中国人肱骨的年龄鉴定

目的对肱骨上端骨松质长度和骨松质指数进行年龄鉴定. 方法随机拍摄10～93岁177例(男90例,女87例)汉族人上肢双侧肩部前后位X线片.每个性别的观察对象分成9个年龄组,分别测量X线片上肱骨上端骨松质长度,计算肱骨上端骨松质指数. 结果肱骨上端骨松质长度与指数随年龄增长逐渐变小,与年龄呈高度负相关.根据肱骨上端骨松质长度和指数与年龄的关系得出回归方程. 结论利用肱骨上端骨松质长度和骨松质指数可为年龄鉴定提供一种新方法.

8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞生长相关基因表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP对人Eca-109细胞与生长相关基因表达的影响. 方法体外培育的人食管癌Eca-109细胞受8-Br-cAMP处理后,用原位杂交、免疫组织化学及RNA、蛋白质斑点印迹技术研究了与细胞生长相关的几种基因的表达变化. 结果 8-Br-cAMP可减弱EGFR、H-ras、c-myc、突变型p53等基因的表达,增强野生型p53基因表达和p21WAF1蛋白的表达. 结论 8-Br-cAMP可通过影响有关信号传递和细胞周期进程基因表达而抑制细胞生长.

孤儿肽在自发性高血压大鼠和家兔心血管系统的分布

目的研究孤儿肽(orphanin FQ,OFQ)在自发性高血压大鼠和家兔心血管系统的分布. 方法采用反转录 -聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学方法. 结果 RT-PCR的结果显示,OFQ的前体mRNA在自发性高血压大鼠的主动脉、肺动脉、肾动静脉均有较高的表达,其表达水平与脑组织表达水平相似,心房组织也有弱的表达,但在心室组织未见OFQ前体mRNA的表达.免疫组织化学结果显示,心肌细胞OFQ免疫反应阴性,心房内膜的内皮细胞和主动脉、肾动静脉的内皮细胞及血管平滑肌细胞均含有OFQ免疫反应阳性颗粒,此外在肾小球也观察到了OFQ反应阳性细胞. 结论 OFQ可能是对心血管系统和肾脏功能有一定调节作用的调节肽,但其具体的功能及调节机制尚待进一步研究.

听源性惊厥易感大鼠中脑导水管周围灰质内突触素的表达

目的分析正常及点燃后听源性惊厥易感大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)内突触密度的变化情况.方法用免疫细胞化学方法和计算机图像分析技术. 结果正常和点燃后听源性惊厥易感大鼠PAG内突触素P38免疫反应产物的校正光密度值(COD)均显著高于正常Wistar大鼠;点燃后听源性惊厥易感大鼠PAG背侧及背外侧两个亚区内突触素P38免疫反应产物的COD值显著高于正常听源性惊厥易感大鼠. 结论 PAG内突触密度的改变与听源性惊厥及其点燃过程密切相关.

实验性脾虚证大鼠胰岛细胞的免疫组织化学研究

目的研究实验性脾虚证大鼠胰岛细胞胰岛素、胰岛淀粉样多肽、胰高血糖素和生长抑素分泌活动的变化,探讨中医学脾虚证发病与胰岛激素分泌活动的关系. 方法用Wistar雄性成年大鼠24只,分为正常对照组、实验性脾虚组、自然恢复组和中药治疗组.4组动物同时麻醉处死,取胰尾固定于Bouin液,制成石蜡切片.用免疫组织化学法显示胰岛B细胞胰岛素和胰岛淀粉样多肽、A细胞胰高血糖素和D细胞生长抑素,并用显微分光光度计对免疫染色强度进行了定量测定. 结果与对照组相比,脾虚组胰岛B细胞胰岛素和A细胞胰高血糖素免疫染色明显减弱,而D细胞生长抑素和B细胞胰岛淀粉样多肽免疫染色明显增强. 结论上述结果提示,胰岛细胞激素分泌活动失常可能与脾虚证代谢异常有密切关系.

镉对大鼠附睾体部的损伤及锌的保护作用

目的探讨镉对大鼠附睾体部的超微结构影响及其作用机理. 方法单纯小剂量氯化镉(2 mg/kg体重)及加锌腹腔内注射后,用透射电镜及硫胺素焦磷酸酶(TPPase)电镜细胞化学定量分析. 结果镉注射后4h,主细胞出现轻度超微结构损伤;24h至3d进一步加重;7～15d退变严重;30～60d基本恢复.TPPase反应产物4h后明显减少,3d后暂时回复,但7～15d再次下降,60d恢复正常.锌保护各组主细胞形态正常,TPPase反应产物较单纯镉组量多,至15d达正常水平. 结论镉对大鼠附睾体部的损伤较轻;镉对主细胞TPPase活性的影响比对结构的损伤敏感些;早期损伤系镉的直接毒理作用,后期则由于雄激素水平下降加重损伤.

SD乳鼠窦房结细胞原代分散培养的光电镜研究

目的探索体外窦房结细胞原代纯化培养方法,观察培养的窦房结细胞生长状况及光电镜形态学特征. 方法 (1)用差速贴壁和Brdu处理作细胞培养;(2)观察和记录各类型培养细胞的生长状况;(3)HE染色和Heidenhain苏木素染色;(4)透射电镜观察. 结果在培养的窦房结细胞中,至少有3种自发性收缩细胞及少量的星状和不规则细胞.收缩性细胞中,多的是多边形细胞,其次是梭形,少的是三角形细胞,且多边形细胞收缩频率低(75.27±1.73/min( )±s),细胞染色和电镜观察结果显示:多边形细胞的细胞器相似于原位窦房结组织中的起搏(P)细胞,梭形细胞相似于移行(T)细胞,P细胞核旁较易见到电子致密颗粒和中心粒,也常见细胞核染色体正处于细胞周期的分裂期的前、中期. 结论多边形细胞很幼稚,具有不断分裂增埴的能力.

神经激肽B受体在猫三叉神经脊束核尾侧亚核和脊髓内的分布

目的了解神经激肽B受体(NK3受体)与伤害性信息的传递和调制的可能关系,调查NK3受体在三叉神经尾侧亚核和脊髓内的分布状况. 方法免疫组织化学技术. 结果 NK3受体样免疫反应产物在三叉神经尾侧亚核和脊髓内的分布基本一致.致密的免疫反应产物分布于Ⅱ内层(inner part),而Ⅰ层和Ⅱ外层(outer part)染色浅淡.NK3受体阳性神经元胞体主要见于三叉神经尾侧亚核和脊髓的Ⅰ层和Ⅱ层,少量分布于脊髓后角深层. 结论提示三叉神经尾侧亚核和脊髓内的NK3受体可能与初级伤害性信息的传递和调控有密切关系.

鸡胚房间隔与第二孔的形态发生

目的探讨心脏房间隔与第二孔形态发生机制. 方法按Hamburger和Hamilton分期法,选用第20～26期鸡胚,用显微解剖术和扫描电镜方法,观察房间隔与第二孔的形态发生过程. 结果房间隔尚未与心内膜垫融合前,房间隔中央部上皮处出现小孔,小孔随着长突起状细胞的出现而增多.筛状的第二孔形成后,长突起状细胞减少并消失. 结论第二孔形成不是被动破裂的过程,在形成的早期可能与长突起状细胞有密切关系.

高渗刺激诱导大鼠下丘脑室旁核和视上核神经激肽B受体阳性神经元表达Fos

目的研究神经激肽B受体(NK3受体)与机体渗透压调节之间的可能关系. 方法用双重免疫组织化学染色技术,高渗刺激采用静脉内注射1.5 mol/L NaCl的方法,观察了下丘脑室旁核和视上核内NK3受体阳性神经元在高渗刺激下的Fos表达情况. 结果高渗盐水可诱导下丘脑室旁核和视上核内大量神经元表达Fos.在室旁核,双标细胞约占NK3受体阳性神经元的88%,约占Fos阳性细胞的71%;在视上核的主部,双标细胞约占NK3受体阳性神经元的74%,约占Fos阳性细胞的43%. 结论室旁核和视上核内NK3受体阳性神经元可能参与大鼠渗透压调节过程.

金属硫蛋白与心肌血管内皮细胞的特异结合

目的探讨金属硫蛋白(MT)进入细胞的机制. 方法以胶体金为示踪物,采用离体心脏灌流术,电镜下观察心肌血管内皮细胞对MT的摄入. 结果心肌血管内皮细胞能特异地摄取MT. 结论血管内皮细胞表面存在MT特异结合位点,为深入研究该蛋白的生理功能及其应用提供了重要依据.

基底前脑NOS神经元移植至成年鼠海马内的发育

目的研究基底前脑NOS神经元移植至成年鼠海马内后,NOS的发育变化规律,同时观察移植物与宿主海马间发生联系的情况. 方法将大鼠14～16d胚胎的基底前脑移植到单侧穹隆海马伞切断的成年大鼠海马内,动物在移植后存活5、7、14、30、60、90、150和180d分别取脑,经NADPH-d法和尼氏染色观察. 结果在移植后第7d时NADPH-d阳性染色才出现在NOS阳性神经元内,随着移植物成活时间的延长,NOS阳性神经元逐渐生长在30d时已发育成熟,而且30d时可见其与宿主海马发生联系,直到180d仍有良好的联系. 结论移植物的NOS阳性神经元在海马的发育有一定的规律.移植物可以在海马内长期存活并可以和宿主脑整合生长,表明移植物可能有功能.

吸莫合烟对金黄色地鼠肺组织超微结构的影响

目的观察吸莫合烟对金黄色地鼠肺组织超微结构的影响. 方法取肺组织做超薄切片,用透射电镜观察. 结果Ⅰ型肺泡细胞和毛细血管内皮细胞均肿胀,线粒体亦肿胀,嵴排列紊乱、断裂消失.Ⅱ型肺泡细胞线粒体体积缩小,板层小体空泡变、胞膜破裂,细胞器溢出.肺泡巨噬细胞次级溶酶体明显增多. 结论吸莫合烟可造成金黄色地鼠肺组织结构的改变,进而影响气体交换的功能.

葡萄糖调节蛋白94在人胚胎发育中的表达

目的为探讨葡萄糖调节蛋白94(GRP94)在胚胎发育中的作用,研究了10～31周人胎组织GRP94的定位及表达. 方法用SP免疫组织化学方法. 结果结肠粘膜上皮、肾小管上皮及肝细胞的胞质内,在10周已有GRP94的表达,18～20周时表达增多,一直维持较高水平.胃粘膜上皮及心肌细胞也有较强的表达.肺、骨骼肌、脊髓及胸腺未见表达. 结论 GRP94存在着基础表达,可能在某些器官的发育过程中起作用.

人酪氨酸羟化酶RNA探针制备的研究

目的制备地高辛标记的人酪氨酸羟化酶(hTH2)cRNA探针. 方法用分子克隆技术重组质粒pGEMTH2.用体外转录法制备地高辛标记hTH2cRNA探针,经限制性内切酶分析,显示重组质粒含有酪氨酸羟化酶基因片段,且插入位点正确.使用斑点杂交证实我们制备的探针是敏感而可靠的. 结果杂交阳性部位呈紫蓝色,深浅与稀释度成正比. 结论 Dig标记的hTH2cRNA探针有较好的敏感性和可靠性,可用于基因治疗帕金森病动物模型基因表达的研究.

大鼠脊髓后角浅层初级传入C纤维内μ阿片受体的免疫组织化学定位光镜与电镜研究

目的在光镜及电镜下观察大鼠脊髓后角内μ阿片受体(MOR)与C纤维的关系,为进一步揭示阿片镇痛的突触机制提供形态学证据. 方法根据辣椒素对初级传入神经中C纤维的特异性神经毒性,在大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素以毁损C纤维,用免疫组织化学ABC法比较脊髓后角内MOR免疫反应性的变化;根据西非单叶豆同工凝集素I-B4(griffonia simplicifolia isolectin I-B4,I-B4)与初级传入C纤维选择性结合的特性,应用双标(免疫)组织化学电镜技术(ABC-纳金法)分别标记脊髓后角内I-B4结合位点和MOR. 结果大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素3～7d后,其脊髓后角Ⅰ～Ⅱ层内的MOR免疫反应性较对照动物明显减弱;电镜下在大鼠脊髓后角浅层内观察到,MOR不仅定位于树突内,也分布在含I-B4结合位点的C纤维终末内.无论在树突内还是在轴突终末内,MOR主要分布在非突触部位,仅少量MOR与突触前膜和/或突触后膜有关. 结论脊髓后角中部分MOR来源于辣椒素敏感的C纤维,外源性吗啡或内源性吗啡样物质如内吗啡肽等MOR激动剂在脊髓后角内既可通过突触后(树突内)的MOR发挥作用,也可通过突触前(轴突终末内)的MOR对C纤维产生突触前抑制效应,而且在此过程中,MOR激动剂在非突触部位的作用可能是主要的.

听源性惊厥发作后中脑导水管周围灰质内c-fos基因的变化

目的探讨中脑导水管周围灰质(PAG)与听源性惊厥的关系. 方法用神经细胞(Nissl)染色和免疫细胞化学技术,观察听源性惊厥发作后易感大鼠(P77PMC)PAG内即早基因c-fos的表达情况. 结果听源性惊厥发作2h后,P77PMC大鼠PAG的背侧亚区及背外侧亚区、尾侧段腹外侧亚区内出现大量Fos阳性神经元,Fos阳性神经元百分率显著高于对照组. 结论听源性惊厥易感大鼠PAG内大量神经元参与了听源性惊厥发作过程.

猕猴消化系统各器官蛋白水解酶种类和性质研究

目的研究太行山猕猴(Macaca mulatta tcheliensis)消化系统各器官蛋白水解酶种类和性质. 方法采用单向活性电泳(1D-G-PAGE)和双向活性电泳(2D-G-PAGE)技术. 结果 (1)消化系统各器官的蛋白水解酶在近中性条件下活性强,其中94、86、64、59和25kD蛋白水解酶在消化系统各器官中普遍存在;(2)消化系统各器官均具有31、30、和29kD 3种酸性蛋白水解酶;(3) pH7.0时,胃、胰、十二指肠中分别含有12、34和18种不同分子量或等电点的蛋白水解酶;(4)pH10.5时,胰、十二指肠中分别检出21和12种不同分子量或等电点的蛋白水解酶. 结论消化系统中蛋白水解酶的种类和数量比较多,且结构相似、功能相近的器官之间,蛋白水解酶的种类和性质相似.

以HRP及氚水作示踪剂研究脑脊液的回流途径

目的研究脑脊液(CSF)的正常回流途径. 方法将HRP、氚水作为示踪剂分别缓慢注入两组大白鼠侧脑室.应用光、电镜技术和液闪、放射自显影技术对HRP和氚水在脑组织中分布状况进行观察. 结果在脑室周围器官及脑室周围室管膜、软脑膜层有HRP反应产物的聚集,在鼻中隔的鼻粘膜下组织间隙、嗅丝周围间隙及静脉周围和管腔内也可见到HRP反应产物;液闪计数显示,大白鼠的脉络丛、脑垂体、后区、松果体等脑室周围器官放射性活度明显高于本底;放射自显影显示大白鼠脑组织神经层细胞内有散在分布的银颗粒. 结论 CSF可经由脑室周围器官、脑膜及鼻粘膜下静脉网汇入体循环,同时CSF可回流至大脑神经细胞层,参与形成神经细胞层组织液,与维持脑的正常功能有关.

利用原位杂交分析几种cyclin和CDK基因在人乳腺癌中的异常表达

目的探讨细胞周期调控基因cyclin和CDK的异常与乳腺癌发生的相关性. 方法采集20例乳腺癌外科手术样品,用原位杂交技术分析了cyclinD1、D3、E、CDK2 和CDK4 mRNA的表达. 结果在大多数乳腺癌样品中,这些基因有一种或几种出现高表达.cyclinD1高表达的样品17例(85%),cyclinD3有12例(60%),cyclinE有7例(35%),CDK2有6例(30%),CKD4有16例(80%).cyclinD1和CDK4显色强,其次是cyclinD3,cyclinE和CDK2显色较弱,正常乳腺组织为阴性显色. 结论推测cyclin和CDK基因,特别是cyclinD1和CDK4的异常表达与乳腺癌的发生有密切关系.

睾丸摘除后大鼠垂体前叶CGRP免疫反应神经纤维的变化

目的探讨体内睾酮水平变化对大鼠垂体前叶CGRP免疫反应神经纤维的影响. 方法成年雄性SD大鼠随机分为7个组:正常对照组(NOR);睾丸摘除组(OX);假手术组(SO);正常+丙酸睾丸素组(NOR+TP);睾丸摘除+丙酸睾丸素组(OX+TP);正常+油剂组(NOR+V);睾丸摘除+油剂组(OX+V).采用免疫组织化学和图像分析方法观察大鼠垂体前叶中CGRP免疫反应神经纤维的变化. 结果睾丸摘除7d后,大鼠垂体前叶CGRP免疫反应神经纤维发生了显著变化,表现为膨体型纤维较正常组稠密,分支增多,迂曲成片,盘绕成网,分布更加广泛,膨体数量显著增多;粗纤维较正常组粗,且发出许多迂曲盘绕的细纤维,膨体形态变大.t检验显示,OX组与NOR组垂体前叶内CGRP免疫反应神经纤维的平均面积密度差异显著,OX+V与NOR组差异显著.而SO组、NOR+TP组、OX+TP组、NOR+V组与NOR组比较,CGRP免疫反应神经纤维的平均面积密度无显著差异.与NOR组比较,NOR+TP组、OX+TP组中,垂体前叶CGRP免疫反应神经纤维的形态以细纤维为主. 结论垂体前叶中CGRP免疫反应神经纤维对体内睾酮水平的剧烈变化能作出积极反应,从功能形态学上证明了这些神经纤维对前叶腺细胞的分泌可起一定的调节作用.

小鼠附睾Ⅳ型胶原和层粘连蛋白的分布

目的研究附睾发育过程中Ⅳ型胶原和层粘连蛋白(liaminin,LN)的定位和分布. 方法应用生物素-抗生物素DCS体系间接免疫荧光染色技术. 结果 15d幼鼠附睾基膜内Ⅳ型胶原和LN荧光强度较弱;3个月成年鼠附睾基膜内Ⅳ型胶原和LN荧光强度强;18个月老年鼠附睾基膜内Ⅳ型胶原和LN荧光强度比3个月弱.3月龄成年小鼠附睾各部分的荧光强度从头部至尾部呈逐渐增强的趋势. 结论小鼠附睾内的细胞外基质成分可能与附睾各部分功能状态有密切关系.

六亚甲基双乙酰胺及其衍生物对人红白血病K562细胞的诱导分化作用

目的探索HMBA及其衍生物HMBA-Ⅰ和HMBA-Ⅱ对人红白血病细胞系K562的诱导分化作用. 方法细胞生长曲线绘制、集落形成试验,检测HMBA及其衍生物对细胞生长的影响,以Western blot检测p21、c-fos蛋白表达,以联苯胺染色显示血红蛋白. 结果 HMBA-Ⅰ,HMBA-Ⅱ呈现对K562细胞生长有不同程度的抑制作用,基因表达产物血红蛋白联苯胺染色呈阳性反应,p21、c-fos蛋白表达有不同程度的增高. 结论 HMBA-Ⅰ,HMBA-Ⅱ对K562有一定的诱导分化活性,作用机制可能与p21、c-fos表达增高有关.

大鼠肝大部切除后再生时贮脂细胞的动态变化

目的研究大鼠肝大部切除后再生时贮脂细胞的动态变化. 方法用结蛋白免疫组织化学法显示肝贮脂细胞并计量,以图像分析仪测灰度值. 结果正常肝小叶内贮脂细胞呈网架状分布,肝大部切除后再生时贮脂细胞数量递减,至第5d时为正常肝的1/3. 结论肝大部切除后再生时贮脂细胞动态变化明显不同于肝中毒等损伤后的增殖变化.

针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白、诱导性一氧化氮合酶及其基因表达的效应

目的研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白(HSP)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)及其mRNA表达的效应. 方法将24只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后,随机分为3组:电针(EA)组、对照1(C1)组和对照2(C2)组.将3组收集的腹腔巨噬细胞制备成玻片和硝酸纤维素膜(NCM)两种标本,应用原位杂交、免疫细胞化学、细胞化学及斑点印迹技术检测HSP70、iNOS及iNOS mRNA. 结果 HSP70定位于巨噬细胞的胞质和胞核;iNOS mRNA及iNOS均定位于巨噬细胞的胞质;3组的iNOS mRNA、iNOS、HSP70的斑点印迹的扫描数值均为EA组>C2组>C1组(P<0.01). 结论电针可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的HSP70、iNOS及iNOS mRNA表达.

FSH受体的特性和表达的调控

卵泡刺激素(FSH)是垂体分泌的一种糖蛋白激素,主要作用是促进和维持正常的性腺发育和生殖功能.FSH的生理功能是通过分布于性腺的特异性受体所介导的.支持细胞(sertoli cell)和颗粒细胞(granulosa cell)分别是FSH作用于睾丸和卵巢的靶细胞.FSH的结构和生理功能虽然已被广泛的研究和阐明,但其作用的分子机制,尤其是在促进配子产生过程中的作用机制尚不清楚.因此,研究FSH受体(FSHR)的分子结构和功能、以及FSHR的基因表达与调控,进而阐明对配子形成的意义,已经成为阐明FSH功能的关键.

<肿瘤学基础与研究方法>介绍