丁苯酞可减轻缺氧缺糖条件下血管内皮细胞的线粒体损伤

目的:探讨丁苯酞(DL-3-n-butylphthalide,NBP)对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)条件下内皮细胞中线粒体的保护作用及相关机制.方法:对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)予以OGD损伤,使用MitoTracker Green对线粒体进行定位并观察线粒体形态的变化.使用MitoSOX Red标记线粒体内的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),免疫荧光法观察NBP对OGD条件下细胞线粒体内ROS产生的影响.使用SOD活性试剂盒检测NBP对OGD条件下HUVECs内SOD活性的影响.结果:NBP明显减少了OGD诱导后内皮细胞中线粒体的断裂,抑制了线粒体内ROS的生成,提高了OGD诱导后细胞内SOD的活性.结论:NBP可能是通过保护OGD条件下内皮细胞线粒体的功能和增加细胞内ROS清除,减少线粒体内ROS生成,终减轻了线粒体损伤.

经皮三叉神经电刺激减轻戊四氮诱导的大鼠癫痫发作并抑制海马内IL-1β和TNF-α的表达

目的:探讨经皮三叉神经电刺激预处理对戊四氮(PTZ)诱发的急性癫痫大鼠的行为学及海马致痫细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法:动物随机分为对照组、致痫组(PTZ组)和经皮三叉神经电刺激组,分别给予7d、14 d和28 d的假刺激和三叉神经电刺激预处理后,腹腔注射PTZ建立急性癫痫动物模型,观察给药后大鼠癫痫行为学表现,并分别用免疫组织化学方法及ELISA方法对海马IL-1β、TNF-α进行检测.结果:经皮三叉神经电刺激可以明显减轻大鼠的痫性发作级别,减少癫痫发作持续的时间(P＜0.05),且海马细胞因子IL-1β及TNF-α的表达明显少于PTZ组(P＜0.05或P＜0.01).结论:经皮三叉神经电刺激预处理在PTZ急性点燃癫痫大鼠模型中不仅具有抗惊厥作用,还可以减少海马致痫细胞因子IL-1β及TNF-α的表达,可能为癫痫的防治带来新的策略.

趋化因子CXCL14在结直肠癌组织中的表达及其临床相关性研究

目的:分析趋化因子CXCL14在结直肠癌组织中的表达,并探讨其表达的临床意义.方法:采用实时荧光定量PCR和免疫组化对40例结直肠癌及癌旁正常组织CXCL14的表达进行检测.Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型评估CXCL14在结直肠癌组织中表达的临床意义.结果:CXCL14 mRNA和蛋白水平在结直肠癌组织中的表达较正常组织明显降低(P＜0.05).临床相关性分析表明,CXCL14表达的下调与肿瘤淋巴结转移、发生部位以及临床病理分期有关(P＜0.05).Kaplan-Meier生存分析显示,不同CXCL14蛋白表达水平的患者,生存时间具有显著差异(P＜0.01).结论:CXCL14可能参与结直肠癌的发生、发展过程.

5型腺病毒载体对人T淋巴细胞的转染及细胞毒性分析

目的:利用5型腺病毒载体转染人T淋巴细胞,对其转染T淋巴细胞的效率以及细胞毒性进行分析.方法:选取T淋巴瘤Jurkat细胞及原代T细胞,腺病毒按感染复数(multiplicity of infection,MOI)为20、50、100、200和400对其转染,转染48 h后利用流式细胞术检测转染效率;选取腺病毒转染后的不同时点,利用碘化丙啶染色法分析转染对于细胞周期的影响;利用Annexin V/7-AAD染色法分析转染诱导细胞凋亡情况;利用台盼蓝染色计数法分析转染对活细胞数目的影响.结果:5型腺病毒载体转染T淋巴瘤的效率高,转染效率随着MOI值的增大而增加;CD8+T细胞和CD4+T细胞的转染效率大致相同,T细胞经刺激活化后,CD8+T细胞的转染效率下降;病毒转染未导致明显细胞凋亡;病毒转染对细胞周期与活细胞数目没有显著影响.结论:5型腺病毒载体转染T细胞呈现较低细胞毒性.

黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制

目的:观察黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对糖尿病肾病(DN)肾脏的保护作用及其机制.方法:38只清洁级雄性SD大鼠分成正常组(10只)、模型组(14只)和AS-Ⅳ干预组(14只),用链脲佐菌素造模,成功后1周开始治疗,期间每4周动态观测血糖及尿微量白蛋白,治疗12周后处死大鼠取材及采血,取肾皮质行HE和Masson染色观察,并检测β1整合素、整合素连接激酶(ILK)和α-actinin-4的蛋白表达水平.结果:干预8周末AS-Ⅳ组血糖水平较模型组明显降低(P ＜0.01).干预12周末AS-Ⅳ组与模型组相比,尿微量白蛋白明显下降(P＜0.01),并使因造模引起的β1整合素、ILK和α-actinin-4表达水平的变化产生逆变(P＜0.05).与正常组比较,模型组的β1整合素、ILK和α-actinin-4表达水平均有明显差异(P＜0.05).结论:AS-Ⅳ对DN肾脏有明显保护作用,能降低血糖和尿白蛋白排泄量,改善足细胞黏附功能,从而延缓DN的进展.

雾化吸入灭活草分枝杆菌降低哮喘小鼠核因子κB及细胞间黏附分子1的表达

目的:研究雾化吸人灭活草分枝杆菌对支气管哮喘小鼠气道炎症,以及哮喘肺组织中核因子κB(NF-κB)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的影响,探讨雾化吸入灭活草分枝杆菌防治哮喘的机制.方法:将24只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为3组,每组8只:正常对照组(A)、哮喘模型组(B)和治疗组(C).以鸡卵清蛋白致敏制造小鼠支气管哮喘模型.C组在激发后给予雾化吸入灭活草分枝杆菌治疗5d,每天1次.各组动物处死后提取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF).进行病理HE染色及AB-PAS染色观察气道炎症浸润及黏液分泌情况,并行病理半定量分析.对BALF中炎症细胞进行分类计数.实时荧光定量PCR检测肺组织NF-κB、ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平.结果:治疗组嗜酸性粒细胞比例低于模型组(P＜0.05),气道炎症病变及黏液分泌情况较模型组减轻(P＜0.05,P＜0.01).哮喘模型组的肺组织中NF-κB mRNA含量与正常组相比显著升高(P＜0.01),而治疗组肺组织中的NF-κBmRNA含量明显低于模型组(P＜0.05);模型组的ICAM-1 mRNA水平比正常组高(P＜0.05),但治疗后明显降低(P＜0.01);VCAM-1的mRNA水平在各组间无显著差异.相关性检验发现小鼠肺组织中VCAM-1的mRNA与ICAM-1的mRNA呈明显正相关(r=0.84,P＜0.01),但NF-κB的mRNA与ICAM-1的mRNA、VCAM-1的mRNA无明显相关性(均P＞0.05).结论:雾化吸入草分枝杆菌对支气管哮喘小鼠气道炎症及黏液分泌有抑制作用;NF-κB参与哮喘发病过程,雾化吸入灭活草分枝杆菌降低哮喘小鼠的NF-κB水平.同时雾化吸入灭活草分枝杆菌可降低黏附分子尤其是ICAM-1的表达,是其控制炎症的另一个重要机制.

姜黄素衍生物B06对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用

目的:研究姜黄素衍生物B06对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用及机制.方法:雄性SD大鼠35只,随机均分成5组:正常对照组、高脂组、高脂治疗组、糖尿病组和糖尿病治疗组.采用高脂饮食加链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型.高脂治疗组及糖尿病治疗组用0.2 mg·kg-1·d-1B06灌胃8周.治疗结束后用光镜和透射电镜观察大鼠肝组织的形态学改变,并用Western blotting方法检测肝脏AMP活化蛋白激酶α(AMPKα)和磷酸化A MPKα (p-AMPKα)蛋白的表达.结果:高脂组及糖尿病组大鼠肝脏显示肝细胞脂肪变性、坏死,炎症细胞浸润,纤维组织增生,2型糖尿病大鼠和高脂血症大鼠肝脏组织p-AMPKα表达降低;经B06干预后,糖尿病大鼠和高脂血症大鼠肝脏的形态学损害明显得到改善,且肝脏组织p-AMPKα的表达水平升高(P＜0.05).结论:B06对2型糖尿病大鼠的肝脏具有保护作用,可能与其上调肝脏p-AMPKα蛋白表达有关.

白细胞介素17在狼疮性肾炎小鼠中的表达及抗白细胞介素17抗体的干预作用

目的:探讨白细胞介素17(IL-17)在狼疮性肾炎(LN)小鼠中的表达及抗IL-17抗体的干预作用.方法:11周龄的雌性MRL/lpr小鼠36只随机分为实验组和干预组,另有同龄雌性昆明小鼠18只为对照组.干预组每只小鼠腹腔注射抗小鼠IL-17多克隆抗体20 μg,每2周1次,至实验观察点结束.各组分别于第1次给药后的24 h、14 d及28 d处死6只小鼠.光镜下观察肾脏病理情况,ELISA法检测小鼠血清IL-17的含量,免疫组化法检测肾组织IL-17的表达水平.结果:MRL/lpr小鼠肾小球系膜细胞及基质弥漫增生,肾小管上皮细胞颗粒及空泡变性,灶状萎缩,肾间质淋巴及单核细胞浸润伴纤维化;而干预组肾脏病理改变较实验组为轻.MRL/lpr小鼠的血清IL-17含量在实验组各时点均显著高于对照组(P＜0.05),而在干预组各时点均显著低于实验组(P＜0.05).IL-17在实验组小鼠肾小管上皮细胞中的表达明显增强,在各时点均显著高于对照组(P＜0.05);在干预组,IL-17在各时点的表达均显著低于实验组(P＜0.05).结论:IL-17在MRL/ lpr小鼠血清与肾组织中的表达显著增加,而抗IL-17抗体可通过抑制IL-17的表达而抑制LN的炎症免疫反应,减轻肾脏病理损害.

早期肠内营养对肥胖急性重症胰腺炎患者预后的影响

目的:评估早期肠内营养对肥胖重症急性胰腺炎患者病情发展经过和预后的影响.方法:选择2007年1月至2013年1月间在我院收治的重症急性胰腺炎患者156例,根据患者接受营养方式及体重指数(BMI)分布情况分为A组(BMI＜ 25 kg/m2,常规治疗加延迟的肠内营养,n=107)、B组(BMI ≥25 kg/m2,常规治疗加延迟的肠内营养,n =22)和C组(BMI ≥25 kg/m2,常规治疗加早期肠内营养,n =27),比较3组患者预后评分(Ranson评分和APACHE-Ⅱ评分)、局部并发症、系统并发症及病死率等的差异,并检测3组患者人院24h内血清白细胞介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果:B组患者Ranson评分显著高于A组患者(P＜0.05),B组与C组患者Ranson评分及入院时APACHE-Ⅱ评分无显著差异(P＞0.05).B组患者胰腺坏死、胰腺感染或脓肿和呼吸功能衰竭的的发生率显著高于A组(P＜0.05).通过早期肠内营养干预,C组患者胰腺感染或脓肿和呼吸功能衰竭发生率显著低于B组患者(P＜0.05).B组患者病死率高达36.4％,显著高于A组的6.5％(P＜0.05);而C组患者病死率减至11.1％,显著低于B组患者(P＜0.05).B组患者CRP和TNF-α水平均显著高于A组(P＜0.05),C组患者CRP和TNF-α水平又显著低于B组患者(P＜0.05).结论:早期肠内营养能降低肥胖重症急性胰腺炎患者胰腺感染或脓肿和呼吸功能衰竭的发生率及病死率,显著改善预后,并可减轻炎症因子的表达.

半枝莲黄酮对Aβ25-35引起的大鼠皮层星形胶质细胞NOS、HSP70及apoE异常表达的影响

目的:探讨半枝莲黄酮对Aβ25-35引起大鼠皮层星形胶质细胞一氧化氮合酶(NOS)热休克蛋白70(HSP70)及载脂蛋白E(apoE)蛋白表达异常变化的影响.方法:培养第3代的大鼠星形胶质细胞随机分为空白对照组、模型组和3个剂量药物组,药物组细胞分别加入17.5、35和70 mg/L半枝莲黄酮作用24 h后,模型组和3个剂量药物组均加入Aβ25-35100 μmol/L作用24 h,免疫组化法测定星形胶质细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)蛋白的表达;Western blotting检测星形胶质细胞中HSP70蛋白的表达;RT-PCR测定细胞中apoE mRNA的表达.结果:与空白组相比,模型组eNOS蛋白含量降低60.83％ (P＜0.01),iNOS蛋白含量增加215.03％ (P ＜0.01),HSP70蛋白含量增加166.67％ (P ＜0.01),apoE mR-NA含量增加150.00％ (P＜0.01);半枝莲黄酮17.5、35及70 mg/L能不同程度地提高eNOS蛋白含量73.66％ ～137.77％ (P ＜0.05),降低iNOS蛋白含量19.40％～44.50％(P＜0.01),降低HSP70蛋白含量18.52％ ～49.38％(P＜0.01),降低apoE mRNA的含量14.17％ ～41.67％ (P＜0.01).结论:半枝莲黄酮对Aβ25-35引起的大鼠皮层星形胶质细胞的损伤具有抑制作用.半枝莲黄酮可能通过影响星形胶质细胞发挥对阿尔茨海默病的治疗作用.

线粒体DNA稳定性与疾病的关系

内质网应激在动脉粥样硬化发生、发展和防治中的作用

微钙化动脉粥样硬化斑块兔模型的建立与染色方法的比较

目的:建立微钙化动脉粥样硬化斑块兔模型,并比较茜素红S和冯·科萨染色方法对微钙化的识别.方法:30只雄性新西兰兔,在高脂饲料喂养和腹主动脉内皮球囊损伤基础上,随机分为套管组(给予腹主动脉双楔形套管缩窄)和非套管组,喂养12周,对比茜素红S和冯·科萨染色方法对微钙化识别的价值,并比较两组微钙化的发生率.结果:两组均形成动脉粥样硬化斑块,套管组微钙化发生率和钙化面积高于非套管组(P＜0.05).茜素红S和冯·科萨染色识别微钙化的敏感性相同,前者具有荧光活性的优势,但对于微钙化的定位准确性逊于后者.结论:本研究成功建立了一种微钙化动脉粥样硬化斑块兔模型.茜素红S和冯·科萨染色均能较好识别微钙化.

新生大鼠心肌成纤维细胞培养方法的比较

目的:建立并比较新生大鼠心肌成纤维细胞的培养方法.方法:分别通过胶原酶+胰酶消化法和胰酶消化法对新生大鼠心肌组织进行消化,利用贴壁时间差分离心肌细胞和心肌成纤维细胞,然后对收集的心肌成纤维细胞进行形态、纯度及对药物反应方面的检测.结果:在细胞形态和纯度方面,2种方法收集的心肌成纤维细胞没有明显差异,但用胶原酶+胰酶消化法可以获得更多数量的心肌细胞;在药物反应方面,采用胰酶消化法获得的心肌成纤维细胞比胶原酶+胰酶消化法具有更强的增殖能力.结论:采用胶原酶+胰酶消化法和胰酶消化法可以获得相同形态和纯度的心肌成纤维细胞,但是采用胰酶消化法获得的心肌成纤维细胞对药物具有更强的增殖反应能力.