ACTL8的表达与乳腺癌临床病理特征及预后的关系

目的:探讨肌动蛋白样蛋向8(ACTL8)在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌临床病理特征及预后的关系.方法:采用Western blot方法检测人正常乳腺上皮细胞株MCF-10A和5种乳腺癌细胞株中ACTL8蛋白的表达;采用免疫组织化学方法检测6例乳腺癌标本及其对应的癌旁组织中ACTL8蛋白的表达;收集TCGA乳腺癌数据集,将488例乳腺标本纳入,分析ACTL8的mRNA表达水平与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系.结果:ACTL8蛋白在乳腺癌细胞株T47D、BT474、HCC1954和SKBR3中表达显著高于乳腺上皮细胞株MCF-1 0A;ACTL8蛋白在乳腺癌组织中的表达也显著高于癌旁组织;ACTL8 mRNA表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、临床TNM分期和淋巴结转移相关(P＜0.05).ACTL8 mRNA高表达的乳腺癌患者5年内生存率低、预后差.结论:ACTL8在乳腺癌组织中高表达并与乳腺癌临床病理特征及预后密切相关,提示ACTL8可作为判断乳腺癌预后的标志物.

通心络对新西兰兔动脉粥样硬化血小板活化的影响

目的:探讨通心络对动脉粥样硬化新西兰兔血小板的保护作用.方法:SPF级新西兰家兔42只,雌雄各半,随机分为7组:正常组,模型组,通心络超微粉低、中、高剂量组(0.15、0.3和0.6g·kg-1 ·d-1),阿托伐他汀组(2.5 mg·kg-1 ·d-1),阿司匹林组(12.5 mg·kg-1·d-1).正常组给予普通饲料12周,模型组给予高脂饮食12周建立动脉粥样硬化模型,其余各组在给予高脂饲料的同时按剂量连续灌胃给药12周,饮水不限.末次给药后禁食12 h取材.取全血进行血常规检测,取血清、血浆分别进行血脂水平、血小板因子4(PF4)和可溶性CD62P(sCD62P)检测,流式细胞术检测血小板钙离子,电镜观察血小板超微结构,光镜下进行动脉粥样组织病理学观察.结果:与正常组比较,模型组新西兰兔血小板计数及血小板平均体积明显增加,血脂胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆同醇(LDL-C)水平显著增高,血清PF4、sCD62P及血小板钙离子浓度表达明显增加(P＜0.05).与模型组相比,各用药组均不同程度地降低血小板计数和血小板平均体积,血小板表达PF4、sCD62P水平及血小板内钙离子浓度明显降低,通心络低、中、高剂量组和阿托伐他汀组降低血清TC、TG和LDL-C水平(P＜0.05);电镜观察见正常组血小板形态规则,细胞器分布均匀,模型组血小板形态畸形,伪足明显,α颗粒及致密颗粒减少,胞浆内空泡增多,提示血小板活化状态,用药组均不同程度改善血小板形态,增加α颗粒及致密颗粒数量,胞质损伤减轻.组织病理学观察正常组内膜光滑完整,模型组内膜显著增厚,泡沫细胞大量聚集,斑块形成,用药组通心络高剂量组内膜增厚显著降低,泡沫细胞明显减少,斑块形成不明显,其它用药组均不同程度改善内膜增厚,降低泡沫细胞含量.结论:通心络可显著抑制动脉粥样硬化过程中血小板的活化状态,对于延缓动脉粥样硬化血栓形成具有重要临床治疗价值.

褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响.方法:将HSC-T6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养HSC-T6细胞.采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对HSC-T6细胞活力变化的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot法分别检测Bcl-2和Bax的蛋白表达.结果:与空白对照组相比,CCK-8检测的结果表明,褐藻素在一定浓度范围内(15 ～ 75 μmol/L)内能显著抑制HSC-T6细胞的活力(P＜0.01),呈剂量和时间依赖性.流式细胞术结果显示,24 h后高浓度(60 μmol/L)组对HSC-T6细胞周期影响的效果显著(P＜0.01),G1期比例显著下降(P＜0.01),G2期和S期的比例显著升高(P＜0.01),48 h后低浓度(15 μmol/L)和中浓度(30 μmol/L)组对HSC-T6细胞周期的阻滞作用增强,呈剂量依赖性(P＜0.05);低、中、高浓度组早期凋亡率和总凋亡率都显著升高,呈剂量依赖性(P＜0.05).蛋白印迹法实验结果表明,低、中、高浓度组Bax的蛋白表达显著上调,中、高浓度组Bcl-2的蛋白表达显著下调(P＜0.05).结论:褐藻素可以通过使细胞周期阻滞于S期和G2期而抑制HSC-T6细胞生长;同时能通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而诱导HSC-T6细胞凋亡.

NMDA受体亚单位NR2D与MOCA相互作用的鉴定

目的:寻找N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚单位NR2D的结合蛋白,为探讨NR2D在视网膜兴奋性毒性损伤中的作用提供依据.方法:构建了包含NR2D细胞内C末端的cDNA片段为诱饵质粒,应用酵母双杂交技术筛选小鼠脑cDNA文库,并用免疫共沉淀实验进一步验证NR2D与其结合蛋白之间的相互作用,免疫荧光显微镜观察NR2D和目的蛋白在视网膜中的共表达.结果:酵母双杂交筛选到细胞黏附修饰因子(modifier of cell adhesion,MOCA)为NR2D可能的相互作用蛋白,两者在视网膜有共定位.结论:MOCA能特异结合谷氨酸受体NR2D,这为进一步研究谷氨酸的兴奋性毒性参与视网膜退行性变的机制奠定了实验基础.

吡格列酮对前脂肪细胞分化及GILZ蛋白表达的影响

目的:探讨吡格列酮在3T3-L1前脂肪细胞分化及糖皮质激素诱导亮氨酸拉链(GILZ)蛋白表达调节方面的作用.方法:形态观察3T3-L1细胞分化过程,不同浓度吡格列酮(1×10-4mmol/L～1×10-2mmol/L)处理细胞48 h,然后于分化的第2、4、6天用油红O染色测定细胞甘油三酯相对含量,实时荧光定量PCR法检测过氧化物增殖活化受体(PPAR) γ2和脂蛋白酶(LPL)的mRNA表达.不同浓度药物处理细胞48 h后,Western blot检测GILZ蛋白表达.结果:油红O法显示甘油三酯相对含量随药物处理浓度的增加而增加,与对照组比,1×10-3mmol/L和1×10-2mmol/L组甘油三酯含量显著性增加(P＜0.05).实时荧光定量PCR检测显示PPARγ2、LPL的mRNA表达也是随着药物处理浓度的增加而增加.与对照组比,吡格列酮高于1×10-3mmol/L浓度时,PPARγ2、LPL的mRNA表达显著性增加(P＜0.01).Western blot显示GILZ蛋白表达随着药物处理浓度的增加而降低.结论:吡格列酮可下调GILZ表达,上调PPARγ2及下游LPL的表达.

盐皮质激素受体阻断剂对SiO2诱导的肺巨噬细胞表型偏移的调节

目的:研究盐皮质受体阻断剂螺内酯(spirolactone,SPI)对二氧化硅(SiO2)诱导的肺巨噬细胞表型偏移的影响.方法:将60只C57BL/6小鼠随机分为生理盐水(NS)组、SiO2组、SPI治疗组(SiO2+ SPI组)及溶剂对照组(SiO2+NS组),经口咽吸入SiO2悬浊液(40 mg/kg)建立矽肺模型,对照组给予等量生理盐水,SiO2+ SPI组在造模后每天经口灌胃给予SPI(10 mg·kg-1·d-1),SiO2+NS组以相同方式给予等量生理盐水.造模后3d、14d、28 d取材,进行肺泡灌洗,取灌洗液细胞进行定量、分类计数及流式细胞术分析,右下肺叶用酶解法制成单细胞悬液行流式细胞术分析.结果:与SiO2组相比,SPI治疗可以明显降低SiO2干预后3d、14 d支气管肺泡灌洗液总细胞数及巨噬细胞、中性粒细胞及淋巴细胞数.SiO2干预后14 d、28 d,肺泡巨噬细胞和间质巨噬细胞由M1表型向M2表型偏移,SPI治疗可以有效逆转SiO2诱导的巨噬细胞表型偏移.结论:SPI可以减轻SiO2导致的肺泡炎症细胞浸润,可能是通过逆转SiO2诱导的巨噬细胞表型偏移实现的.

长链非编码RNA linc-STXBP5-1在宫颈癌中的表达及其干预效应分析

目的:检测长链非编码RNA linc-STXBP5-1在宫颈癌组织中的表达及意义,细胞学水平分析其对宫颈癌细胞活力及侵袭力的影响.方法:Real-time PCR检测48例宫颈鳞癌组织、9例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ-Ⅲ、20例CIN Ⅰ和20例正常宫颈组织linc-STXBP5-1的表达水平;分析linc-STXBP5-1在不同病理级别和临床分期宫颈鳞癌中的表达情况;linc-STXBPS-1 siRNA干预HPV16(+)SiHa宫颈癌细胞后,检测细胞活力;Transwell侵袭实验检测沉默linc-STXBP5-1后SiHa宫颈癌细胞的侵袭能力;后检测linc-STXBP5-1在宫颈癌细胞胞浆及胞核的定位表达.结果:宫颈鳞癌及CINⅡ-Ⅲ组织linc-STXBP5-1表达明显高于CIN Ⅰ及正常宫颈组织(P＜0.05);宫颈鳞癌与CINⅡ-Ⅲ之间以及CIN Ⅰ与正常宫颈组织间linc-STXBP5-1表达差异无统计学显著性;linc-STXBP5-1表达与宫颈癌临床病理分析显示,病理分级属于G3的宫颈鳞癌组织linc-STXBP5-1的表达量明显高于G1、G2组织(P＜0.05);临床分期中属于Ⅲ和Ⅳ期的宫颈鳞癌组织也明显高于Ⅰ和Ⅱ期(P＜ 0.05);linc-STXBP5-1表达水平与不同年龄、肿瘤直径和肿瘤类型未见显著相关性.利用siRNA下调SiHa宫颈癌细胞linc-STXBP5-1表达后,细胞活力和侵袭能力显著降低;定位表达分析提示linc-STXBP5-1主要表达于宫颈癌细胞的细胞核中,仅有少许表达于细胞浆中.结论:肿瘤组织上调表达的linc-STXBP5-1可作为促癌基因参与宫颈癌的发生发展过程.

内质网应激中IRE1级联反应对动脉粥样硬化的作用

Agrin在神经系统损伤后修复中的作用