正天丸对偏头痛大鼠三叉神经节P2X3受体表达的影响

目的:探讨正天丸对偏头痛大鼠三叉神经节P2X3受体表达的影响.方法:SD大鼠随机分为对照组、偏头痛组、正天丸组和抑制剂(A-317491)组.给药7d后,偏头痛组、正天丸组和抑制剂组硝酸甘油(10 mg/kg)皮下注射建立偏头痛大鼠模型,对照组注射等量生理盐水.观察各组大鼠行为学表现,造模4h后取材,采用免疫荧光、Western blot和实时荧光定量PCR方法观察各组大鼠三叉神经节中P2X3受体表达的变化.结果:造模后5 min左右各组均出现挠头、爬笼等行为学表现,对照组大鼠仅开始30 min内出现挠头和爬笼现象,无耳红表现,大约2h后正天丸组和抑制剂组头痛行为学表现停止,偏头痛组大鼠在造模后3h左右停止.偏头痛组和对照组相比较,大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)中P2X3受体蛋白和mRNA表达均明显升高(P＜0.05);正天丸组大鼠TG中P2X3受体蛋白和mRNA表达均明显低于偏头痛组(P＜0.01);正天丸组和抑制剂组相比,大鼠TG中P2X3受体蛋白和mRNA表达无明显差异.结论:正天丸可抑制偏头痛发作时TG中P2X3受体的过表达,从而发挥抗偏头痛的作用.

应用微阵列芯片分析糖尿病大鼠下肢动脉硬化miRNAs差异表达谱

目的:通过建立糖尿病大鼠模型,检测糖尿病大鼠动脉硬化下肢与糖尿病大鼠无动脉硬化下肢的动脉组织中微小RNAs(miRNAs)的差异表达情况,探究异常表达的miRNAs参与糖尿病大鼠下肢动脉硬化可能的分子机制.方法:选取建模成功的患有糖尿病下肢动脉硬化和患有糖尿病但无下肢动脉硬化的大鼠,取出下肢动脉组织,分别提取总的miRNAs,用miRNAs微阵列芯片进行杂交检测,经过芯片扫描和数据分析,再用RT-qPCR验证芯片的扫描分析结果,终获得糖尿病大鼠下肢动脉硬化的miRNAs差异表达谱.结果:筛选出10个与糖尿病大鼠下肢动脉硬化有关的miRNAs,即rno-miR-206-3p、rno-miR-133a-5p、rno-miR-133b-3p、rno-miR-133a-3p、rno-miR-325-5p、rno-miR-675-3p、rno-miR-411-5p、rno-miR-329-3p、rno-miR-335和rno-miR-126a-3p,这10个异常表达的miRNAs都上调.RT-qPCR证实,其中9个miRNAs与芯片检查结果一致,仅仅rno-miR-335的PCR检测结果与基因芯片检测结果相反,表达下调.结论:有一群miRNAs在糖尿病大鼠下肢动脉硬化中起着重要作用,其表达过程很可能影响着动脉硬化的进程.

螺内酯对实验性矽肺小鼠的干预研究

目的:探讨螺内酯(spirolactone,SPI)在实验性小鼠矽肺病理进展中的作用及机制.方法:将120只雄性C57 BL/6小鼠(18 ～20 g)随机分为生理盐水组(NS组)、石英组(quartz组)、石英+生理盐水组(quartz+NS组)和石英+螺内酯组(quartz+ SPI组),经口咽吸入石英混悬液建立实验性小鼠矽肺模型;quartz+ SPI组及quartz+ NS组每天分别经灌胃给予螺内酯10 mg/kg或等体积的生理盐水.术后3d、14 d和28 d处死小鼠,行常规支气管肺泡灌洗术,回收支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行细胞分类和计数;采用ELISA法检测BALF上清中转化生长因子β1(TGF-β1)的含量;采用HE染色、Masson染色和免疫荧光染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度;采用RT-qPCR检测各组肺组织中胶原Ⅰ(Col Ⅰ)、胶原Ⅲ(Col Ⅲ)及TGF-β1的mRNA表达水平.结果:经口咽吸入石英后,小鼠肺组织经历了典型的急性炎症期和纤维化期改变,给予SPI干预后的小鼠肺组织炎症反应程度相比于quartz+ NS组减轻(P＜0.05).给予螺内酯干预后,在第3天小鼠肺组织TGF-β1的mRNA表达量显著下调(P＜0.01),BALF中TGF-β1的含量也显著减少(P＜0.01).到第28天,quartz+ SPI组小鼠肺组织Col Ⅰ、Col Ⅲ的mRNA表达量明显低于quartz+ NS组(P＜0.05).结论:SPI可能通过调控TGF-β1的mRNA表达,减少TGF-β1蛋白的分泌,从而改善石英导致的早期急性炎症反应,并在纤维化期减轻了Col Ⅰ和Col Ⅲ的mRNA表达,抑制了纤维化的进展.

损伤性C类初级感觉神经元膜上唾液酸对其兴奋性的影响

目的:研究坐骨神经损伤后,大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)C类初级感觉神经元膜表面唾液酸含量变化对其电生理特性的影响.方法:制作大鼠慢性压迫性神经损伤(chronic constriction injury,CCI)痛觉模型,以正常大鼠为对照,采用胞内电生理记录法检测损伤及正常C类神经元的电生理特性,随后用Ca2+去中和损伤及正常C类神经元膜表面唾液酸所带负电荷或用唾液酸酶(neuraminidase,NA)分解膜表面唾液酸,观察电生理特性的变化.结果:损伤性C类神经元的静息电位(rest potential,RP)较正常C类神经元移向去极化方向,诱发动作电位(action potential,AP)发生率增加,所需阈强度减小,兴奋性增加;使用Ca2+和唾液酸酶使损伤性C类神经元膜电位向超极化方向移动,诱发AP所需阈强度增加,兴奋性降低.而Ca2+和唾液酸酶对正常C类神经元的电生理特性及兴奋性无影响.结论:损伤C类神经元膜表面唾液酸含量增加,导致其RP去极化且兴奋性增加.

PTEN、 VEGF、 COX-2与JAK2 V617F突变阳性骨髓增殖性肿瘤血管新生

目的:观察PTEN、VEGF、COX-2在JAK2 V617F突变阳性骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者骨髓中的表达与血管新生之间的相互关系.方法:收集保定市第一医院住院及门诊42例JAK2V617F阳性的MPN患者(初治组27例,治疗组15例),其中原发性血小板增多症(ET)17例,真性红细胞增多症(PV) 10例,原发性骨髓纤维化(PMF) 15例;此外,选取10例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者作为对照.Real-time PCR检测突变型与野生型JAK2比值.免疫组化检测患者及对照骨髓病理切片p-JAK2、PTEN、VEGF、COX-2的蛋白水平及CD105标记的微血管密度(MVD).结果:初治患者p-JAK2 、VEGF 、COX-2及MVD水平明显高于对照组,而PTEN表达水平明显低于对照组.治疗组患者p-JAK2 、VEGF、COX-2及MVD的水平明显低于初治组,但PTEN表达水平高于初治组.JAK2V617F突变量与VEGF、COX-2及MVD呈正相关(P＜0.05).PTEN与VEGF及MVD负相关(P＜0.05).JAK2突变型与野生型比值≥0.5的患者p-JAK2、VEGF、COX-2及MVD均明显高于比值＜0.5的患者,而PTEN与上述相反.结论:PTEN、VEGF、COX-2与JAK2 V617F共同参与了骨髓增殖性肿瘤患者血管新生.

miRNA-7介导Bax和Bcl-2表达对人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的影响

目的:研究过表达微小RNA-7(microRNA-7,miRNA-7)诱导人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)CNE-1细胞凋亡及其与Bax和Bcl-2表达之间的关联情况.方法:体外利用脂质体Lipofectamine 2000将miRNA-7模拟物转染到人鼻咽癌CNE-1细胞中;采用real-time PCR法检测转染后各实验组细胞中miRNA-7的相对表达情况;CCK-8法检测各组细胞活力的改变;在荧光显微镜下利用Hoechst 33258荧光染色法观察转染后细胞的凋亡;real-time PCR法检测Bax和Bcl-2的mRNA表达水平;Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平.结果:Real-time PCR结果表明,转染miRNA-7模拟物的CNE-1细胞中其miRNA-7的相对表达水平明显高于无关序列组和空白对照组(P＜0.01);转染miRNA-7模拟物后,CNE-1细胞的活力明显下降(P＜0.01);Hoechst 33258染色检测可发现典型的凋亡细胞核形态学变化;real-time PCR及Western blot结果显示,转染miRNA-7模拟物的CNE-1细胞中Bax的mRNA及蛋白显著上调(P＜0.01),而Bcl-2的mRNA及蛋白则显著下调(P＜0.01).结论:过表达miRNA-7可以通过调节Bax/Bcl-2之间的比例关系来抑制鼻咽癌CNE-1细胞的恶性生长,并促进细胞凋亡.

低毒性磁性纳米颗粒搭载喜树碱的抗肺癌作用

目的:研究磁性纳米材料搭载喜树碱(MNC-Camp)的制备、药物释放、细胞吸收及抗肺癌作用.方法:紫外分光光度法监测MNC-Camp的药物释放能力,普鲁兰染色法检测A549肺癌细胞对磁性纳米材料的吸收能力的影响,利用MTT法测定游离Camp和MNC-Camp对A549细胞株和白细胞生长的抑制能力,细胞侵袭法分析游离Camp和MNC-Camp对A549细胞转移能力的影响,酶标仪吸光度法检测细胞凋亡蛋白caspase-3的活性.结果:MNC-Camp的药物释放随着时间的增加而增加,A549肺癌细胞对磁性纳米材料具有良好的吸收能力;与MNC组比较,游离Camp和MNC-Camp能够使A549细胞生长能力降低,IC50分别为(35.14±3.21)和(7.16±2.54)mg/L,且A549细胞转移的数目下降,凋亡蛋白caspase-3活性增加,以上作用效果MNC-Camp明显强于游离Camp(P＜0.05).结论:磁性纳米材料搭载喜树碱比游离的喜树碱更能显著降低人肺癌A549细胞的生长和转移能力,提示磁性纳米材料能增强喜树碱的抗肺癌作用.

PPARs介导脊髓损伤修复的研究进展

食管鳞状细胞癌基因组改变的研究进展