App17肽对Tau蛋白超磷酸化表达的影响

目的通过对Tau蛋白磷酸化在脑内分布的观察,研究App17肽对糖尿病小鼠脑神经元Tau蛋白磷酸化的影响.方法用链脲佐菌素(streptozotion,STZ)诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射App17肽对糖尿病小鼠进行治疗,4周后取脑组织做AT-8、Tau-1、蛋白磷酸酯酶(PP-2B)脱磷酸后的Tau-1免疫组织化学染色.结果糖尿病小鼠脑内AT-8阳性反应神经元广泛分布于压后颗粒皮层、海马、丘脑、下丘脑等部位,胞浆深染,而正常小鼠及App17肽保护的糖尿病小鼠脑内阳性反应细胞仅在海马和压后颗粒皮层表达,阳性细胞数目少,染色淡;用Tau-1单染正常小鼠脑及App17肽治疗的糖尿病小鼠脑的压后颗粒皮层及海马阳性反应神经元数目多,糖尿病小鼠只有用PP-2B脱磷酸后阳性反应神经元数目及染色程度才与正常组接近.结论糖尿病小鼠脑内Tau蛋白磷酸化广泛表达,App17肽可改善糖尿病小鼠脑内Tau蛋白磷酸化,从而改善学习与记忆.

转化生长因子β1及其受体在着床期小鼠子宫内膜中的免疫组织化学研究

目的进一步证实转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGFβ1)在胚泡着床过程中的生物学作用.方法利用昆明小鼠,在着床前后不同时期取材,通过改良的免疫组织化学方法,检测了TGFβ1及其受体(TGFR1)在子宫内膜中的表达状况.结果受精后第4d,子宫内膜表面上皮和腺上皮细胞中TGFβ1及其受体均较未孕期增加,成纤维细胞周围的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)也呈TGFβ1阳性着色.受精后第5、6d,TGFβ1及其受体主要表达于初级蜕膜带(primary decidual zone,PDZ).随着胚泡植入的深入,TGFβ1及其受体广泛分布于蜕膜细胞.结论TGFβ1及其受体的表达与胚泡植入过程密切相关.

氧化呼吸链在精子运动中的作用研究

目的探讨精子运动的能量供应机制.方法采用计算机辅助精子分析(CASA)和组织化学、生物化学方法,检测人精子用氧化呼吸链阻断剂KCN孵育前后,运动状态和细胞色素氧化酶活性.结果用KCN孵育后精子细胞色素氧化酶活性被完全阻断.然而,精子运动速度参数和运动状态参数无显著改变.结论在氧化呼吸链阻断后,精子仍能维持基本正常地运动,表明精子运动的供能尚有其他来源.

渔游蛇生精上皮超微结构的季节性变化

目的研究渔游蛇生精上皮各类细胞超微结构的季节性变化,为探讨蛇类的受精机理及人工养殖提供理论依据.方法以2.5%戊二醛和1%锇酸双固定,按常规制作石蜡切片和超薄切片,分别用光镜和H-600电镜观察.结果渔游蛇4月份生精上皮的细胞呈休止状态;5～7月份是精原细胞复苏、增殖、分化形成精母细胞时期;8～9月份是精母细胞分裂成为精细胞时期;9月末至11月份是精子形成高峰期;12月至次年1月份,精子发生渐趋停滞.结论渔游蛇精子发生的周期性符合羊膜动物的基本规律,又有其自身的特点,特别是精子形成过程有许多独特之处.

衰老大鼠心肌细胞器形态的定性定量改变及其调控钙离子能力分析

目的探讨心肌衰老机制.方法采用Wistar大鼠,分老龄组(22月龄)和成年组(7月龄).用透射电镜观察心肌细胞器形态定性改变;用体视学方法测定心肌细胞器形态定量改变;用X射线能谱仪分析心肌细胞器调控Ca2+能力.结果与成年组比较,老龄组大鼠心肌改变:(1)核有切痕、肌原纤维不规整、闰盘离解、线粒体和肌浆网肿胀、脂褐素和残余体增多.(2)在心肌组织内,非肌细胞所占体积份数增加,线粒体和肌浆网体密度减少,线粒体外膜比面积、内膜+嵴比面积、肌浆网比面积减少.(3)在舒张状态下,肌原纤维和线粒体内Ca2+增加,肌浆网内Ca2+减少.结论衰老心肌的舒缩力减退,心肌细胞器形态呈明显改变,心肌衰老与线粒体和肌浆网的形态改变及其调控Ca2+能力有直接关系.

bcl-2基因在小鼠睾丸及试验隐睾中表达的研究

目的研究bcl-2基因在正常小鼠睾丸中的定位表达及试验隐睾所导致的改变.方法以Western-blotting印迹法从蛋白水平检测bcl-2基因在正常小鼠睾丸及试验隐睾中的表达、变化;地高辛标记bcl-2基因cDNA探针,石蜡组织切片原位杂交技术,从mRNA水平检测bcl-2基因在小鼠生精上皮中的定位及试验隐睾所导致的改变.结果Bcl-2蛋白在正常小鼠睾丸中有较丰富的表达,试验隐睾导致其表达明显降低;bcl-2基因在生精细胞中有较高水平的mRNA转录,表达细胞主要为各级生精细胞,支持细胞和间质细胞未见表达,隐睾术后仍然保持较高水平的mRNA转录.结论Bcl-2蛋白可能在生精细胞主动退化的调节中起着重要作用.

不同年龄大鼠斜角带核水平支神经元内TrkA和ChAT的表达--免疫组织化学研究

目的了解大鼠基底前脑斜角带核水平支神经元内酪氨酸激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)、胆碱乙酰化转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)样阳性神经元的生后发育规律及两者的相互关系.方法用免疫组织化学方法结合图像分析仪检测大鼠基底前脑斜角带核水平支TrkA、ChAT样阳性神经元的数量、面积和灰度值.结果TrkA、ChAT分布于基底前脑神经元.生后1d可见TrkA表达,但生后5d才出现ChAT表达.生后20dTrkA、ChAT表达至高峰;生后30d下调,成年时维持相对较高水平.老年鼠TrkA、ChAT样阳性神经元出现萎缩、数量也分别减少39.7%、33.3%;胞体平均面积分别减少15.7%、12.8%;平均灰度值分别减少29.9%、9.9%.同时,不同年龄大鼠TrkA、ChAT样阳性神经元截面积和灰度呈弱正相关,数量呈正相关.结论大鼠基底前脑斜角带核水平支神经元TrkA表达早于ChAT表达.从生后5d起,TrkA、ChAT表达有相似的时间模式.TrkA可能参与斜角带核胆碱能神经元的发育、分化、成熟和老化.老年鼠TrkA、ChAT表达下调可能是老年动物和阿尔茨海默病人基底前脑胆碱能神经元变性的易感性增加的原因之一.

转染反义Fas阻断T细胞凋亡及对肿瘤的治疗意义

目的通过阻断T细胞的Fas信号传递途径,探讨消除肿瘤对T细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义.方法流式细胞术、RT-PCR方法检测卵巢癌细胞表达Fas和FasL.构建pcDNA3-反义Fas真核表达载体,经脂质体转染Jurkat细胞,流式细胞仪检测Fas表达变化.以Annexin-V和MTT法检测转染反义Fas基因对Jurkat细胞凋亡的影响.采用MTT体外杀伤实验观察3AO对Jurkat细胞杀伤变化.结果6种卵巢癌细胞均表达Fas和FasL.pcDNA3-反义Fas基因可以使Jurkat细胞表达Fas量下降并部分阻断Fas单抗诱导的Jurkat细胞凋亡,3AO对其杀伤减弱.结论卵巢癌细胞表达FasL可能是其逃逸免疫监视并产生对淋巴细胞攻击的原因之一;应用反义技术阻断Fas表达,可部分阻断Fas单抗诱导Jurkat细胞凋亡,可削弱肿瘤细胞对淋巴细胞的攻击.

大鼠肾上腺的NADPH、NPY、CGRP、SP、c-fos细胞化学特性

目的探讨肾上腺内分泌组织和神经组织的双重组织学特性.方法用组织化学和免疫组织化学技术,在光学显微镜下观察NADPH、NPY、CGRP、SP、c-fos在大鼠肾上腺的分布.结果肾上腺皮质分布有NPY阳性神经细胞和神经纤维、CGRP阳性神经纤维;肾上腺髓质分布有NADPH-d阳性神经细胞和神经纤维、CGRP阳性神经纤维、SP阳性神经纤维、c-fos阳性神经细胞和神经纤维.肾上腺皮质球状带、网状带、束状带细胞均NADPH-d阳性,髓质部分嗜铬细胞NADPH-d阳性,部分嗜铬细胞NPY阳性,部分嗜铬细胞CGRP阳性,部分嗜铬细胞SP阳性.结论大鼠肾上腺接受广泛的非经典递质的神经支配,特别是肽能神经支配的肾上腺实质细胞及髓质嗜铬细胞,能分泌多种神经肽物质.提示肾上腺的内分泌活动不仅受到复杂的神经调节而且也受到自身的活性物质的调节.

小鼠间质胶原和基膜成分在诱导排卵过程中的变化

目的研究间质胶原和基膜成分在诱导排卵过程中的变化.方法苦味酸-天狼星红偏振光法,生物素-抗生物素蛋白间接免疫荧光,原位杂交.结果排卵前后,Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白的分布、数量,以及Ⅳ型胶原和间质金属蛋白酶-2 mRNA的表达有一定改变.结论间质胶原和基膜成分对排卵过程有一定调控作用.

一氧化氮合酶在自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质的分布

目的探讨自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质内一氧化氮合酶阳性细胞和纤维的分布及其与自发性高血压的关系.方法采用NADPH-d组织化学方法,并以计算机图像分析系统对脊髓胸腰部中间外侧核本部区NADPH-d染色强度(A值)进行半定量分析.结果1.在脊髓中间带灰质区,一氧化氮合酶阳性神经细胞和纤维主要见于胸腰部中间外侧核本部区和中央管周围,在中介核区也有少量分布.胸腰部中间外侧核本部区染色阳性细胞成群分布,细胞群的大小、间距随节段而稍有不同.一氧化氮合酶阳性细胞分布模式在自发性高血压大鼠和正常鼠两组之间未发现明显差异.2.在脊髓T2、T5、T8、T11、L1各节段中间外侧核本部区,一氧化氮合酶阳性物质的A值,自发性高血压大鼠比正常鼠低.统计结果显示,差异有显著性(P＜0.05).结论脊髓中间带灰质的交感神经节前神经细胞可能通过一氧化氮表达参与调控血压升高和维持.

针刺对小鼠巨噬细胞基因表达的效应

目的为了探讨针刺镇痛效应与细胞免疫的关系,研究了针刺对小鼠巨噬细胞中c-fos mRNA,ppENKmRNA,iNOSmRNA及iNOS活性的效应.方法20只BALB/c小鼠被随机分成2组:a.用5Hz电针处理的针刺组;b.未用电针处理的对照组.针刺或牵拉前后用钾离子渗透法检测痛阈.实验采用原位杂交,NADPHNBT组织化学,RNA斑点印迹及蛋白质斑点印迹技术.应用TLC扫描仪扫描斑点印迹信号并作统计学处理.结果杂交信号和iNOS活性呈现蓝紫色,信号均定位于巨噬细胞的胞质.与对照组相比,针刺组的所有印迹信号均增强,P＜0.01.针刺组中c-fos mRNA,ppENKmRNA,iNOSmRNA的表达及iNOS的活性与提高的痛阈呈正相关.此外,c-fos mRNA与ppENKmRNA之间的变动呈正相关.结论针刺可上调小鼠巨噬细胞中c-fos,ppENK,iNOS的基因表达,且提示c-fos可能参与ppENK基因表达,c-fosmRNA与ppENKmRNA可能同时表达.

轴突损伤距离对成年金黄地鼠视网膜节细胞轴突在正常或预先溃变周围神经移植物中再生的影响

目的系统研究轴突损伤的距离与轴突再生之间的关系,以及预先溃变周围神经移植物对视网膜节细胞(简称节细胞)轴突在不同距离损伤后再生的影响.方法在距成年金黄地鼠眼球后极0.5、1、1.5、2、3或7mm处切断左侧视神经,视神经眶侧断端同正常(正常组)或预先溃变(溃变组)的周围神经移植物相吻合.结果移植术后28d,两组荧光金逆行标记的发出再生轴突的节细胞数量均随轴突损伤距离的增加而下降,并以0.5～3mm距离点之间下降为明显.比较两组对应距离点,溃变组标记节细胞数量在2、3mm距离点较正常组显著增多.结论成年金黄地鼠节细胞轴突损伤的距离,决定了发出再生轴突的节细胞数量.预先溃变周围神经移植物对节细胞轴突再生具有促进作用,并以轴突损伤距离为条件.

GDNF在坐骨神经损伤后大鼠L4～6背根节神经元的表达及变化

目的观察坐骨神经夹伤后不同时间点,胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在成年大鼠L4～6背根节(DRG)中的分布,探讨GDNF对感觉神经元损伤的反应.方法成年大鼠右侧坐骨神经夹伤后,分别取伤后1、3、5、7、10、14、28和56d L4～6背根节,行抗GDNF多克隆抗体免疫组织化学ABC法染色,之后对染色结果进行图像分析.结果GDNF免疫反应存在于坐骨神经夹伤后1、3、5、7、10、14、28和56d成年大鼠L4～6背根节神经元中,图像分析结果表明,伤后1、3、5和7d的损伤侧背根节神经元的平均光密度大于对照侧背根节神经元.结论大鼠坐骨神经夹伤后,GDNF在背根节L4～6感觉神经元中有一定量的变化,且伤后1周内GDNF在伤侧背根节神经元中的表达增强.

山羊心脏中心纤维体内的骨髓组织

目的探讨山羊心脏中心纤维体的组织结构.方法用石蜡切片,HE、Masson和苏木素-美蓝-天青-伊红染色,光镜观察.结果山羊中心纤维体为骨组织,其中有骨小梁和典型的骨髓组织.结论山羊中心纤维体可能具有造血功能.

血栓调节蛋白在成人及胎肺组织中的表达

目的研究血栓调节蛋白在成人肺组织及胎肺组织中的表达意义.方法以发育18周的人胎肺组织、正常成人肺组织为研究对象,应用免疫组织化学SP法检测血栓调节蛋白的存在.结果在18周人胎肺组织中,血栓调节蛋白表达于围绕原始肺泡上皮细胞团周围的血管内皮细胞中,在原始肺泡上皮细胞及原始支气管上皮细胞、软骨均呈阴性表达.正常成人肺组织内的血管内皮细胞呈阳性表达.结论血栓调节蛋白在人胎中期肺组织中未见表达.

大鼠颌下腺GnRH受体基因的体外扩增及基因序列分析

目的研究大鼠颌下腺GnRH受体基因的存在及其基因序列.方法从SD大鼠颌下腺提取总RNA,用RT-PCR法扩增GnRH受体基因,利用双脱氧链终止法对扩增产物进行序列测定.结果从SD大鼠颌下腺扩增出GnRH受体基因的特异性条带,经序列分析,扩增产物的基因序列与文献报道大鼠脑垂体的完全一致.结论大鼠颌下腺有GnRH受体基因的表达,能合成GnRH受体,是GnRH的靶器官,颌下腺产生的GnRH可作用于颌下腺的靶细胞,参与颌下腺生理功能的调节.

小鼠2-细胞、4-细胞胚胎G1期检测及同步化的研究

目的研究小鼠2-细胞、4-细胞胚胎同步化的方法,并检测其G1期的持续时间.方法先用低温抑制和噻胺酯哒唑阻断的方法分别将小鼠2-细胞和4-细胞胚胎同步化于G1期,然后利用放射自显影技术检测胚胎DNA的合成.结果(1)小鼠2-细胞胚胎G1期的持续时间短于3h.(2)噻胺酯哒唑对胚胎细胞的抑制作用及对胚胎发育的影响有浓度依赖性.(3)小鼠4-细胞胚胎的G1期约3～4h.结论小鼠早期胚胎细胞周期的G1期持续时间都很短,利用噻胺酯哒唑阻断和低温控制的方法能够得到大量同步于G1期的胚胎细胞.

妊娠早期小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶的分布

目的了解胚泡着床前后妊娠昆明系小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的分布.方法免疫细胞化学LSAB法.结果妊娠2～5d小鼠的卵巢内,黄体细胞上有iNOS的阳性表达;输卵管粘膜上有iNOS的分布,肌层则为阴性;妊娠2、3d的小鼠子宫内,阳性标记主要出现在子宫内膜上皮以及子宫内膜中的子宫腺上皮,内膜基质细胞为阴性;妊娠4d的子宫内,子宫腺及蜕膜部分均有iNOS的分布,妊娠5d时,在小鼠胚泡的表面也检测到了iNOS的存在.结论小鼠胚泡着床前后,在其卵巢、输卵管及子宫内均有iNOS的存在,提示iNOS在小鼠胚胎早期发育及着床过程中起作用.

滋养层发育和机能分化与粘附因子及细胞因子

胚泡着床后侵入蜕膜组织形成强固粘附的同时,迅速分化成绒毛并完成胎盘的组织构成.绒毛上皮由细胞滋养层、合体细胞滋养层和绒毛外细胞滋养层(extravillous cytotrophoblast)组成.在滋养层细胞增殖与分化和绒毛膜形成的过程中与性激素、生长因子、癌基因、癌抑制基因、凋亡关联因子、细胞外基质和粘附因子等多种因子的关系密切.本文仅对细胞粘附因子(adherin)及细胞因子(cytokine)与滋养层细胞的发育与机能分化进行讨论.

粉防己碱对乳腺癌细胞系生长的影响

乳腺癌是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的常见的恶性肿瘤之一.我们报道粉防己碱(tetrandrine,Tet)对体外乳腺癌细胞系Bca-111生长的影响,以探索粉防己碱对乳腺癌的作用及其机制.

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