尾加压素Ⅱ通过ERK1/2途径诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和上调Egr-1表达

目的:研究不同浓度尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体拮抗剂urantide对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响,探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径及早期生长反应因子1(Egr-1)在UⅡ诱导大鼠PASMCs增殖中的作用.方法:以组织贴块法原代培养大鼠PASMCs:(1)采用BrdU掺入实验测定不同浓度(1μmol/L、0.1 μmol/L和0.01 μmol/L)UⅡ及其受体拮抗剂对大鼠PASMCs增殖的影响;(2)采用real-time PCR检测UⅡ及其受体拮抗剂对细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、应激活化蛋白激酶(SAPK)、p38 MAPK及Egr-1mRNA表达的影响;(3)采用Western blotting检测UⅡ、urantide及ERK1/2抑制剂PD98059对PASMCs磷酸化ERK1/2 (p-ERK1/2)、p-SAPK、p-p38 MAPK和Egr-1蛋白表达的影响.结果:(1)UⅡ在一定浓度范围(1μmol/L、0.1 μmol/L和0.01 μmol/L)呈浓度依赖性地促进肺动脉平滑肌细胞增殖(P＜0.01或P＜0.05),这种增殖作用可被urantide拮抗(P＜0.05);(2)UⅡ上调ERK1/2、SAPK及Egr-1 mRNA表达(P＜0.01或P＜0.05),PD98059和(或)urantide可拮抗UⅡ诱导的ERK1/2、SAPK和Egr-1 mRNA的表达(P＜0.01或P＜0.05),但对p-p38 MAPK无影响;(3)UⅡ可增加PASMCs p-ERK1/2、p-SAPK及Egr-1蛋白表达(P＜0.01或P＜0.05),urantide及PD98059可拮抗UⅡ诱导的p-ERK1/2、p-SAPK和Egr-1蛋白表达(P＜0.01,P＜0.05).结论:UⅡ可能通过ERK1/2途径诱导PASMCs增殖和上调Egr-1表达,Egr-1可能通过激活ERK1/2途径参与了PASMCs的增殖.

Rock可能通过抑制PI3K/Akt通路促进缺氧诱导的心肌细胞凋亡

目的:通过建立体外心肌细胞缺氧模型,观察Rho相关的卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)在不同缺氧时点的表达,探讨其在心肌细胞凋亡中的作用.方法:(1)原代培养SD乳鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定.(2)利用缺氧液和缺氧盒,建立心肌细胞缺氧模型,分别缺氧培养1h、3h、6h、9h,以正常氧培养的心肌细胞作为对照.(3)用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,MTF检测细胞存活率,Western blotting检测ROCK-1、ROCK-2、caspase-3活化片段、PI3K和p-PI3K的表达情况.结果:(1)缺氧1h、3h、6h、9h后,心肌细胞凋亡率分别为(8.76±1.51)％、(15.36±2.34)％、(26.50±3.43)％、(41.96 ±4.22)％,与对照组[2.60±0.34)％]比较均有显著差异(P＜0.01);存活率分别为(93.20 ±4.12)％、(86.14±3.10)％、(75.53±7.25)％、(60.21±6.75)％,与对照组[(97.60±1.12)％]比较均有显著差异(P＜0.05).(2) ROCK-1和ROCK-2缺氧1h即开始升高,3～6h表达达高峰,9h开始回落,且均明显高于对照组(P＜0.05).(3)Caspase-3在缺氧1h开始逐渐活化,在随后观察的时点内持续处于活化状态,与对照组比较均有显著差异(P＜0.01).(4) p-PI3K在缺氧1h后开始升高,3h达高峰,6h开始回落,9h表达基本消失,各时点比较差别有统计学意义(P＜0.05).结论:ROCK-1和ROCK-2在缺氧后表达逐渐升高,与细胞凋亡的过程相一致.ROCK可能通过抑制p-PI3K信号途径,促进缺氧心肌细胞凋亡.

用阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征动物模型研究vaspin与胰岛素信号通路的相关性

目的:通过建立阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)大鼠模型,检测其vaspin的血清学以及mRNA、蛋白水平的表达特点,阐述脂肪因子vaspin在OSAHS发生过程中的作用机制.方法:用慢性间歇低氧(CIH)模拟OSAHS.健康雄性Wistar大鼠22只,随即分为空白对照(control)组和CIH组.每天将CIH组大鼠放入间歇性低氧舱内,共8周.实验前后应用大鼠尾压测量仪测量血压.实验结束后处死动物,检测空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、vaspin和脂联素.应用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法(Western blotting)检测vaspin mRNA以及vaspin、Akt、p-Akt蛋白水平.结果:(1)慢性间歇性缺氧下血气结果:缺氧低点时大鼠动脉血氧分压23.4 mmHg～32.8 mmHg,低血氧饱和度范围为40.8％～65.9％,恢复舱内氧浓度至21％后,测得动脉血氧分压为74.5 mmHg～102.9 mmHg,动脉血氧饱和度为93.8％～ 98.9％.(2)实验前后2组大鼠之间比较体重均无显著差异;血压变化实验前2组大鼠尾动脉收缩压无显著差异,实验后2组大鼠之间比较,CIH组大鼠收缩压明显高于正常对照组.CIH组和control组比较,FPG、FINS、TG和TC均升高,差别有统计学意义(P＜0.05).(3) Pearson相关分析显示,血清vaspin水平与FPG、FINS、HOMA-IR和TC呈正相关.(4) CIH组大鼠脂肪组织的vaspin mRNA和蛋白质的表达水平均增加,差别有统计学意义(P＜0.01);Akt mRNA表达水平无明显改变,但CIH组的p-Akt蛋白水平较control组降低.结论:OSAHS动物模型中vaspin;水平的改变可能在胰岛素抵抗发生过程中具有一定作用.

脑缺血再灌注损伤后血脑屏障结构与功能的变化及丁苯酞预处理的干预作用

目的:探讨脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠血脑屏障结构与功能的变化,以及丁苯酞(NBP)预处理对其的干预作用.方法:120只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(IR组)、NBP预处理组低剂量组(NBP Ⅰ组)、NBP预处理组中剂量组(NBPⅡ组)和NBP预处理组高剂量组(NBPⅢ组),每组24只.采用线栓法制作CIRI模型,缺血2h再灌注24h后测定脑含水量和伊文思蓝(EB)含量,透射电镜下观察血脑屏障病理形态学变化,分别采用免疫组化法和real-time PCR法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白和mRNA的表达.结果:脑缺血再灌注损伤后脑水肿加重,EB含量明显增加,血脑屏障损伤严重,MMP-9表达上调(均P＜0.01);NBP预处理后能明显减轻脑水肿,减少EB含量,减轻血脑屏障损伤,降低MMP-9的表达(均P＜0.01);NBPⅡ、Ⅲ组较NBPⅠ组改变更为明显(P＜0.05),Ⅱ、Ⅲ组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:丁苯酞预处理脑缺血再灌注损伤大鼠后,可降低MMP-9的表达,减轻血脑屏障损伤程度,发挥预防性保护作用.

艾塞那肽对新诊断2型糖尿病患者骨代谢的影响

目的:观察24周胰高糖素样肽1受体激动剂艾塞那肽治疗对新诊断2型糖尿病患者骨密度及骨转化标志物的影响.方法:20名新诊断2型糖尿病患者,予以艾塞那肽治疗24周.治疗前后检测体重、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(PBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS)、骨密度、体脂分布和空腹血清中的骨转化标志物水平,包括骨形成标志物骨钙素(OC)、骨吸收标志物Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAcP5b).结果:新诊断2型糖尿病患者经过24周艾塞那肽治疗后,FPG、PBG和HbA1c降低(P＜0.01),HOMA胰岛素抵抗指数改善(P＜0.05),体重及体脂含量下降(P＜0.05);虽然患者OC水平下降,骨吸收标志物(CTX和TRAcP5b)水平上升,骨密度增加,但均未达统计学意义.结论:24周艾塞那肽治疗改善新诊断2型糖尿病患者的血糖和胰岛素抵抗,使体重及体脂含量下降,但尚未对患者骨密度及骨转化标志物产生影响.

晚期糖基化终产物改变心肌细胞自发钙火花形态学

目的:本研究旨在探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对心肌细胞雷诺丁受体(RyR)活性的影响及钙调控作用,从而阐明糖尿病心肌病心脏功能障碍的潜在机制.方法:通过激光共聚焦显微成像技术在培养的乳鼠心肌细胞观察自发钙火花发放频率以及钙火花的形态.结果:与对照组相比,AGEs大幅度增加钙火花的发放频率,其中10 mg/L AGEs组增加48％(P＜0.01),50 mg/L组AGEs增加200％ (P ＜0.01);而150 mg/L组AGEs组增加110％ (P＜0.01).AGEs改变自发钙火花的形态、降低钙火花的幅度、宽度和钙火花持续时间并增加心肌细胞静息期钙离子水平.结论:AGEs引起自发钙火花的发放频率,从而增强钙火花介导的肌浆网Ca2+漏流,增加心肌细胞静息期钙离子水平,这可能是引起糖尿病性心肌病收缩功能障碍的重要原因.

金属硫蛋白与线粒体功能调节

植入式遥测技术偶测血压方法探究

目的:建立植入式遥测技术偶测血压方法,提高植入子使用寿命和效率.方法:以自发性高血压大鼠(SHR)为动物模型,采用植入式遥测仪记录SHR连续多天24h血压等生理参数,分别以30 min、lh和3h为间隔时段,计算各时段的血压均值,观察血压均值动态变化的特征,并采用相似因子比较法,将各时段的血压均值与24h血压均值进行比较和分析.结果:SHR在连续监测的24h内,基础血压随时间一直在波动变化;经比较研究发现,在20:00～23:00时段内获取的血压均值与24h血压均值较为相似,表现出较高的稳定性.进一步的药效学实验证明,在该时段内获取的血压均值曲线与24 h血压均值曲线相似,相似因子达到77.8.结论:植入式遥测仪测定SHR血压时,可选择在20:00 ～23:00时间段内开机,此时段内获取的血压均值稳定、重复性好,能代表24h连续开机获取的血压均值.本研究是对目前植入式遥测技术连续开机测定血压方法的有力补充,对于提高植入子使用寿命和效率,开展长期药效学研究具有重要意义.

雌性小鼠骨髓移植给雄性小鼠后内源性骨髓细胞残存状态的研究

目的:以雌性小鼠骨髓移植给雄性小鼠的方法,通过检测雄性小鼠血细胞的Y染色体来明确内源性骨髓细胞的残存状态.方法:将雌性或雄性C57BL/6小鼠作为受体,实验组用[137Cs]照射,6h后每只经尾静脉注射供体小鼠骨髓细胞1×107.统计骨髓移植后14 d动物的存活率,并通过眶静脉采血观察外周血白细胞数量的变化,检测受体雄性小鼠体内Y染色体基因水平的变化以明确骨髓移植的效果.结果:分别用1 000、950和900rad的照射剂量对受体小鼠进行照射后将供体小鼠的骨髓移植到受体小鼠体内,1 000和950 rad剂量时雌性受体小鼠可迅速恢复造血功能,而雄性受体小鼠则仅有48％的存活率.900 rad照射剂量骨髓移植后,雄性受体小鼠迅速恢复了造血功能,13 d后外周血白细胞计数基本恢复正常.移植后的雄性受体小鼠在5周内已检测不到外周血细胞Y染色体基因,表明雄性受体小鼠的骨髓被完全破坏,雌性供体小鼠的骨髓可完全替代受体雄性小鼠的骨髓并且发挥造血功能.结论:在照射剂量900 rad照射后,雄性小鼠可以作为骨髓移植受体,为将来应用雄性小鼠作为骨髓移植受体动物开展有关心血管疾病的研究奠定了实验基础.