妊娠期小鼠暴露尼古丁对后代大脑皮层与海马形态结构发育及神经细胞黏附分子表达的影响

目的观察妊娠期小鼠暴露尼古丁对后代大脑皮层和海马形态结构发育及对神经细胞黏附分子(NCAMs)表达的影响.方法建立妊娠期暴露尼古丁的小鼠动物模型,HE染色观察后代大脑皮层和海马形态结构的改变,免疫组织化学法、蛋白质免疫印迹法观察生后小鼠NCAMs表达的变化.结果妊娠期暴露尼古丁小鼠的后代其大脑皮层和海马变薄,海马各区细胞层也变薄.与对照组相比,妊娠期暴露尼古丁小鼠的后代大脑皮层和海马中,PSA-NCAM表达升高,而NCAM-180、140和120的表达减弱. 结论妊娠期小鼠暴露尼古丁能阻碍后代大脑皮层和海马形态结构的正常发生,还能改变NCAMs在生后小鼠大脑皮层和海马中的表达.

大鼠自体嗅成鞘细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究

目的探讨自体外周嗅成鞘细胞对脊髓损伤修复的可能作用和促进受损轴突再生的能力,为临床应用自体OECs修复脊髓损伤进行可行性研究.方法以改良的Allen法建立脊髓(T9～10节段)损伤模型后,将动物分为自体OECs悬液组和Hanks液对照组,分别移植含自体OECs的细胞悬液和Hanks液,以神经丝蛋白(NF)和神经生长因子受体蛋白(NGFR p75)免疫荧光双标染色,激光共聚焦显微镜检测移植效果;通过BBB行为学评分记录两组动物后肢恢复功能.结果镜下观察可见自体OECs悬液组动物脊髓损伤处的空洞较对照组明显缩小.而自体OECs悬液组免疫荧光标记纤维中夹有NGFRp75标记的OECs,且随标记的NF纤维走行方向排列.行为学观察可见自体OECs悬液组的大鼠后肢运动功能较对照组有显著恢复.结论自体OECs悬液多点注射有助于脊髓损伤部位神经纤维的再生.

p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长及周期相关基因的影响

目的探讨抑癌基因p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长以及周期相关基因cyclinD1、cyclinE、CDK2和CDK4表达的影响.方法将正义的p53真核表达载体导人MCF-7细胞,获得稳定表达正义p53的细胞模型,并经PCR和Western blot鉴定.分析了细胞的各种生长特性包括生长曲线、血清依赖、单细胞克隆形成、软琼脂成集落等;利用TdR双阻断法同步化细胞,流式细胞术分析了细胞周期;Western blot检测了其他周期相关基因的表达.结果p53的高表达可以使细胞的生长速度减慢、血清依赖性增加、单细胞克隆成集落能力降低、非锚定依赖性生长能力减弱,S期的进程减缓,一定程度上抑制cyclinD1和CDK2的表达,cyclinE和CDK4的表达未见明显变化.结论抑癌基因p53的表达能够抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长,并可能通过阻抑cyclinD1和CDK2的表达而阻抑细胞周期S期进程,实现其调节功能.

海洛因依赖对大鼠胰岛A细胞胰高血糖素表达和功能的影响

目的探讨海洛因依赖对大鼠胰岛A细胞胰高血糖素免疫反应(Glu-IR)的影响.方法应用免疫组织化学SABC单染法、形态计量及放射免疫测定法,研究大鼠海洛因依赖期间,A细胞面数密度(NA)及血浆胰高血糖素水平的变化.结果与正常组及盐水组比较,A细胞免疫组织化学显色在海洛因依赖组均增强,阳性细胞增多;A细胞的NA在海洛因依赖第38 d组明显增加,P<0.01;血浆胰高血糖素水平在海洛因依赖第10 d、24 d、38d组均高于正常组和盐水组,P<0.01.结论A细胞通过增加细胞数和增强合成分泌胰高血糖素的功能,参与海洛因依赖期间大鼠糖代谢的调节过程.

CD44介导的透明质酸对单核细胞黏附和迁移的作用

目的研究透明质酸(HA)在单核细胞中的分布,HA受体CD44和细胞问黏附分子-1(ICAM-1)在单核细胞中的表达以及HA及其受体对单核细胞黏附和迁移的影响.方法用Percoll非连续密度梯度离心法分离狗外周血单核细胞,然后用免疫荧光染色法标记单核细胞的HA、CD44和ICAM-1.通过用透明质酸酶(HAase)消化细胞表面的HA、在培养皿底面和细胞培养池膜上涂布HA和在培养液中添加HA,观察细胞表面的HA、底物HA和游离HA对细胞黏附和迁移的影响.以抗体阻断剂抑制CD44或ICAM-1,研究HA受体的介导作用.结果单核细胞表面和细胞内存在HA,并表达CD44和ICAM-1.消化细胞表面HA后,黏附和迁移的单核细胞数减少.在培养皿底面和细胞培养池膜上铺HA,黏附和迁移的细胞数增加.培养液中加入HA,黏附和迁移的细胞数减少.阻断CD44后,HA底物上黏附和迁移的细胞数减少,而阻断ICAM-1后黏附和迁移的单核细胞数无明显变化.结论单核细胞内外分布有HA.单核细胞表面的HA和底物HA促进细胞的黏附和迁移,但游离HA阻碍单核细胞的黏附和迁移.CD44介导HA对单核细胞黏附和迁移的作用.

灵芝孢子对大鼠脊神经腹根切断后脊髓运动神经元存活及其NT-3、NOS表达的影响

目的探讨灵芝孢子(萌动激活赤灵芝孢子)对大鼠脊髓受损伤运动神经元存活和表达神经营养素-3(NT-3)及一氧化氮合酶(NOS)的影响.方法对单侧腹根切断后的大鼠胃饲不同剂量的灵芝孢子,计算受损伤运动神经元存活率;用免疫组织化学及原位杂交方法检测NT-3的表达;用酶组织化学方法检测NOS的活性.结果腹根切断后35 d,对照组运动神经元存活率为47.32%,灵芝孢子低、中、高剂量组的运动神经元存活率分别为67.11%、72.67%和81.67%;腹根切断后高剂量组存活的运动神经元NT-3和NOS的表达都高于对照组. 结论灵芝孢子促进大鼠脊髓前角受损伤的运动神经元存活,其存活率与用药剂量有关;灵芝孢子促进大鼠脊髓存活的运动神经元表达NT-3和NOS.

第四脑室外侧隐窝室管膜与哺乳关系的形态学观察

目的观察哺乳期雌性小鼠第四脑室外侧隐窝室管膜形态的变化与哺乳之间的关系.方法HE染色和扫描电镜法.结果光镜下对照组外侧隐窝室管膜细胞单层稀疏排列,哺乳早、中期外侧隐窝室管膜细胞密集,常呈双层或多层排列,在室管膜细胞增厚区上可见均质的絮状物,以哺乳中期明显,此改变与对照组比较具有显著的差异(P<0.05).扫描电镜下对照组外侧隐窝处纤毛稠密,呈簇状分布;哺乳早期纤毛黏连成束,纤毛肿胀增粗,室管膜表面可见到密集的、大小不一的分泌囊泡;哺乳中期分泌囊泡比早期小,囊泡在室管膜表面黏连在一起,成层分布;哺乳末期室管膜细胞的纤毛和微绒毛与对照组相似.结论小鼠第四脑室外侧隐窝室管膜细胞有旺盛的分泌现象,这种改变与哺乳周期密切相关.

人脐血细胞在肝损伤裸鼠体内向肝细胞的分化

目的探讨在制备的肝损伤模型中人脐血单个核细胞向肝细胞的分化能力. 方法采用腹腔注射CCl4和5-氟尿嘧啶的方法制备肝损伤模型,将分离的脐血单个核细胞以2×107/ml经尾静脉注射入裸鼠体内.4周后处死裸鼠取肝组织.以RT-PCR方法对ALB、AFP mRNA的表达进行检测;并用免疫组织化学SP染色检测人HSA、PCNA、ALB的表达情况.结果RT-PCR显示ALB、AFP mRNA在人肝组织移植组中表达呈阳性,而在损伤未移植组和正常对照组表达为阴性;免疫组织化学染色表明,在裸鼠肝实质区域出现人HSA、PCNA和ALB阳性表达细胞.结论人脐血单个核细胞在裸鼠体内确有向肝细胞分化的趋势.

不同强度游泳运动对大鼠不同组织铁分布及血清铁状态的影响

目的观察不同负荷的游泳运动对大鼠血清铁状态及不同组织铁含量的影响. 方法将30只雌性SD大鼠随机分为对照组、适度运动组和过度运动组,运动训练10周后,测定血清铁、血清未饱和铁结合力、总铁结合力、转铁蛋白饱和度及心、肝、脾、十二指肠、腓肠肌和骨髓非血红素铁含量的变化.结果1.过度运动组血清铁和转铁蛋白饱和度显著降低,适度运动组血清铁升高;2.过度运动组和适度运动组腓肠肌非血红素铁含量显著增加,而骨髓铁含量均有不同程度的降低,其中过度运动组降低多. 结论适度的运动可以促进机体铁的动员,而过度运动则会破坏机体铁代谢的动态平衡,引起非贫血性铁缺乏.

鸡胚胎原始生殖细胞对不同冷冻体系适合性的研究

目的研究鸡胚胎原始生殖细胞(EPGCs)对不同冷冻体系的适合性. 方法对发育至第19期和第28期胚胎性腺PGCs,采用二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇、聚乙二醇为冷冻保护液,在不同组合、不同浓度、不同的冷冻程序下进行超低温冷冻保存.结果1.采用同一种冷冻保护液,10%浓度与15%浓度之间,除DMSO+乙二醇(冷冻保护液Ⅳ)外,其他类型的冷冻液对EPGCs保存后存活率的影响差异不显著(P＞0.05);20%浓度的各种冷冻保护液对EPGCs保存后的存活率低,且与10%和15%浓度相比差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);2.采用同一种冷冻保护液,浓度为10%时,冷冻程序Ⅰ(2～4℃平衡45～60min,-4～-6℃诱发结晶45min,悬挂液氮面1 h以上,投入液氮保存)和冷冻程序Ⅱ(2～4℃平衡90～120 min,悬挂液氮面1 h以上,投入液氮保存)对EPGCs冷冻后存活率差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);3.采用冷冻程序Ⅰ,浓度为10%时,不同的冷冻保护液对EPGCs保存后的存活率影响显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),DMSO+乙二醇(冷冻保护液Ⅳ)显示出好的保护效果;4.第19期和第28期性腺中的EPGCs在相同的冷冻条件下冷冻后,存活率差异不显著(P＞0.05). 结论采用冷冻程序Ⅰ,在10%的DMSO+乙二醇(冷冻保护液Ⅳ)的保护下对鸡EPGCs冷冻较为适合.

巢蛋白阳性细胞在胎儿肝中的分布及形态学研究

目的观察巢蛋白(nestin)阳性细胞在发育早、中期胎儿肝中的形态及分布,探讨其在肝发育中的作用.方法取10～20周胎儿肝组织,常规石蜡切片,地高辛标记nestin寡核苷酸探针,原位杂交组织化学法显示netin阳性细胞.结果nestin阳性细胞主要分布在肝界板处或发育中的胆管周围,细胞体积较小,细胞核呈圆或卵圆形,核大,常见双核.结论肝内存在一定数量的nestin阳性细胞,该细胞具有较强的分裂增殖能力,可能是胚胎早期发育过程中隐藏在机体各种组织中的一类具有相同功能的细胞,在日后的肝细胞修复及肿瘤的发生中起着重要的作用.

骨形态发生蛋白-2在骨髓源性心肌干细胞向心肌分化中的作用

目的研究骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对骨髓源性心肌干细胞(MCSC)向心肌分化的作用,探讨MCSC向心肌分化中的BMP-2信号转导机制.方法从SD大鼠骨髓中筛选MCSC,用BMP-2诱导向心肌定向分化.RT-PCR检测诱导前后BMP-2受体BMPRIA和BMPRII、心肌早期转录因子Nkx2.5和GATA-4以及cTnT mRNA的表达.免疫细胞化学标记诱导后细胞cTnT和Cx-43的表达.结果用BMP-2诱导后,MCSC的形态和排列发生变化.RT-PCR检测结果显示,诱导前BMPRIA和BMPRII以及Nkx2.5和GATA-4呈低表达,诱导后1周表达增加,3～4周表达明显.cTnT mRNA在诱导前不表达,诱导后1周开始表达,3～4周表达明显.免疫细胞化学染色显示,cTnT和Cx-43从诱导后2周开始表达.3～4周cTnT表达增强,呈现密集的横纹样结构.Cx-43在2周位于细胞膜下,3周分布于相邻细胞连接处,4周呈颗粒状密集分布于肌管的相邻细胞连接处. 结论BMP-2通过BMPRIA和BMPRII的介导作用诱导MCSC分化为心肌细胞.

脾虚胃溃疡大鼠分裂原激活的蛋白激酶信号传递分子的研究

目的探讨脾虚证时分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路中信号分子表皮生长因子(EGF)、胞外信号调节激酶(ERK)的变化及加味四君子汤治疗脾虚证的机理.方法HE染色、免疫组织化学反应、免疫印迹法.结果脾虚胃溃疡大鼠下颌下腺颗粒曲管细胞内EGF阳性反应产物的含量增加,胃黏膜磷酸化的ERK减少,胃溃疡愈合延迟;经过加味四君子汤治疗后,上述异常变化得到纠正. 结论EGF信号传递分子表达的变化可能是脾虚胃溃疡的发病机理之一,加味四君子汤能通过纠正这些变化而发挥治疗作用.

胰的冠状断层标本与磁共振对照研究

目的为胰病变的断层影像诊断和外科治疗提供实用的形态学依据.方法在30例成人上腹部连续冠状断层标本及2例尸体腹部和5例健康成人上腹部磁共振(MRI)冠状图像上,研究冠状断面上胰的分部、毗邻和大小.结果在经肝门静脉左支角部的断面(A10)上胰颈首先出现,胰尾消失在经左右肾窦后份和脾门的断面(A20)上.在连续冠状断面上,胰集中出现于下腔静脉后缘前54 mm和后12 mm的范围内.在经肠系膜上静脉的断面(A12)上,胰颈位于肠系膜上静脉的前方,其大上下径和大左右径分别为20.93±3.61 mm和10.09±3.31mm.在经肝门静脉主干的断面(A13)上,胰头位于肝门静脉主干右下方和十二指肠降部的左前方,其大上下径和大左右径分别为46.58±6.44 mm和35.56±6.57 mm.在经下腔静脉前份和左肾静脉的断面(A15)上,胰体的左侧份位于脾静脉前方和左肾血管的上方,其大上下径和大左右径分别为28.16±5.31 mm和51.27±11.80 mm.在经下腔静脉后份和主动脉裂孔的断面(A17)上,胰尾位于左肾外上方、脾门和胃底之间,其大上下径和大左右径分别为21.13±2.06 mm和34.11±6.03 mm.结论在冠状断面上,肠系膜上静脉是识别胰颈的标志,下腔静脉和左肾静脉分别是识别胰头和胰体的标志,脾动、静脉和左肾是识别胰尾的标志.

人单核细胞来源的树突状细胞微观流变学研究

目的探讨不同发育阶段树突状细胞(DC)的微观流变学特性及其差异. 方法应用密度梯度离心法从正常人外周血分离获得单个核细胞,经贴壁培养和免疫磁珠阴性选择获取纯化的单核细胞,以此作为DC前体(pDC)在体外培养诱导获得未成熟DC(imDC)和成熟DC(mDC).并用免疫细胞化学、免疫荧光、酶细胞化学、流式细胞仪等技术对不同发育阶段的DC进行鉴定;应用微观流变学研究方法对以上细胞的电泳率、渗透脆性、膜流动性和傅立叶红外光谱(FT-IR)进行测量和分析. 结果改进的分选法所获得的CD14+pDC＞97%.体外加入rhGM-CSF和IL-4培养6d后,S-100+imDC占细胞总数的96.9%;再加入rhGM-GSF、IL-4和TNF-α培养48 h后,CD86+mDC占细胞总数的87%.其微观流变学特性为:mDC电泳率明显高于pDC和imDC(P<0.05);3种细胞均具有较强的抗低渗能力,但imDC强(细胞未破碎率为27%);mDC的膜流动性大,其荧光偏整度P值为0.062±0.001(P<0.01);FT-IR显示mDC中的蛋白质二级结构发生了较大变化. 结论DC的微观流变学特性随其不同的发育阶段而发生了明显变化.

卵泡刺激素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌影响的体外研究

目的研究卵泡刺激素(FSH)在体外对胰腺组织分泌胰岛素和胰高血糖素的影响.方法体外孵育大鼠胰腺组织并施加不同浓度FSH,应用酶联免疫分析(ELISA)方法检测上清液中胰岛素和胰高血糖素的含量.结果当FSH浓度小于10-2IU/L时,胰岛素和胰高血糖素分泌量随FSH浓度的增加而减少;当FSH浓度大于10-2IU/L时,胰岛素和胰高血糖素分泌量随FSH浓度的增加而增加.结论FSH在体外对胰岛素和胰高血糖素分泌具有相同的双向调节作用,FSH可能对胰腺内分泌具有调节功能.

颞下颌关节盘前移位对髁状突软骨中纤溶酶原激活剂系统表达的影响

目的研究颞下颌关节盘前移位对关节软骨组织中尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)系统的影响.方法24只日本大耳白兔在不打开关节囊的情况下建立右侧颞下颌关节盘前移位动物模型,分别于术后4、1、2、4、8d和12周各处死4只动物.常规HE染色观察髁突软骨的形态学变化,并以原位杂交法检测髁突软骨细胞中uPA和纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)的基因表达变化.结果术后髁突受力区出现一过性的软骨变薄、各层排列紊乱等病理变化.uPA和PAI-1基因转录水平在术后即开始上调,至2周时达到高水平,至12周时基本恢复至正常水平,与髁突软骨的适应性改建相一致.结论颞下颌关节盘前移位后,关节软骨内uPA系统的变化与关节软骨的适应性改建密切相关.

低切应力对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的研究低切应力对颈总动脉粥样硬化形成及其血管平滑肌细胞凋亡的影响. 方法应用低切应力颈总动脉粥样硬化模型,采用免疫组织化学方法观察大白兔血管平滑肌细胞的Bcl-2及Bax蛋白表达的变化.结果颈总动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的Bcl-2表达减少、Bax表达增高.结论在低切应力作用下动脉粥样硬化的形成过程中,低切应力与高脂协同作用,可使促进凋亡的因素增强,抑制凋亡的因素减弱,从而调控VSMC的凋亡.

硒对氧化偶氮甲烷所致结肠癌模型大鼠睾丸精原细胞P16蛋白表达的影响

目的观察硒对氧化偶氮甲烷(AOM)所致结肠癌大鼠睾丸精原细胞P16蛋白表达的影响.方法随机将20只3周龄断乳雄性SD大鼠分为:正常对照组、实验对照组、AOM致癌前喂食亚硒酸钠水组、AOM致癌后喂食亚硒酸钠水组.每周腹腔注射AOM 15 mg/kg,持续2周,造成大鼠结肠癌模型.用4 mg/L Na2SeO3水溶液分别在AOM致癌前、后开始进行干预,并持续至实验结果.各组均于34周后取两侧睾丸,用免疫组织化学方法,观察大鼠睾丸精原细胞内P16蛋白的表达,并进行图像分析.结果正常组大鼠的睾丸内未见精原细胞表达P16蛋白,而实验对照组、硒干预AOM致癌组(AOM致癌前、后喂食亚硒酸钠水)的精原细胞P16均呈阳性表达,阳性产物呈深棕色,定位于细胞核中,细胞质内仅有少量表达.实验对照组、AOM致癌前、后喂食亚硒酸钠水组阳性表达逐渐增强,组间具有显著性差异(P<0.05).结论硒可增强AOM所致结肠癌大鼠精原细胞P16蛋白的表达.

Nogo-A在成年大鼠脑内神经元的分布

目的研究Nogo-A阳性神经元在正常成年大鼠脑内的分布. 方法免疫组织化学方法(ABC法).结果Nogo-A在正常大鼠脑内的神经元和纤维有广泛的表达,出现在许多核团,主要在1.前脑的大脑皮质、嗅觉系统、海马、隔区、基底神经节、丘脑、下丘脑和视前区等部位;2.脑干的视听觉、体躯感觉、内脏觉核团、运动核团以及网状结构等;3.小脑Purkinje细胞和深核.阳性反应物主要见于神经元的胞浆和突起内,在脑室系统的嗅球室管膜、侧脑室和第三脑室部分室管膜细胞及其突起内也有表达.结论Nogo-A在脑内神经元的广泛存在提示其在正常状态下的脑功能中可能起重要作用.

Aβ42亚单位疫苗诱导的抗体与阿尔茨海默病人脑海马老年斑结合

目的观察Aβ42亚单位肽疫苗接种SD大鼠产生的抗体与阿尔茨海默(Alzheimer)病人脑海马老年斑结合的情况,以筛选Aβ42亚单位片段. 方法先以Bielschowsky改良法确定有老年斑的AD病人的脑,再将Aβ1～15及Aβ36～42亚单位疫苗和Aβ42全肽疫苗接种于SD大鼠,取后一次接种大鼠的血清与AD病人的脑切片进行免疫组织化学反应(ABC法).结果Aβ1-15亚单位片段疫苗以及Aβ42全肽疫苗诱导产生的抗血清染出的老年斑形态,以经典型(即成熟型)居多,间或有弥散型的老年斑.老年斑略呈圆形,大小不一,遍布海马的各个区域;有些老年斑则呈疏松的丝网状的球体;室管膜下和脑血管膜也见有Aβ沉积.Aβ36-42亚单位片段疫苗诱导产生的抗血清则未能染出老年斑.结论Aβ1-15亚单位疫苗以及Aβ42全肽疫苗诱导产生的抗血清,能与AD病人脑海马切片的老年斑结合;而Aβ36～42亚单位疫苗诱导产生的抗血清,则不能与AD脑片的老年斑结合.

大鼠胚胎皮肤淋巴管血管内皮生长因子受体-3的表达

目的观察血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)蛋白和mRNA在大鼠胚胎发育不同时期皮肤淋巴管内皮的表达模式,明确VEGFR-3在胚胎淋巴管发生中的生物功能.方法应用免疫组织化学技术(SABC法)和原位杂交技术对61例大鼠胚胎第15 d和第21 d皮肤组织进行VEGFR-3蛋白和mRNA检测.结果皮肤淋巴管内皮细胞阳性表达VEGFR-3蛋白和mRNA,在大鼠胚胎发育的第15 d和第21 d,VEGFR-3蛋白在淋巴管内皮的阳性表达率分别是38.71%(12/31)和73.33%(22/30),第21 d胚胎皮肤淋巴管内皮VEGFR-3蛋白的表达水平明显高于第15d胚胎淋巴管内皮VEGFR-3蛋白的表达水平(x2=7.408 P<0.01).VEGFR-3 mRNA在淋巴管内皮的阳性表达率分别是61.29%(19/31)和80.0%(24/30).结论1.大鼠胚胎皮肤淋巴管阳性表达VEGFR-3蛋白和VEGFR-3mRNA.2.随着大鼠胚胎的发育,VEGFR-3蛋白和mRNA在皮肤淋巴管的阳性表达均表现为上升的趋势.3.VEGFR-3在大鼠胚胎皮肤淋巴管的发育中起一定的调节作用.

人神经营养素-3基因重组腺病毒载体的构建、表达和生物活性检测

目的构建具有生物活性的人神经营养素-3(NT-3)基因重组腺病毒表达载体.方法从人脑组织mRNA中扩增NT-3基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的质粒.再与腺病毒骨架DNA(Adeno-X viral DNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd-NT-3).用pAd-NT-3转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno-NT-3). 结果NT-3基因RT-PCR扩增产物约801 bp.Adeno-NT-3 PCR鉴定为正确重组子.RT-PCR、免疫细胞化学、ELISA及Western blot检测显示,Adeno-NT-3能在其转染的293细胞表达和分泌NT-3.这种NT-3能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞. 结论应用体外连接法成功构建了人NT-3基因重组腺病毒表达载体,其表达产物具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞的活性作用.

温度敏感型基因永生化神经前体细胞系的建立

目的建立温度敏感型永生化神经前体细胞系,鉴定其细胞生长特点及表达抗原的特性. 方法利用逆转录病毒感染原代培养的胚胎13d SD大鼠中脑神经前体细胞,建立温度敏感型永生化神经前体细胞系RMN,利用免疫细胞化学、Western blot和流式细胞分析方法测定RMN细胞的特征. 结果在33℃条件下,RMN细胞呈多边形,有较短突起;细胞增殖迅速,群体倍增时间为48 h,可连续传代和冷冻保存;细胞表达SV40大T抗原,nestin蛋白和Nurrl蛋白;RMN细胞中未发现染色体倍体的异常,裸鼠接种20周后未观察到肿瘤的形成.在39℃条件下,RMN细胞增殖速度减缓,细胞形成较长突起.在含1%胎牛血清的培养基中培养1周后,RMN细胞可表达β-Ⅲ-tubulin,GFAP和Gal C等抗原,但SV40抗原表达减弱.结论RMN细胞系是SV40/tsA58基因永生化的大鼠神经前体细胞系,是具有温度敏感性及多分化潜能的前体细胞系.

外源FHIT基因对不同FHIT基因状态肺癌细胞系恶性增殖的影响及其机理的研究

目的研究外源FHIT基因对不同FHIT基因背景肺癌细胞系恶性增殖的影响并探讨抑癌机理.方法用Lipofectamine介导PEGFP-FHIT真核表达质粒转染受体细胞系并建立稳定转染细胞系.RT-PCR、免疫组织化学及Western blot方法鉴定转染细胞中外源FHIT基因和蛋白的表达.细胞集落形成实验研究外源FHIT基因对肺癌细胞恶性增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡.Western blot检测母系及转染细胞系中p21Waf/cip蛋白的表达.结果3种受体细胞转染外源FHIT基因后均检测到FHIT mRNA和蛋白的表达.集落形成实验801D-FHIT(46.3%)、A2-FHIT(43.7%)、A549-FHIT(32.7%)细胞集落形成率比801D(58.2%)、A2(60.3%)、A549(52.8%)的低,差异有显著性(P<0.01).FACS分析细胞周期显示:801D-FHIT、A2-FHIT和A549-FHIT细胞分别出现了G1、S和G2/M期阻滞.转染FHIT基因的801D-FHIT、A2-FHIT和A549-FHIT细胞p21Waf/cip蛋白表达增加. 结论外源FHIT基因能够抑制不同FHIT基因背景的肺癌细胞的恶性增殖,并引起细胞周期改变,不同FHIT基因背景的细胞产生细胞周期阻滞的时间不同.FHIT基因通过促进p21Waf/cip蛋白的表达来调节细胞周期.

牦牛脑的动脉供应

目的探讨青藏高原耗牛脑动脉供应的形态学特征,为高原动物脑动脉供应的形态学研究提供理论依据.方法对经10%福尔马林溶液固定的成年牦牛头进行大体解剖,追踪其脑动脉的来源和分布,并测量各动脉的口径.结果脑的血液由颈内动脉、上颌动脉、枕动脉和椎动脉供应.上述血管的分支于大脑垂体周围和枕骨基底部分别形成前、后硬膜外异网和大脑动脉环.颈内动脉通过大脑前动脉和大脑中动脉主要供应大脑半球前部(约60%)的血液.椎动脉参与形成基底动脉、小脑动脉系和大脑后动脉,供应脑干、小脑和大脑后部(约40%)的血液.血管起始端口径自0.4mm到2.6mm不等.结论牦牛脑的血液是由颈内动脉、上颌动脉、枕动脉和椎动脉供应的.

国家级继续医学教育项目《医学科研方法讲习班》第二期--科研设计基础及技巧即将举行

江苏省神经再生重点实验室