大鼠嗅球和鼻腔嗅粘膜成鞘细胞的形态学研究

目的观察大鼠嗅神经成鞘细胞在嗅球和嗅粘膜的分布及其形态学结构特征,研究其与中枢神经再生的关系.方法Luxol固蓝染色、Mallory染色和NGFRp75免疫组织化学染色结合透射电镜观察. 结果在嗅球纤维层的成鞘细胞随神经纤维呈纵向排列,在嗅小球层的成鞘细胞则围绕着嗅小球环行排列.在嗅粘膜的成鞘细胞位于柱状上皮深方,沿基底膜分布.成鞘细胞的胞体为细长梭形,有较长的突起,细胞核呈圆形或椭圆形.在嗅小球周围和嗅粘膜内的成鞘细胞呈NGFRp75免疫反应阳性.在电镜下,嗅球成鞘细胞的纵断面上可见其胞体呈长梭形,细胞核为不规则形,核仁清晰.在胞体的周围有大量的平行神经纤维纵向排列,在放大的横断面上,可见在1个成鞘细胞的细胞核周围有数根神经纤维被胞质包裹在一起. 结论嗅成鞘细胞是一种特殊的胶质细胞,分布于嗅球的纤维层、嗅小球层和嗅粘膜内.嗅神经成鞘细胞的胞体细长,有较长突起,其轴系膜紧密包裹成束的无髓神经纤维.

外周免疫刺激诱导小鼠下丘脑室旁核和视上核中Ⅰ型IL-1受体表达的变化

目的通过研究外周免疫刺激后免疫性细胞因子受体在下丘脑神经内分泌核团中的表达变化,揭示这些核团与神经免疫调节的关系. 方法小鼠腹腔内给予细菌内毒素脂多糖(lipopolysacchride,LPS)或葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB),用免疫组织化学方法观察脾脏核增殖抗体(PCNA)及下丘脑室旁核和视上核中Ⅰ型IL-1受体的表达,并采用双标记技术观察Ⅰ型IL-1受体阳性神经元和加压素及催产素表达的关系.结果1.与对照组比较,LPS或SEB引起脾脏核增殖抗体的表达明显增强.2.Ⅰ型IL-1受体在正常小鼠脑内的表达很广泛.与对照组比较,LPS或SEB引起Ⅰ型IL-1受体在小鼠下丘脑室旁核和视上核中表达显著增强.3.在正常下丘脑室旁核和视上核中Ⅰ型IL-1受体阳性的神经元既有加压素能的,又有催产素能的.结论下丘脑室旁核和视上核参与了免疫反应的调节,这两个核团中的部分加压素能神经元和催产素能神经元在神经免疫调节中可能具有重要作用.

施万细胞对培养的神经干细胞存活及其分化的影响

目的探讨施万细胞能否在体外促进神经干细胞的存活和分化.方法分离和克隆新生大鼠海马组织的神经干细胞;同时获取坐骨神经和臂丛神经,从中分离和纯化施万细胞.将施万细胞和神经干细胞进行共培养,借助免疫细胞化学技术检测培养的神经干细胞巢蛋白(nestin)的表达及其分化后神经丝蛋白(NF)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.应用扫描电镜观察神经干细胞的形态变化.结果与施万细胞一起培养的神经干细胞存活数量增加,分化为神经元样细胞的数量也明显增加.这些神经元样细胞的初级突起比对照组的明显增长.施万细胞能使神经干细胞胞体表面不规则的凹凸变得平整.共培养的施万细胞和神经干细胞可以3种方式接触生长:1.胞体与胞体接触;2.胞体与突起接触;3.突起与突起接触.结论施万细胞能促进体外培养的神经干细胞的存活及其分化为神经元样细胞.

大鼠三叉神经中脑核内GABAA受体和GABAB受体的定位分布

目的观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)内GABAA受体(GABAAR)和GABAB受体(GABABR)的定位分布,为研究GABA受体在面口部本体感觉信息传递和调控中的作用提供形态学依据. 方法用免疫细胞化学技术,染色结果在光学显微镜下进行观察.结果在Vme内可观察到大量GABAAR和GABABR样免疫反应阳性的胞体、纤维和终末,其不同亚单位的分布具有一定差别:1.GABABR1亚单位主要分布于Vme神经元的胞体,呈强阳性反应,而GABABR2亚单位只见于Vme神经元胞体周围的纤维和终末内,呈弱阳性反应,Vme神经元为阴性;2.在Vme内亦可观察到大量GABAAR免疫反应阳性的胞体、纤维和终末,其主要亚单位有α1、α2、α3和β.其中GABAARα1和GABAARα3亚单位只分布于神经元胞体,呈强阳性反应,GABAARα2和GABAARβ亚单位仅见于神经纤维和终末内,Vme神经元胞体为阴性;3.密集分布的GABABR2、GABAARα2和GABAARβ亚单位样免疫阳性纤维和终末似包绕在Vme神经元胞体的周围,其中以GABAARα2的免疫染色强,分布也较为集中.结论GABAA受体和GABAB受体的不同亚单位在Vme内的定位分布有一定差异,提示GABA能神经终末对面口部本体感觉信息的传递发挥抑制性调控作用,可能主要是由位于Vme神经元胞体内的GABAARα1和GABAARα3亚单位所介导.

脊髓神经管神经上皮干细胞的分离培养和诱导分化

目的从胚胎大鼠脊髓神经管中分离神经上皮干细胞并诱导其向多巴胺能神经元方向分化.方法利用无血清悬浮培养、单细胞克隆技术分离神经上皮干细胞;采用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记新生细胞,免疫细胞化学单标或双标染色技术,检测神经上皮干细胞蛋白(nestin)和分化后特异性神经细胞抗原的表达;用纹状体组织提取液,诱导神经上皮干细胞向多巴胺能神经元方向分化.结果从胚胎大鼠脊髓神经管中分离的细胞可以连续传代,表达nestin,它们分化后可以表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原;与对照组3%相比,纹状体组织提取液可以诱导这些细胞中的12%分化成为多巴胺能神经元.结论分离自脊髓神经管的细胞具有自我更新能力和多分化潜能(multipotent),是增殖能力很强的神经干细胞;这些干细胞在一定的体外环境中能被诱导成为特定的神经元,提示其可以为神经移植提供材料.

怀孕可增加小鼠海马齿状回的细胞增殖和神经发生

目的观察怀孕对小鼠海马齿状回(DG)和脑室下层(SVZ)的细胞增殖和神经发生的影响.方法5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记新生细胞结合免疫组织化学方法对脑切片进行BrdU、TuJ1及GFAP单标或双标染色.结果怀孕小鼠齿状回的细胞增殖和神经发生明显高于正常未孕成年雌性小鼠,脑室下层中细胞增殖的数目在两者却无明显差异.在齿状回新生的细胞中大约有80%为新生的神经元,3%～5%为神经胶质细胞. 结论成年小鼠海马齿状回的细胞增殖和神经发生可能因怀孕而显著增多,这些新生的细胞对海马的功能可能有重要的影响.

TNFα激活的星形胶质细胞在慢性癫痫复发中的作用

目的研究TNFα激活的星形胶质细胞在慢性癫痫复发中的作用.方法分别用反相高效液相色谱法和免疫组织化学反应检则细胞释放谷氨酸(Glu)和NF-κ Bp65表达的变化.将TNFα激活的星形胶质细胞条件培养液(ACM)注射入慢性马桑内酯致痫发作间期大鼠之侧脑室,观察动物行为和脑电图的变化,并用免疫组织化学反应观察海马NF-κ Bp65和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化. 结果1.TNFα可明显促进星形胶质细胞释放Glu,并快速诱导星形胶质细胞核内NF-κ Bp65的表达;2.侧脑室注射ACM可引起大鼠4级癫痫行为及典型的痫样脑电图表现;注射ACM后0.5h即可观察到海马回特别是CA1区细胞核内p65的表达,2～4 h达高峰,8 h恢复至对照水平;注射ACM后1h海马GFAP免疫反应阳性细胞数开始高于对照组,4 h达高峰,8 h仍明显高于对照组.结论TNFα激活的星形胶质细胞可通过释放可溶性的神经活性物质引起慢性癫痫的复发.

同型半胱氨酸对人胚心肌细胞HCY-2表达的影响

目的研究同型半胱氨酸对人胚心肌细胞同型半胱氨酸诱导基因(HCY-2)表达及对心肌细胞增殖的影响.方法取人胚心肌细胞培养,采用免疫组织化学及图像分析技术对心肌细胞内HCY-2表达及心肌细胞增殖的变化进行定量测定分析.结果当同型半胱酸的浓度小于1.25 mmol/L时,HCY-2的表达随着同型半胱氨酸浓度的增高而逐渐增强,并且同型半胱氨酸促进细胞的增殖;当浓度超过1.25 mmol/L时,HCY-2的表达逐渐降低,同时同型半胱氨酸抑制细胞的增殖.结论HCY-2高表达时同型半胱氨酸对心肌细胞的增殖起促进作用,低表达时则抑制心肌细胞的增殖.

腺病毒介导hTGF-β1基因体内转染兔椎间盘髓核细胞的表达

目的观察以腺病毒为载体的外源性治疗基因Ad/CMV-hTGF-β1转染兔椎间盘髓核细胞后的表达.方法采用本实验室构建的腺病毒载体基因Ad/CMV-hTGF-β1 20μl(6×106 pfu)注射于纯种成年新西兰大白兔腰椎间盘髓核内;手术后不同时间分别取出椎间盘,用免疫组织化学方法对椎间盘髓核细胞进行基因表达产物测定;用VIDAS图像分析系统进行半定量观察.结果免疫组织化学染色显示注射Ad/CMV-hTGF-β1椎间盘,4 d组可见髓核细胞内呈现阳性染色颗粒;1周组即显示强阳性染色,阳性表达持续至12周组.实验对照组及自身椎间盘对照组呈阴性或弱阳性反应.结论椎间盘髓核作为靶细胞能够被外源性基因转染;腺病毒载体基因Ad/CMV-hTGF-β1转染兔椎间盘髓核细胞后能在相当长时间内表达TGF-β1蛋白.

H-89和wortmannin对forskolin和IBMX促进受损视网膜节细胞再生作用的影响

目的探讨forskolin 和IBMX促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的作用机制. 方法采用荧光逆行示踪标记术和自体坐骨神经移植术,研究蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89或/和PI3-K特异抑制剂wortmannm玻璃体内注射对forskolin和IBMX促进成年金黄地鼠受损RGCs再生的影响.结果H-89和wortmannin均可部分抑制forskolin和IBMX对受损RGCs的促再生作用,wortmannin的抑制作用更大;两药联合应用,可完全抑制forskolin和IB-MX对受损RGCs的促再生作用. 结论forskolin和IBMX可能是通过PKA-CREB和PI3-K-Akt通路实现对受损RGCs的促再生作用.

成年SD鼠骨髓基质细胞的细胞分化及抗凋亡的研究

目的探讨用不同的抗凋亡剂与诱导剂组合进行诱导,以延长分化后神经元样细胞存活时间,为临床治疗提供长寿细胞.方法采用全骨髓法培养成年SD大鼠股骨骨髓基质细胞.传至第5代,用单一或组合的诱导剂诱导分化,诱导分6组:RA、褪黑素(10-9 mol/L)、bFGF、bFGF+RA、褪黑素+RA、褪黑素+bFGF.于诱导后第5 h行神经细胞特异性抗原MAP-2和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学鉴定,并分别在诱导后的第1、5和24 h计数各组神经元样细胞的分化率,比较各组诱导后神经元样细胞的存活率. 结果神经元样细胞皆呈MAP-2阳性,GFAP阴性.RA、褪黑素(10-9 mol/L)、bFGF、bFGF+RA、褪黑素+RA、褪黑素+bFGF各组诱导后第1 h分化率分别为0.24、0.28、0、0、0.44、0.64;5 h为0.56、0.40、0、0、0.76、0.83;24 h为0.10、0.27、0、0.14、0.35、0.59.诱导后24 h神经元样细胞存活率在RA、褪黑素、褪黑素+RA、褪黑素+bFGF 4组分别为0.08、0.37、0.05、0.51.结论1.bFGF单独不能诱导骨髓基质细胞向神经元样细胞分化,且拮抗RA的诱导作用,但对褪黑素的诱导有互补作用.2.单独用褪黑素可诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞并有对抗神经元样细胞凋亡作用.3.褪黑素及bFGF联合诱导不仅使神经元样细胞分化率提高且使存活时间明显延长.

施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响

目的探讨移植的施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响.方法50只成年SD大鼠被分为实验组和对照组.在胸11脊髓段半横切后立即在损伤处移植入施万细胞. 结果脊髓半横切后,15 d和25 d对照组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数均比未损伤侧的明显减少.存活的神经元胞体出现明显皱缩,有些神经元呈现NADPH-d阳性.15 d和25 d施万细胞组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数则比同期对照组的明显增加,表达NOS的存活神经元数也随之增多.但存活的神经元胞体仍然是皱缩的. 结论移植的SCs可促进受损伤的背核神经元存活及其表达NOS,但不能阻止其胞体出现皱缩.

A20基因在血管内皮细胞的表达研究

目的探讨外源性A20基因在内皮细胞获得稳定表达的可行性. 方法将N-末端标记E-tag的HA20cDNA重组于pCAGGS真核表达载体,构建了pCAGGSEHA20真核表达重组体.DOTAP脂质体介导的pCAGGSEHA20和pMAMneo基因转染,经G418筛选阳性克隆,再用免疫荧光及分子原位杂交检测A20基因的表达.结果成功构建了pCAGGSEHA20真核表达重组体,A20基因在经G418筛选后的内皮细胞中得到有效表达.结论在DOTAP脂质体介导下,A20基因能够导入内皮细胞并在其内获得表达.

Nogo(N-18)在成年大鼠三叉神经节、背根节及腰段脊髓中分布的免疫组织化学研究

目的观察Nogo在成年大鼠三叉神经节、背根节及腰段脊髓中的分布,探讨其存在的意义.方法采用抗Nogo(N-18)多克隆抗体免疫组织化学SP法. 结果成年大鼠三叉神经节、背根节感觉神经元胞浆和胞核以及腰段脊髓灰质神经元胞核内出现Nogo免疫反应.结论Nogo免疫反应存在于大鼠三叉神经节、背根节感觉神经元胞浆和胞核以及腰段脊髓灰质神经元胞核内,应重新认识Nogo的功能.

大鼠胃壁细胞GnRH受体的定位及GnRH类似物对壁细胞内钙的影响

目的观察促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)受体在培养的大鼠胃粘膜壁细胞中的定位,并探讨GnRH类似物阿拉瑞林(alarelin)对壁细胞内游离钙动员的机制.方法采用免疫组织化学和原位杂交技术;应用Ca2+指示剂Fluo-3-AM作为细胞内钙离子的荧光探针,对负载培养的胃壁细胞,应用激光共聚焦显微镜技术检测单个细胞内钙荧光强度的变化.结果大鼠胃壁细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,阳性物质位于细胞质,细胞核为阴性;同样壁细胞内可检测到GnRH受体mRNA杂交信号,阳性物质位于细胞质,细胞核为阴性;胞内Ca2+浓度变化为:1.在Hank液中,GnRH类似物浓度为10-8、10-7、10-6 mol/L时,胃壁细胞内Ca2+浓度逐渐升高,其峰高(峰值减去静息值)分别为7.1±1.4、12.1±1.7、16.8±2.2.其达峰时间也逐渐增快,分别为34.2±6.4s、18.9±1.2s、10.4±2.3s.相邻两组间其峰高及达峰时间均存在显著性差异(P＜0.05),且呈明显剂量依赖性.2.在D-Hank液(去除外钙)中,阿拉瑞林可轻度短暂升高胞内Ca2+;用内罗啶孵育后再加入阿拉瑞林也可轻度短暂升高胞内Ca2+,二者无显著性差异.3.当用拉西地平孵育后再加入阿拉瑞林,可明显抑制胞内Ca2+的增加.4.当用PLC(磷酸脂二酶)抑制剂和PKC(蛋白激酶C)抑制剂孵育后,再加阿拉瑞林,其胞内Ca2+升高仍受到抑制,明显小于单独应用10-6 mol/L的阿拉瑞林组(P＜0.01).结论大鼠胃壁细胞能自身表达GnRH受体;GnRH类似物可明显升高胃壁细胞内Ca2+浓度,且胞内Ca2+的增加主要源于外钙的内流,部分源于内钙的释放.其中细胞外钙的内流主要是通过L-型钙通道实现的.

大鼠三叉神经中脑核内GAD样阳性终末与PAG和GABAA受体α3亚单位阳性共存神经元的联系

目的观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)内谷氨酸脱羧酶(GAD)样阳性终末与磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)、GABAA受体α3亚单位(GABAA Rα3)和小白蛋白(PV)样阳性神经元之间的联系. 方法免疫荧光组织化学三重染色技术,在激光共聚焦显微镜下进行观察. 结果在Vme内可观察到大量的GABAA Rα3样、PAG样和PV样免疫反应阳性神经元,吻尾方向几乎在其全长出现,多为大的假单极神经元(直径为25～50μm).大约90%左右的PAG样阳性神经元同时呈GABAARα3样和PV样免疫阳性.在激光共聚焦显微镜下观察到,密集分布的GAD样阳性终扣聚集在PAG样和GABAARα3样双重标记的Vme神经元胞体周围,并与之形成密切接触. 结论GA-BA能神经元投射至Vme的神经终末可能通过位于Vme神经元胞体内的GABAARα3亚单位对谷氨酸介导的面口部本体感觉信息的传递发挥抑制性调控作用.

大鼠神经系统内5-羟色胺2A受体亚型的免疫组织化学定位

目的观察大鼠神经系统内5-羟色胺受体2A亚型(5-HT2AR)免疫组织化学染色阳性结构的分布.方法5-HT2AR特异性抗体的免疫组织化学染色.结果5-HT2AR阳性胞体主要分布于嗅球的小球层和僧帽细胞层、海马始层、外侧缰核、丘脑背外侧核、下丘脑室旁核、中脑中央灰质、小脑浦肯野细胞、脑干运动核和感觉神经节等;5-HT2AR阳性纤维和终末主要分面于嗅球的小球层和内丛层、大脑皮质、外侧隔核、杏仁外侧核、丘脑网状核、腹侧顶盖区、桥核、下橄榄及脑干运动核等.结论5-HT2AR亚型阳性结构广泛分布于大鼠神经系统,它们可能介导5-HT在神经系统中的多种生理功能.

P物质对人脐静脉张力及内皮细胞Ca2+的调控及其机制

目的观察P物质(SP)对人脐静脉张力的调节及其对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)膜上Ca2+通道及胞浆内游离Ca2+浓度[(Ca2+)i]的调控作用.方法应用常规生理记录仪,记录SP对人脐静脉张力的影响,用共聚焦激光扫描显微术和膜片钳单通道记录技术对体外培养HUVEC胞浆内(Ca2+)i、膜上Ca2+通道开放情况进行观察.结果SP具有内皮依赖性舒张人脐静脉的作用,促使体外培养HUVEC胞膜上Ca2+通道开放和胞浆内(Ca2+)i明显升高.结论SP对人脐静脉张力的舒张作用可能通过HUVEC胞浆内储存的(Ca2+)i释放和膜上Ca2+通道开放,达到其调节效应.

脑红蛋白mRNA在大鼠脑内的定位

目的了解脑红蛋白(NGB)mRNA在大鼠脑内的定位. 方法用地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学技术观察了NGB mRNA在成年大鼠脑中的正常分布. 结果NGB mRNA在成年大鼠脑中有非常广泛的表达,其分布区域包括大脑皮质、海马、丘脑、下丘脑、嗅球及小脑等.NGB mRNA阳性物质定位于神经元的细胞质. 结论NGB mRNA在大鼠脑中有非常广泛的表达,提示NGB基因在中枢神经系统的功能活动中可能起重要作用.

大鸨胃的超微结构研究

目的研究大鸨前胃及肌胃超微结构,为大鸨人工饲养提供理论基础.方法超薄切片透射电镜观察.结果在前胃粘膜柱状上皮细胞核上方分布着大量直径约0.2～0.8 μm的致密颗粒,核周围可见许多泡状结构.前胃乳头内腔上皮细胞则为柱状粘液细胞,核上方胞质中充满着大量的粘原颗粒.深腺细胞根据核形态及线粒体结构差别可分两种.肌胃粘膜及直管腺上皮细胞的圆形核上方形成许多分泌颗粒,根据其分泌颗粒的结构分为两种细胞,一种分泌颗粒为均质圆形,另一种为纤维状的.两种细胞形成的分泌物参与类角质膜的形成,在腺管底部至粘膜表面形成的类角质膜的超微结构有所不同.结论大鸨胃具有较强的消化能力.

BDNF基因对噪音引起的听神经元损伤的保护作用

目的有效地利用BDNF基因对噪音引起的听神经元损伤进行治疗.方法利用噪音制备豚鼠耳聋模型,在噪音损伤7d后,通过圆窗膜注入108重组腺病毒.注入Ad-BDNF病毒的为实验组,Ad-lacZ为对照组.4周后,取耳蜗组织固定切片,进行BDNF抗体免疫细胞化学染色和HE染色.结果经BDNF抗体免疫细胞化学染色可见,注入Ad-BDNF病毒的实验组中,在内耳多种细胞中可见明显的BDNF蛋白表达.同时,HE染色显示,注射Ad-BDNF的实验组中螺旋神经节细胞的数目明显多于对照组,细胞的状态也与正常动物相近,细胞质丰富且细胞核边界清晰.注射Ad-LacZ组的豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞明显退变.结论腺病毒介导的BDNF基因可长期表达于内耳中,并且可在噪音引起毛细胞死亡后有效地抑制听神经元的退变.

生长抑素和降钙素基因相关肽在小鼠舌下腺的分布

目的观察小鼠舌下腺内神经肽的分布.方法免疫组织化学ABC方法.结果小鼠舌下腺纹状管上皮细胞呈生长抑素和降钙素基因相关肽免疫反应阳性,免疫反应物分布于胞质,胞核为阴性.结论表明小鼠舌下腺导管上皮细胞内含有神经肽,对腺体分泌活动可能起重要作用.

切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞PDGF-B mRNA表达的影响

目的探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞(VSMCs)对内皮细胞(ECs)PDGF-B mRNA表达的影响,为预防血管移植物发生再狭窄提供实验资料.方法用原位杂交和图像分析等技术,以静态条件下单独培养的ECs和联合培养的ECs为两对照组,观察切应力作用下单独培养的ECs和与VSMCs联合培养ECs的PDGF-B mRNA表达变化.结果静态条件下联合培养ECs的PDGF-B mRNA表达水平比单独培养的ECs下降;切应力作用下,联合培养ECs的PDGF-B mRNA的表达在切应力作用1h左右有瞬时上升,6h后下降至低于联合培养条件下的静态水平,且瞬时上升的时间点比单独培养的ECs提前. 结论切应力作用下,与VSMCs联合培养ECs的PDGF-B mRNA表达水平下降,这可能有利于抑制VSMCs的增生.

肺泡表面活性物质超微结构显示法的改进及意义

目的对肺泡衬里层固定方法进行改进,以便更好地显示肺泡表面活性物质(PS)的超微结构.方法采用血管灌注固定加组织块固定相结合的方法(简称PS复合固定法).结果1.肺泡衬里层由表面活性膜和下相构成;2.表面活性膜可表现为嗜锇膜、囊泡、管状髓磷脂结构、板层体等;3.下相多呈均质性. 结论PS复合固定法能较好地保留肺泡衬里层,有助于显示PS超微结构.

干细胞常用词汇