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芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管新生相关因子表达的影响
目的：观察芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织缺氧诱导因子1α( hy-poxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)和血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的抗血管新生作用机制。方法选用健康Wistar大鼠30只,随机分为正常组、模型组、对照组(雷公藤多甙片组)和小、中、大剂量治疗组(芍甘附子汤加味组),除正常组均制备胶原诱导性关节炎( Collagen-induced arthritis, CIA)模型,造模成功后连续给药28天。测定各组大鼠足趾肿胀体积,进行关节炎指数( Arthritis index, AI)评分,采用免疫组织化学方法检测大鼠膝关节滑膜组织HIF-1α、Ang-1和Ang-2的表达。结果与模型组比较,对照组和大剂量治疗组足趾肿胀体积有所降低(P<0.05),对照组和中、大剂量治疗组AI评分明显降低(P<0.01)；与正常组比较,模型组HIF-1α和Ang-1表达均显著升高(P<0.01),Ang-2表达有所升高(P<0.05)；与模型组比较,对照组和大、中剂量治疗组 HIF-1α和 Ang-1表达均出现显著降低( P<0．01),Ang-2表达呈降低趋势。结论芍甘附子汤加味可能通过降低类风湿关节炎滑膜组织HIF-1α、Ang-1和Ang-2的表达,抑制滑膜血管新生,从而起到治疗类风湿关节炎的作用。
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益肾化浊法对慢性脑缺血血管性痴呆大鼠脑组织海马HIF-1α和VEGF表达的影响
目的：观察益肾化浊法对慢性脑缺血血管性痴呆大鼠脑组织海马低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法采用双侧颈总动脉永久性阻断法建立血管性痴呆大鼠模型,造模后7天随机分为假手术组,模型组和聪圣颗粒低、中、高剂量组和尼麦角林片组,给药治疗60天后,采用Western-blot及Real Time-PCR方法检测大鼠海马HIF-1α、VEGF表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠HIF-1α和VEGF的蛋白表达量和mRNA的表达量均升高( P<0．05)；与模型组比较,聪圣颗粒中、高剂量组可升高模型组HIF-1α及VEGF的蛋白和mRNA的表达(P<0．05,P<0．01)。结论益肾化浊法对慢性脑缺血血管性痴呆大鼠作用机制可能与调控海马区HIF-1α和VEGF的表达有关。
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麻杏石甘汤煎煮方式对哮喘模型小鼠气道黏液分泌和急性低氧环境的影响
目的:观察麻杏石甘汤不同煎煮法对哮喘模型小鼠气道黏蛋白MUC5AC及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的影响.方法:将小鼠随机分为5组(正常对照组,哮喘模型组,麻杏石甘汤分煎组,麻杏石甘汤同煎A组,麻杏石甘汤同煎B组),每组10只,除正常对照组外,其他各组均用鸡卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏小鼠,并以低浓度OVA雾化吸入激发制作哮喘模型.麻杏石甘汤先煎组、麻杏石甘汤同煎A组、麻杏石甘汤同煎B组从激发开始连续7d灌胃给药,测定各组小鼠支气管肺泡灌洗液MUC5AC及肺组织匀浆HIF-1α浓度.结果:麻杏石甘汤先煎组降低小鼠支气管肺泡灌洗液MUC5AC及肺组织匀浆HIF-1α浓度优于麻杏石甘汤同煎B组和麻杏石甘汤同煎A组(P＜0.01).结论:麻杏石甘汤除去麻黄上沫的煎煮法理想,其降低支气管哮喘气道黏液高分泌和改善急性低氧环境的效果佳.
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六味地黄汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾组织缺氧诱导因子1α及相关因子表达的影响
目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α、血小板源性生长因子(PDGF)-A及PDGF-B在慢性肾功能衰竭大鼠肾组织中的表达及作用,观察六味地黄汤对其表达的影响.方法 用5/6肾切除法复制慢性肾功能衰竭模型,分假手术组,模型组和六味地黄汤组.造模后12周,检测各组肾功能指标,HE染色法观察肾组织病理变化,Masson染色法观察肾组织胶原的沉积,免疫组化法和RT-PCR法分别检测HIF-1α、PDGF-A和PDGF-B在肾组织中的表达.结果 24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐在模型组明显升高(P＜0.01),六味地黄汤组则明显降低(P＜0.01).模型组肾间质纤维化明显,大量胶原纤维沉积;六味地黄汤组肾间质纤维化程度明显减轻,少量胶原纤维沉积.与假手术组比较,模型组肾组织中HIF-1α、PDGF-A及PDGF-B蛋白水平和基因表达均明显升高(P＜0.01);与模型组比较,六味地黄汤组肾组织中HIF-1α、PDGF-A及PDGF-B蛋白水平和基因表达均明显降低(P＜0.01),且PDGF-A和PDGF-B的表达与HIF-1α均呈正相关(P＜0.01).结论 HIF-1α可能通过上调PDGF-A和PDGF-B的表达促进肾间质纤维化,六味地黄汤可下调HIF-1α的表达,从而抑制肾间质纤维化.
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抗肿瘤作用强心苷研究进展
强心苷类化合物在临床上主要用于心力衰竭和心房颤动的治疗,近年来,强心苷的抗肿瘤作用也越来越受到重视.本文综述了强心苷化合物的抗肿瘤作用研究进展,对其抑制肿瘤细胞增殖及诱导肿瘤细胞凋亡的相关靶点作了介绍.
关键词： 强心苷 Na+/K+-ATP 酶 缺氧诱导因子1α 肿瘤 -
大苞雪莲石油醚部位对缺氧大鼠脑组织的保护作用及其机制研究
目的:研究大苞雪莲石油醚部位(petroleum ether extract of Saussurea involucrata,PESI)对常压密闭缺氧大鼠脑组织的保护作用及其机制.方法:首先采用常压密闭缺氧模型进行缺氧大鼠的PESI剂量依赖性实验,给药剂量分别为125,250,500 mg·kg-1,单次腹腔注射给药,终确定的佳给药剂量为PESI高剂量.然后取90只雄性Wistar大鼠随机分为缺氧模型组、乙酰唑胺250 mg·kg-1组和大苞雪莲石油醚部位高剂量组,每组又按不同缺氧时间分为3个亚组,各亚组10只大鼠.采用与上述相同的方法缺氧和给药,并于缺氧处理0,3,6h后处死大鼠,取脑组织进行常规组织学观察和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)免疫组化染色,并用Real-time RT-PCR检测HIF-1α,促红细胞生成素(EPO),血红素加氧酶(HO-1)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)基因表达情况,用蛋白印迹法检测HIF-1α蛋白的表达情况.结果:缺氧模型组脑组织随缺氧时间的延长而出现严重的病理损伤,乙酰唑胺组和PESI高剂量组的损伤情况则明显减轻.基因表达和蛋白印迹检测均发现,PESI高剂量抑制HIF-1α的表达,单纯基因表达检测发现,PESI高剂量增强EPO和HO-1 mRNA的表达,但抑制Caspase3 mRNA的表达.结论:PESI对常压密闭缺氧大鼠脑组织的保护机制可能与其抑制HIF-1α表达、增强血液输氧能力和抗脑细胞凋亡有关.
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天楼解毒消肿散对糖尿病足大鼠足背动脉HIF-1α、VEGF蛋白表达及MVD的影响
目的 观察天楼解毒消肿散治疗糖尿病足的可能作用机制.方法 将60只大鼠随机分为正常对照组、模型组、天楼解毒消肿散组、莫匹罗星组和如意金黄散组,每组12只.除正常对照组外,其余组大鼠采用高脂饲料喂养加链脲佐菌素液腹腔注射制成糖尿病大鼠模型,用烫伤法制备糖尿病足大鼠模型.正常对照组不予任何处理,模型组每天常规清理患肢溃疡部位,天楼解毒消肿散组予以天楼解毒消肿散直接撒于溃疡处,莫匹罗星组予以莫匹罗星膏外敷,如意金黄散组予以如意金黄散涂抹于患处或用凡士林调和后摊于纱布上贴患处.各组均以覆盖整个溃疡面为度,每日1次.给药2周后观察大鼠创面一般情况及溃疡面积大小变化,HE染色观察各组大鼠足背动脉变化,免疫组化法观察足背动脉缺氧诱导因子1α (HIF-1αt)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达及微血管密度(MVD).结果 与模型组比较,天楼解毒消肿散组、莫匹罗星组、如意金黄散组溃疡面积明显减小,且天楼解毒消肿散组溃疡面积小(P＜0.05).与正常对照组比较,模型组HIF-1α、VEGF蛋白表达及MVD明显增强(P＜0.05).与模型组比较,天楼解毒消肿散组、莫匹罗星组、如意金黄散组足背动脉中HIF-1 α、VEGF蛋白表达及MVD明显升高(P＜0.05),且天楼解毒散组较莫匹罗星组、如意金黄散组升高(P＜0.05).结论 天楼解毒消肿散能提高足背动脉中HIF-1α、VEGF蛋白表达及MVD,可能是其治疗糖尿病足的机制之一.
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人非小细胞肺癌中HIF-1α的表达与血管生成和细胞凋亡的关系及意义
目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与血管生成和细胞凋亡的关系,评估它在NSCLC发生发展过程中的作用.方法 采用免疫组织化学的方法检测HIF-1α在正常肺组织、良性病变、癌前病变、原位癌、非小细胞肺癌及肺癌转移淋巴结中的表达,及血管内皮生长因子(VEGF)在NSCLC中的表达;采用TUNEL法检测部分NSCLC中细胞凋亡指数AI.结果 HIF-1α在支气管黏膜非典型增生、原位癌、NSCLC及肺癌转移淋巴结中的阳性表达率相似,总阳性表达率为40.0%(68/170),其在正常及良性病变中的总阳性表达率为6.0%(4/67),两组间有显著差异(P＜0.01).HIF-1α在NSCLC中的表达与各项临床病理特征均无明显相关性,仅与患者术后生存时间明显正相关(P＜0.01).VEGF在NSCLC中的表达与HIF-1α的表达呈正相关(P＜0.01),与患者预后呈负相关(P=0.027).凋亡指数(AI)在各组织类型和各分化程度的Ⅰ期肺癌中无明显差异,但生存期≥5年的肺癌患者AI明显高于生存期＜5年的患者(P=0.004).AI与HIF-1α的表达明显正相关(P=0.004).结论 HIF-1α在非小细胞肺癌组织中的表达较正常及良性病变肺组织明显上调,其与肿瘤血管生成及细胞凋亡均密切相关,在NSCLC生长中的作用具有多向性.HIF-1α可以作为评估患者预后的重要指标.
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缺氧诱导因子1α和碱性成纤维细胞生长因子在大肠腺癌组织中的表达
目的 观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)在大肠腺癌组织中的表达,探讨其表达与大肠腺癌生物学行为关系.方法 采用免疫组织化学染色检测手术切除的大肠腺癌组织(n=60)、癌旁组织(n=60)和正常大肠黏膜组织(n=20)中HIF-1α和BFGF表达.结果 HIF-1α和BFGF在大肠腺癌组织中表达阳性率[61.7%(37/60),65.0%(39/60)]较癌旁组织[10.0%(6/60),13.3%(8/60)]明显升高(P<0.05),正常肠黏膜组织中未检出HIF-1α和BFGF表达;HIF-1α和BFGF在大肠腺癌组织中表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置和分化程度无关(P>0.05),与肿瘤Dukes分期有关(P<0.05):HIF-1α和BFGF在Dukes A、B期(n=36)表达阳性率分别为47.2%和52.7%,在Dukes C、D期(n=24)分别为83.3%和83.3%(P<0.05);大肠腺癌组织中HIF-1α和BFGF表达具有相关性(r=0.4276,P<0.001).结论 大肠腺癌组织中HIF-1α和BFGF表达水平上调,可能与大肠腺癌的预后有关;HIF-1α和BFGF有协同作用,共同促进大肠腺癌的发生.
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长期中等强度运动对小鼠骨骼肌HIF-Iα mRNA的表达及葡萄糖转运的影响
目的:观察长期中等强度运动对小鼠骨骼肌血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、葡萄糖转运体1(GLUT-1)、葡萄糖转运体4(GLUT-4)mRNA表达的影响,在此基础上进一步观察运动对缺氧诱导因子lα(HIF-1α )mRNA表达的影响,初步探讨运动对小鼠骨骼肌葡萄糖转运的影响及其可能机制.方法:健康雄性昆明小鼠24只随机分为运动组和对照组,运动组小鼠给予12周中等强度跑步训练.末次运动后处死所有小鼠,取双侧腓肠肌,光镜及电镜观察显微及超微结构；实时PCR法测定小鼠骨骼肌VEGF-A、GLUT-1、GLUT-4及HIF-1 α mRNA的表达.结果:①运动组小鼠较对照组体重明显增加(P＜0.05)；②骨骼肌肌细胞数目增加、肌纤维增粗,肌原纤维的直径增加,线粒体数目增加；③运动组小鼠骨骼肌VEGF-A、GLUT-1、GLUT-4及HIF-1 α mRNA表达明显高于对照组(分别增加1.68、1.14、2.31、1.92倍,P分别＜0.05、0.01、0.01、0.01).结论:长期中等强度运动可导致小鼠体重增加、肌纤维增粗、线粒体数目增加,VEGF-A mRNA表达增加；可增加骨骼肌GLUT-1、GLUT-4mRNA的表达,其机制可能与上调骨骼肌HIF-1 α mRNA表达有关.
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细胞外HSP70/HSP70-PCs通过HIF-1α影响肝癌细胞HepG2 Glut1与VEGF的表达
目的:探讨细胞外的热休克蛋白70及HSP70肽复合物(heat shock protein 70/peptide complexes,HSP70/HSP70-PCs)对肝癌细胞HepG2缺氧诱导因子1α(hypoxiainducible factor-1 α,HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,Glut1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及可能机制.方法:将肝癌细胞分为3组:正常对照组、细胞外HSP70/HSP70-PCs诱导实验组(终浓度2μg/mL)、细胞外HSP70/HSP70-PCs+siRNA转染组.应用Real-time RT-PCR与Western blot法检测HIF-1α、Glut1和VEGF的表达变化.结果:细胞外HSP70/HSP70-PCs诱导实验组HIF-1α、VEGF与Glut1蛋白表达显著升高,与对照组相比有显著差异(P＜0.05),表明细胞外HSP70/HSP70-PCs促进肝癌细胞的HIF-10α、Glut1和VEGF表达;应用siRNA阻断HIF-1α后,细胞外HSP70/HSP70-PCs对Glut1和VEGF的上调表达作用消失,与对照组相比有明显差异(P＜0.05).结论:细胞外HSP70/HSP70-PCs可以上调肝癌细胞HepG2中Glut1和VEGF表达,并且这一作用是通过HIF-1α来实现的.
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HIF-1α与iNOS、COX-2在胃癌中的表达及临床意义
目的:研究HIF-1α与iNOS、COX-2在胃癌中的表达、相互关系及他们在胃癌发生发展、浸润和转移中的作用.方法:应用免疫组化SP法检测54例胃癌中HIF-1α与iNOS、COX-2的表达,分析HIF-1α与iNOS、COX-2的表达关系及临床意义.结果:54例胃癌组织中HIF-1α与iNOS、COX-2的阳性表达率分别是74.07%、66.67%和62.9%,HIF-1α与iNOS、COX-2在胃癌组织中的表达水平明显高正常胃组织中的表达水平(P<0.05).HIF-1α与iNOS、COX-2的表达与胃癌的临床TNM分期、浸润程度和淋巴结转移有关(P<0.05);与组织学分级无关.HIF-1α、iNOS和COX-2间存在显著相关性(r=0.596,0.875,0.502,均P<0.05).结论:HIF-1α与iNOS、COX-2在胃癌的发生发展中起重要作用,HIF-1α可能通过上调iNOS和COX-2的表达促进肿瘤血管生成而促进胃癌的转移,联合检测可作为判断胃癌恶性程度和预后的指标.
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槐耳清膏对缺氧结肠癌SW480细胞VEGF及HIF-1α表达的影响
目的: 观察槐耳清膏对体外培养人结肠癌SW480细胞系VEGF和HIF-1α表达的影响.方法: 体外培养人结肠癌SW480细胞48 h, 随机分为常氧对照组(NC组)、低氧对照组(HC组)和低氧槐耳组(HH组), HH组RPMI 1640培养基含槐耳清膏(终浓度1 g/L). 半定量RT-PCR检测SW480细胞VEGF和HIF-1α mRNA表达水平, Western blot检测两者蛋白表达水平.结果: HH组和HC组VEGF、HIF-1α mRNA表达水平均显著高于NC组(4.71±0.07, 4.54±0.02 vs 1.19±0.03;5.68±0.07, 5.58±0.05 vs1.21±0.05, 均P<0.05), 但HH组与HC组比较无统计学差异. HC组VEGF、HIF-1α蛋白表达均显著显著高于NC组(0.66±0.03 vs 0.38±0.02;0.58±0.04 vs 0.31±0.03, 均P<0.05), 与HC组比较, HH组VEGF和HIF-1α蛋白表达均显著下降(0.37±0.03, 0.30±0.05, 均P<0.05).结论: 槐耳清膏通过下调人结肠癌SW480细胞内HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制肿瘤生成.
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缺氧时三氧化二砷对人肝癌细胞株BEL-7402生长及凋亡的影响及机制
目的:探讨不同浓度三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞株BEL-7402生长及凋亡的影响及机制.方法:应用化学缺氧剂二氯化钴(CoCl2)诱导人肝癌细胞BEL-7402缺氧.不同浓度As2O3对BEL-7402进行干预后,应用MTT法测定缺氧条件下的生长抑制作用;应用电镜,激光共聚焦显微镜及流式细胞术观察其对细胞凋亡的影响;应用逆转录聚合酶链式反应检测缺氧诱导因子HIF-1α,耐药基因mdr1的表达水平.结果:As2O3具有抑制人肝癌细胞株BEL-7402缺氧条件下生长的作用,并呈剂量-效应依赖性;4.0 μmo1/L As2O3干预48 h后,缺氧条件下的细胞呈现典型的凋亡形态学特征;缺氧时,0.5-4.0 μmol/L As2O3下调HIF-1α,mdr1基因表达水平,其中4.0 μmo1/L As2O3组作用强,基因相对表达量分别为HIF-1α 0.60±0.07,mdr10.59±0.09,各剂量组As2O3作用后与缺氧对照组比较差异有显著性(P＜0.01).结论:不同浓度的As2O3在由CoCl2诱导的化学缺氧条件下能够抑制人肝癌细胞BEL-7402的生长及诱导凋亡,其机制可能与As2O3下调HIF-1α,mdr1的基因表达水平有关.
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丹参酮ⅡA磺酸钠对MKN-45胃癌裸鼠移植瘤增殖及血管生成的影响
目的:明确丹参酮ⅡA磺酸钠(TanⅡA)在体内的抗癌作用及其对肿瘤血管生成的影响.方法:建立MKN-45胃癌裸鼠移植瘤模型,随机分成对照组和低、中、高丹参酮ⅡA磺酸钠干预组,每组6只.干预组分别用TanⅡA磺酸钠1、5、10 mg/kg,ip,1次/d,连续14d.对照组等量生理盐水干预.2 wk后处死裸鼠,分离瘤块,观察抑瘤率;TUNEL法测凋亡指数:CD34标志法观察四组瘤块微血管密度(MVD);免疫组化法观察缺氧诱导因子HIF1α、血管内皮生长因子(VEGF)、COX2的蛋白表达.结果:与对照组相比,3组干预组凋亡指数AI明显上升(36.02%±3.41%,34.78%±3.41%,30.05%±3.41% vs 10.83%±0.92%,均P<0.05).低剂量组增殖减慢,抑瘤率为20.69%±1.79%;中、高剂量瘤重反而增加,高剂量组抑瘤率为-(21.4%±2.38%).与对照相比,3组干预组MVD、VEGF表达上调,尤以中高剂量组差异显著(8.11±1.011,10.01±0.89 vs6.56±0.42;63628±611,70957±684 vs 51056 ±410,均P<0.05);3组干预组COX-2表达与对照无明显差异;HIF1α在低剂量组表达略有下调,但未达到统计学差异,中高剂量组表达则有明显上调(29468±204,42227±214 vs15691±106,P<0.01或0.05)结论:丹参酮ⅡA体内的抗肿瘤效果没有体外细胞实验显著,高剂量丹参酮ⅡA的抗癌效应可被HIF的代偿高表达抵消甚至逆转.
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高血糖对缺氧及非缺氧条件下培养的大鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α表达的影响及机制
目的 探讨血糖对缺氧状态及非缺氧状态下大鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的作用及机制. 方法 体外培养新生大鼠的心肌细胞,给予不同的处理因素培养6h,具体分组为:(1)正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖);(2)氯化钴(Cocl_2)模拟缺氧组(5.5mmol/L葡萄糖+400μmol/L Cocl_2);(3)高葡萄糖组(11.1、22.2、33.3 mmol/L葡萄糖);(4)Cocl_2(模拟缺氧)+高葡萄糖组(11.1mmol/L葡萄糖+400μmol/L Cocl_2,22.2mmol/L葡萄糖+400mmol/L Cocl_2>,33.3mmol/L葡萄糖+400μmol/Lcocl_2);(5)高葡萄糖+抗氧化剂α-tocopherol组(33.3mmol/L葡萄糖+100μmol/L α-tocopherol);(6) Cocl_2(模拟缺氧)+高葡萄糖+α-tocopherol组(33.3mmol/L葡萄糖+400μmol/L Cocl_2+100μmol/L α-tocopherol).观察高葡萄糖、Cocl_2、高葡萄糖合并氯化钴对HIF-1α mRNA及蛋白表达的影响,以及给予α-tocopherol阻断氧化作用后,高葡萄糖、高葡萄糖合并Cocl_2对HIF-1α mRNA及蛋白表达影响的变化.结果 (1)与正常对照组相比,Cocl_2模拟缺氧后,大鼠心肌细胞HIF-1α的表达增加;(2)在非缺氧状态下,随着葡萄糖浓度(5.5、11.1、22.2、33.3mmol/L)的增加HIF-1α的表达逐渐增加;(3)Cocl_2合并高葡萄糖培养条件下,随着葡萄糖浓度(5.5、11.1、22.2、33.3mmol/L)的增加,大鼠心肌细胞HIF-1α的表达逐渐减弱;(4)高葡萄糖合并α-tocopherol(33.3mmol/L Glu+100 μmol/L α-tocopherol)培养条件下,大鼠心肌细胞HIF-1α的表达较单纯高葡萄糖(33.3mmol/L)时减弱;(5)Cocl_2合并高葡萄糖及α-tocopherol(33.3mmol/L Glu+400 μmol/L Cocl_2+100μmol/L α-tocopherol)的培养条件下,HIF-1α的表达较同样氯化钴合并高葡萄糖(33.3mmol/L Glu+400μmol/L Cocl_2)时增加. 结论 葡萄糖对非缺氧状态下培养的大鼠心肌细胞HIF-1α的作用是增强其表达,而对缺氧状态下培养的大鼠心肌细胞HIF-1α的作用是减弱其表达,其机制可能涉及活性氧(ROS)信号转导系统及氧化应激反应.
关键词： 高血糖 氯化钴 缺氧诱导因子1α 乳鼠心肌细胞 抗氧化剂α-tocopherol -
慢性间断缺氧小鼠缺氧诱导因子1α的研究
目的探索睡眠呼吸暂停综合征(SAS)的慢性间断性缺氧(CIH)对心血管损害的可能机制.方法制作CIH小鼠模型.将30只ICR小鼠均分为实验组、空气模拟对照组及空白对照组.免疫组织化学方法检测实验小鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及诱导型一氧化氮合成酶(NOS-2)的表达.酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测小鼠血浆血管内皮生长因子(VEGF)及内皮素1(ET-1)的浓度.结果实验组心肌细胞HIF-1α表达高于空白对照组(t=3.54,P＜0.05)及空气模拟对照组(t=2.92,P＜0.05);空白对照组HIF-1α表达与空气模拟对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验组血浆VEGF浓度[(9.57±1.41)ng/ml]高于空白对照组[(8.10±0.62)ng/ml,q=4.27,P<0.05]及空气模拟对照组[(8.32±0.99)ng/ml,q=3.64,P<0.05];空白对照组血浆VEGF浓度与空气模拟对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).实验组血浆ET-1浓度[(3.31±0.81)ng/ml]高于空白对照组[(2.50±0.72)ng/ml,q=3.64,P<0.05];空气模拟对照组血浆ET-1浓度[(2.69±0.43)ng/ml]与实验组及空白对照组[(3.31±0.81)、(2.50±0.72)ng/ml]比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).小鼠心肌细胞NOS-2表达在各组间比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 CIH可引起小鼠HIF-1α表达增加,并可促进HIF-1α目的基因产物VEGF、ET-1的表达.这可能是其对心血管损害的重要机制之一.
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缺氧对过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响
目的研究不同程度缺氧条件下,肺癌A549细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达状况,及反义封闭HIF-1α后,对PPARα表达的影响,以了解PPARα和HIF-1α的相关性.方法首先将A549细胞分为4组:正常对照组(A组)、缺氧24小时组(B组)、缺氧48小时组(C组)、缺氧72小时组(D组).观察不同缺氧时间对PPARα及HIF-1α蛋白和mRNA表达水平的影响.为观察HIF-1α对PPARα表达状况的影响,再设计4组:对照组2(E组),HIF-1α反义寡核苷酸组(F组),HIF-1α正义寡核苷酸组(G组),HIF-1α错义寡核苷酸组(H组).结果正常对照组,PPARα和HIF-1α蛋白及mRNA均有少量表达;随着缺氧时间的延长,两者的表达水平逐渐升高.在缺氧24小时,两者mRNA和蛋白开始增高,48小时明显增高,至72小时达到高峰.反义封闭HIF-1α后, PPARα蛋白及mRNA的表达水平明显下降.结论 PPARα及HIF-1α的表达水平随肿瘤细胞缺氧信号的加强而增加,且PPARα受HIF-1α的调控.
关键词： 肺肿瘤 细胞低氧 缺氧诱导因子1α 过氧化物酶体增殖物激活受体α -
缺氧诱导因子1α调控血管内皮生长因子对大鼠缺氧性肺动脉高压的作用
目的研究大鼠缺氧性肺动脉高压(HPH)肺血管壁缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的动态变化.方法 40只成年雄性Wistar大鼠随机分成对照组、缺氧3、7、14和21 d组,每组8只,测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、血管形态学指标、右室肥大指数(RVHI);原位杂交和免疫组化检测HIF-1α,VEGF基因表达.结果缺氧7 d后,mPAP开始上升[(18.41±0.37) mm Hg],与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),缺氧14 d达高水平并维持于此水平.肺血管重塑,RVHI改变在缺氧14 d后出现.HIF-1α蛋白在对照组表达不明显,各缺氧组肺血管内膜均为阳性;在中膜,HIF-1α蛋白缺氧3 d始增高(0.178±0.017),与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),缺氧7 d达高峰(0.221±0.021,P＜0.05),14 d和21 d下降;HIF-1α mRNA对照组,缺氧3 d和7 d组均不明显,缺氧14 d增高(0.203±0.024,P＜0.05),并维持于高水平.VEGF蛋白在缺氧7 d增高(0.074±0.022,P＜0.05),14 d达高峰(0.147±0.017,P＜0.05)并持续于高水平;VEGF mRNA对照组和缺氧3 d组不明显,缺氧7 d增高达高峰(0.138±0.010,P＜0.05),之后持续于高水平.VEGF mRNA于中膜和内膜、VEGF蛋白于内膜明显.相关分析表明,HIF-1α mRNA、VEGF、mPAP与血管重塑均相关(P＜0.01).HIF-1α蛋白(内膜)与VEGF mRNA、VEGF蛋白均呈正相关(P均＜0.01).结论 HIF-1α和VEGF均在大鼠HPH的发病机制中发挥作用.HIF-1α蛋白可能以转录激活的形式上调VEGF基因,导致HPH的发生和发展.
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慢性阻塞性肺疾病患者肺部丝裂原活化蛋白激酶、蛋白激酶B和缺氧诱导因子1α的表达
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达变化在缺氧性肺动脉高压(HPH)中的作用和意义.方法通过苏木精-伊红(HE)染色检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者和对照组患者肺小动脉形态学改变,应用免疫组化检测肺小动脉壁内磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)、磷酸化胞外信号调控激酶(p-ERK)、磷酸化c-Jun氨基端蛋白激酶(p-JNK)、磷酸化p38(p-P38)表达水平,应用原位杂交和免疫组化检测肺小动脉壁内HIF-1α的表达水平.结果 COPD患者管腔面积与管总面积比值(LA%,18±3)及肺小动脉中膜厚度[PAMT,(31±3)μm]均较对照组[30±5、(40±4)μm]显著增高(t=7.58、6.57,P均＜0.01).COPD患者肺小动脉壁p-ERK蛋白、p-PKB蛋白、HIF-1α蛋白和HIF-1α mRNA表达[均以吸光度(A)值表示]水平(0.164±0.012、0.113±0.009、0.232±0.008、0.154±0.013)较对照组(0.062±0.010、0.031±0.011、0.058±0.006、0.052±0.008)显著增强(t=23.18、21.03、62.14、2.44,P均＜0.01),而p-JNK、p-P38蛋白表达(0.041±0.012、0.031±0.010)与对照组(0.048±0.013、0.028±0.007)比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).相关分析表明HIF-1α蛋白、HIF-1α mRNA、p-ERK蛋白和p-PKB蛋白表达与COPD组LA%呈显著负相关(r=-0.920～-0.892,P均＜0.05),与PAMT呈显著正相关(r=0.895～0.934,P均＜0.05).结论 MAPK信号通路和PI3K信号通路以及HIF-1α可能参与了COPD患者HPH的发生.
