蛋白激酶D1促血管新生的体内外实验分析

目的:探讨蛋白激酶D1(PKD1)促血管新生的作用,为心肌梗死等缺血性疾病以PKD1为治疗靶点提供新的思路.方法:体外培养、分离和鉴定内皮祖细胞(EPCs),观察PKD1及其特异性阻断剂CID755673对EPCs中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体KDR表达的影响.复制大鼠心肌梗死模型,分析PKD1及CID755673干预对大鼠心肌梗死后受损心肌组织病理形态学、微血管和内皮细胞变化以及VEGF、KDR表达的影响.结果:EPCs体外细胞培养实验表明,PKD1可明显上调EPCs中VEGF和KDR的表达水平.大鼠心肌梗死动物实验结果表明,PKD1干预后的大鼠心肌组织排列较为有序,结构较为清晰,内皮细胞胞膜光滑、完整,周细胞可见,心肌组织中的VEGF和KDR表达水平显著上调.结论:PKD1有明显的促血管新生作用,该作用可能是通过VEGF介导而实现的.

胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞氧化应激和凋亡的影响

目的:探讨胡桃醌对人卵巢癌SKOV3细胞的毒性作用及机制.方法:采用MTT法检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞生长的作用;流式细胞术检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响;采用DCF-DA染色荧光显微镜观察细胞内的活性氧簇(ROS)水平;采用Western blot检测卵巢癌SKOV3细胞细胞色素C(Cyt C)和活化caspase-3的水平.结果:与对照组比较,胡桃醌对SKOV3细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度和时间的增加而增强(P＜0.05).流式细胞术检测50 μmol/L胡桃醌作用细胞24 h和48 h后诱导细胞凋亡,早期凋亡率和晚期凋亡率均高于对照组(P＜0.01).胡桃醌显著提高细胞内的ROS水平,上调细胞Cyt C和活化caspase-3的蛋白水平.结论:胡桃醌通过促进SKOV3细胞ROS的积累诱导细胞凋亡和抑制细胞生长.

缩泉丸对膀胱过度活动症大鼠膀胱充盈期盆神经放电的影响

目的:研究缩泉丸对膀胱过度活动症(OAB)大鼠膀胱容量、压力及盆神经放电的影响,探讨缩泉丸对OAB大鼠膀胱感觉功能的作用.方法:SD雌性大鼠分别进行膀胱出口梗阻手术以复制OAB模型,随机分为OAB模型组、假手术组和缩泉丸高、中、低剂量组,给药4周后,以尿动力仪观察灌注过程中膀胱容量、压力及非排尿性收缩的变化,以多通道生理记录仪检测灌注过程中盆神经放电的变化.结果:OAB大鼠盆神经放电模式表现为放电频率先于压力达到峰值,而后压力达到峰值时,放电频率趋于平台或下降.OAB模型大鼠膀胱充盈过程中盆神经放电频率明显增强,膀胱压力上升,容量增加,非排尿性收缩增多;缩泉丸的干预能降低盆神经的放电冲动,减少神经放电增强引起的逼尿肌非排尿性收缩,降低膀胱压力,并呈剂量依赖性.结论:缩泉丸对OAB大鼠膀胱感觉功能的调节可能是其治疗OAB的机制之一.

过表达IGF-1对脐带间充质干细胞氧化损伤的抑制作用

目的:分析过表达胰岛素样生长因子1(IGF-1)对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)氧化损伤的抑制作用,开发UC-MSCs新的应用模式.方法:通过酶消化法,从脐带组织中分离UC-MSCs,并采用流式细胞术对细胞的表面特异标志物进行鉴定,通过逆转录病毒感染体系,构建过表达IGF-1的UC-MSCs(UC-MSCs-IGF-1),并进一步通过实时荧光定量PCR和流式细胞术对UC-MSCs-IGF-1的IGF-1表达水平进行评价,同时分析UC-MSCs-IGF-1的表面标志物及成骨成脂分化能力;用不同浓度的H2O2(0μmol/L、10μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L)处理细胞,分析UC-MSCs-IGF-1在增殖活力维持、抗氧化损伤和抗凋亡方面的优势.结果:UC-MSCs表面标志物CD29、CD90和CD105的表达均呈阳性,而CD34的表达为阴性,符合正常间充质干细胞的表型特征;实时荧光定量PCR和流式细胞术结果表明,应用逆转录病毒感染体系构建的UC-MSCs-IGF-1在IGF-1表达方面远高于正常UC-MSCs,同时干细胞表型与UC-MSCs一致,且具备正常的成脂成骨分化能力;在H2O2的氧化损伤作用下,与UC-MSCs相比,UC-MSCs-IGF-1具有较强的增殖活力和抗氧化、抗凋亡功能,同时细胞中的SOD活性略高于UC-MSCs.结论:过表达IGF-1对UC-MSCs的氧化损伤及氧化引起的凋亡均具有一定的防护作用,与正常UC-MSCs相比,UC-MSCs-IGF-1可能在临床应用方面具有一定的优势.

连翘苷对Lewis肺癌VEGF和内皮抑素表达的影响

目的:探讨连翘苷对Lewis肺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成抑制因子内皮抑制素(endostatin)蛋白表达的影响.方法:免疫组化染色检测临床收集的正常肺部组织、癌旁组织和肺癌组织样本中VEGF和endostatin的蛋白表达.设空白对照组10只,同时于40只小鼠右肢腋窝皮下接种Lewis瘤细胞,随机分为模型组、连翘苷低剂量组、连翘苷中剂量组和连翘苷高剂量组,每组10只.模型组每天1次灌胃等体积无菌水;连翘苷低、中剂量组每天灌胃5、10 g/kg连翘苷1次;高剂量组每天灌胃10 g/kg连翘苷2次.给药20 d后取肺部组织进行HE染色和免疫组化染色检测肿瘤组织形态学与肺部组织中VEGF和endostatin的蛋白表达.结果:临床样本中,与正常组织和癌旁组织相比,肺癌组织中的VEGF呈高表达,endostatin呈低表达.连翘苷随剂量增加可显著减少Lewis肺癌小鼠肿瘤体积和瘤组织密度;给予不同剂量连翘苷后,VEGF在肺癌组织中表达显著低于模型对照组,而endostatin表达则明显高于模型对照组.结论:连翘苷通过下调VEGF的表达、上调endostatin的表达而发挥抑制肺部肿瘤发展的作用.

大麻素受体二聚化及其激活机理

视网膜感光细胞退变过程中内层神经元结构和功能的变化

一种改良的间歇性低氧细胞模型方法

目的:研制细胞氧舱,建立间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)细胞模型并进行验证.方法:定制细胞实验舱和空气模拟对照舱,根据氧分压-时间曲线设计间歇低氧模式.将人肺腺癌细胞A549随机分为正常对照(C on)组、间歇低氧6 h(6IH)组、间歇低氧9 h(9IH)组、空气模拟对照6 h(6AC)组、空气模拟对照9 h(9AC)组、持续低氧4 h(4SH)组、持续低氧6 h(6SH)组.暴露结束后光镜下观察细胞形态改变,real-time PCR、免疫组化法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的mRNA和蛋白表达变化.结果:该模型间歇低氧模式为5％ O2 60 min-20％O2 30 min,6个循环.与Con组比较,6AC、9AC组为原本细胞形态,6IH、9IH和6SH组部分细胞出现突起、变圆,胞质中出现较多黑色颗粒,细胞边界模糊,而4SH组未见明显异常.与6IH组比较,9IH组HIF-1α的mRNA和蛋白表达量明显增加(P＜0.05);6IH和9IH组HIF-1α的mRNA和蛋白分别高于4SH和6SH组(P＜0.05);6AC、9AC组与Con组比较差异不显著.结论:5％O260 min-20％ O2 30 min的间歇性低氧-复氧细胞模式能模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征病理生理过程,是研究该疾病较理想的细胞模型.