解剖学报杂志
Acta Anatomica Sinica 해부학보
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中国解剖学会
- 影响因子： 0.46
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0529-1356
- 国内刊号： 11-2228/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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Ghrelin对小鼠空间记忆和海马神经元突触及生长激素促分泌素受体表达的影响
目的 探讨Ghrelin对正常小鼠空间学习记忆能力和海马神经元突触及生长激素促分泌素受体(GHS-R)表达的影响. 方法 8周龄小鼠20只,随机分为实验组和对照组,分别腹腔注射Ghrelin和等量生理盐水,通过水迷宫实验检测小鼠的空间学习记忆能力,免疫组织化学实验检测海马Ghrelin受体GHS-R表达,并通过电子显微镜观察海马突触的超微结构变化. 结果 水迷宫隐匿平台实验中,第2、3、4天,实验组小鼠的逃避潜伏期与对照组相比明显缩短(P＜0.05),跨越平台次数明显增加(P＜0.05),海马CA3和齿状回区GHS-R免疫阳性产物表达明显增强(P＜0.05),神经元突触数量明显增加(P＜0.05). 结论 Ghrelin可能通过结合GHS-R,增加海马神经元突触数量,显著改善小鼠的空间学习记忆能力.
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神经鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠海马神经细胞自噬现象
目的 利用神经鞘磷脂合成酶2( SMS2)基因敲除小鼠探讨神经酰胺对海马神经细胞自噬现象的影响. 方法 将SMS2杂合子(SMS2+/-)小鼠采用杂交、回交、互交的方法进行繁殖,用酚-氯仿提取法提取小鼠基因组DNA,PCR扩增目的基因,琼脂糖凝胶电泳对小鼠基因型作出鉴定,建立纯合子(SMS2-/-)小鼠模型；采用透射电子显微镜、免疫荧光染色及Western blotting技术观察生后第7天(P7)、P14和P30 SMS2-/-小鼠海马CA1区神经细胞自噬的发生(每种方法每个时间点8只小鼠). 结果 1.SMS2-/-小鼠海马CA1区神经细胞自噬现象:电子显微镜下,模型组海马神经元内出现较多自噬体或自噬溶酶体样结构.光镜下,模型组P7、P14和P30 CA1区神经元自噬细胞数较对照组高(P＜0.01)；2.自噬相关蛋白Beclin-1对于自噬的调节作用:Beclin-1在模型组与对照组间的表达规律与微管相关蛋白1轻链3( MAPLC3)基本一致,P7、P14、P30模型组Beclin-1阳性细胞数明显多于对照组(P＜0.01).Beclin-1与MAPLC3两者在同一细胞中基本呈重叠表达；3.Western blotting检测各组海马CA1区神经细胞MAPLC3蛋白的相对表达量与上述结果一致. 结论 SMS2-/-小鼠海马神经细胞内神经酰胺增高,神经酰胺不仅促进细胞凋亡,同时促进自噬,造成小鼠海马神经细胞自噬现象增强.
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骨形态发生蛋白-7对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达的影响
目的 观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响及其机制. 方法 将40只SD雄性大鼠随机分为实验组、对照组和假手术组,采用改良线栓法制作大脑中动脉栓塞缺血再灌注(MCAO/R)模型,实验组在缺血2h再灌注后尾静脉注射BMP-7 (0.1 mg/kg) 250μl,对照组和假手术组尾静脉注射等量生理盐水,运用Bederson评分法进行神经功能缺失评分.再灌注24h后将大鼠处死,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察梗死灶范围,并计算梗死灶体积占半球体积的百分比；HE染色观察脑组织病理变化,原位缺口末端标记法(TUNEL)计数神经元凋亡数量,免疫组织化学染色观察缺血脑组织内Caspase-3表达. 结果 BMP-7组大鼠Bederson评分(1.7±0.5)比对照组(2.7±0.5)明显降低(t=4.66,P＜O.01),脑梗死体积百分比(7.6±1.4)比对照组(22.3±4.5)明显降低(t=6.98,P ＜0.01).与对照组相比,HE染色显示BMP-7组大鼠缺血侧大脑皮质脑组织损伤明显减轻.BMP-7组缺血侧大脑皮质、纹状体及海马TUNEL阳性细胞数(分别为3.6±0.6、7.4±1.1、5.0±0.7)明显低于对照组同一区域(分别为13.4±1.1、17.8±1.5、15.4±1.1,P＜0.01).BMP-7组缺血侧大脑皮质、纹状体及海马Caspase-3阳性细胞数(分别为7.6±0.9、5.8±0.8、10.6±1.1)明显低于对照组同一区域(分别为15.4±0.6、14.0±1.2、17.2±0.8,P＜0.01). 结论 BMP-7可通过下调Caspase-3表达而抑制大鼠脑缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡,起到神经保护作用.
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成纤维细胞生长因子信号调控早期鸡胚胎神经嵴细胞的迁移
目的 利用Sprouty2基因阻断成纤维细胞生长因子(FGF)信号,探讨FGF在早期鸡胚胎发育过程中对神经嵴细胞迁移的影响及其机制. 方法 通过体内培养的方法孵育鸡胚至HH9期,通过显微注射的方法将Sprouty2-绿色荧光蛋白(GFP)质粒注射入神经管腔内.实验侧使用电穿孔转染的方法转染胚胎半侧神经管,另一侧正常神经管设为对照侧.采用神经嵴细胞特异标记物HNK1免疫荧光的方法检测Sprouty2基因阻断FGF信号后是否影响胚胎头部和躯干部神经嵴细胞的迁移过程.随后,进一步通过检测神经细胞钙黏分子N-Cadherin的表达来观察细胞之间黏附作用的改变. 结果 HNK1免疫荧光检测结果显示,Sprouty2转染侧即阻断FGF信号通路后,HNK1在早期鸡胚胎的头部和躯干部的表达量均比对照侧的表达量增多；而神经细胞钙黏分子N-Cadherin检测结果表明,Sprouty2转染侧和正常对照侧N-Cadherin在头部和躯干部神经管上表达量的差异均无显著性. 结论 Sprouty2基因阻断FGF信号后,促进了早期鸡胚胎神经嵴细胞的迁移,但是FGF信号对此过程的影响可能不是由神经钙黏分子N-Cadherin介导的.
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干细胞/基因联合治疗
细胞治疗与基因治疗的相互交融形成了更行之有效的干细胞/基因联合治疗,本文简要介绍干细胞/基因联合治疗中常用的细胞类型、各种载体以及它们的优缺点；例举了迄今已报道有成效的某些人类疾病的治疗或动物实验治疗的结果.此外,指出干细胞/基因联合治疗中可能遇到的致瘤性问题及其对策.
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帕金森病小鼠模型黑质纹状体通路的形态学改变
目的 观察帕金森病小鼠模型黑质纹状体通路随病程进展而发生的形态学变化,从新的视角探讨帕金森病的病理生理机制. 方法 正常C57小鼠36只,随机分为生理盐水组和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)组,每组18只,于注射后第7、14、21、25、28、35天取材,利用免疫组织化学、免疫荧光技术和激光扫描共焦显微镜观察黑质多巴胺能神经元的数量、在纹状体内投射的神经纤维密度及其在纹状体直接通路和间接通路神经元(D1 R/D2R阳性神经元)上的分布比例. 结果 注射MPTP后,黑质多巴胺能神经元减少40％～50％；纹状体内多巴胺能神经纤维数量呈现先减少后增加的过程:第21天少,仅为正常的20％；第35天高,达到正常的45％；多巴胺能神经纤维在纹状体D1R/D2R阳性神经元上的分布比例也有先低后高的表现:第21天低,第35天高,与生理盐水组相比差异有显著性. 结论 MPTP帕金森病模型小鼠的黑质纹状体通路呈现多巴胺能神经纤维再生现象,再生的多巴胺能神经纤维更多地分布于其直接通路的神经元上.
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蛋白酶活化受体1/4参与大鼠蛛网膜下腔出血后脑内小胶质细胞的活化
目的 探讨蛋白酶活化受体1/4(PAR-1/4)对蛛网膜下腔出血(SAH)后大鼠脑内小胶质细胞活化的影响. 方法 雄性SD大鼠100只,随机分为sham组、SAH+ control siRNA组、SAH+ PAR-1 siRNA组、SAH+PAR-4 siRNA组以及SAH +PAR-1/4 siRNA组,每组20只.应用血管内插线法建立大鼠SAH模型,治疗组在术后1h脑室注射相应剂量药物.在SAH后6h和24h,观察了各组大鼠神经功能学缺陷、脑水含量和脑内伊文思蓝含量,同时应用免疫组织化学和Western blotting方法检测了脑内肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1( ICAM-1)的表达. 结果 单独应用PAR-1 siRNA或PAR-4 siRNA均可减轻SAH后大鼠的神经功能缺陷并降低血管通透性(P＜0.05),同时脑内小胶质细胞TNF-α和ICAM-1的表达也明显下降.联合应用PAR-1和PAR-4siRNA的治疗效果为显著. 结论 PAR-1/4参与了蛛网膜下腔出血后大鼠脑内小胶质细胞的活化,而PAR-1/4 siRNA可通过抑制两者的活性减少炎性因子的产生,具有显著的神经血管保护作用.
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氯化锂对FMR1基因敲除小鼠的高架十字迷宫行为的干预作用
目的 探讨糖原合成酶激酶3( GSK3)抑制剂氯化锂对FMR1基因敲除(KO)小鼠的高架十字迷宫行为的干预作用及机制. 方法 给90只30日龄FMR1基因敲除小鼠连续5d腹腔注射不同剂量的氯化锂,用药第6天进行高架十字迷宫行为学实验,通过录像机录像,然后用Smart软件分析录像,观察能否改善KO鼠的高架十字迷宫的表型；同时通过免疫印迹技术检测KO及野生型(WT)鼠的海马和皮层中GSK3β和磷酸化GSK3β(p-GSK3β)的变化. 结果 在高架十字迷宫实验中,与WT组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显增强,且KO组小鼠在开放区域的活动时间、次数以及路程均明显高于WT组.KO鼠用氯化锂后,在开放区域的活动时间、次数以及路程均减低,差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫印迹实验结果显示,KO鼠p-GSK3β表达比WT鼠少；用氯化锂后,KO鼠p-GSK3β表达增加.WT鼠用氯化锂后,开放区域活动时间、次数以及路程有较少改善,p-GSK3β表达也有增加.未使用氯化锂的KO鼠与WT鼠相比,总GSK3β表达无明显差异,KO鼠和WT鼠使用氯化锂后,总GSK3β无明显改变,P＞0.05. 结论 GSK3β的抑制剂氯化锂能改善KO鼠的高架十字迷宫表型,对KO鼠有治疗作用,其机制可能与氯化锂导致的p-GSK33表达增加有关.
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喙端迁移流的发生及其细胞凋亡
目的 研究生后不同日龄小鼠喙端迁移流(RMS)的发育,神经干细胞增殖和凋亡的规律. 方法 利用Caspase-8免疫荧光标记法和5'-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法,对小鼠RMS内的神经干细胞增殖和凋亡进行研究(n=92). 结果 生后早期小鼠脑内,尤其是室管下区(SVZ)和RMS,存在大量的增殖细胞.随着小鼠年龄的增加,脑内干细胞逐渐减少,到成年,大脑皮质几乎见不到增殖的神经干细胞,但在SVZ和RMS仍可以看到许多增殖的神经干细胞.在RMS,神经干细胞增殖的同时伴随着细胞凋亡,干细胞的增殖与凋亡存在着正相关关系.结论 RMS的神经干细胞增殖与凋亡有重要的生理意义,通过细胞凋亡,RMS可以调节神经干细胞向嗅球迁移的数量,也可以调节干细胞向颗粒细胞分化.
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ApoE基因多态性对毛南族人群血清apoA1、apoB水平的影响
目的 探讨载脂蛋白(apo)E基因多态性对毛南族人群血清apoA1、apoB水平的影响. 方法 收集221名贵州省黔南州毛南族人群血样品,采用免疫透射比浊法测定血清apoA1、apoB浓度；应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)检测apoE2、E3、E4基因多态性. 结果 与apoE2/2+ E2/3+ E2/4基因型亚组(n=37)比较,apoE3/4+E4/4基因型亚组(n=41)和apoE3/3基因型亚组(n=143)血清apoB水平升高(P＜0.05),apoA1/B比值降低(P＜0.05)；apoE3/4+ E4/4基因型亚组apoB水平高于apoE3/3亚组(P＜0.05).未发现不同apoE基因型亚组间血清apoA1水平差异存在统计学意义(P＞0.05). 结论 毛南族人群apoE基因多态性明显影响血清apoB水平和apoA1/B比值,但未见该基因多态性与血清apoA1水平相关联.
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贵州习水苗族头面部体质特征
目的 研究贵州习水苗族头面部体质特征是否存在性别差异,以及与我国南方其他5个苗族和贵州其他族群的亲缘关系. 方法 对世居在贵州习水良村镇苗族的357名(男173人,女184人)年龄在20～59岁的苗族进行头面部活体观察和测量(观察项目14项,测量项目19项)；采用聚类分析,选择欧氏距离值,比较其间亲缘关系.结果 习水苗族头面部的特征除头长、额小宽、下颌角间宽、两眼内角宽、鼻长、口裂宽、唇高、全头高、形态面高男女差异无显著性(P＞0.05)外,鼻宽、鼻高、鼻深、头耳高男女性别差异显著(0.01＜P＜0.05),而头宽、两耳屏宽、面宽、两眼外角宽、容貌面高以及头水平围男女性别差异极显著(P＜0.01)；习水苗族男女以直发为主,大部分头发为黑色,前额发际多为直型；大部为浅色皮肤,以黑褐色眼色为主；眼裂倾斜度以外角高于内角为主,上眼睑大部分有皱褶,且多为短睫毛;鼻梁形态,男性多为凸型,女性多为直型,以上翘的鼻尖方向为主,鼻孔形状大部分为卵圆形；上唇皮肤部突出以正唇为主,且红唇厚度大多为中等；耳垂形状以三角形多见.男性头型以特圆型、女性以圆型多见；面型都以阔面型为主；都属中鼻型. 结论 习水苗族头面部体质特征有些存在性别差异和差异显著;男性与贵州王卡苗族,女性与贵州布依族亲缘关系近.
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碱性成纤维生长因子基因单核苷酸多态性与广西壮族男性骨质疏松的关系
目的 探讨碱性成纤维生长因子(bFGF)基因5个单核苷酸多态性(SNPs)与广西百色地区壮族男性骨密度(BMD)的关系. 方法 选取壮族男性147例跟骨骨量减少患者和154例骨量正常对照进行病例对照研究,采用单碱基延伸的单核苷酸多态性分型技术对广西百色地区301例壮族男性的脂联素基因的5个位点(rs308379、rs12644427、rs3789138、rs308442和rs3747676)进行了基因分型,采用法国生产的Osteuspace干式超声骨密度仪测量右侧跟骨超声振幅衰减(BUA). 结果 rs308379、rs12644427、rs3789138、rs308442和rs3747676多态性分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P＞0.05).以5个多态性位点作为自变量的多元Logistic回归显示,仅rs308442多态性与跟骨骨量减少显著相关(OR=1.831,95％ CI:1.075 ～3.116,P=0.026). 结论 bFGF基因第1内含子rs308442多态性与壮族男性BMD可能有一定关联,其中TT型可能对BMD具有一定的保护作用,TA型是BMD降低的危险因素.rs308379、rs12644427、rs3789138及rs3747676多态性与壮族男性BMD无相关性.
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超级化激活环核苷酸门控阳离子通道4、连接蛋白43和平足蛋白在小鼠胚胎心的表达与心传导系的发生
目的 探讨小鼠胚胎心传导系的发生机制. 方法 用抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗超级化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)、抗缝隙连接蛋白43( CX43)和抗平足蛋白(podoplanin)抗体,对40只胚龄9～16d小鼠胚胎心进行连续石蜡切片并免疫组织化学或免疫荧光染色. 结果 胚龄9d,较强的HCN4阳性表达集中在MHC阴性的静脉窦壁,随心脏发育,HCN4较强阳性表达逐渐向窦房结转移.胚龄11d开始,CX43阴性表达显示部位特异性.CX43阴性染色经窭房结沿右心房背侧壁和左、右静脉瓣向房室管背侧壁延伸.胚龄13d,左、右静脉瓣与房间隔底部融合后,进一步延续为房室管背侧壁发育中的CX43阴性染色的房室结,继而与室间隔顶部CX43阴性的房室束相连.胚龄9～ 10d,在MHC阳性心肌、心包腔背侧壁脏壁中胚层心肌前体细胞及静脉窦周间充质均显示podoplanin阳性表达.胚龄11 ～13d,podoplanin阳性间充质细胞沿心脏外表面扩展形成podoplanin阳性间皮样心外膜. 结论 心脏发育早期,主起搏点位于静脉窦壁,起搏电位的产生早于收缩功能的发生.CX43阴性心肌是发育中的心传导系心肌,在胚龄11d即可观察到心传导系早期雏形.podoplanin参与促进心肌前体细胞向心肌细胞的分化.
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麻黄素对仔鼠肝脏组织结构和相关活性物质的影响
目的 探讨麻黄素对仔鼠肝组织结构、Bax蛋白的表达和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)含量及血清中谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)活力的影响.方法 对48只仔鼠采用递增剂量腹腔莲续注射麻黄素溶液(2.0g/L、3.0g/L和4.0g/L)和等量的生理盐水,分别于注射5d、10d和15d称量检测仔鼠肝重的变化,用比色法测定仔鼠肝组织中SOD、CAT活性、MDA含量及血清中GOT和GPT活性的变化,用光学显微镜观察肝脏组织结构的变化,用免疫组织化学法检测肝组织中Bax蛋白表达的变化. 结果 注射麻黄素5d、10d、15d仔鼠的肝重低于对照组；随着给药时间的延长和药剂量的增加,SOD和CAT的活性先升高后降低,实验组仔鼠5d时SOD、CAT的活性高于对照组,差异显著(P＜0.05),10d、15d时SOD、CAT的活性低于对照组,差异显著或极显著(P＜0.05或P＜0.01)；MDA含量则先降低后升高,实验组仔鼠5d时MDA含量低于对照组,差异显著(P＜0.05),10d、15d时MDA含量高于对照组,差异极显著(P＜0.01).注射麻黄素后仔鼠血清内GOT和GPT活性高于对照组,差异显著或极显著(P＜0.05或P＜0.01).注射麻黄素后仔鼠肝脏有不同程度的损伤,肝板萎缩,肝血窦扩张,细胞界限模糊,内皮细胞脱落；Bax蛋白阳性表达数高于对照组,差异显著或极显著(P＜0.05或P＜0.01). 结论 麻黄素影响发育期仔鼠肝脏的组织结构,这可能与肝组织中抗氧化物酶活性降低和MDA含量升高有关.
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甲醛对机体整体内源性代谢产物的影响
目的 探讨甲醛暴露人群对机体内源性小分子代谢产物的影响. 方法 借助超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)检测技术,对甲醛暴露组与对照组的尿液样品进行检测,建立尿液代谢轮廓图,并进一步借助非监督模式的主成分分析( PCA),从体内微观角度证明了甲醛对机体整体代谢网络的干扰. 结果 建立了甲醛职业接触者尿中内源性代谢产物的UPLC-Q-TOF/MS测定方法,确定甲醛职业接触与未.接触者尿液代谢轮廓图的差异；明确了表征甲醛对机体损伤的内源性生物标志物.结论 从生物体内整体代谢方面说明了甲醛对职业接触者的毒性危害.
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静脉体区及其连接结构的造影研究
目的 探索简便易行的静脉造影的方法并分析其造影机制. 方法 SD大鼠40只,随机分为A、B两组,每组20只,再随机分成4组(a～d),每组5只.A组通过颈内静脉和尾静脉同时分别灌注不同浓度的造影剂；B组通过颈总动脉分别灌注不同浓度的造影剂.A、B两组同时造影并配合电脑图像处理技术,观测静脉显影情况.新西兰大白兔4只,肝素抗凝处理后取皮,直接经皮静脉灌注造影剂,探讨静脉造影的机制. 结果 A组中明胶浓度为7％的Ac组大鼠全身静脉显影清晰,可清楚地显示静脉的走行及其分布情况；B组中明胶浓度为2％的Bb组大鼠全身动、静脉同时显影,可清晰地显示动、静脉的伴行及其相互之间的连接关系.在压力和灌注量都足够的情况下,造影剂可充填兔皮内主干静脉及其大的交通支. 结论 本方法既可以直接通过静脉灌注进行全身静脉造影,又可通过动静脉联合造影同时显示动脉与静脉.静脉造影既需要“瓣膜失效”,也需要“迷宫式回流”.
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油樟叶挥发油及其主要成分的体外抗肝癌活性
目的 探讨油樟叶挥发油及其主要组成成分(1,8-桉叶油素、黄樟油素、γ-松油烯、α-松油烯和松油烯-4-醇)的抗肝癌活性. 方法 运用体外培养细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)快速比色法,观察油樟叶挥发油的主要组成成分(1,8-桉叶油素、黄樟油素、α-松油烯、松油烯-4-醇和γ-松油烯)对人肝癌BEL-7402细胞的抑制作用,并用软琼脂细胞集落形成实验,观察油樟叶挥发油的主要组成成分对人肝癌BEL-7402细胞形成细胞集落的抑制作用. 结果 油樟叶挥发油、1,8-桉叶油素、黄樟油素、γ-松油烯、α-松油烯和松油烯-4-醇体外对人肝癌BEL-7402细胞的大增殖抑制率分别为58.63％、42.83％、90.04％、81.53％、34.83％和31.46％；对人肝癌BEL-7402细胞集落形成的大抑制率分别为55.13％、61.99％、94.56％、89.54％、62.02％和59.91％. 结论 油樟叶挥发油及其主要组成成分能不同程度地抑制人肝癌BEL-7402细胞的体外增殖及单个细胞形成细胞集落.其中黄樟油素和γ-松油烯对人肝癌BEL-7402细胞的抑制作用强.
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红毛五加多糖对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖和核转录因子p53、c-myc蛋白表达的影响
目的 探讨红毛五加多糖(AGP)对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖以及对细胞核转录因子p53、c-myc表达的影响.方法 在DMEM培养基内加入不同浓度AGP(0.15625、0.3125、0.625、1.25、2.5 g/L)体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231 1d、3d、5d、7d后,用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒WST-1测定人乳腺癌细胞的增殖,倒置显微镜观察其形态变化；用免疫荧光法、免疫印迹法检测人乳腺癌细胞凋亡相关蛋白p53、c-myc的表达.结果 WST-1法显示,不同浓度AGP作用3d、5d、7d后对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的增殖具有抑制作用,与阴性对照组相比差异有显著性(P＜0.05)；抑制率与AGP剂量、作用时间呈依赖性.免疫荧光法及免疫印迹法显示,AGP作用于人乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,其细胞的c-myc表达明显减弱,并向细胞质内聚集；而免疫印迹法显示p53表达显著增强.结论 AGP具有抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖的作用,这可能与AGP下调c-myc表达、上调p53表达有关.
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乙二胺四乙酸联合正丁醇在大鼠胫骨癌痛标本石蜡切片制作中的应用
目的 探索一种简便有效的制作大鼠胫骨癌痛标本石蜡组织切片的方法. 方法 取大鼠胫骨癌痛模型组和正常组胫骨标本,使用乙二胺四乙酸(EDTA)加温脱钙联合正丁醇取代传统强酸脱钙、纯酒精脱水和二甲苯透明,制作石蜡切片后HE染色观察. 结果 两组大鼠胫骨癌痛标本形态结构均保存完整.与传统方法相比,制片步骤简单,脱水和透明时间较为灵活,蜡块切割性能较好.结论 EDTA与正丁醇的联合应用,是大鼠胫骨癌痛标本石蜡组织切片制作适宜和可靠的方法.
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重组人内抑素对人瘢痕疙瘩成纤维细胞形态及增殖的影响
目的 观察重组人内抑素( rhEndostatin)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)增殖的影响.方法 体外培养及鉴定人KFs；应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分别检测不同浓度rhEndostatin (6.25 × 10-6、1.25×104、2.50×10-5、5.00×10-5、1.00×10-4mg/L)作用24h、48h、72h后对KFs增殖的影响,并同时观察其形态变化. 结果 组织块接种7～8d后,其周边可见少许梭形细胞,继之细胞逐渐增多并以组织块为中心呈放射状生长；传2代培养的细胞单层排列,形态均一,呈长梭状,折光性好.细胞波形蛋白免疫化学染色显示胞质均呈棕黄色.rhEndostatin(6.25×10-6mg/L浓度组除外)能明显抑制KFs的增殖(P＜0.05),抑制效应与rhEndostatin浓度和作用时间呈一定的依赖关系；其中,5.00×10-5mg/L和1.00 × 10-4mg/L组rhEndostatin作用48 h后,细胞生长缓慢,体积变小,数目减少,排列紊乱. 结论 重组人内抑素对人KFs增殖具有抑制作用.
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小鼠铁调素1功能肽Hepc25的表达及纯化
目的 利用原核生物表达载体表达小鼠铁调素功能肽Hepc25,并对其进行纯化. 方法 选取编码25aa的Hepc25基因与硫氧还蛋白基因融合后在大肠杆菌中大规模诱导表达该融合蛋白,以RT-PCR法扩增小鼠Hepcidin1功能肽基因Hepc25,将目的基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中获得pET-32a-Hepc25,再以pET-32a-Hepc25转化大肠杆菌BL21表达融合蛋白,收集菌体蛋白,用Western blotting和SDS-PAGE法检测融合蛋白,优化融合蛋白高表达条件.依次利用亲和层析、离子交换层析和凝胶排阻层析法纯化融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切、高效液相色谱法(HPLC)分离纯化获得了目的蛋白Hepc25. 结果 成功构建了小鼠pET-32a-Hepc25融合蛋白表达载体,融合蛋白表达量约占大肠杆菌BL21总蛋白量的28％,融合蛋白在33℃、120r/min、终浓度为0.2mmol/L的异丙基-13-D硫化半乳庶糖(IPTG)诱导8h的条件下表达量高,融合蛋白纯度达95％.融合蛋白经过色谱分离、酶切和HPLC分析,目的蛋白的纯度也达95％以上. 结论 利用原核生物表达载体成功表达并纯化了小鼠铁调素功能肽Hepc25,并筛选出了高表达的优化条件.
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JNK信号通路在大鼠肝再生及肝硬化的细胞增殖和凋亡中作用的比较
目的 从基因转录水平了解JNK信号通路在大鼠肝再生(LR)和肝硬化(LC)中的作用异同. 方法 采用2/3部分肝切除手术制备大鼠肝再生模型,以腹腔注射CCl4中性菜籽油溶液法建立大鼠肝硬化模型,采用大鼠Genome 230 2.0芯片检测不同时间点再生肝和肝硬化组织中JNK信号通路的基因表达谱,用生物信息学和系统生物学等方法分析基因表达谱预示的增殖和凋亡活动. 结果 JNK信号通路涉及302个基因和42条途径,大鼠Genome 230 2.0芯片含上述基因中的240个基因,其中,79个基因发生有意义表达变化,涉及LR的52个基因,LC的5个基因,有22个基因与两者相关.在大鼠LR启动阶段,途径1和16促进细胞增殖及途径22 ～ 33促进细胞凋亡作用强于对照；在进展阶段,途径1～17、34和35促进细胞增殖及途径22 ～33促进细胞凋亡作用强于对照,途径37～41抑制细胞凋亡作用弱于对照；在终止阶段,途径37、39、41和42诱导细胞凋亡作用弱于对照,同时,尚未发现途径18 ～ 21和36参与大鼠LR.而在LC发生中,JNK信号通路中的这些途径与对照相比均无显著差异.结论 JNK信号通路的37条途径调控大鼠肝再生的细胞增殖和凋亡,对大鼠肝硬化的调控作用则不显著.
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Caspase信号通路调控大鼠再生肝肝细胞的凋亡
目的 从基因转录水平了解Caspase信号通路各途径对大鼠再生肝肝细胞凋亡的调节作用. 方法 将114只大鼠随机分为19组,包括9个部分肝切除组,9个假手术组和1个正常对照组.于手术后10个不同时间点用常规的两步灌流法和Percoll密度梯度离心法分离大鼠肝细胞,用大鼠Genome 230 2.0芯片检测在大鼠肝再生(LR)中Caspase信号通路相关基因表达变化,用荧光定量PCR确定芯片结果的可靠性,用生物信息学和系统生物学等方法分析基因表达变化预示的Caspase信号通路在调控大鼠再生肝肝细胞凋亡中的作用. 结果 Caspase信号通路涉及38条途径和123个基因,大鼠Genome 230 2.0芯片含其中的106个基因,38个基因在大鼠肝再生中与肝细胞相关.Caspase信号通路抑制细胞凋亡的21条途径中,途径1、2和11在大鼠部分肝切除(PH)后的30h,途径27、29和31在72h,途径15和16在2h和30h,途径3和4在30h和72h抑制肝细胞凋亡.促进细胞凋亡的17条途径中,途径14在2h,途径34在6h,途径7在30h,途径13在2h和30h,途径36在6h和30h促进肝细胞凋亡.同时,尚未发现其他途径参与肝细胞增殖和(或)凋亡调控. 结论 Caspase信号通路的15条途径和38个基因调控大鼠再生肝的肝细胞凋亡.
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不同年龄小鼠脂肪源间充质干细胞体外原代培养衰老和凋亡的变化
目的 探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化. 方法 用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组细胞的形态差异和生长情况,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测ADMSCs衰老情况,PI-Hoechst33342双染色观察ADMSCs的凋亡变化. 结果 两组体外原代培养的ADMSCs均贴壁生长,具有典型干细胞的形态和生长特征,两组ADMSCs CD73、CD90和CD105的表型一致.SA-β-Gal染色显示:原代培养的老年组ADMSCs衰老比例比幼年组多,1月组原代培养2～7d的ADMSCs阳性率分别为(3.87±1.34)％、(4.21±1.22)％、(9.00±0.98)％、(11.20±1.24)％、(9.50±2.19)％和(13.20±2.93)％;24月组分别为(8.67±1.05)％、(10.23±0.98)％、(12.80±0.78)％、(17.10±1.13)％、(19.80±1.59)％和(24.70±1.86)％.PI-Hoechst 33342染液双染显示:1月组原代培养2～ 7d的ADMSCs凋亡率分别为(22.1±1.4)％、(36.7±1.62)％、(11.7±1.45)％、(38.4±1.57)％、(6.5±1.32)％和(11,3±1.63)％；24月组4～7d的ADMSCs凋亡率分别为(29.4±1.72)％、(37.6±1.64)％、(19.4±1.29)％和(18.9±1.25)％. 结论 老龄ADMSCs增殖能力下降,衰老、凋亡和坏死的细胞比例增加；随着ADMSCs原代培养时间的延长,其衰老增加,但凋亡和坏死无规律性变化.
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组织蛋白酶B-RNAi-慢病毒对体外类毛细血管形成的抑制
目的 探讨组织蛋白酶β-RNAi-慢病毒CathepsinB-RNAi-Lentivirus( CTSB-RNAi- LV)对体外类毛细血管形成的抑制作用. 方法 实验分为对照组和RNAi慢病毒组,采用免疫组织化学和构建体外类毛细血管模型的方法,检测CTSB-RNAi-LV转染小鼠脑微血管内皮细胞(mouse brain micvascular endothelial cells,bEND.3)后对Cathepsin B和类毛细血管形成的影响. 结果 免疫组织化学结果显示,bEND.3内Cathepsin B的表达呈棕褐色,主要位于细胞核周围,各组间Cathepsin B的表达以RNAi慢病毒组少;bEND.3和培养基总蛋白测定与体外类毛细血管形成实验表明:RNAi慢病毒组总蛋白的含量和体外类毛细血管的形成区域明显低于其余两组,其组间比较有统计学意义(P＜0.05). 结论 CTSB-RNAi- LV能抑制bEND.3内Cathepsin B的表达和体外类毛细血管区域的形成.CTSB-RNAi-LV可靶向抑制体外类毛细血管的形成.
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钙调素在生长相关蛋白-43调控细胞周期中的作用
目的 探讨钙调素-43( CaM)在生长相关蛋白(-43)(GAP-43)调控细胞周期过程中的作用. 方法 利用反转录病毒体系构建表达不同活性状态的GAP-43(即野生型、非磷酸化型和假磷酸化型GAP-43)NIH3T3细胞模型,并分别命名为表达野生型GAP-43 (3T3-G)、表达非磷酸化GAP-43(3T3-A)和表达假磷酸化GAP-43 (3T3-D)；另设对照组(转染空载体NIH3T3细胞).通过免疫组织化学及Western blotting鉴定各型细胞模型转入GAP-43的情况；应用免疫共沉淀检测各型GAP-43与CaM的功能关系；应用细胞生长曲线、BrdU累积标记法、BrdU脉冲标记法测定各型转GAP-43细胞的细胞周期. 结果 免疫组织化学和Western blotting结果显示,NIH3T3细胞能够表达转入的各型GAP-43.其中,3T3-A细胞增殖速度较其他细胞减缓.免疫共沉淀显示,3T3-A中有GAP-43和CaM相互作用表现；3T3-G中GAP-43和CaM有少量相互作用；3T3-D与3T3-P中则相互作用.累积BrdU测定,脉冲BrdU测定M期的实验表明,3T3-P细胞无明显周期改变；3T3-D与3T3-G细胞的周期延长；3T3-A细胞的周期明显延长并显示G1期明显延长. 结论 表达GAP-43的细胞其增殖表现可能是由于GAP-43结合了CaM,使之与Ca2+的结合减少而引起细胞周期(尤其是G1期)的延长.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
| 1998 | 01 02 03 04 |
