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心肌缺血对大鼠孤束核利钠肽受体表达的影响
目的 探讨心肌缺血后大鼠孤束核内利钠肽受体NPR-A和NPR-C表达的时程变化,并检测其与胆碱能和儿茶酚胺能神经元之间的关系.方法 雄性SD大鼠分为对照组、假手术组和模型组.复制心肌缺血模型,并于术后的3、7、14、18和28 d取材;用Western blot检测孤束核区域NPR-A和NPR-C的表达量;免疫荧光化学法观察NPR-A、NPR-C与ChAT、TH在孤束核内的共表达.结果 在缺血后14 d孤束核区NPR-A的表达显著低于对照组(P＜0.05),而后逐渐升高,至缺血后28 d显著高于对照组(P＜0.01);NPR-C的表达从缺血第3～18天均显著低于对照组(P＜0.01);孤束核内仅见少量的NPR-A/TH双标记神经元,而NPR-C/TH则较多;未见ChAT与NPR-A或NPR-C双标记神经元的分布.结论 心肌缺血后,在孤束核内利钠肽的调节作用增强,这种调节可能不是直接影响胆碱能和儿茶酚胺能神经元的活动来实现的.
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灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响
目的 探讨灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(CDk4)表达的影响.方法 给予实验对照组和灵芝孢子组妊娠E7.75d的小鼠一次性胃饲维甲酸,造成这2组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出2组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Western blotting检测胚胎神经管神经上皮依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)的表达情况.结果 在灵芝孢子组可以观察到形态正常的胚胎中,神经管的神经上皮细胞有Cdk4的表达,其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较没有明显差异.在灵芝孢子组形态异常的胚胎中,其神经管的神经上皮细胞也有cdk4的表达,但其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较是低的.结论 灵芝孢子可能是通过促进神经管神经上皮细胞上调Cdk4的表达来减轻维甲酸诱导的胚胎小鼠神经管畸形.
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大鼠囊泡膜谷氨酸转运体样和谷氨酸脱羧酶样阳性终末与表达GABAA受体α3亚单位的三叉神经中脑核神经元之间的联系
目的观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)内囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1和DNPI)样和谷氨酸脱羧酶(GAD)样阳性终末与GABAA受体α3亚单位(GABAARα3)样阳性神经元之间的联系. 方法免疫荧光组织化学三重染色技术,在激光共聚焦显微镜下观察. 结果在Vme吻尾方向上,有大量的神经元胞体呈GABAARα3样免疫阳性,这些神经元多为大的假单极神经元(直径为25～50μm).VGluT1样、DNPI样和GAD样免疫阳性终末密集分布于Vme内,一些VGluT1/DNPI样和GAD样阳性终末包绕在GABAARα3样阳性Vme神经元胞体周围,并与之形成密切接触. 结论 Vme神经元在介导口面部本体感觉信息的传递过程中,可能同时接受中枢其他来源的谷氨酸能和GABA能终末的调控,其中GABA能终末的作用可能是通过GABAA受体实现的.
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谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核内GFP阳性神经元的分布及与小白蛋白的共存
目的观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核(Vc)浅层内,表达GFP的GABA能神经元的分布及其与小白蛋白(PV)的共存.方法分别运用原位分子杂交与免疫组织化学相结合;GFP与神经元标记物--神经元核蛋白(NeuN)或PV免疫荧光染色相结合的双重标记方法,在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下进行观察.结果1.Vc浅层内90%以上的GFP阳性神经元同时表达GAD67 mRNA,而几乎所有表达GAD 67 mRNA的阳性神经元都呈GFP阳性;2.GFP阳性神经元主要分布于Vc的Ⅰ～Ⅱ层内,细胞较小,尤其在Ⅱ层内可见大量密集分布的GFP阳性细胞和突起.GFP阳性神经元分别占Ⅰ、Ⅱ层内NeuN阳性神经元总数的19.4%和24.3%;3.GFP/PV双标神经元主要分布于Vc的Ⅰ～Ⅱ层,这些双标神经元大约占PV阳性神经元的62.4%,占GFP阳性神经元的12.8%. 结论在Vc表达GFP的GABA能神经元主要密集分布于与外周伤害性信息传递关系密切的板层内,且大部分PV样阳性神经元属于GABA能神经元.
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卵泡刺激素及其受体在大鼠胰腺的共定位观察
目的观察卵泡刺激素(FSH)及其受体(FSHR)在大鼠胰腺中的共存关系,以了解FSH对胰腺的功能意义.方法应用免疫荧光组织化学双标记染色技术,在激光共聚焦扫描显微镜下观察染色结果.结果部分外分泌腺细胞、导管上皮细胞及部分胰岛细胞呈FSH反应阳性,呈强绿色荧光.小血管内皮细胞也呈FSH反应弱阳性,呈弱的绿色荧光.部分胰岛细胞呈FSHR反应阳性,呈强红色荧光.一些外分泌腺上皮细胞呈FSHR反应弱阳性,呈淡红色荧光.有一些胰岛细胞呈FSH和FSHR双阳性反应,呈黄色荧光或红、绿相间荧光. 结论FSH及其受体均存在于大鼠胰腺中,胰岛中的部分细胞共同存在FSH及其受体,FSH可能通过旁分泌或自分泌的途径对胰腺的功能起调节作用.
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本体觉传入纤维在小鼠脊髓内的发育变化
目的观察本体觉传入纤维在小鼠脊髓内投射和终止的发育变化. 方法采用小牛白蛋白(PV)免疫组织化学染色特异标记本体觉传入纤维,用免疫荧光单标记和双标记方法观察本体觉传入纤维在脊髓内的生长模式以及与运动神经元的关系.染色后的切片用激光共聚焦显微镜进行观察. 结果PV样免疫阳性(LI)本体觉纤维早于胚胎(E)14 d出现在后索,E15时进入脊髓灰质.E16时,已有较多的PV-LI纤维到达中间带灰质和前角(VH).此后,随着发育阶段的增长,脊髓VH内PV-LI本体觉纤维和终末的数量和密度逐渐增加,并在生后早期P0-P7达到高水平.P14后,上述本体觉纤维和终末的数量逐渐减少.本体觉传入纤维的终末在E17时开始与脊髓VH运动神经元形成密切的接触.结论本体觉传入纤维在脊髓内的定位模式形成于小鼠胚胎后期和生后早期,本研究结果为深入理解脊髓反射运动环路的发育特点提供了依据.
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大鼠前庭神经核复合体内5-HT能终末与表达5-HT1A受体的前庭-臂旁核投射神经元之间的联系
目的 观察大鼠前庭神经核复合体(VNC)内5-羟色胺(5-HT)样阳性终末与表达5-HT1A受体(5-HT1A R)的前庭-臂旁核投射神经元之间的联系.方法 运用逆行束路追踪和免疫荧光组织化学染色相结合的双重标记技术,在激光共焦显微镜下观察.结果 将四甲基罗达明(TMR)注入臂旁核后,在双侧VNC的各个核团内均可观察到许多TMR逆标神经元,但以同侧为主.免疫荧光组织化学染色结果显示,在前庭内侧核(MVe)、前庭下核(SpVe)、前庭上核(SuVe)、前庭外侧核(LVe)、X核以及Y核的一些区域内,许多神经元表达5-HT1A R样免疫阳性,并可观察到大量5-HT样阳性纤维和终末.激光共焦显微镜下可进一步观察到一些TMR逆标神经元同时呈5-HT1A R样免疫阳性,且有部分5-HT样阳性终末与TMR/5-HT1A R双标神经元的胞体或树突形成密切接触.结论 提示5-HT可能通过5-HT1A R对前庭神经核复合体-臂旁核间的信息传递发挥调控作用.
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牛膝多肽促大鼠海马神经元突起的生长
目的 研究牛膝多肽(ABPP)对体外培养的大鼠海马神经元突起生长的促进作用及其对生长相关蛋白-43 (GAP-43)和神经丝蛋白(NF-H)mRNA和蛋白表达的影响. 方法 以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)检测ABPP对海马神经元细胞活性的影响,通过免疫荧光细胞化学法,采用Image-Pro Express软件测量不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h,对海马神经元神经突起生长的影响;通过实时荧光定量PCR法定量分析不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药6h,对海马神经元GAP-43和NF-H基因表达的影响;采用免疫印迹法观察不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h后,对海马神经元GAP-43 和NF-H蛋白表达的影响.同时应用胞外信号调节激酶(ERK)特异性拮抗剂PD98059与ABPP共培养海马神经元,分析ABPP对海马神经元的作用与ERK通路的关系. 结果 ABPP可有效地促进海马神经元突起的生长,加药后24h浓度为1.0mg/L,作用强;实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光细胞化学法和免疫印迹检测的结果表明,ABPP能增加体外培养的海马神经元GAP-43和NF-H的mRNA和蛋白表达,PD98059可抑制该过程. 结论 ABPP能促进体外培养的海马神经元神经突起的生长,其作用与上调GAP-43和NF-H 基因的表达相关,并可能与ERK通路有关.
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红景天对慢性高原心脏病大鼠心肺组织中内皮抑素和血管内皮细胞生长因子受体表达的影响
目的探讨内皮抑素和VEGF受体与慢性高原心脏病发病的关系以及红景天治疗高原心脏病的机理.方法建立慢性高原心脏病大鼠模型,分为对照组、吸烟运动刺激组、拟高原心脏病组和治疗组.利用免疫荧光组织化学和半定量RT-PCR方法检测内皮抑素和VEGF受体的表达水平.结果刺激组心肺组织与对照组相比,VEGF受体表达水平升高,而内皮抑素下降.治疗组与拟高原心脏病组相比VEGF受体表达水平降低,而内皮抑素升高.结论慢性高原心脏病发病与内皮细胞损伤密切相关,红景天可以减少内皮细胞损伤.
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围着床期小鼠胚卵L-选择素的表达变化及作用
目的 探讨围着床期小鼠胚卵L-选择素的表达规律及其对胚胎着床的影响.方法 1.分别采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫荧光组织化学方法检测围着床期小鼠胚卵L-选择素mRNA和蛋白的表达,并用免疫荧光组织化学方法检测L-选择素在细胞的定位;2.用子宫角内抗体干预的方法观察并统计小鼠着床胚胎数.结果 1.随着胚卵分化成熟,L-选择素mRNA和蛋白表达均呈逐渐增加趋势,胚泡期表达强(P<0.05).L-选择素在单细胞期和4细胞期有少量表达,桑椹胚周边区L-选择素表达显著增强,胚泡滋养层L-选择素表达强.2.小鼠子宫角实验侧(经抗L-选择素单克隆抗体干预)胚胎着床数较对照侧(经等体积生理盐水干预)明显减少(P<0.05).结论 胚卵可能通过L-选择素信号转导途径及其与子宫内膜的糖蛋白受体结合参与胚胎着床.
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大鼠三叉神经中脑核内GAD样阳性终末与PAG和GABAA受体α3亚单位阳性共存神经元的联系
目的观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)内谷氨酸脱羧酶(GAD)样阳性终末与磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)、GABAA受体α3亚单位(GABAA Rα3)和小白蛋白(PV)样阳性神经元之间的联系. 方法免疫荧光组织化学三重染色技术,在激光共聚焦显微镜下进行观察. 结果在Vme内可观察到大量的GABAA Rα3样、PAG样和PV样免疫反应阳性神经元,吻尾方向几乎在其全长出现,多为大的假单极神经元(直径为25～50μm).大约90%左右的PAG样阳性神经元同时呈GABAARα3样和PV样免疫阳性.在激光共聚焦显微镜下观察到,密集分布的GAD样阳性终扣聚集在PAG样和GABAARα3样双重标记的Vme神经元胞体周围,并与之形成密切接触. 结论GA-BA能神经元投射至Vme的神经终末可能通过位于Vme神经元胞体内的GABAARα3亚单位对谷氨酸介导的面口部本体感觉信息的传递发挥抑制性调控作用.
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大鼠咽黏膜内ATP受体P2X_3阳性感觉纤维的分布
目的 研究大鼠咽黏膜内三磷酸腺苷(ATP)受体P2X_3阳性感觉纤维的分布,为探究ATP在咽黏膜感觉信号传导中的作用提供形态学依据. 方法 成年Wistar大鼠12只,应用免疫荧光组织化学双标技术结合激光扫描共焦显微镜. 结果 1.在咽黏膜各部位均可观察到P2X_3阳性感觉纤维,纤维分为两类:一类为串珠样游离神经纤维;另一类纤维在黏膜内发出分支并形成复杂的树枝状末梢,纤维分支在黏膜内形成神经丛.2.可见许多降钙素基因相关肽(CGRP)阳性纤维缠绕在P2X_3阳性树枝状末梢周围,并有少量的串珠样P2X_3阳性纤维与CGRP共存.3.在岩神经节内可观察到许多P2X_3或CGRP免疫阳性神经元,其中有少量神经元同时呈P2X_3/CGRP免疫阳性. 结论 大鼠咽黏膜内不同类型的感觉纤维均表达ATP受体P2X_3阳性,提示ATP可能与咽黏膜伤害性刺激和其他生理性刺激向中枢的传递有关.
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胃电刺激对大鼠海马胃扩张反应神经元及胃动素和nNOS表达的影响
目的:观察胃电刺激(GES)对大鼠海马CA1区胃扩张(GD)相关神经元放电活动的影响及脑内一氧化氮合酶(nNOS)和胃动素(MTL)表达的改变,初步探讨GES的中枢作用机制.方法:选用成年Wistar大鼠58只,采用细胞外记录神经元单位放电方法,记录海马CA1区神经元自发放电活动,根据神经元对胃扩张刺激反应的不同,分为胃扩张兴奋性神经元(GD-E)和胃扩张抑制性神经元(GD-I).观察3组不同参数的胃电刺激(GES-A,GES-B和GES-C)对CA1区内GD-E和GD-I放电频率的影响:GES-A(6 mA,0.3 ms,40 Hz,2 s-on,3s-off)为标准参数;GES-B的串刺激波宽增至3ms;GES-C的串刺激频率减少至20 Hz,其他参数均同GES-A.采用放射免疫法检测胃电刺激对大鼠不同脑区MTL含量的影响;并采用免疫荧光组织化学染色方法观察胃电刺激2 h对大鼠海马内nNOS免疫阳性神经元的表达.结果:CA1区记录的87个神经元中有79个神经元(90.8%)对胃扩张刺激(GD,3-5 mL,10-30 s)有反应,其中40个(50.6%)为GD-E申经元,39个(49.4%)为GD-I神经元.GES-A,-B,-C分别兴奋了62.5%,100%和62.3%的GD-E神经元,GES-B对GD-E神经元的作用明显强于GES-C(神经元兴奋率GES-B 100% vs GES-C 62.3%,P＜0.05).在GD-I神经元中有63.6%,85.7%和50%的GD-I神经元分别被GES-A,-B和-C所兴奋,其中GES-C的兴奋作用较弱(P=0.041,vs GES-A;P=0.021,vs GES-B).GES-A刺激胃窦部2 h,下丘脑(48.93±6.98 fmol/mg vs 96.23±12.93 fmol/mg,P＜0.01)、中脑(30.96±4.86fmol/mg vs 53.17±8.96 fmol/mg,P＜0.05)、延脑(46.27±7.83 fmol/mg vs 73.86±9.37 fmol/mg,P＜0.05)和海马(32.23±6.51 fmol/mgvs 62.72±10.07 fmol/mg,P＜0.05)中MTL免疫反应物(MTL-IR)的含量与假手术对照组相比明显减少,但脑桥内MTL-IR的含量与假手术对照组相比无显著差异;且海马CA1区(16.75±0.91 cells/mm2 vs 20.46±1.30 cells/mm2.P＜0.05)和CA2-3区(14.91±1.17 cells/mm2 vs 18.73±1.10 cells/mm2,P＜0.05)nNOS免疫阳性神经元表达明显减少.结论:GES可兴奋海马CA1区内胃扩张反应性神经元,电刺激作用的强弱与GES刺激的频率和单个电刺激的持续时间有关;脑内MTL和海马内nNOS可能参与了GES的中枢作用机制.
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OVX-OP大鼠腺垂体FS细胞中S-100蛋白表达的共聚焦显微镜研究
目的 探讨神经组织蛋白S-100在去卵巢致骨质疏松症大鼠(OVX-OP)腺垂体滤泡 星 形细胞(FS细胞)中的表达。方法 采用适龄SD大鼠40只，随机均分为卵巢 切除(OVX)组和假性手术对照(Sham组)，于术前和术后6周末测量大鼠全身及腰椎骨密度(BMD )。取垂体，应用免疫荧光组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)分析技术，检测FS 细胞中S-100表达。结果 术后6周末OVX组大鼠全身及腰椎BMD均明显低于S ham组值(P＜0.01，P<0.01)。S-100阳性荧光标记物定位于FS细胞的胞浆中 。FS细胞具有典型的细胞突结构、与腺垂体中丰富的血窦直接相邻、结成了腺垂体中发达的活性细胞网络、在结构上与多种腺垂体内分泌细胞密切相连。两组间S-100荧光强度和表达阳性率无显著差异(P>0.05)。结论 SD大鼠OVX术后6周出现骨质疏松 变化，FS细胞在形态结构和定位上的特征及其在数量上的稳定性可能是中枢调节骨代谢因素作用的一个细胞基础。
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Na+-K+-2Cl-共转运体不同亚型在大鼠胃黏膜的差异性分布及表达
目的 研究Na+-K+-2Cl-共转运体(Na+-K+-2Cl-co-transporter,NKCC)的两种亚型在胃不同部位黏膜层的差异性分布及表达的意义.方法 用免疫荧光组织化学法和实时定量PCR技术检测NKCC不同亚型NKCC1与NKCC2在正常大鼠胃不同部位(胃底、胃体和胃窦)黏膜组织的分布和表达.结果 ①免疫荧光组织化学显示:NKCC1多分布于胃底、胃窦黏膜底部及胃体黏膜中下部,细胞膜表达多;而NKCC2则多分布于胃体、胃窦黏膜全层及胃底黏膜上1/3部,细胞质、细胞膜均有表达.②实时定量PCR显示:NKCC1的mRNA在正常大鼠胃体表达高,NKCC2的mRNA则在胃窦表达高.结论 正常大鼠NKCC1与NKCC2在不同部位胃黏膜上皮细胞的分布及表达含量不同,NKCC1多分布在黏膜底部或中下部,NKCC2多分布于黏膜顶部或全层.
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宫颈癌组织CX43和Vimentin的表达与临床意义研究
目的:检测正常宫颈组织和CIN及宫颈癌病灶中的CX43和Vimentin表达水平,分析二者与临床病理指标之间的关系.方法:收集2014年1月-2015年6月年高青县人民医院妇产科手术切除的33例宫颈癌、32例CIN及16例正常宫颈组织标本作为对照组,试验对象术前均未进行化疗与放疗,且均行HPV检查.采用免疫荧光与Western Blot方法检测CX43和Vimentin在3种组织中的表达水平.结果:(1)Cx43在对照组、CIN(Ⅰ、Ⅱ-Ⅲ及宫颈癌中的阳性表达率分别为68.8%、66.7%、65%、27.3%,宫颈癌组cx43表达明显低于对照组(p=0.006);cx43在宫颈癌静脉侵犯组的表达率显著低于未侵犯组:13%VS60%,(p=0.018);在淋巴结侵犯组的表达率显著低于未侵犯组:9.1%和63.6%,(p=0.004).(2)Vimentin在对照组、CIN(Ⅰ、Ⅱ-Ⅲ及宫颈癌中的阳性表达率分别为12.5%、25%、50%、69.7%,进行X2检验显示阳性表达率有显著性差异(p=0.024);Vimentin在宫颈癌侵犯静脉组的表达率显著高于未侵犯静脉组:90.9%VS27.3%,(p=0.001);在宫颈癌淋巴结侵犯组的表达率显著高于淋巴结未侵犯组:86.4%和36.4%,(p=0.011).(3)spearman相关分析显示cx43与Vimentin的表达呈负相关(r=-0.485,p=0.004).结论:CX43表达降低和Vimentin表达增多与宫颈癌恶性程度相关,Vimentin与CX43的表达呈负相关联系.
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组织蛋白酶B在大鼠胃和十二指肠的分布
目的 研究组织蛋白酶B (cathepsins B,CB)在正常SD大鼠胃和十二指肠组织中的表达.方法 采用免疫荧光组织化学的方法,观察CB在大鼠胃和十二指肠组织中的分布.结果 CB免疫反应阳性细胞分布在大鼠胃粘膜腺体的壁细胞、主细胞、颈粘液细胞,腺体基底部的肠嗜铬细胞呈阴性反应.CB免疫反应阳性细胞分布在十二指肠粘膜腺体的所有细胞,包括吸收细胞、杯状细胞和内分泌细胞.阳性物质分布于细胞质,细胞核阴性.结论 Cb可能在胃和十二指肠起着非常重要的作用.
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组织蛋白酶B在大鼠肝脏的分布
目的 研究组织蛋白酶B(cathepsins B,CB)在正常SD大鼠肝脏组织中的表达.方法 采用免疫荧光组织化学的方法,观察CB在大鼠肝脏组织中的分布.结果 CB免疫反应阳性细胞主要分布在肝细胞、枯否细胞、肝窦内皮细胞,枯否细胞、肝窦内皮细胞的免疫活性比较强,肝细胞的免疫活性比较弱,而肝星状细胞没有CB免疫活性.阳性物质分布于细胞质,细胞核阴性.结论 CB在大鼠肝脏组织的表达提示其可能在肝脏起着非常重要的作用.
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单胺氧化酶B在大鼠胃和十二指肠的分布
目的 研究单胺氧化酶B(MAO-B)在大鼠胃和十二指肠组织中的表达,为进一步研究MAO与应激导致的胃肠功能紊乱间的关系提供形态学依据.方法 采用免疫荧光组织化学的方法,观察了MAO-B在大鼠胃和十二指肠组织中的分布.结果 MAO-B免疫反应阳性细胞分布在大鼠胃底腺、贲门腺、幽门腺腺体基底部的肠嗜铬细胞,胃粘膜腺体的壁细胞、主细胞、颈粘液细胞呈阴性反应.MAO-B免疫反应阳性细胞分布在十二指肠粘膜腺体的所有细胞,包括吸收细胞、杯状细胞和内分泌细胞.阳性物质分布于细胞质,细胞核阴性.结论 MAO-B在大鼠胃和十二指肠的表达,提示MAO-B可能在胃和十二指肠起着非常重要的作用.
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黄体生成素及其受体在大鼠胰腺的免疫荧光定位
目的 观察黄体生成素(LH)及其受体(LHR)在SD大鼠胰腺的定位分布,以了解LH对胰腺的功能意义.方法 选取SD大鼠12只,雌雄不拘,经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后,用4％多聚甲醛灌流固定2h,取出胰腺组织置于300g/L蔗糖液中,用于双标记免疫荧光定位研究,在激光共聚焦扫描显微镜下观察.结果 胰腺部分外分泌腺细胞质、导管上皮细胞及部分胰岛细胞质LH反应阳性,小血管内皮细胞质呈LH弱阳性.部分胰岛细胞质呈LHR反应阳性,一些外分泌腺上皮细胞质呈LHR反应弱阳性,部分胰岛细胞及胰腺外分泌细胞质呈LH和LHR双阳性反应.结论 LH可能通过旁分泌或自分泌的途径对胰腺的功能起调节作用.
