酶解法清除猪皮α-Gal抗原的研究

目的 利用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪皮细胞及基质的异种抗原(α-Gal抗原) ,降低猪皮基质敷料的免疫原性. 方法 2月龄健康无皮肤疾患的猪皮皮片,经剖层裁切成不同的规格后,分别经碘酊和75%乙醇溶液浸泡消毒,随后用PBS清洗后进行酶解条件的摸索;采用免疫荧光法检测猪皮的α-Gal抗原,双抗夹心ELISA法检测残留酶,通过对酶解猪皮的残留酶和α-Gal抗原的检测进而优化、改进酶解条件和洗涤条件,以确立佳酶解工艺. 结果 建立了有效的酶解方法和洗涤方法,酶解后猪皮的α-Gal抗原清除率>90%,残留酶不能检出(间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng/ml). 结论 所建立的酶解工艺和洗涤工艺可有效清除猪皮细胞及基质的α-Gal抗原,建立了制备低免疫原性猪皮敷料的方法.

MERS冠状病毒核衣壳蛋白原核表达和纯化

目的 构建带有MERS-CoV N( MERS冠状病毒核衣壳蛋白)基因片段的pET-22b+原核表达载体,并表达和纯化核衣壳蛋白( NP). 方法 通过PCR技术扩增NP蛋白基因片段,插入到原核表达载体pET-22b+上. 使用核酸电泳、测序以及小量诱导表达确认所构建克隆的正确性,然后将重组质粒转化进大肠杆菌BL21a(DE3)中,并在大肠杆菌BL21a(DE3)中大规模诱导表达NP蛋白,使用AKTA纯化系统经强阳离子交换层析纯化出NP蛋白.结果 测序和小量诱导结果表明,扩增的NP蛋白片段序列正确,所构建的pET-22b+-NP克隆可在大肠杆菌BL21a (DE3)的包涵体和细胞质中表达;通过阳离子交换层析和浓缩后,蛋白的纯度和浓度都得到明显提高. 结论纯化出高纯度、高浓度的NP蛋白,为NP蛋白功能性研究提供重要基础.

病原微生物实验室实验操作产生气溶胶风险定量研究

目的 使用指示细菌、病毒代替有传染性的细菌、病毒,研究实验操作产生的微生物气溶胶风险,为相关实验室活动的风险评估提供科学数据. 方法 负压实验室内用高浓度指示细菌和病毒(噬菌体)进行实验室中多种实验操作产生的气溶胶风险,包括高浓度吹吸混匀、高浓度培养瓶意外跌落、离心管破裂产生的气溶胶风险实验. 安德森六级采样器主动采样和沉降平皿被动采样两种方法进行微生物气溶胶采样. 根据采样结果得到各种实验操作产生的气溶胶风险. 结果 在模拟的各种正常和意外事故的实验室操作中,在模拟测试条件下高浓度气溶胶吹吸在局部环境中产生的细菌气溶胶风险高浓度为1174菌落形成单位( CFU)/m3、病毒气溶胶高浓度为1058噬斑形成单位( PFU)/m3 ,高浓度培养瓶破碎产生的细菌气溶胶风险高浓度为7957 CFU/m3、病毒为7942 PFU/m3 ,离心管破裂时产生的细菌气溶胶风险高浓度为80 CFU/m3、病毒为78 PFU/m3. 结论 病原微生物实验操作中存在着产生很高微生物气溶胶的风险. 实验人员要遵守操作规程,选择合适的防护装备.

艰难梭菌毒素A和毒素B羧基端抗原区段的表达及抗原性分析

目的 构建艰难梭菌毒素A和毒素B的原核表达载体,获得融合表达抗原,并鉴定其抗原活性. 方法以ATCC43255菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得毒素A和B羧基端( C端)基因片段,并进行原核表达获得毒素A和B羧基端抗原区段. 利用艰难梭菌毒素检测试剂盒对毒素A和B羧基端抗原区段的抗原性进行鉴定. 结果 成功构建了艰难梭菌毒素A和毒素B的原核表达载体,并获得能被相应特异性抗体所识别的毒素A和B羧基端抗原区段. 结论 获得毒素A和B羧基端抗原区段具有很好的抗原活性,为进一步制备相应抗体并建立艰难梭菌毒素A和B的免疫检测方法奠定了基础.

抗凝血多肽Hirulog-S的稳定性研究

目的 考察抗凝血多肽Hirulog-S原料药及冻干剂的稳定性,为该药临床应用及保存条件的制定奠定基础. 方法 采用高效液相色谱法,通过影响因素实验、加速实验和长期稳定性实验测定Hirulog-S原料药及冻干剂的含量及有关物质的变化. 结果 影响因素实验结果表明,温度、湿度对Hirulog-S原料药、冻干剂的含量及有关物质变化影响不大;加速实验(40℃,RH75%)、24个月室温及4℃长期稳定性实验显示,Hirulog-S原料药及冻干剂含量及有关物质均无显著变化. 结论 Hirulog-S原料药及冻干剂具有较高稳定性,原料药室温避光密封保存、冻干粉4℃避光密封保存,暂定有效期2年.

单极纺锤体蛋白激酶1 ( Mps1 )与蛋白酶体α7亚基( PSMA7 )相互作用研究

目的 研究单极纺锤体蛋白激酶1( Mps1)与蛋白酶体α7亚基( PSMA7)是否存在蛋白间相互作用. 方法 以真核表达质粒pCMV-C-Myc-PSMA7为模板,pGEX-4T-1为载体,构建原核表达载体pGEX-4T-1-PSMA7( GST-PSMA7);并通过GST pull-down及免疫共沉淀实验检测Mps1与PSMA7之间是否存在相互作用. 结果 免疫印迹实验结果证实,构建的原核表达载体pGEX-4T-1-PSMA7(GST-PSMA7)能正确表达;GST pull-down及免疫共沉淀实验表明,Mps1与PSMA7之间存在蛋白质间相互作用. 结论 成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1-PSMA7(GST-PSMA7),并在大肠杆菌中得到了表达;Mps1与PSMA7之间存在相互作用,为进一步研究两者之间的关系及Mps1功能的影响打下基础.

PHLPP2基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及对舌癌细胞Tca8113增殖的影响

目的 构建稳定表达PHLPP2小发夹RNA( shRNA)的Tca8113细胞系,研究敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化水平和Tca8113细胞生长的影响. 方法 利用RNA干扰( RNAi )技术,设计并合成针对PHLPP2 基因的shRNA,并将其克隆到shRNA表达载体PSIH-H1上. 经测序成功后,包装病毒并感染舌癌细胞Tca8113,建立敲低PHLPP2的稳定细胞株. 通过实时定量PCR( qRT-PCR)和Western印迹实验检测RNAi的干扰效果. 利用Western印迹实验和细胞生长曲线检测敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化及细胞生长的影响. 结果 经测序证明,成功构建PHLPP2 shRNA真核表达载体. qRT-PCR和Western印迹实验证明,构建的shRNA能有效抑制PHLPP2的表达,并构建敲低PHLPP2基因的Tca8113稳定细胞系. 实验表明,敲低PHLPP2可促进细胞的生长并升高Akt Ser473的磷酸化水平. 结论 成功构建PHLPP2基因的shRNA真核表达载体,转染细胞后能有效抑制PHLPP2基因的表达,且能升高Akt Ser473的磷酸化水平并促进细胞的生长,为进一步研究PHLPP2在舌癌中的功能及机制奠定了基础.

肾病综合征与术后胃瘫综合征患者ALB及胆红素的对比分析

目的 低蛋白血症是肾病综合征( nephrotic syndrome,NS)患者的典型特征之一,其原因可能与大量蛋白随尿液丢失有关. 而低胆红素血症亦为NS患者常见临床症状. 为揭示二者间的关系,该研究对NS、慢性肾小球肾炎(chronic glomerulonephritis,CGN)及术后胃瘫综合征(postoperative gastroparesis syndrome,PGS),白蛋白(albumin, ALB)<35 g/L患者的胆红素、ALB及24 h尿蛋白定量进行了对比研究. 方法 选取NS 187例、原发性CGN 70例、PGS(ALB<35 g/L)64例,检测ALB、尿蛋白(urinary protein,UPR)、尿微量白蛋白/肌酐(urinary microalbuminuria/creatinine,Umalb/cr)及总胆红素( TBIL) ,应用SPSS 17.0 软件分析组间差异及TBIL与UPR、ALB的相关性. 结果NS组、CGN组及PGS组人群TBIL、ALB、UPR及Umalb/Cr水平存在显著差异(one-way ANOVA test,P<0.05),且NS组和CGN组TBIL与ALB均呈正相关,TBIL与UPR及Umalb/Cr均呈负相关(Spearman′s rho test,P<0.05);但PGS组上述观察指标间未见相关性(Spearman′s rho test,P>0.05). 结论 NS患者血胆红素低水平与血ALB水平呈正相关,与尿蛋白、微量ALB水平呈负相关;且PGS及CGN患者对照比较,PGN患者血胆红素与血ALB没有关联性. 结果表明,NS患者低血胆红素的原因可能为部分胆红素随尿蛋白的排出而丢失所致.

右美托咪定对LPS所致脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用

目的 观察右美托咪定( Dex)对脂多糖( LPS)诱导脓毒症( Sep)小鼠炎症反应、氧化应激及肺组织损伤的影响. 方法 清洁级雄性成年BALB/c小鼠48只,随机分为正常对照组( Ctrl组)、Sep组及Dex组,每组16只. 于实验开始0点腹腔注射LPS 20 mg/kg建立Sep小鼠急性肺损伤( ALI)模型,于0.5 h腹腔注射dex 30μg/kg,于2 h及6 h检测血清白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)浓度,于6 h检测肺组织中的髓过氧化物酶(MPO)活性及丙二醛( MDA)含量,计算右肺下叶湿干比( W/D) ,并将左肺HE染色后观察组织病理学改变. 结果 与Sep组比较,Dex组小鼠2 h及6 h血清IL-6明显下降(P<0.05),IL-10明显上升(P<0.05);6 h肺组织MPO、MDA、W/D均明显下降(P<0.05);光镜下可见,肺组织损伤程度明显减轻. 结论 Dex可通过抑制LPS诱导的Sep小鼠全身炎症反应,减轻肺组织的炎性浸润和氧化应激来发挥其防治ALI作用.

体内外遗传毒性实验组合评价纳米银的遗传毒性

目的 采用小鼠淋巴瘤细胞tk+/-位点突变实验、大鼠肝细胞碱性彗星电泳实验以及大鼠外周血网织红细胞微核实验观察纳米银的体内外遗传毒性. 方法 (1)以2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0 μg/ml浓度纳米银处理L5178Y细胞3 h,确定细胞毒性水平;再以0.63、1.25、2.50和5.00μg/ml浓度处理细胞3 h,分析纳米银致基因突变频率. (2) SD大鼠单次尾静脉注射纳米银0.63、1.25、2.50、5.00 mg/kg,24 h后分别采用碱性彗星电泳和流式细胞术检测肝细胞DNA损伤和外周网织红细胞血微核形成率. 结果 (1) L5178Y细胞相对悬浮增殖率随纳米银浓度的增加而降低,在5.0 μg/ml时已降至阴性对照组的11.42%;在测试浓度下,tk+/-基因位点突变频率呈浓度依赖性升高,与阴性对照组差异显著(P<0.05). 同时,小集落比例较阴性对照组均有显著提升(P<0.01).(2)纳米银5.0 mg/kg组给药后10 min内2只大鼠死亡,至24 h时死亡数增至3只,样本数不足不能参与统计. 与阴性对照组相比,1.25、2.5 mg/kg剂量组尾部DNA百分含量均有显著性差异(P<0.05),0.63 mg/kg组未见明显异常. 与阴性组相比,纳米银0.63、1.25、2.5 mg/kg 3个剂量组诱发外周血网织红细胞微核发生率均有显著性差异(P<0.05),并与暴露剂量呈正相关(Pearson r=0.98, P<0.05). 结论 实验条件下检测出纳米银具有诱发诸如基因突变、染色体畸变和原发性DNA损伤等体内外遗传毒性的潜在风险.

美军全球药材供应保障体系和特点分析

该文通过介绍美军药材供应保障的体制、模式和方法,分析其全球保障的特点,特别是信息化建设、集中化管理、效率效益优化的理念,思考其对我军新时期药材工作建设的启发,以期对提高我军药材供应保障水平提供借鉴.

综合评价方法在军事飞行员选拔中的应用

军事飞行员选拔具有降低培训成本、确保人机安全和提高军事效能的重要意义,选拔过程需要对候选飞行员的身体、心理和飞行能力等多项指标进行综合评价. 该文简要介绍了综合评价方法的概念和分类,对近年来综合评价方法在国内外军事飞行员选拔中的应用情况进行了综述,为我国军事飞行员选拔系统中综合评价技术的研究和应用提出了建议.

多位点可变数目串联重复序列分析在布鲁菌分型和溯源中的应用研究进展

布鲁菌病是一种由布鲁菌属感染引起的危害严重的人兽共患病. 经典的布鲁菌分型方法将其分为6个生物种22个生物型,DNA-DNA杂交研究显示6个经典物种同源性>90%. 多位点可变数目串联重复序列分析( MLVA)依据可变数目串联重复序列( VNTR)特征进行菌株基因分型,在血清分型的基础上进一步分型,阐明了环境菌株和临床菌株的关系,并在布鲁菌病暴发流行调查中得到了广泛应用. 该文综述了MLVA技术基本原理、发展概况、优越性及其在布鲁菌分型和溯源中的应用.

脓毒症免疫抑制的发生及其可能调节机制

脓毒症是导致重症监护患者死亡的常见原因,早期诊断及适当干预能提高脓毒症患者的预后. 现有许多研究已证实脓毒症不同阶段的免疫状态不尽相同,在脓毒症早期以全身炎症反应为主,晚期以免疫抑制为主. 大量研究表明,虽然有部分患者死于早期全身炎症反应综合征( systemic inflammatory response syndrome, SIRS)及其导致的多器官功能衰竭( multiple organ failure,MOF) ,但免疫抑制和继发感染是脓毒症患者的主要死亡原因. 针对脓毒症炎症反应的研究已逐渐转向以免疫抑制及其调控机制为重点. 该文主要探讨脓毒症免疫抑制发生及其可能的调节机制.

针刺配合口服中药治疗骨折延迟愈合的临床观察

骨折延迟愈合是骨科较为棘手的问题,有手术治疗和保守治疗两种方法. 利用传统中医、中药、针刺等手段治疗骨折延迟愈合,相比手术治疗不仅创伤小、费用低、并发症少,而且临床疗效相当,治愈率高.1 资料与方法1.1 一般资料本组90 例骨折延迟愈合患者均来自2008 年8 月至2013年8 月解放军309医院康复医学科住院病房,其中男53例,女37 例,年龄23 ~55 岁,平均年龄43.7 岁,病程4~10个月,平均病程为6 .5个月. 将所有患者按随机数字表均分为针刺组、中药组和复合组,每组30例,3组在性别、年龄、病程等分布情况差异无统计学意义(P>0.05).

3927例军人诊区皮肤科患者疾病谱分析

目的 分析某部队医院军人皮肤科门诊患者病种分布特征,为采取有效的针对性防治措施提供科学依据. 方法 对2013年10月至2014年11月解放军313医院军人门诊皮肤科就诊患者的数量、病种等进行描述性统计分析. 结果 全年共接诊部队患者3927 人次,排名前10 位的疾病分别为湿疹(19.71%)、浅表真菌感染(13.38%)、乳头状瘤病毒感染(如寻常疣,13.19%)、荨麻疹(7.72%)、痤疮(7.68%)、神经性皮炎(7.64%)、过敏性皮炎(4.81%)、湿疹样皮炎(3.87%)、鸡眼(2.41%). 各疾病的发病率以及病种构成比与地方医院门诊以及基层巡诊搜集的资料存在差异. 结论 军人诊区皮肤疾病谱的特点可能与该院承担着野战部队以及近千名海潜空勤人员这些特殊群体的卫勤保障任务有关,也与基层部队皮肤病实际患病情况存在差异有关,这对于我们在日常工作中以及基层巡诊中采取有针对性预防措施、更好地防治部队皮肤病发病具有积极意义.

口服牛骨胶原肽对模拟微重力条件下大鼠股骨微结构的改善效应

目的 观察胶原肽(collagen peptides, CP)对模拟微重力(simulated microgravity,SMG)条件下大鼠骨代谢指标及骨微结构的影响. 方法 雄性SD大鼠24只随机平均分为3组: 水平对照组(control,CN),后肢尾吊模拟失重组( SMG组) ,模拟失重同时给予CP灌胃组( CP组). CN和SMG组灌等量双蒸水,各组实验期均为28 d. 采用全自动生化分析仪检测血清钙(Ca)、磷(P)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量,放射免疫法检测血清骨钙素( osteocalcin,OC)含量;Micro-CT分析右侧股骨远端的骨微结构;Masson染色观察右侧胫骨近端骨胶原纤维.结果 SMG+CP显示骨保护作用:抑制SMG诱导的血清Ca、ALP和OC含量的降低,改善股骨远端的微结构(增加骨体积相对含量及骨小梁数量,能抑制骨小梁完整性的减少) ,同时抑制SMG所致的胶原纤维含量的降低. 结论 口服牛骨CP能明显改善SMG大鼠股骨微结构,从而为微重力条件下骨质疏松的防治提供理论依据.

科技人才评价新框架探索——以某军事医学科研机构为例

目的 探索科技人才评价新框架,设计框架运行的方法学和管理机制. 方法 引入人才评价新理念,根据组织战略目标和科技创新要素规划关键指标;设计雷达图透视评价结果的方法步骤,实现对指标、范围、层级的全维识别. 结果与结论 建立了"可插拔"的分层管理机制,构建了数据、评价逻辑、操作管理相互协作的有机架构. 选取某军事医学科研机构,对该框架进行了示例性应用.

空军招收飞行学员医学选拔综合评定合格情况分析

目的 阐明空军招飞医学选拔综合评定合格学员的基本情况,为后续研究提供科学依据. 方法 采用横断面调查方法,根据招收飞行学员体检号随机抽取某年度招飞医学选拔中体检结论为"综评合格"和"合格"的飞行学员各200名,整理招飞体检数据、问卷调查飞行学员人口学基本特征,并按照综评合格病征及隶属体检专科进行分类统计. 采用EpiData3.02建立数据库,SPSS 16.0进行数据统计分析. 结果 综评合格组和合格组的年龄分布、地区分布、文理科分布情况以及心理选拔合格率和各平台成绩差异均无统计学意义;招飞医学选拔综评合格中发现的病征前10位依次为胸围不足、体质量超标、虹膜囊肿、脾大超标、胆囊息肉、扁平足、皮肤病、肝内钙化灶、关节疾病或损伤和生殖系统疾病或异常;涉及体检专科依次为外科、超声诊断科、眼科、耳鼻喉科、放射科、心电图和内科,其中以外科和超声诊断科病征为主,分别占全部综合评定病征的55.52%和16.37%. 结论 综合评定体现了招飞医学选拔"重功能轻形态"的思想,对充分利用招飞资源,提高招飞质量具有重要意义. 进一步对综评合格学员进行跟踪随访,构建飞行人员体格检查综合评定指标体系,对完善我国空军医学鉴定指标体系具有重要意义.

筛选高强度军事训练致急性肾损伤高危人群的临床研究

目的 筛选高危人群并早期干预是防治急性肾损伤的重要手段,探讨未参加过训练、训练前未培训、不良心理情绪(紧张、焦虑)、平时体育活动频率少(<3次/周)这4个危险因素能否筛选高强度军事训练致急性肾损伤的高危人群. 方法 根据问卷调查结果将参加武装越野5 km的战士分为无危险因素组(组1 )、1个危险因素组(组2)、2个危险因素组(组3)、3个危险因素组(组4)、4个危险因素组(组5) ,分别留取训练后6、24 h的尿标本,比较尿蛋白、尿潜血、尿微量白蛋白( mALB)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶( NAG)等肾损伤指标. 结果 随着危险因素的增加,各组训练后6 h尿蛋白阳性的发生率增加(x2 =101.8,P<0.001),训练后6 h的mALB、NAG水平明显升高(F=133.3,P<0.001;F=67.71,P<0.001). 对中高危组(3、4、5组)的分析提示训练后24 h尿mALB、NAG水平亦随着危险因素增加而增加,以组5的均值高. 结论 未参加过训练、训练前未培训、不良心理情绪(紧张、焦虑)、平时体育活动频率少(<3次/周)是发生肾损伤的独立危险因素,可用于筛选高强度军事训练致急性肾损伤高危人群.

军队"三防"医学救援基地化训练内容体系构建研究

目的 结合"全军核生化医学救援与公共卫生应急处置训练基地"建设及应用实践,构建军队"三防"医学救援基地化训练内容体系. 方法 通过文献研究法、专家访谈法对军队"三防"医学救援基地化训练的内涵、构建理念、训练内容体系要素进行分析. 结果与结论 提出军队"三防"医学救援基地化训练内容体系的组训模式,确定训练内容体系的路线图.

参考文献类型及其标识

根据GB/T3469《文献类型与文献载体代码》规定,以单字母方式标识以下参考文献类型:专著"M"、论文集(或会议录)"C"、报纸"N"、期刊"J"、学位论文"D"、报告"R"、标准"S"、专利"P"、专著及论文集中的析出文献"A".对于电子文献类型的参考文献,用以下双字母作为标识:数据库( database)"DB"、计算机程序( computer program)"CP"、电子公告( electronic bulletin board)"EB".电子文献的载体类型及其标识:对非纸张型载体的电子文献,当被引用为参考文献时,需在参考文献类型标识中以双字母表示电子文献载体类型:磁带( magnetic tape)"MT"、磁盘( disk)"DK"、光盘( CD-ROM)"CD"、联机网络( online)"OL",并用以下格式表示包括了文献载体类型的参考文献类型标识:[文献类型标识/载体类型标识].

关于投稿的统计学要求