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HIV-1 B亚型gag基因密码子优化及其免疫原性的研究
从河南HIV-1流行区感染者中克隆HIV-1 B亚型gag基因,通过序列比对获得其一致性共有序列,对该共有序列按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Western blot方法比较优化前后gag基因体外表达量.发现对gag基因进行密码子优化可显著提高其表达水平.将优化后的mod.gag基因插入重组腺病毒载体,构建了重组病毒rAdV-mod.gag.在BALB/c小鼠体内分别以108PFIJ及108PFU rAdV-mod.gag疫苗单独免疫两次均可产生较高水平的gag特异性细胞免疫反应.由此得出结论,对gag基因的密码子优化是成功的;表达优化后gag基因的重组腺病毒疫苗,可以在小鼠体内诱导较强的gag基因特异性CTL应答.
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HIV-1CN54合成gp120基因(syngp120)的DNA疫苗鼻内免疫小鼠诱导全身的和粘膜的免疫应答
目的初步探讨HIV-1CN54合成gp120基因的DNA疫苗(pcDNA3.1-syngp120)鼻内接种小鼠是否诱发免疫应答.方法DNA疫苗免疫后,制备脾和肠系膜淋巴结(MLN)淋巴细胞,在体外测其增殖应答和CD+8 CTL应答.间接ELISA法测血清和粘膜洗液抗原-特异的IgG和IgA抗体滴度.中和实验测免疫血清和阴道洗液是否中和HIV-1SF33.结果在DNA疫苗末次免疫后,小鼠第1周检测到脾和MLN CD8+CTL应答较弱,而第5周未检测到.另外,在末次免疫后的第1、5周检测到MLN而未检测到脾淋巴细胞发生增殖应答.并且检测到特异的血清IgG抗体和粘膜的(包括粪便和阴道洗液)IgA抗体,但未检测到血清的IgA抗体和粘膜的(包括粪便和阴道洗液)IgG抗体.中和实验发现末次免疫后第5周的血清能中和实验室毒株HIV-1SF33(B亚型),而阴道洗液则没有.结论该DNA疫苗鼻内免疫小鼠可诱导粘膜免疫应答,包括MLN淋巴细胞增殖应答和CD8+CTL应答,同时诱导较弱的粘膜IgA抗体应答.此外,能诱导脾CD+8CTL应答和血清IgG抗体应答.免疫血清中和HIV-1S F33,而阴道洗液不能.
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蛋白转导结构域在抗原交叉提呈中的应用进展
大量实验证明,蛋白转导结构域可高效携带多种类型的物质穿越细胞膜进入细胞质.因此,将蛋白转导结构域与外源抗原连接(融合)可以促进外源抗原的交叉提呈,递送外源抗原进入MHC-Ⅰ型途径进行加工提呈,从而诱导CTL应答.本文综述了蛋白转导结构域在抗原交叉提呈中的应用进展.
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HBV慢性感染与树突状细胞功能异常研究进展
我国是HBV感染高流行区,一般人群HBsAg阳性率约为9.09%,慢性乙型肝炎患者约3千万人.乙型肝炎病毒(HBV)持续感染的机制虽仍不完全清楚,但大量实验表明,树突状细胞(dendritic cell DC)功能异常可能是其主要原因.
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乙肝核酸疫苗诱导BALB/C小鼠的CTL免疫应答
目的:研究携带HBsAg基因的载体质粒pcDHBs诱导小鼠CTL应答效果.方法:将HBsAg基因连接到真核表达载体pcDNA3.1上,构建成载体质粒pcDHBs.将纯化后的质粒pcDHBs和pcDNA3.1肌肉注射免疫小鼠,眼眶采血检测血清中抗体水平.用质粒pcDHBs转染P815细胞制备乙肝疫苗诱导BALB/C小鼠CTL活性检测的靶细胞.免疫后,取脾细胞,按效靶比为10∶1、25∶1、50∶1进行CTL杀伤检测.结果:免疫pcDHBs疫苗后,检测到小鼠血清中的HBsAb.用pcDHBs进行转染的P815细胞能够检测到HBsAg基因片段和蛋白质抗原的表达.用pcDHBs免疫组小鼠的CTL杀伤率均明显高于pcDNA3.1免疫组.结论:质粒pcDHBs作为核酸疫苗能够诱导小鼠体液免疫应答和CTL免疫应答.
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皮肤表面接种疫苗的应用
随着生物医药技术的发展和人们对免疫机理的深入了解,新的免疫接种策略及选择(如喷雾、药膏、可食用配方)得到发展,从而展现了不用针头和注射器接种疫苗的可能性.局部免疫接种已经成为现实,它使疫苗接种更合理、安全和有效.此外,它将提高疫苗的依从性比率,并使全球预防传染病的大规模疫苗接种运动更易成功实施.本文主要综述了将候选疫苗抗原接种于裸露皮肤的新进展,并介绍了用多肽和糖结合疫苗作为免疫原的新观察结果.
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中国人类免疫缺陷病毒-1B亚型Gag蛋白特异性T淋巴细胞的免疫应答
大量研究证明，细胞免疫特别是HIV特异性CTL在控制HIV感染中发挥关键作用[1]。HIV-1特异性CTL应答不仅由HIV-1特异性抗原蛋白结构决定，同时也受到特异性人类白细胞抗原(HLA)I类抗原的限制。不同人群HLA-I类基因型分布频率不同，决定了不同人群HIV-1特异性CTL应答模式的不同[2]。目前HIV-1特异性CTL应答研究主要集中在白种人和黑种人，有关中国人HIV-1特异性CTL应答的研究不多，结论也不一致[3-4]。因此，本实验选用既往研究证明应答频率较高的结构蛋白Gag为靶蛋白，进一步明确中国人HIV-1特异性T淋巴细胞应答特点及HIV-1特异性T淋巴细胞反应与临床疾病进展的相关性。
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慢性乙型肝炎中医证型与HBV特异性CTL应答相关性研究
目的 探讨HBcAg、HBsAg及混合肽段(HBcAg18-27、HBcAg60-68、HBsAg183-191)对慢性乙型肝炎患者特异性CTL应答的影响与其不同中医证型之间的相关性. 方法 收集中医辨证分型为湿热中阻型和肝郁脾虚型的CHB患者各30例,分别用重组HBcAg、HBsAg、混合肽段诱导CHB患者PBMC体外增殖.用酶联免疫斑点(ELISPOT)法检测抗原和观测肽段诱导后CD8+T细胞分泌IFN-γ数量. 结果 HBcAg与HBsAg及混合肽段比较,诱导慢乙肝患者PBMC产生IFN-γ数量均有显著性差异(P＜0.05),HBsAg与混合肽段比较无显著性差异(P＞0.05).无论在HBcAg、HBsAg还是混合肽段刺激下,湿热中阻组同肝郁脾虚组患者PBMC产生IFN-γ数量比较均有显著性差异(P＜0.05). 结论 HBcAg诱导慢乙肝患者CTL应答较HBsAg及混合肽段强,无论在HBcAg、HBsAg还是混合肽段诱导下,湿热中阻组均较肝郁脾虚组CTL应答强.
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扶正抗毒丸对HIV感染ⅡA期患者CTL应答及T细胞亚群影响的研究
目的:分析扶正抗毒丸治疗对HIV感染ⅡA期患者CTL应答及T细胞亚群表达影响.方法:采用治疗前后自身对照方法,对HIV感染ⅡA期患者给予扶正抗毒丸治疗12个月,用流式细胞术分析患者治疗前后CTL应答及T细胞亚群表达变化.结果:用扶正抗毒丸治疗12个月后,HIV感染ⅡA期患者淋巴细胞总数、CD4+T、CD8+T细胞计数稳定在一定范围;HIV特异性CD8+T细胞占淋巴细胞总数的比例明显上升;CD8+ CD95+、CD4+ CD95+和CD8+ CD28+细胞亚群比例明显下降.结论:扶正抗毒丸治疗HIV感染,可以稳定ⅡA期患者CD4+T、CD8 +T细胞计数,增强CTL应答,可能与降低CD8和CD4细胞凋亡有关.
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HSPs对呼吸道合胞病毒重组蛋白抗原免疫应答的调节作用
目的 考察热休克蛋白HSP70对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白抗原G1F/M2免疫应答的调节作用.方法 构建并表达了Javelin-G1 F/M2重组蛋白,在G1F/M2的N端引入Javelin序列,通过该序列可以实现重组蛋白与HSP70蛋白高亲和力结合.以HSP70:Javelin-G1F/M2复合物等免疫Balb/c小鼠,用乳酸脱氧酶释放法测定CTL活性,ELISA法测定IgG及其亚型IgG1和IgG2a抗体滴度,空斑抑制实验测定血清中和抗体.结果 经表达和纯化获得了纯度达90％以上的融合蛋白；皮下免疫HSP70:Javelin-G1F/M2复合物可诱导高滴度的IgG抗体和强的CTL应答,其抗体滴度和CTL应答强度均优于Javelin-G1F/M2加铝佐剂腹腔免疫和单独Javelin-G1F/M2皮下免疫.HSP70:Javelin-G1F/M2复合物在诱导中和抗体方面与Javelin-G1 F/M2加铝佐剂腹腔免疫基本相当.HSP70:Javelin-G1F/M2复合物可以诱导更强的IgG2a应答,IgG的亚型IgG 1/IgG2a的比值明显低于Javelin-G1 F/M2加铝佐剂腹腔免疫组和单独Javelin-G1F/M2皮下免疫组.结论 HSP70可能通过增强CTL应答进一步纠正Th2型优势应答,使得Th1/Th2应答更加平衡.
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HIV感染与CTL应答的研究进展
HIV病毒与宿主之间有着复杂的关系,病毒侵入机体之后,机体会产生一系列免疫应答,细胞介导的免疫应答通常是机体抵抗病毒感染的第一道防线.HIV特异性CTL免疫应答在控制感染者体内的病毒复制中具有重要作用.故对已取得的成果从HIV感染特异性CTL应答的机制、不同时期应答的特点以及影响因素这几个方面进行了综述.
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CTL前体频率对CD8+CTL应答类型的影响
目的:探讨CTL前体的频率对CTL应答类型的影响.方法:用重组鼠IL-4和GM-CSF诱导小鼠骨髓来源DC发育成熟,卵清蛋白-Ⅰ(OVA-Ⅰ)多肽激活DC,流式细胞术(FCM)分析DCOVA表型;用OVA特异CD8+T细胞和DCOVA接种Iab-/- C57BL/6小鼠,FCM检测小鼠体内OVA特异性CTL及特异性CTL对OVA特异性脾细胞的体内细胞毒作用,并观察DCOVA免疫后小鼠肺肿瘤的生长情况.结果:经OVA-Ⅰ多肽刺激后,DC表面有高水平CD11c、CD80、CD54、Iab、Kb分子及pMHC Ⅰ复合体表达;注射不同剂量(0×106、0.25×106、0.5×106、1×106、5×106)OVA特异性CD8+ T细胞后,小鼠外周血OVA特异CTL占CD8+ T细胞的百分比分别为0.01%、1.31%±0.21%、2.34%±0.17%、3.11%±0.25%、4.23%±0.32%,注射CD8+ T细胞组OVA特异CTL百分比均较对照组明显增高(P<0.05),未接种CD8+T细胞的野生型C57BL/6小鼠外周血OVA特异CTL为2.45%±0.22%;各剂量组CFSElow细胞数不变,CFSEhigh细胞随着CD8+T细胞数的增加而逐渐减少,小鼠肺肿瘤数随接种CD8+ T细胞数的增加而减少(P<0.05).结论:增加CTL前体频率可使CTL应答类型由CD4+ T细胞依赖型转变为CD4+ T细胞非依赖型.
