乳腺癌细胞动力学指标与相关基因表达、突变的关系

目的探讨乳腺癌细胞动力学及凋亡与相关基因表达、突变的关系. 方法采用流式细胞术检测54例乳腺癌DNA指数(DI)、S期细胞比例(SPF)、细胞增殖指数(PI)及细胞凋亡指数(AI),免疫组织化学法检测原癌基因c-erbB-2、Bcl-2、抑癌基因p53,增殖细胞核抗原PCNA、Ki67及托普DNA酶Ⅱ(Topo Ⅱ)的表达,PCR-SSCP法检测p53点突变及突变部位、类型; 结果高DI、异倍体率、SPF、PI、AI与c-erbB-2、p53、PCNA、Ki67、Topo Ⅱ高表达相关.低DI、SPF、PI、AI与Bcl-2高表达相关.高DI、SPF、PI、AI与p53高突变相关,高AI与p53突变类型之一--杂合性缺失(LOH)相关. 结论乳腺癌细胞动力学及凋亡的异常与相关基因的异常表达及突变密切相关.

人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ基因的克隆与表达

目的研究人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ(GCHⅠ)基因在多巴胺代谢过程中的作用. 方法从人胚胎肝脏中提取总RNA,以RT-PCR法扩增GCHⅠ cDNA,克隆于PGEM-T-easy载体中,测序正确后再构建真核表达载体,转染猴肾成纤维细胞系COS7,原位杂交检测其表达. 结果 RT-PCR扩增出904bp的cDNA,并成功构建真核表达载体pCI-neo-GCHⅠ,原位杂交证实其在COS7表达阳性率为70%～80%. 结论 GCHⅠ有望用于帕金森病的基因治疗.

Fas和Fas配体在角膜移植免疫排斥反应中的表达

目的了解Fas和Fas配体(FasL)在发生免疫排斥的角膜植片中的表达情况,探讨其在角膜移植免疫排斥反应中的作用. 方法角膜移植术后排斥反应的患者42例,于再次行穿通性角膜移植术时取其排斥的移植片;正常角膜6例.进行免疫组织化学染色,观察正常角膜和移植片中上皮、基质和内皮层的Fas及Fas配体的表达. 结果在6例正常角膜中,角膜上皮、内皮Fas和FasL为阳性表达.42例移植片中,角膜上皮Fas和FasL均有表达.有新生血管形成及免疫细胞浸润的角膜基质中,血管内皮细胞、基质细胞FasL为阳性表达,Fas在部分浸润的免疫细胞中有表达;移植片内皮细胞层广泛破坏. 结论 Fas、FasL在角膜移植片中的表达,可能与角膜移植免疫排斥反应有关.

α-突触核蛋白过表达对黑质多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶表达的影响

目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-SYN)过表达对多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响. 方法在α-SYN基因转染的MES 23.5大鼠黑质多巴胺能神经元细胞系,分别用免疫组织化学、免疫荧光、Western blot等方法分析α-SYN和TH的表达以及两者之间的关系.通过绘制生长曲线和MTT测试细胞氧化还原活性,观察α-SYN基因转染细胞的生长和损伤情况. 结果α-SYN过表达明显抑制MES 23.5多巴胺能神经元的TH表达,但对该细胞的生长和增殖无明显影响,也不引起该细胞损伤. 结论α-SYN过表达对多巴胺能神经元的TH表达具有抑制作用.

β淀粉样肽1-40通过激活caspase-3诱导大鼠皮层神经元凋亡

目的探讨半胱氨酸蛋白酶caspase-3在β淀粉样肽1-40(β-AP1-40)诱导大鼠皮层神经元凋亡中的可能作用. 方法用β-AP1-40诱导神经元凋亡,同时检测caspase-3活力和caspase-3活性片段及caspase-3 mRNA的表达水平. 结果 40 mg·L-1的凝聚态β-AP1-40诱导大鼠皮层神经元凋亡过程中,caspase-3活力和caspase-3 mRNA的表达水平均有明显增高(P<0.01);特异性的caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO对caspase-3的激活和皮层神经元细胞凋亡均有明显的阻断作用. 结论 caspase-3可能是β-AP1-40诱导大鼠皮层神经元凋亡的效应因子.

金雀黄素抑制人乳腺癌细胞系体外增殖作用机理的实验研究

目的研究金雀黄素抑制人乳腺癌细胞株体外增殖作用的机理. 方法选用2种不同的人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231体外培养,MTT法检测细胞增殖作用,Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,同时进行了原位细胞凋亡的检测. 结果金雀黄素对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞体外生长具有明显的抑制作用.Giemsa染色显示,金雀黄素处理的MCF-7细胞呈明显的凋亡形态改变,细胞固缩、发泡,染色质凝集呈块状,并沿核周分布.流式细胞仪检测在G1峰前可见凋亡峰,且随用药时间的延长,凋亡比率递增.而金雀黄素处理的MDA-MB-231细胞未见明显的凋亡形态改变和凋亡峰的出现,细胞周期明显地阻滞于G2～M期. 结论金雀黄素通过诱导细胞凋亡或阻滞细胞于G2-M期,从而抑制乳腺癌细胞的体外增殖,为其减缓人乳腺癌细胞的体内生长提供理论依据.

观察佛波脂和二甲基亚砜联合诱导人肺腺癌GLC分化过程中的形态和超微结构

目的探讨佛波脂(TPA)和二甲基亚砜(DMSO)联合诱导分化剂对人肺腺癌GLC细胞形态的影响. 方法采用细胞计数,光镜、扫描电镜与透射电镜观察,经过TPA和DMSO联合诱导的人肺腺癌GLC细胞增殖以及形态和超微结构的变化. 结果经过联合诱导分化剂作用后,细胞增殖受到抑制,细胞体积增大,呈现扁平铺展状态,细胞核质比例变小,核仁数量减少.细胞表面微绒毛减少,细胞边缘丝状伪足减少,片状伪足增多,核形态较规则,核内异染色质减少,常染色质增多,细胞质中的细胞器数量增多,结构趋于正常. 结论 TPA和DMSO联合诱导能够一定程度改变GLC细胞恶性形态结构特征并对GLC细胞具有一定的诱导分化作用.

雌性大鼠心内神经节中雌激素受体及其mRNA的表达

目的在雌激素受体蛋白及ERmRNA水平提供雌激素对心内神经节中神经元作用的形态学依据.方法采用免疫组织化学及原位杂交技术. 结果在心内神经节部分神经元中,雌激素受体免疫反应及其mRNA原位杂交反应阳性.雌激素受体免疫反应沉淀物呈棕黄色,定位于胞核,雌激素受体mRNA免疫反应沉淀物呈棕黄色,定位于胞浆. 结论大鼠心内神经节中,部分神经元能合成雌激素受体蛋白,说明ER阳性神经元可以为雌激素提供结合位点,因此,这些神经元可能受到雌激素的影响.

剂量与极低频电磁场对细胞因子诱导神经干细胞分化的影响

目的观察剂量及极低频电磁场对睫状神经营养因子(CNTF)、白细胞介素-1α(IL-1α)诱导新生大鼠中脑神经干细胞(NSC)分化的影响. 方法 NSC接受不同剂量CNTF\,IL-1α和极低频电磁场处理5 d,利用神经元特异性标记物微管相关蛋白-2ab(MAP2ab),通过免疫荧光化学染色检测神经干细胞神经元向的分化百分比.结果与对照组相比,小剂量CNTF和IL-1α组NSC神经元向分化百分比增加;大剂量CNTF组该比例明显降低(P<0.01).施加电磁场后,小剂量CNTF的促进效应增强,尤其是电磁场可使大剂量CNTF的神经元向分化抑制作用转变为促进作用.电磁场抑制了小剂量IL-1的促进作用,不影响大剂量IL-1的诱导结果. 结论细胞因子对NSC的诱导分化结果与剂量有关.极低频电磁场与细胞因子的共同效应不是简单协同或拮抗,说明生物磁场在神经系统发育中的作用不可忽视,电磁场可能成为调控NSCs分化的新手段.

糖皮质激素代谢酶11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型在新生大鼠脑内的分布与表达

目的观察新生大鼠脑发育成熟过程中糖皮质激素代谢酶11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(11β-HSD1)的变化. 方法免疫组织化学和Western印迹杂交的方法. 结果免疫组织化学染色表明,11β-HSD1分布于新生大鼠大脑皮层的各个层次,但以Ⅱ层(外颗粒层)含量为高、Ⅲ(锥体细胞层)、Ⅳ(内颗粒层)层11β-HSD1的含量次之.海马的各个区域和齿状回也均有11β-HSD1的分布.Western印迹杂交分析表明,新生鼠顶叶皮层、海马和下丘脑11β-HSD1的表达在出生后2周内表达一直比较高,第15 d时其表达开始下降. 结论提示新生鼠大脑11β-HSD1的表达可能与糖皮质激素促进脑组织的发育和成熟有关.

ATP敏感性钾离子(KATP)通道的mRNA在大鼠颈动脉体的表达

目的探讨因缺氧引起颈动脉体K+流减少而导致颈动脉体神经活性增加的分子学机制. 方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)评价大鼠颈动脉体的ATP敏感性钾离子(KATP)通道的mRNA表达. 结果在大鼠颈动脉体中内向整流性钾离子通道亚家族Kir6.1的mRNA是存在的,而Kir6.2和磺酰脲受体(SUR1 and SUR2)则未见. 结论 Kir6.1 mRNA的存在提示KATP通道在颈动脉体感受缺氧应答时可能起重要作用.

大鼠海马与前皮质N4 mRNA神经元的发育--原位杂交与RT-PCR研究

目的研究大鼠N4 mRNA神经元在前皮质与海马的时空表达模式. 方法地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学和逆转录PCR技术. 结果 E13-E16:原位杂交方法早检测到N4 mRNA神经元,在海马与前皮质呈强阳性信号.P0～P2:N4 mRNA阳性信号在海马开始减弱,在前皮质仍维持较高的水平.P7:N4 mRNA阳性信号在海马明显减弱,仅在海马的齿状回见部分阳性神经元,在前皮质的水平轻度减低.P14:N4 mRNA神经元数目增多,主要位于海马齿状回的颗粒细胞层;P21～P28:N4 mRNA在海马的齿回呈强阳性信号,在CA3区呈中等程度的阳性信号,CA1区、CA2区及下托可见部分阳性神经元,前皮质可见Ⅱ/Ⅲ层的锥体细胞层呈强阳性信号.P90～P150:在海马的齿状回、CA3区,CA1区、CA2区及下托见中等强度的N4 mRNA阳性信号.P300:N4 mRNA神经元在海马与皮层的表达明显减少,仅见部分散在的阳性神经元.逆转录PCR检测结果与原位杂交所得结果基本相符,在胚胎期N4 mRNA表达强,生后减弱,P7降至低,P21～P28为生后的表达高峰,随之下降,P300表达弱.N4基因在不同发育时期皮层的表达,在胚胎期信号强,生后略微减弱,组间差异不明显. 结论 N4基因特异的表达于海马,并在海马的形成期表达高,可能对海马的传入通路的发育有重要作用.

逆转录病毒介导的人CNTF在嗅神经鞘细胞中的表达及其对神经细胞存活和突起生长的影响

目的研究含有睫状神经营养因子(CNTF)表达调控系统修饰的嗅神经鞘细胞(OECs)对神经细胞存活和突起生长的影响. 方法通过基因克隆,用KpnⅠ+XbaⅠ将pcDNA\-3-S(NGF信号肽)-hCNTF质粒中含有NGF信号肽的CNTF切下,插入逆转录病毒表达载体pRev-TRE中.酶切鉴定后,将其与本系统的调控质粒pRev-Tet-On转入Ecopack-293细胞进行病毒包装,制备重组缺陷型hCNTF和Tet-On逆转录病毒感染原代培养的大鼠OECs,用不同浓度的强力霉素诱导,以Western-blot法对hCNTF的表达培养上清进行检测.将转染hCNTF的OECs与新生2d大鼠DRG联合培养,用其上清培养视网膜节细胞(RGCs).经β-tubulin免疫组织化学染色后,分别测量DRG神经突起的长度并统计阳性RGCs数目. 结果 1.经HindⅢ和BamHⅠ酶切鉴定,pRev-TRE-S-hCNTF重组体分别被切下630bp和400bp片段,插入子的方向和完整性经确认与预期相符.2.以不同浓度强力霉素诱导hCNTF修饰的OECs,其培养上清均有分子量约24 kD的hCNTF蛋白质的显著特异表达,此表达与强力霉素的浓度呈正相关.未诱导组和对照组未见明显蛋白带.3.同单纯OECs(23.15±4.7)、空载(24.55±5.8)、空白(16.8±6.5)等对照组相比,经hCNTF转染的OECs上清组的存活RGC数显著增高(41.34±5.4).4.与单纯OECs(418±45μm)和空载(400±65μm)对照组相比,与hCNTF修饰的OECs联合培养的DRG神经突起显著增长(660±67μm),且更为密集,而空白对照组未见向外延伸的突起. 结论 hCNTF可经逆转录病毒载体转染OECs,其表达依赖于强力霉素浓度,并对神经细胞存活和突起生长具有显著的促进作用.

维甲酸诱导大鼠胚胎脑神经干细胞P450RAI基因的表达

目的探索全反式维甲酸(RA)对神经干细胞和分化细胞P450RAI表达的影响. 方法从大鼠胚胎脑中分离神经干细胞,用EGF促进其增殖,再用不同浓度的RA单独处理,在不同时间用RT-PCR测定神经干细胞及分化细胞的P450RAI表达水平. 结果 1 μmol/L RA处理神经干细胞,P450RAI mRNA水平高.1 μmol/L时2 h就可检测到神经干细胞P450RAI mRNA的生成,4～12 h达到高峰,随后迅速下降,24 h几乎检测不到P450RAI mRNA.间断给予RA,P450RAI的表达随之下降.在EGF诱导生成的分化细胞中无P450RAI表达,而在RA处理的分化细胞中有少量表达. 结论神经干细胞表达P450RAI对RA有浓度依赖性并需要RA的持续存在,随着神经干细胞分化为神经细胞,其表达量下降.

原代培养大鼠嗅球成鞘细胞Nogo(N-18)的共聚焦激光扫描显微镜观察

目的观察原代培养的成年大鼠嗅球成鞘细胞(OECs)Nogo(N-18)蛋白的表达,探讨Nogo与成鞘细胞促进神经再生作用的关系. 方法原代培养嗅球OECs,采用免疫组织化学和双标免疫荧光细胞化学技术,结合激光共聚焦扫描显微镜观察. 结果原代培养的嗅球OECs的Nogo(N-18)免疫细胞化学反应呈阳性,Nogo(N-18)蛋白主要分布于胞浆,而在胞膜及突起分布较少. 结论嗅球(OECs)含有Nogo-A蛋白,提示Nogo-18蛋白在嗅神经系统可能没有决定抑制轴突再生的作用.

培养的大鼠间皮细胞的形态特点及抗凝与纤溶功能的研究

目的观察间皮细胞在培养状态下的形态学特征,测定其抗凝与纤溶作用的强度,为血管假体内腔铺被细胞的选择提供依据. 方法取SD大鼠大网膜、主动脉、皮下结缔组织用作间皮、内皮及成纤维细胞的培养.倒置显微镜及扫描电镜下观察各自的形态特点.取3类细胞第3代融合后48 h的无血清培养液,放射免疫法测定6-酮-PGF1α(前列环素的代谢产物)的含量,发色底物法测定纤溶酶原激活物活性. 结果在相同培养状态下,间皮细胞生长较快,表现出许多与内皮细胞相似的形态特点.间皮细胞培养液中6-酮-PGF1α浓度显著高于成纤维细胞及内皮细胞培养液中的浓度,纤溶酶原激活物活性也高于成纤维细胞者,但与内皮细胞相比无显著性差异.结论在相同培养状态下,间皮细胞具有与内皮细胞相似的结构与功能特点,可能为血管假体内腔铺被层的理想材料.

微囊化大鼠松果体细胞的体外培养研究

目的研究微囊化大鼠松果体细胞在体外的生物活性与功能状态. 方法采用胶原酶、胰酶双消化法获取大鼠松果体细胞并进行APA微囊包裹处理,体外培养细胞包囊,相差显微镜观察包囊及细胞形态,台盼蓝染色、5-HT免疫细胞化学法分析包裹细胞活性及分布,高效液相色谱技术(HPLC)检测囊内松果体细胞的褪黑素(MT)分泌状态及微囊的渗透能力.结果微囊化松果体细胞存活良好,大多数细胞为5-HT免疫反应阳性,HPLC检测证实微囊化松果体细胞MT分泌功能正常,对肾上腺素能激动剂作用敏感.结论 APA细胞微囊具备良好的渗透能力,松果体细胞经微囊包裹处理后其活性和功能未受影响.

口腔鳞癌中c-erbB2和p53基因的扩增和表达

目的探讨c-erbB2和p53基因扩增和表达在口腔鳞癌(OSCC)发生发展中的作用. 方法用原位杂交和免疫组织化学技术与图像分析相结合的方法,对30例口腔鳞癌和5例正常口腔粘膜中c-erbB2和p53两种基因的扩增、mRNA表达和蛋白表达状况进行了定性、定位、定量研究. 结果 OSCC中c-erbB2和p53的扩增阳性率分别为46.67%和40%;而c-erbB2和p53在OSCC中的mRNA表达率分别是70%和80%,蛋白表达率分别是46.67%和63.33%.这两种基因的扩增、mRNA表达和p53蛋白表达在各种性状差异之间均没有显著性差异(P>0.05);erbB2蛋白表达在不同部位的口腔鳞癌中具有显著性差异(P<0.02). 结论 c-erbB2和p53两种基因的扩增和过表达在OSCC发生发展中都具有重要作用,c-erbB2蛋白表达增高在腭癌和口底癌的形成过程中具有更重要的意义.

银杏内酯B对成年大鼠神经干细胞向神经元分化的促进作用

目的探讨银杏内酯B对神经干细胞分化为神经元的促进作用. 方法采用无血清培养和单克隆实验技术在体外分离培养出大量来源于同一细胞的单细胞克隆球,并将其均匀种植于24孔培养板中,分3组分别加入含银杏内酯B、BDNF和不加任何细胞因子的完全培养液.培养7 d和14 d后终止,用神经元特异性标记物微管相关蛋白-2(MAP-2)的单克隆抗体进行免疫荧光标记,荧光显微镜下观察和计数MAP-2标记的阳性细胞并对细胞面积和周长进行图像处理. 结果两个时期银杏内酯组MAP-2阳性细胞数均明显多于单纯对照组而少于BDNF组;分化7 d和14 d时银杏内酯组MAP-2阳性细胞的面积和周长明显大于单纯对照组,而略小于BDNF组.结论银杏内酯B亦具有类似BDNF促进神经干细胞分化为神经元的作用.

自发性高血压大鼠心肌间质胶原的扫描电镜观察

目的探讨自发性高血压大鼠(SHR)心肌间质胶原的形态变化及对心功能的影响. 方法取左心室壁,经四氧化锇细胞浸渍和氢氧化钠细胞浸渍方法处理,在扫描电镜下观察. 结果正常大鼠(WKY)心肌细胞周围主要存在有粗细两种胶原纤维并互相交织成网.在自发性高血压大鼠,粗纤维呈腱样增宽增厚,在心肌细胞周围排列呈栅栏状;胶原网变得致密,在血管周围呈毡片样增厚. 结论高血压心肌肥厚时,心肌胶原粗纤维的变化可能是心壁僵硬度改变的主要原因,胶原网的形态变化可能影响心肌细胞功能.

P19细胞向神经元诱导分化的实验研究

目的探讨P19细胞向神经元定向分化发育的可能性. 方法经维甲酸(RA)诱导4 d的P19细胞按神经细胞培养方法培养12 d,分别用NSE、MAP-2和TH进行免疫组织化学染色,用AchE进行组织化学染色,鉴定分化细胞的特征. 结果经RA诱导的P19细胞培养12 d,大多数细胞转变为类似于神经元的形态,长出突起并相互联络成网.经NSE免疫组织化学显示,12 d培养物中神经元约占89%.P19诱导的神经元培养12 d,神经元突起经MAP-2染色呈阳性反应.TH免疫组织化学显示,神经元中TH染色阳性神经元约占0.8%.组织化学显示,神经元中AchE染色阳性神经元约占71.09%. 结论 P19细胞在体外经定向诱导分化可以产生较高比例的神经元.

大鼠脾气虚胃溃疡证病结合模型胃肠粘膜局部免疫-神经-内分泌网络的变化

目的探讨脾气虚胃溃疡证病结合模型中胃肠粘膜局部神经内分泌免疫(INE)网络的变化及其作用. 方法免疫组织化学染色和图像分析技术. 结果脾气虚合并胃溃疡模型中胃粘膜D细胞分泌SST的活性显著增强;空、回肠分泌SP、VIP神经元的活性增强;胃粘膜免疫细胞分泌IL-2的活性增强. 结论大鼠脾气虚胃溃疡模型的SST、SP、VIP、IL-2的合成及分泌水平发生了改变,表明胃肠粘膜局部免疫、神经、内分泌网络均发生了一定程度的变化,是脾虚胃溃疡发生的重要因素.

成纤维细胞生长因子受体3在软骨发育分化过程中的意义

成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)是一组结构相似的多肽类家族,目前已发现有19个成员[1],其在胚胎发育、血管新生、伤口愈合、肿瘤形成中发挥重要作用.这些作用的发挥是通过与其细胞表面受体相结合后而介导的.目前已克隆出4种成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor, FGFR),虽然4种FGFRs结构相似,但每种FGFR在机体发育的不同阶段及不同组织中各有其特殊的表达方式.近来研究证明,在软骨和骨的发育分化过程中,FGFR3发挥着重要的作用,我们对此进行综述.

显示微血管功能状态技术方法的比较研究

目的为子宫血管生物学的研究提供形态学指标的依据. 方法人增殖期子宫内膜10例.应用免疫组织化学方法,对与血管功能密切相关的各种因子进行标记表达. 结果不同标记物在同一组织、同一切面上,微血管的形态与密度呈现了明显的差异. 结论 CD34和CLIV是显示血管密度好的标记物.

冰冻切片进行免疫电镜的新尝试

利用冰冻切片制作电镜标本,由于冰晶的大量出现无法进行超微结构的识别,故很少有人涉足.在免疫电镜及酶细胞电镜等研究中,需要定位后进行电镜标本制作,为了避免冰晶的出现,只能使用非常烦琐的振动切片机切片.若进行系统的光镜、电镜观察,就更加困难.为此我们经过反复实验,不断探索,成功地使用冰冻切片进行脑组织免疫电镜的标本制作,改变了传统的冰冻切片不能制作电镜标本的观念,并取得了极为理想的效果.

干细胞常用词汇(续四)