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重组痘苗病毒表达人免疫缺陷病毒中国株B'亚型Gag蛋白及免疫效果观察
为筛选用于我国HIV疫苗的候选基因,利用痘苗病毒载体构建表达HIV-1 B′亚型中国流行株RL42的Gag蛋白的重组病毒rVV-RL42gag,并免疫BALB/c小鼠,检测其诱导的特异性抗体及中和抗体,同时检测其诱导的特异性CTL及与中国流行株C(B′/C重组)亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应.结果显示:重组病毒能很好地表达Gag蛋白,它具有与7株单克隆抗体结合的抗体表位;电镜下可观察到Gag蛋白形成的颗粒.rVV-RL42gag免疫小鼠后能诱导产生高滴度的特异性抗体和CTL,抗体具一定的中和活性,且检测到与C(B′/C重组)亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应.这些结果表明,rVV-RL42gag具有良好的免疫原性,可进一步构建表达HIV B′亚型中国流行株RL42的Gag蛋白的重组痘苗病毒作为候选疫苗.
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HIV-1 Gag和Env蛋白特异性ADCC反应与AIDS病程进展的关系
目的 了解艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)Gag和Env蛋白特异性抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(AD-CC)反应,与艾滋病(AIDS)疾病进展的相关性.方法 采集58份未经抗病毒治疗的、感染时间1年以内的男男性行为人群(MSM)标本,利用HIV-1特异性肽库刺激和流式细胞染色技术进行ADCC检测.结果 病毒载量与HIV-1 Gag特异性CD2+IFN-γ+细胞占CD3-细胞的比例呈显著的正相关(r=0.2919,P=0.0339);而01_AE亚型感染者的病毒载量与HIV-1Env特异性CD2+ CD107a+细胞占CD3-细胞的比例呈显著负相关(r=-0.3454,P=0.0454).结论 在HIV-1感染早期,感染者体内可以产生Gag蛋白特异性的ADCC反应,其中Env蛋白特异性的ADCC反应具有控制疾病进展的作用.
关键词： 艾滋病病毒 Gag蛋白 Env蛋白 病毒载量 抗体依赖的细胞毒作用 -
人类免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白(Gag)在大肠杆菌中的表达
目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白Gag,为HIV感染的诊断和疫苗的研制奠定基础.方法通过PCR扩增获得HIV-1 gag基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-5X-1的tac启动子下游,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE和Western blot分析验证其表达产物.结果表达产物是相对分子质量为82 000的GST融合蛋白,且能与抗p24单克隆抗体发生特异性反应.结论重组Gag蛋白在大肠杆菌中得到了有效表达,且具有良好的抗原性,可进一步用于HIV感染及动物免疫等方面的研究.
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利用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达HIV-1Gag蛋白
目的在昆虫细胞中表达中国流行株B亚型HIV-1 Gag蛋白,制备重组Gag蛋白.方法将中国株B亚型HIV-1的Gag全基因序列,克隆到杆状病毒表达载体pfastbacI中,构建了重组质粒pfastGag.经转座及平板筛选,提取重组穿梭质粒Bacmid.经转染Sf9昆虫细胞后,获得了重组杆状病毒.用SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光实验分析表达的目的蛋白.结果重组病毒在昆虫细胞Sf9中高效表达了中国株B亚型HIV-1 Gag蛋白,表达的重组蛋白具有良好的抗原活性,可与HIV-1标准阳性血清及p24单克隆抗体发生较强的免疫反应.结论重组表达产物可用于艾滋病的免疫诊断和疫苗研究.
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中国人类免疫缺陷病毒-1B亚型Gag蛋白特异性T淋巴细胞的免疫应答
大量研究证明，细胞免疫特别是HIV特异性CTL在控制HIV感染中发挥关键作用[1]。HIV-1特异性CTL应答不仅由HIV-1特异性抗原蛋白结构决定，同时也受到特异性人类白细胞抗原(HLA)I类抗原的限制。不同人群HLA-I类基因型分布频率不同，决定了不同人群HIV-1特异性CTL应答模式的不同[2]。目前HIV-1特异性CTL应答研究主要集中在白种人和黑种人，有关中国人HIV-1特异性CTL应答的研究不多，结论也不一致[3-4]。因此，本实验选用既往研究证明应答频率较高的结构蛋白Gag为靶蛋白，进一步明确中国人HIV-1特异性T淋巴细胞应答特点及HIV-1特异性T淋巴细胞反应与临床疾病进展的相关性。
