纤维蛋白胶包裹嗅神经鞘细胞促进脊髓轴突再生的实验研究

目的观察纤维蛋白胶(FG)包裹嗅神经鞘细胞(OECs)植于成年大鼠脊髓全横断断端间隙内对损伤轴突再生的促进作用.方法成年雄性SD大鼠16只,行脊髓T11节段全横断术.FG-OECs组于间隙内移植FG包裹的OECs,FG对照组移植等量的FG,OECs对照组移植等量DF12-OECs悬液,单纯全切对照组未做任何移植,每组动物4只.术后2周处死动物,脊髓损伤区冰冻水平切片,荧光显微镜下观察OECs的存活及迁移,并行抗神经丝(NF)和生长相关蛋白-43(GAP-43)抗体免疫组织化学染色.结果 OECs及单纯全切对照组脊髓两断端连接较差,而FG对照组及FG-OECs组两断端连接良好.FG、OECs及单纯全切对照组损伤区可见少量NF及GAP-43免疫反应纤维;FG-OECs组间隙内OECs大量存活,并迁移至两侧脊髓实质内,大量NF及GAP-43免疫反应纤维通过间隙.结论 FG包裹的OECs可在成年大鼠脊髓全横断断端间隙内存活并迁移至脊髓实质内,促进损伤轴突的再生.

大鼠脊髓后角内5型代谢型谷氨酸受体与C纤维的关系--免疫组织化学及电镜研究

目的揭示大鼠脊髓后角内5型代谢型谷氨酸受体(mGluR5)与一级传入C纤维的关系.方法在大鼠单侧足底注射福尔马林作为疼痛刺激,应用免疫组织化学技术光镜下观察疼痛对脊髓后角内mGluR5的影响;在大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素,以毁损C纤维,用免疫电镜技术观察大鼠脊髓后角浅层内mGluR5阳性结构与C纤维间的超微结构关系.结果脊髓后角疼痛刺激侧Ⅰ～Ⅱ层内mGluR5免疫反应性较对照侧明显增强;在蛛网膜下腔注射辣椒素的大鼠,电镜下可见其后角浅层内大量变性的C纤维轴突终末与1至多个含mGluR5的树突形成突触联系.结论提示脊髓后角浅层内mGluR5主要作为突触后受体参与介导和调节C纤维内对伤害性信息的传入.

人工组织神经移植物修复狗缺损坐骨神经后腓肠肌的形态观察

目的了解复合型医用可降解材料制成的人工组织神经移植物辅加神经再生素修复狗坐骨神经缺损后,腓肠肌的形态变化.方法将人工组织神经移植物连接在狗的坐骨神经缺损30 mm处.以自体神经桥接和神经缺损的狗为对照组Ⅰ和Ⅱ.术后6个月时取腓肠肌进行称重、特殊染色和组织化学染色,显微镜下了解腓肠肌的形态变化并进行图像定量分析,同时了解肌纤维的超微结构变化.结果术后6个月,实验组腓肠肌的萎缩形态指标变化均轻于对照组Ⅱ,而与对照组Ⅰ相似. 结论经人工组织神经移植物修复缺损的坐骨神经后,使腓肠肌又重新获得神经支配,肌肉萎缩明显减轻.

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达和活性检测

目的克隆人胰岛素样生长因子Ⅰ型(hIGF-1),构建真核表达载体并进行表达及活性检测,为IGF-1基因治疗糖尿病奠定基础.方法提取胎儿肝脏总RNA,RT-PCR法扩增IGF-1cDNA片段,重组于pUCM-T载体,测序正确后构建表达载体,转染猴肾成纤维细胞系COS-7,用原位杂交和免疫组织化学检测表达,收集培养上清以胰岛素刺激释放实验进行活性测定.结果扩增得到710 bp带有Kozak序列的IGF-1cDNA片段;成功构建了真核表达载体pCI-neo/hIGF-1;IGF-1在COS-7细胞得到了表达,并具有刺激胰岛素分泌的活性.结论新构建的载体pCI-neo/hIGF-1能在COS-7细胞中表达、分泌,且所分泌的IGF-1具有生物活性.

细胞因子与着床过程中小鼠子宫内膜细胞凋亡的相关性研究

目的探讨着床过程中小鼠子宫内膜细胞凋亡的调控机制,以及细胞因子在子宫内膜细胞凋亡发生中的生物学作用.方法用TUNEL法原位检测着床过程中子宫内膜细胞凋亡状况,用原位杂交和免疫组织化学的方法,检测凋亡相关基因(bel-2、bax)和细胞因子(EGF、bFGF和TGFβ1)在着床期小鼠子宫内膜中的表达,分析凋亡相关基因、细胞因子与子宫内膜细胞凋亡之间的关系,并在体外培养的子宫内膜细胞中,直接检测了上述因子对bcl-2和bax转录的影响.结果孕4～5 d,凋亡细胞主要分布于子宫内膜表面上皮和腺上皮,与此相对应,上皮细胞TGFβ1和bax表达增加,而bFGF和bCl-2表达减少;孕7～8 d,凋亡细胞主要分布于胚泡着床部位周围的蜕膜中,此时胚泡周围的蜕膜中,EGF、bFGF和bcl-2表达明显降低,TGFβ1和bax表达明显增加.体外实验显示,培养基中加入抗EGF或bFGF抗体后,bcl-2/bax比率下降,而加入抗TGFβ1抗体后,bcl-2/bax比率增加. 结论细胞因子、凋亡相关基因与着床期子宫内膜细胞凋亡密切相关,细胞因子可通过调节bcl-2和bax的表达参与细胞凋亡的调控.

虚拟中国人关键技术的研究

目的探索虚拟中国人(VCH)高精度建模的关键技术.方法1.建立中国人体标准的评价体系,对"虚拟中国人"Ⅰ号及Ⅱ号(VCHⅠ及VCHⅡ)进行标准化评定;完成尸体获取的法律程序;2.应用CT、MR和发泡包埋技术对VCHⅠ及VCHⅡ进行切削前预处理;3.用动脉灌注的方法对材料的动脉血管进行标记;4.用自行设计的冷冻工作间和切削设备对人体材料进行切削和图像采集.结果人体材料保持了正常形态,预切间距可达到0.1mm,小切削间距可达到0.02 mm,可对人体材料进行一次装夹连续切削.结论研究的结果在多个领域补充提高了现有的切削建模技术.

成人基底前脑巢蛋白免疫阳性神经细胞的细胞化学观察

目的探讨巢蛋白(nestin)免疫阳性细胞在人基底前脑内的分布规律及化学特性. 方法采用nestin 331B、10C2、Rat 401抗体显示人基底前脑的nestin免疫阳性细胞,并应用NSE、p75NGFR、ChAT、GFAP抗体分别对nestin免疫阳性细胞进行了双标免疫细胞化学研究,同时还应用NADPH-d进行组织化学染色.结果在成人基底前脑有一个连续的nestin免疫阳性细胞带,胞体较大,呈卵圆形或梭形,有1～3个突起,分布于隔核、斜角带核、Meynert核、无名质及杏仁核群.双标染色显示,nestin阳性细胞被NSE抗体标记,并与ChAT、NGFR、NOS阳性神经元间杂分布,多数不呈交叉反应.约28%nestin免疫阳性细胞为ChAT阳性神经元,15%为NGFR阳性神经元,6%为NOS阳性神经元.此外,透明隔及隔区靠近软膜处有少量nestin免疫阳性细胞,其形态与星形胶质细胞相似,不与GFAP有交叉免疫阳性反应.结论成人基底前脑存在一个有别于ChAT、NGFR、N0S神经元的nestin免疫阳性神经元簇,其生物学意义值得进一步研究.

少突胶质细胞瘤中PTEN基因突变和10q 染色体的杂合性缺失分析

目的探讨PTEN基因突变和10 q染色体的杂合性缺失(LOH)在少突胶质细胞瘤发生和发展中的意义.方法以55例少突胶质细胞瘤和混合性胶质细胞瘤为研究对象,PCR扩增PTEN基因所有9个外显子,其产物经变性梯度凝胶电泳(DGGE)后,DNA序列分析检测PTEN基因突变.应用不同颜色荧光标记10 q微卫星标志物引物,PCR扩增后,其产物在自动测序仪上进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用Gene Scan软件分析LOH.结果2/55例有PTEN基因突变,1例是PTEN的第9外显子的20号T碱基缺失导致终止密码351易位至347,另1例在139位发生C到A的转换,使得Phe变成Leu.23/55(42%)例出现染色体10 q的LOH,其中15/55例位于10 q23,3(D10S541),其为PTEN基因位点,12/55例10q微卫星标志物位点完全缺失.结论在少突胶质细胞瘤中PTEN突变较少见,而10 q LOH较频繁,尤其在恶性度高的少突胶质细胞瘤中表现明显,提示10 q LOH与少突胶质细胞瘤恶性进展有关,且10 q上可能存在其他抑癌基因.

人参提取物对内毒素所致小鼠脾细胞损伤的保护作用

目的观察人参提取物在内毒素脂多糖(LPS)所致的SIRS/MODS中对脾细胞的作用. 方法通过HE、TUNEL染色和透射电镜比较注射人参提取物(GS)后再注射LPS时的脾脏形态学及凋亡情况,并用免疫组织化学的方法检测Bcl-2,Fas,FasL的表达.结果随LPS作用时间的延长,脾损伤逐渐加重.动脉周围淋巴鞘细胞碎片及TUNEL阳性细胞增多,电镜观察可见到凋亡的淋巴细胞.而人参组细胞损伤明显减轻.Bcl-2的表达随着LPS作用时间的延长而减少,Fas,FasL则增强.人参提取物主要阻止Bcl-2表达减少. 结论人参提取物对LPS脾细胞损伤有保护作用,其作用机制与增强Bcl-2表达有关.

温脾汤药物血清对体外培养的大鼠系膜细胞核转录因子-κB活化的影响

目的探讨温脾汤药物血清对大鼠原代培养系膜细胞核转录因子NF-κB及其抑制因子IκB表达的影响,提供其肾保护作用机理的实验依据.方法应用荧光标记和激光共聚焦扫描显微镜技术,研究温脾汤药物血清对LPS刺激引起的NF-κB活化的影响;应用Western blot方法研究温脾汤药物血清对LPS刺激引起的IκBα降解的影响.结果LPS刺激10 h后,NF-κB的活性达到高峰,且高荧光强度位于细胞核内;大剂量药物血清明显抑制NF-κB的活性增强;IκBα在LPS刺激后迅速降解,又在1～2 h内迅速恢复近正常水平;大剂量药物血清能明显抑制IκBα的降解.结论温脾汤通过抑制LPS诱导的IκBα降解,使NF-κB与IκBα结合成复合物而减少解离,阻止了系膜细胞NF-κB的活化过程.

大鼠肝星状细胞系的建立及其生物学特性的研究

目的建立并鉴定肝星状细胞(HSC)细胞系.方法采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法分离培养大鼠的HSC;通过体外长期传代培养后建立1株细胞系,应用细胞形态学观察、细胞倍增时间测定、细胞生长曲线绘制、染色体分析、双层软琼脂培养、免疫细胞化学检测、RT-PCR检测、聚硅酮膜培养法观测HSC的收缩等方法对其生物学特性进行研究. 结果 HSC细胞系已传了 78代,保持着肌成纤维样细胞的形态学特点.细胞倍增时间为36.5 h;细胞的染色体众数42条,为正常大鼠体细胞的染色体表型;双层软琼脂培养未见细胞克隆形成;免疫细胞化学检测表明,细胞系表达Desmin、GFAP、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、iNOS、ICAM-1、TGF-α;RT-PCR检测表明,该细胞系表达TGF-8、ICAM-1;聚硅酮膜培养法显示,HSC细胞系能在ET-1作用下产生收缩反应.结论HSC细胞系符合建系标准,是1株新建立的大鼠肝星状细胞系,命名为rHSC-99,可作为肝硬化、门静脉高压症实验研究的模型.

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马凋亡相关基因表达的影响

目的研究APP17肽对D-半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响.方法用D-半乳糖制备脑老化模型,皮下注射APP17肽治疗D-半乳糖脑老化小鼠,3个月后取脑组织做Bcl-2、Bax、CREB、AKt、AIF免疫组织化学染色.结果D-半乳糖脑病小鼠海马内Bax、AIF阳性反应神经元胞浆与突起深染,而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少,染色淡;D-半乳糖小鼠海马内Bcl-2、CREB、AKt阳性细胞数目少,染色淡;而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元胞浆与突起深染.结论促进凋亡的Bax、AIF在D-半乳糖小鼠海马表达增加;抑制凋亡的Bcl-2、CREB、AKt在D-半乳糖小鼠海马表达降低.APP17肽能影响D-半乳糖腩病小鼠脑内Bcl-2、Bax、CREB、AKt、AIF的表达,使之接近正常.

培养的大鼠胃壁细胞促性腺激素释放激素的定位、克隆及序列分析

目的研究培养的大鼠胃壁细胞GnRH的定位及其基因序列.方法应用免疫组织化学和原位杂交的方法进行定位研究;从壁细胞中提取总RNA,应用RT-PCR的方法扩增GnRH基因,并对产物进行纯化回收,连接入pUC19载体中扩增,经PCR和酶切鉴定后进行序列分析.结果大鼠胃壁细胞呈GnRH免疫反应性阳性物质位于细胞质,细胞核为阴性;壁细胞内亦可检测到GnRH mRNA杂交信号,信号物质位于细胞质,细胞核为阴性;同样从大鼠胃壁细胞中扩增出GnRH基因的特异性条带,经序列分析发现,扩增产物的基因序列与文献报道的大鼠下丘脑的完全一致.结论大鼠胃粘膜壁细胞能表达GnRH基因,其序列和下丘脑的完全一致,并能自身合成GnRH,说明GnRH可能以自分泌或以旁分泌的方式参与胃壁细胞功能的调节.

Nogo(N-18)在大鼠海马及大脑皮质中分布和发育的免疫组织化学研究

目的观察Nogo(N-18)在成年大鼠、乳鼠和胎鼠海马及大脑皮质中的分布规律,探讨其存在的意义.方法采用抗Nogo(N-18)多克隆抗体免疫组织化学链霉卵白素-过氧化物酶SP(streptavidin peroxidase,SP)法.结果成年大鼠海马以及大脑皮质神经元胞核Nogo(N-18)免疫反应呈强阳性,胞浆和突起的反应较弱,而乳鼠和胎鼠海马及大脑皮质神经元Nogo(N-18)免疫反应阳性产物只存在于突起和胞浆中.结论 Nogo(N-18)免疫反应阳性神经元广泛分布于成年大鼠、乳鼠和胎鼠海马及大脑皮质,其生物学意义有待探讨.

CD34在体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞发育的免疫组织化学研究

目的观察CD34在发育中的体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞中的分布,探讨CD34在发育中的大鼠骨骼肌卫星细胞中的作用.方法原代培养骨骼肌卫星细胞,第1次传代后,取贴壁2、4、8、16、24、48和72 h的细胞行CD34多克隆抗体的免疫组织化学染色.结果CD34免疫阳性反应存在于发育中的骨骼肌卫星细胞中,但在形成肌管后,细胞核免疫反应转为阴性,同时成纤维细胞呈弱阳性反应.结论CD34在发育中的骨骼肌卫星细胞中有一定量的分布,它可能在骨骼肌的生理发育中起某种调节作用.

Aβ42及其C端亚单位疫苗接种正常SD大鼠后产生高滴度的抗Aβ42抗体

目的探讨Aβ42及其C端亚单位肽疫苗接种正常成年SD大鼠后能否产生高滴度的抗Aβ42抗体.方法将AAβ36～42与不同载体偶联制成的亚单位疫苗和Aβ42全肽疫苗分别接种于SD大鼠.用Western blotting方法和间接ELISA法检测其血清和脑匀浆上清液中的抗体的特异性以及滴度,并用HE染色对大鼠的脑、肝、脾和肾进行形态学观察.结果第2次接种后各实验组的血清均开始有抗Aβ42抗体产生,且抗体滴度随接种次数的增多而增高,第4次接种后各实验组血清的抗Aβ42抗体滴度均达到1:10 000以上,同时脑匀浆上清液也检测到低滴度的抗Aβ42抗体;实验鼠的大脑、肝、脾和肾均未发现病理性变化. 结论 Aβ42及其亚单位疫苗(Aβ36～42)接种于正常SD大鼠后,均能产生高滴度的抗Aβ42抗体,且重要脏器未发现病理改变.

中药神经再生素作用于背根神经节细胞过程中基因的表达变化

目的探讨中药神经再生素(NRF)作用的分子生物学机制. 方法采用半定量PCR方法,观察和比较NRF组、NGF组和空白对照组中生长相关蛋白43(GAP-43)、低分子量神经丝蛋白(NF-L)、翻译延伸因子2A3-2(EF-Ts,RRAJ5161)和锌指样蛋白DDP2(F196315)基因水平的表达变化.结果在NRF作用于离体培养的DRG细胞过程中,GAP-43、NF-L、2A3-2和DDP2基因表达在不同时间呈不同程度的上调.结论NRF促神经生长的作用与NGF相似,可作用于蛋白翻译水平,促进神经细胞的生长;作用于细胞骨架蛋白水平,维持神经细胞的形态和神经细胞正常生理活动;作用于神经细胞特异的蛋白水平,具有维持细胞生存及促进神经细胞突起生长的作用;还可以作用于反式因子调控水平,影响相关基因的表达,促进神经元存活和神经突起延伸.

周围神经再生时重组CNTF对受损神经元 STAT3表达和酪氨酸磷酸化的作用

目的研究周围神经再生时,重组睫状神经营养因子(CNTF)对受损神经元JAK-STAT途径和酪氨酸磷酸化的作用.方法用硅管套接切断的成年大鼠坐骨神经,术时在受损神经局部给予重组CNTF,用免疫组织化学ABC法结合计算机图像分析研究STAT3、磷酸化酪氨酸(PTyr)免疫反应阳性物质在L3～5段脊髓前角外侧核和L5脊神经节神经元中的分布和相对含量.结果与生理盐水组相比,CNTF组脊髓前角外侧核神经元胞核STAT3和胞膜PTyr阳性物质的含量更高,脊神经节神经元胞浆和胞核PTyr阳性物质的含量更高.结论重组CNTF能激活和强化受损运动神经元的JAK-STAT途径,增强受损神经元的酪氨酸磷酸化.

胶原或明胶吸附施万细胞移植促进全横断脊髓损伤修复的研究

目的探讨胶原或明胶吸附施万细胞移植对全横断脊髓结构和功能修复的影响.方法将胶原或明胶吸附施万细胞移植到成年大鼠全横断脊髓的损伤处,术后3个月用爬网格方式测试动物后肢自主运动功能恢复情况;用荧光金逆行标记法观察大脑感觉运动区和脑干红核的神经元神经纤维再生;用免疫组织化学法检测脊髓CGRP和5-HT能神经纤维再生.结果移植施万细胞的大鼠后肢自主运动功能有显著的恢复.大脑感觉运动区和脑干红核均有被荧光金标记的神经元胞体,提示两个区域的神经元轴突能在脊髓再生并穿越损伤区到达尾侧脊髓.脊髓损伤处有CGRP和5-HT阳性神经纤维,以及损伤处尾侧有5-HT阳性神经纤维.对照组大鼠以上结果均为阴性.结论施万细胞移植可促进大鼠全横断脊髓结构和功能的恢复.胶原或明胶可作为移植细胞的网架用于细胞治疗.

β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ对施万细胞增殖的影响

目的探讨周围神经施万细胞表达β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-GalT-Ⅰ)对其增殖的影响.方法将构建的正、反义β-1,4-GalT-Ⅰ表达质粒,转染到施万细胞中,分析转染细胞倍增时间、3H-TdR掺入情况以及细胞周期变化.结果转染正义β-1,4-GalT-Ⅰ后施万细胞的增殖受到抑制,这种作用随转染浓度增大而增强;在G1/G0期的细胞数目增加,S期的数目减少.而转染反义β-1,4-GalT-Ⅰ有相反的作用. 结论β-1,4-GalT-Ⅰ对施万细胞的增殖有抑制作用,可能在周围神经施万细胞的增殖调节中发挥重要作用.

7,12-二甲基苯丙蒽诱导Wistar大鼠乳腺癌发生过程中端粒酶活性变化

目的动态观察在乳癌发生过程中端粒酶活性的变化,明确端粒酶在乳癌发生中的意义.方法采用7,12-二甲基苯丙蒽(DMBA)诱导雌性Wistar大鼠乳癌,TUNEL法检测凋亡细胞,Rt-PCR-ELISA法检测端粒酶活性.结果在乳癌发生过程中端粒酶活性逐渐增强,乳腺增生组端粒酶活性高于正常乳腺组(P＜0.01),乳癌组端粒酶活性高于乳腺增生组(P＜0.01).单发乳癌组与多发乳癌组间端粒酶活性无明显差异(P＞0.05),乳腺增生组织中凋亡细胞多于乳癌组织中凋亡细胞(P＜0.01).结论在乳癌发生过程中,乳腺凋亡细胞逐渐减少,端粒酶活性逐渐增强.

大鼠内淋巴囊的解剖学与组织学观察

目的研究大鼠内淋巴囊的解剖学与组织学特征.方法选用健康成年SD大鼠,处死后取双侧颞骨,先观察颞骨内侧面的解剖结构、内淋巴囊的位置及毗邻关系,然后将标本固定、脱钙、石蜡包埋切片,HE染色,观察内淋巴囊的形态和组织结构;再用抗大鼠IgG、CD3单克隆抗体,应用免疫组织化学技术,观察免疫活性细胞在内淋巴囊组织的定位分布.结果大鼠内淋巴囊的上皮类型以单层立方上皮和扁平上皮为主;内淋巴囊上皮层、上皮下及囊周组织有淋巴细胞,CD3、IgG免疫反应阳性淋巴细胞主要存在于内淋巴囊的上皮层.结论大鼠内淋巴囊具有与人和豚鼠内淋巴囊基本相似的形态结构;组织中存在CD3、IgG免疫活性细胞,提示其在内耳免疫应答过程中可能发挥重要作用.

血管紧张素Ⅱ受体介导细胞凋亡及其功能的研究进展

肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)是机体调控内环境稳定的重要体液调节系统之一,它主要通过血管紧张素的作用而产生多种生物学效应.血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,ANGⅡ)是肾素-血管紧张素系统的主要活性肽,愈来愈多的证据表明,在一些以组织器官发生进行性纤维化为特征的慢性疾病,尤其是心血管,肾脏疾病的进展中起着重要作用[1].

肝脏干细胞和胰脏干细胞与其他细胞的联系和转分化

肝脏和胰脏均属消化腺,都具有内分泌和外分泌功能,都来源于内胚层,在发生上有密切联系,肝脏干细胞、胰脏干细胞与其他细胞在发生、功能、再生中的联系和转分化研究得越来越深入,我们就有关这方面的进展作简要综述.

大鼠脑源性神经干细胞的分离培养

目的探讨大鼠不同年龄组来源的神经干细胞体外培养和诱导分化的佳条件.方法分离12～15 d大鼠胚胎、1～2 d新生鼠的脑组织和成年大鼠脑的海马区和嗅球,在条件培养基(包含生长因子)中增殖培养,用神经于细胞的特异性单克隆抗体巢蛋白(nestm)鉴定克隆细胞;去除生长因子,降低血清浓度到2%后,诱导细胞分化,用神经细胞的特异性单克隆抗体鉴定分化细胞.结果获得了大量可自我增殖并分化为3种神经细胞(神经元,星形胶质细胞,少突胶质细胞)的神经前体细胞.结论在适当的分离培养条件下,可以获得大量的神经前体细胞,为神经干细胞的基础和临床研究提供细胞基础.

干细胞常用词汇(续三)