粒DNA转入COS7细胞,通过免疫荧光法检测外源基因在真核细胞中的表达.将重组质粒DNA免疫BALB/c小鼠,观察其免疫原性.结果:通过酶切鉴定和序列测定证实了NS1基因片段已经插入真核表达载体.用免疫荧光法证明转染了重组质粒的COS7细胞的胞浆中有特异荧光.重组质粒DNA免疫小鼠后可观察到诱发产生的细胞免疫应答.结论:含有登革3型病毒NS1基因的真核重组表达质粒可以在COS7细胞中进行表达,而且能够诱导小鼠产生细胞免疫应答.
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DNA双链断裂感应分子ATM能与PTC1相互作用
目的:研究DNA双链断裂感应分子ATM与原癌基因ret重排活化蛋白PTC1的相互作用.方法:用Flag抗体Western印迹检测,ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的PTC1;RET抗体检测ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的c-ret;用HA/myc抗体Western 印迹检测,HA-ret TK+myc-LZPR免疫共沉淀蛋白复合物;荧光蛋白标记的亚细胞定位.结果:PTC1可以与ATM激酶相互作用,此作用不依赖于电离辐射,且不被PI3K家族特异性抑制剂沃氏蓝霉素(wortmannin)所抑制,而野生型RET蛋白则不能同ATM结合;缺失体实验进一步证明两者的结合区段为ATM的LZPR结构域与PTC1的酪氨酸激酶结构域.构建PTC1绿色荧光蛋白表达质粒的亚细胞定位实验显示,PTC1以弥散形式分布于细胞质内.结论:胞浆蛋白PTC1可能借助某种途径使ATM在DNA损伤反应发生后重新定位,介导了细胞的恶性转化机制.
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pEGFP-N1-mSemcap2重组质粒在小鼠体内的分布及对PP结淋巴细胞表型的影响
目的:利用报告系统pEGFP观察pEGFP-N1-mSemcap2重组质粒肌肉注射小鼠后mSemcap2在体内的分布情况,以及对集合淋巴结(PP结)淋巴细胞表型的影响.方法:将pEGFP-N1-mSemcap2重组质粒肌注小鼠后分别在第5,7天收集各组织细胞,利用FACS检测其在组织中的表达;取PP结淋巴细胞进行流式细胞术分析.结果:重组质粒肌注小鼠后在不同时间点从小肠、肺脏、肾脏、肝脏、PP结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结等部位检测到了蛋白表达;小鼠PP结B220+细胞比例增高.结论:肌肉注射重组质粒后mSemcap2在体内的组织分布与其天然分布不尽相同;mSemcap2可以改变PP结淋巴细胞的表型.
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Acrp30基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达
目的:克隆人Acrp30基因,并在大肠杆菌中表达.方法:提取人脂肪组织总RNA,经RT-PCR扩增目的cDNA片段,进行核苷酸序列分析;将该基因克隆入原核表达载体pQE-30,在大肠杆菌M15中表达,用Ni2+固相化的螯合Sepharose Fast Flow亲和层析纯化重组蛋白;并用Western印迹检测所制备多克隆抗体的特异性.结果:从人脂肪组织总RNA中扩增得到736 bp的目的cDNA,其序列与已报道的序列完全一致,并在大肠杆菌中成功获得高水平表达,蛋白相对分子质量大约为30×103,其表达量占菌体总蛋白的15%左右.重组蛋白经Ni2+固相化的螯合Sepharose Fast Flow亲和层析纯化,纯度>90%.Western印迹试验证实所制备多克隆抗体具有较高特异性.结论:本研究为进一步探讨Acrp30在肥胖症和糖尿病患者中的表达情况以及Acrp30的作用机制奠定基础.
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Ni2+亲和胶的制备及其对带His6标签融合蛋白的纯化
目的:制备Ni2+亲和胶,并检测其纯化带His6标签融合蛋白的效果.方法:在强碱条件下,用环氧氯丙烷活化Sepharose 4B后,接上多个IDA臂,将Ni2+连接在IDA臂上,即为亲和胶成品.用亲和胶分别在变性和非变性的条件下,纯化包涵体和可溶性表达的带His6标签的人TRF1 和人tankyrase的PARP结构域,并通过Western印迹鉴定纯化的靶蛋白.结果:用自制的Ni2+亲和胶可以获得SDS-PAGE单一条带的目的蛋白,并得到Western印迹的鉴定.结论:自制的Ni2+亲和胶对带His6标签融合蛋白的纯化能力与商品胶完全等同,但价格低廉.
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肝损伤指数判断慢性肝炎转归的临床意义
目的:建立一种生物数学指数判断肝损伤程度,评价慢性肝病患者预后,判定不同治疗方案的疗效.方法:由肝脏蛋白合成能力、抗体产生水平、细胞裂解程度、胆汁郁积和肾功能损害等构成以生物数学和病理生理学为基础的肝损伤指数(liver damage score,LDS),对486例慢性肝病患者的肝损伤程度、预后及疗效进行临床分析.结果:LDS为1.5~3 U时,肝损伤为轻度;LDS为3.7~5.7 U时,肝损伤为中等;LDS为6~8 U时,肝损伤较重;LDS>8 U时,肝损伤重,预后差;LDS能够反映疾病进展的过程和疗效.结论:LDS是一种新的、简单而易操作的生物数学指数,能定量反映肝损伤程度和慢性肝病的发展过程,对指导临床治疗和判定预后具有重要意义.
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Graves病甲亢患者甲状腺摄131I率峰值的影响因素探讨
目的:分析甲亢患者甲状腺摄131I率峰值的影响因素.方法:对106例甲亢患者进行甲状腺摄131I率(RAIU)的测定,并分析年龄及性别、甲状腺重量、是否服用抗甲状腺药物(ATD)、服ATD时间及停ATD时间对甲状腺摄131I率峰值的影响.结果:不同年龄、性别组患者的甲状腺摄131I率峰值无显著性差异(F=1.68,P=0.1439).测定前按要求准备,不同服药时间及停药时间组之间的RAIU峰值差异无显著性意义(F=0.81,P=0.5974),服 ATD组与未服药组无明显差异(t=1.1362,P=0.2625).甲状腺重量≤30 g的患者较重量>30 g的患者的RAIU峰值差异有显著性(F=6.13,P=0.0029).结论:年龄、性别对RAIU峰值无影响.只要测定RAIU前停ATD至少一周以上,RAIU峰值不受服药、停药时间影响,与未服药组所测结果一致.RAIU峰值与甲状腺重量有关,重量≤30 g患者的RAIU峰值小于重量>30 g患者的峰值.
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大豆皂甙对环磷酰胺所致小鼠免疫失衡的保护作用
目的:探讨大豆皂甙对免疫抑制剂所致免疫损伤的保护作用.方法:利用已知具有免疫毒性的物质环磷酰胺制造小鼠免疫损伤模型,同时给予不同剂量的大豆皂甙,从免疫器官、细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫等方面观察了大豆皂甙对环磷酰胺所致小鼠免疫失衡的保护作用.结果:在20 mg/kg剂量条件下,环磷酰胺对受试小鼠具有明显的免疫抑制作用,它不仅可以引起受试小鼠免疫器官发生功能改变或萎缩,而且还使受试小鼠的体液免疫和细胞免疫受到抑制.但在给予环磷酰胺的同时投予大豆皂甙,在10 mg/kg,20 mg/kg和30 mg/kg剂量范围下,大豆皂甙可以不同程度地拮抗环磷酰胺所致小鼠的免疫损伤,对接触环磷酰胺小鼠的免疫器官及体液免疫和细胞功能均具有保护作用.结论:大豆皂甙具有免疫保护作用.
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重组腺病毒和质粒对心肌缺血治疗效果的比较
目的:研究不同载体对基因治疗效果的影响.方法:采用本实验室建立的犬心肌缺血动物模型,通过冠状动脉造影和TTC染色两种方法比较了携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒Ad-HGF和质粒puDKH对心肌缺血的治疗效果;并且在体外采用绿色荧光蛋白报告基因测定了不同载体对原代心肌细胞的转染率.结果:重组腺病毒Ad-HGF对心肌细胞的转染率和心肌缺血的治疗效果均好于重组质粒puDKH.结论:导入系统是影响基因治疗效果的关键因素之一.
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乙型肝炎病毒多表位嵌合蛋白的表达、纯化和鉴定
目的:构建含乙肝病毒表面抗原前S1,S2(HBV preS1,preS2)优势B细胞表位与乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的嵌合蛋白,探索其作为兼具预防和治疗HBV感染作用的新型疫苗的可能性.方法: 利用分子克隆技术先后将HBV preS1(21~47AA.),preS2(133~145AA.) 表位基因插入HBcAg基因中,得到HBV C144,CS1,CS1S2融合基因,分别克隆到原核表达载体pQE-30中,在大肠杆菌(E.coli)M15中进行表达,用Ni2+固相化的螯合Sepharose Fast Flow亲和层析纯化重组蛋白,后进行抗原性的鉴定.结果:构建了HBV嵌合型颗粒蛋白表达载体,并在E.coli中高效表达出可溶性病毒样颗粒蛋白C144,CS1,CS1S2,经Ni-NTA亲和层析纯化后,蛋白纯度达80%,Western印迹及ELISA证明蛋白各表位都具有抗原性.结论:本研究为进一步深入研究新型HBV治疗性疫苗的功能和应用奠定了基础.
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人源性角质细胞生长因子(KGF)的克隆及其表达分析
目的:克隆出正确的人源性角质细胞生长因子(KGF)并探讨影响其表达的因素.方法:应用RT-PCR技术克隆出KGF基因,并用pBV220表达质粒对其进行表达,然后用RNAdraw对其RNA进行分析.结果:带有信号肽的KGF基因在pBV220中表达量为10%左右,而去掉信号肽的KGF基因在pBV220中表达量估计只有1%~2%;利用RNAdraw分析的结果表明前者RNA前端没有形成茎环结构,而后者则形成了茎环结构.结论:KGF基因在细菌中表达量较低,信号肽是影响其表达量的重要因素.
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神经生化标志物S100蛋白的分子生物学基础及临床应用
本文综述了近年来对S100蛋白家族的分子生物学研究及其临床应用新进展.包括S100蛋白家族的化学本质、基因定位和组织细胞分布,及其作用的靶蛋白、功能和相关疾病;在临床上用于脑组织损伤和黑素瘤的诊断、治疗和疗效判断等研究进展.
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用原子力显微技术测定蛋白分子间及分子内的作用力
蛋白分子间与分子内作用力都与蛋白活动密切相关.原子力显微技术已被广泛用于测定蛋白分子间的作用力及稳定蛋白结构的分子内作用力,并由此获得了大量关于蛋白质结构与功能的信息.原子力显微镜已经成为研究蛋白分子相互作用及蛋白质机械性质的一个重要工具.本文就有关文献进行综述.
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细胞因子与长时程增强
长时程增强(long-term potentiation,LTP)是研究学习记忆相关的神经突触可塑性较为理想的模型.研究发现多种细胞因子对LTP有调节作用.本文主要综述了IL-1β,IL-2,IL-6,IFN,TNF,BDNF对LTP作用的研究结果,探讨其对神经可塑性的影响.
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基于骨架蛋白的噬菌体肽库研究
噬菌体展示肽库技术是研究蛋白质分子进化的理想工具.从选择合适的蛋白骨架入手,构建在此结构基础上的构象型肽库,结合高通量大规模的筛选技术,可以方便地获得具有新功能的蛋白质.这些新功能蛋白因具有高亲和力和高特异性,将有可能在许多生物技术领域中替代天然抗体.
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前列腺癌肿瘤标志物的研究进展
前列腺癌肿瘤标志物不仅与前列腺癌早期诊断有关,而且在检测前列腺癌的发生、发展与转移,监测治疗效果以及判断预后等方面均具有较大价值.由于血液标本容易获得,收集方法简单,外周血前列腺癌肿瘤标志物的研究已受到越来越多的关注.本文综述了多种前列腺癌肿瘤标志物及其在前列腺癌诊断中应用的研究进展.
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对拉萨牛出血性败血症病牛的血清学调查
2002年5月底,拉萨市城关区北郊突发牛疫情,疫区牛群共发病147头,死亡92头,病死率62.6%.根据临床表现、病理学和细菌学检验及流行病学的调查结果,排除了炭疽、鼠疫、土拉菌病,确诊为由多杀巴斯德菌(Pasteurella multoida)感染引起的牛巴斯德菌病(pasterallosis),即牛出血性败血症(俗称"牛出败").在紧急采取的一系列针对"牛出败"的措施下,包括病牛隔离治疗、污染区消毒和健康家畜紧急接种疫苗等,疫情得到了有效控制,截至6月2日再无新发病例报告.
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重组人尿型纤溶酶原激活剂规模生产中纯化过程的质量控制
尿型纤溶酶原激活剂(u-PA)是一种高效、出血副作用和再阻率低的溶栓制剂,由于在溶液中不稳定,在纤溶酶、激肽释放酶、胰酶及理化因素影响下,容易从158Lye-159Ile处断裂成双链,故u-PA有包括单链和双链两种形态.u-PA的国外临床用量大剂量可达80 mg,因此对产品的质量提出更高的要求.为了保证产品的终质量,必须在生产过程中加以严格控制,以确保产品的安全有效.我们对u-PA中试生产中纯化阶段的质量控制进行了研究,包括:蛋白含量、活性测定、活性回收率及比活计算、单双链比例测定、纯度分析几项指标的控制,以保证产品的质量.
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前列腺特异性抗原免疫组化试剂盒的研制与初步应用
前列腺特异性抗原(PSA)是由前列腺上皮细胞分泌的糖蛋白,相对分子质量33 000,具有组织特异性[1],被认为是目前检测前列腺癌好的肿瘤标志物.PSA免疫组化方法检测前列腺癌具有特异性好、灵敏度高等优点,临床上广泛应用于对前列腺癌的诊断和鉴别诊断.我们在多年研究的基础上,从人体样品中纯化分离了电泳纯的PSA,以此免疫动物制备了抗PSA的单克隆抗体,建立了前列腺癌PSA免疫组化检测方法,在此基础上研制了PSA免疫组化试剂盒,并在临床上进行了初步应用.
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几种大动物骨髓穿刺的方法与体会
高功率微波武器、电磁脉冲武器和中子武器是当今迅速发展的高新技术武器之一.高功率微波、电磁脉冲等电磁辐射及中子、γ、X等射线均会引起骨髓造血组织的损伤.为了深入研究其损伤的病变规律和机制,常需在不同动物、不同时相动态抽取骨髓组织进行研究.不同动物因其各部位骨骼髓腔造血丰度和解剖结构的差异,骨髓穿刺的部位和技巧需视动物种系而有所不同.本文报告猴、狗和家兔3种不同动物抽取骨髓的体会及注意事项.
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2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 |
2001 | 01 02 03 04 |
2000 | 01 02 03 04 |