甾体类性激素对培养的胸腺上皮细胞增殖相关信号转导的调节

目的探讨甾体类性激素(sex steroid)对胸腺上皮细胞增殖相关信号转导的调节机制. 方法用免疫印迹法(immunoblotting)及免疫组织化学法(immunohistochemistry)研究甾体类性激素在体外培养大鼠胸腺上皮细胞株(IT-45R1)蛋白激酶C相关的信号转导途径中的作用机制. 结果 (1)甾体类性激素诱导的胸腺上皮细胞的增殖受甾体类性激素和血浆抑制因子相互作用产生的质膜相关信号途径的调节;(2)细胞周期蛋白依赖激酶系在胸腺上皮细胞的细胞周期中起重要作用;(3)5α-双氢睾酮在10-10mol/L增强细胞周期蛋白依赖激酶系的调节,而17β-E2则呈浓度依赖性抑制细胞周期蛋白依赖激酶系的调节. 结论胸腺上皮细胞增殖相关信号的转导是几条途径相互作用的结果.

牛精子头后部质膜分区的研究

目的检测牛精子头后部存在的不同质膜区域. 方法先用钙离子载体A23187诱导精子发生顶体反应,然后用水浴超声波和低速离心法分离得到纯牛精子头.直接用顶体反应后精子和低渗处理的顶体反应后精子头免疫Balb/c母鼠和新西兰公兔,制备抗牛精子抗体,并结合以前制备的抗牛精子sp18单克隆抗体进行间接免疫组织化学分析. 结果牛精子头后部质膜表面存在两个位置互补的荧光区域,即紧邻赤道板和紧邻尾段的荧光区域:前一区域表面稳定存在的主要是sp18族膜蛋白,后者的膜蛋白在顶体反应和洗涤时易解离. 结论依据膜蛋白成分的差异,牛精子头后部质膜可以划分为紧邻赤道板的sp18质膜区域(sp18-rich region)和紧邻尾段的无sp18质膜区域(sp18-free region).

糖皮质激素对致痫大鼠的行为、脑电图和代谢型谷氨酸受体1α的影响

目的探讨糖皮质激素的抗痫效应. 方法应用脑电图仪和免疫细胞化学方法,分别研究地塞米松对马桑内酯或戊四氮致痫大鼠的脑电图(EEG)和代谢型谷氨酸受体1α(mGluR1α)免疫反应性的影响,并观察大鼠行为的改变. 结果大鼠注射马桑内酯或戊四氮前30min经静脉注入地塞米松,能防止严重的癫痫发作症状和脑电图中高电位的痫波发放,并能减少mGluR1α在海马区的表达. 结论地塞米松具有抑制马桑内酯或戊四氮诱发癫痫的作用,海马内的mGluR1α可能在癫痫活动中起一定作用,地塞米松的抗痫效应可能与降低mGluR1α的表达有关.

人胎海马结构小白蛋白免疫反应神经元的分布与发育

目的了解人类海马结构神经元的发育. 方法用免疫组织化学方法观察了16～38周人胎海马结构内小白蛋白免疫反应性(PV-IR)神经元的分布和发育. 结果 PV-IR神经元早见于23周海马结构内,主要位于下托和CA1区的锥体细胞层和多形层(始层),以下托为主.24周开始,PV-IR神经元数量逐渐增加,大多位于下托和CA1区锥体细胞层/多形层交界处附近,少数见于CA2.直至38周,CA3和齿状回内才可见到少量PV-IR神经元.含PV-IR神经元均为非锥体细胞,它们的染色强度和突起的数量与长度随着胎龄增大而增加. 结论海马结构内PV-IR神经元出现的早晚与该细胞分化成熟的早晚密切相关.

人酪氨酸羟化酶催化核心DNA片段的克隆与表达

目的获得编码人酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)催化核心cDNA片段,并观察其表达.方法采用人的全长THcDNA为模板,设计特定的引物进行PCR扩增反应并构建真核表达载体--质粒pCMVTHC.在对目的片段测序后,将重组质粒转染到大鼠原代培养骨骼肌细胞内,用免疫组织化学方法检测其表达. 结果获得了编码N-端缺失145个氨基酸的酪氨酸羟化酶催化结构域的cDNA片段,其表达载体构建正确.插入片段的DNA序列与人THmRNA相应序列完全一致,将其转入肌细胞内测得有酪氨酸羟化酶表达. 结论本研究结果为帕金森病的基因治疗提供了有价值的新工具.

小鼠精子和球形精子细胞显微注射受精研究

目的研究动物受精机理. 方法以昆明白鼠为实验动物,利用显微注射技术,对精子和球形精子细胞的显微注射受精进行了研究.结果 1. 带下注射受精,注射4～6个精子的卵的受精率(32.5%)和卵裂率(25.0%)显著高于注射单个精子的卵的受精率和卵裂率(分别为12.5%和6.3%)(P＜0.05).2. 带下注射4～6精子后,有第1极体卵母细胞的存活率(69.6%)、受精率(32.5%)和卵裂率(25.0%)分别高于无第1极体卵母细胞的存活率、受精率和卵裂率(分别为64.4%、20.7%和13.8%),但两者无显著差异(P＞0.05).3.胞质内精子注射卵的存活率(21.4%)极显著低于带下注射卵的存活率(69.6%)(P＜0.01);而胞质内精子注射卵的受精率(35.5%)、卵裂率(32.3)%和囊胚率(20.0%)则高于带下注射卵的受精率(33.3%)、卵裂率(25.0%)和囊胚率(10.0%),但无显著差异(P＞0.05).4.将球形精子细胞注入经电活化处理的卵母细胞的透明带下,注射卵的存活率为90.5%,电融合率为34.6%,2-细胞分裂率为28.3%. 结论 1.注射精子的数量对小鼠带下注射的受精率和卵裂率有显著影响.2.卵母细胞中第1极体存在与否对小鼠带下注射的受精率和卵裂率无显著影响.3. 不同注射方法对小鼠卵的存活率有极显著的影响,而对受精率、卵裂率和囊胚率无显著影响.4. 本实验所采用的电融合条件,尚未满足多数球形精子细胞与卵母细胞融合之需要.

大鼠中枢神经元内免疫神经内分泌物质的共存

目的研究白细胞介素-2、代谢型谷氨酸受体1亚型(mGluR1)和雌激素受体(ER)在中枢神经系统神经细胞的表达,证实它们共存的可能性. 方法使用种属特异性1抗(山羊抗IL-2、兔抗mGluR1,小鼠抗ER血清)的免疫细胞化学三重标记技术,在相邻的两张连续切片(1张显示IL-2,另1张显示mGluR1和ER)上证实大鼠大脑皮质、延髓和脊髓内上述3种物质的共存. 结果在上述部位的中枢神经元内可见IL-2、mGluR1和ER 3种免疫反应性标记细胞.IL-2免疫反应产物为棕褐色,位于胞浆内.相邻切片的mGluR1免疫反应产物为蓝黑色,位于胞膜;ER免疫反应产物亦为棕褐色,位于胞浆或核内.显示mGluR1和ER的同一切片上有mGluR1/ER双标细胞,双标细胞约占全部标记细胞的50%～60%.通过对相邻的两张切片的投影核对,证实存在mGluR1/ER/IL-2三标细胞,三标细胞占mGluR1/ER双标细胞的30%. 结论在大鼠中枢神经系统内mGluR1,ER和IL-2可共存于同一个神经细胞,从而首次在细胞水平为神经免疫内分泌网络学说提供了形态学依据.

大鼠中枢神经系统肾母细胞瘤过度表达基因mRNA神经元的发育原位杂交与RT-PCR研究

目的研究大鼠CNS肾母细胞瘤过度表达基因(nov)mRNA神经元的发育. 方法原位杂交组织化学和逆转录PCR. 结果 P0～P4:原位杂交方法早检测到nov mRNA神经元是P0,P0～P4阳性信号均较弱,分布于脑桥和脊髓等.P5:丘脑部分核团和海马锥体细胞层观察到阳性神经元.P8:nov mRNA神经元数目增多,边缘系统及丘脑明显阳性;大脑皮质和下丘脑阳性较弱.P15:丘脑、下丘脑和大脑皮质nov mRNA神经元增多,其余核团稳定在P8水平.P30:在脑干观察到强烈的阳性信号,大脑皮质强阳性,海马、丘脑和下丘脑标记较强.P60:脑桥和延髓的标记仍然很强,大脑皮质、丘脑和下丘脑的阳性信号稳定在P30水平.P300:nov mRNA神经元显著减少,阳性信号明显减弱.逆转录PCR检测结果与原位杂交所得结果基本相符,在出生前2d检测到nov mRNA,其表达高峰出现在P30～P60之间,随之下降,P150和P300表达弱. 结论 nov基因与其他早期反应基因不同,其表达高峰不是在胚胎发育早期,而是在近性成熟时期,提示nov基因主要在神经系统发育、分化及功能活动中起作用.

大鼠肝细胞线粒体形态的三维重建

目的研究同一细胞内不同形态线粒体的数量、大小和超微结构. 方法用三维重建和体视学测量的方法,研究成年大鼠肝细胞线粒体的形态类型. 结果肝细胞线粒体按形态可分为5个基本类型:Ⅰ型(球形、椭球形和盘状)线粒体约占线粒体总数的21.4%;Ⅱ型(杆状)约占32.4%;Ⅲ型(不规则形)约占23.8%,Ⅳ型(分支形)约占19.6%,Ⅴ型(出芽形)仅占2.8%.Ⅰ～Ⅴ型线粒体的平均体积分别为0.11、0.21、0.32、0.51和0.64μm3.体现学分析显示,各型线粒体的体积密度有差异(P＜0.05或P＜0.01),Ⅱ型线粒体体积密度大,然后是Ⅲ、Ⅳ和Ⅰ型,Ⅴ型线粒体体积密度小.Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ型线粒体嵴膜密度均高于Ⅲ或Ⅳ型(P＜0.05). 结论肝细胞内不同形态的线粒体都占有一定的比例,他们不仅体积差异很大,其超微结构亦有不同.

大鼠下丘脑室旁核和视上核内神经激肽B受体和加压素的共存研究

目的研究神经激肽B受体(NK3受体)免疫反应产物在大鼠下丘脑室旁核和视上核的分布及其与加压素的共存. 方法免疫组织化学染色,标本在光镜和电镜下观察.共存研究采用相邻切片染色法. 结果致密的NK3受体阳性产物分布于室旁核的后大细胞部和视上核的主部.免疫电镜观察发现NK3受体阳性反应产物出现于室旁核和视上核的胞体和树突内.在相邻切片上观察到室旁核和视上核内有相当数量的NK3受体阳性神经元,同时含有加压素,它们主要分布于室旁核的后大细胞部和视上核的主部. 结论根据本研究和以往的机能学的研究结果,推测下丘脑室旁核和视上核内的NK3受体阳性神经元可能参与调控机体内环境改变时下丘脑加压素的释放.

大鼠生后发育期间胰岛D细胞的胰岛淀粉样多肽和生长抑素的表达

目的观察大鼠生后发育期间胰岛淀粉样多肽(islet amyloid polypeptide,IAPP)与生长抑素(somatostatin,SS)在胰岛D细胞的表达. 方法免疫组织化学PAP邻片单染法. 结果从生后1d至成年大鼠胰岛内均有部分IAPP-IR细胞和SS-IR细胞形态相似、定位一致;外分泌部腺泡间散在分布的部分IAPP-IR细胞也呈SS免疫反应性. 结论大鼠生后发育过程中胰岛部分D细胞同时表达IAPP和SS,即两者共存于胰岛D细胞内.

BDNF、NGF对AD模型鼠脑移植区胚胆碱能神经元发育生长的调控

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)对AD模型鼠脑植入胚基底前脑后行为改善和移植区胚胆碱能神经元发育生长的影响. 方法用使君子酸损毁SD大鼠基底大细胞核制成AD模型,分成BDNF、NGF、BDNF+NGF及单纯移植对照4组.在额、顶叶皮质植入同种胚基底前脑细胞悬液,前3组含相应神经营养因子,移植后每2d向侧脑室灌注相应神经营养因子共7次.移植后1、2.5和4个月时行避暗回避试验和跳台试验,后脑切片经AChE组织化学、ChAT和LNGFR免疫组织化学等染色,对移植区中的神经元及纤维作定量分析和图像处理. 结果移植后应用神经营养因子的动物较对照组行为改善明显迅速,BDNF+NGF组行为改善又较BDNF组或NGF组明显.形态学证实,应用神经营养因子动物移植区中AChE阳性神经元数、16 900μm2网格中AChE阳性纤维交点数及AChE阳性神经元面积均优于对照组,BDNF+NGF组的结果又好于BDNF组或NGF组. 结论 BDNF与NGF一样能促进植入胚基底前脑的AD模型鼠行为改善和移植区胚胆碱能神经元的发育生长,BDNF和NGF联合使用比单独使用一种因子更为有效.

大鼠消化道促性腺激素释放激素受体的免疫组织化学研究

目的探讨大鼠消化道是否存在GnRH受体及其定位. 方法采用兔抗GnRH抗独特型抗体的免疫组织化学ABC法. 结果胃底腺壁细胞、胃小凹上皮细胞及肌间神经丛的副交感神经节细胞呈GnRH受体免疫反应性.三段小肠绒毛上皮细胞、潘氏细胞、十二指肠腺上皮细胞以及小肠肌间神经丛副交感神经节细胞,均呈较强的GnRH受体免疫反应性.在盲肠、结肠和直肠,粘膜上皮细胞、肠腺上皮细胞及肌间神经丛呈GnRH受体免疫反应性.阳性物质均分布在胞质内,胞核呈阴性. 结论大鼠消化道广泛分布有GnRH受体,其分布模式与先前GnRH及GnRH-mRNA的相类似.说明胃肠道的一些细胞分泌的GnRH可能以自分泌或旁分泌的方式参与消化功能的调节.

人胚胎食管上皮的扫描电镜观察

目的了解人胚胎食管上皮的组织发生. 方法电镜和光镜观察. 结果 7周(55d)的食管上皮为复层柱状,有2～3层细胞.表层柱状细胞有稀疏的微绒毛,少数具有纤毛.12～17周时由3～6层细胞组成,表面多为柱状纤毛细胞,柱状的无纤毛细胞开始变矮.21～29周时上皮增至4～10层,表面的纤毛柱状细胞与立方细胞或梭形的无纤毛细胞在形态上的区别更为明显,它们皆分片分布.26周以后纤毛细胞逐渐减少.新生儿时上皮大多数为典型的复层鳞状,厚处达15层细胞,少量柱状纤毛细胞"岛"分散于无纤毛细胞之间. 结论 3～6月胎儿食管上皮中,复层纤毛柱状上皮占大多数.在食管肌层发育完善以前,纤毛可能有助于胎儿吞咽羊水.

大鼠中枢运动核团内谷氨酸受体、GABAA受体、甘氨酸受体和阿片μ受体的定位分布

目的观察大鼠中枢运动核团内谷氨酸受体、γ-氨基丁酸受体(GABAAR)、甘氨酸受体(GlyR)和阿片μ受体(MOR)的定位分布,搞清谷氨酸、GABA、甘氨酸和脑啡肽在中枢运动核团内的作用部位. 方法免疫组织化学染色技术. 结果在动眼神经核、滑车神经核、三叉神经运动核、展神经核、面神经核、疑核、舌下神经核、E-W核、上涎核、迷走神经背核和脊髓前角内均可见NMDAR1样和GluR2/3样阳性胞体,但NMDAR1样和GluR2/3样阳性纤维和终末仅见于动眼神经核、E-W核、滑车神经核、三叉神经运动核和迷走神经背核,除三叉神经运动核、疑核和脊髓前角能见到少量GABAAR β亚单位样阳性胞体外,上述各核团也可见GABAAR β亚单位样阳性的纤维和终末,而GABAARα亚单位样阳性胞体主要见于疑核、舌下神经核、迷走神经背核和脊髓前角;中枢运动核团内均可见GlyR和MOR样阳性的纤维和终末. 结论谷氨酸、GABA、甘氨酸和脑啡肽在中枢运动核团可能通过突触前和突触后机制,对中枢运动神经元发挥调控作用.

生发中心淋巴细胞凋亡与小结树突细胞关系的研究

目的研究人淋巴结和扁桃体生发中心内的凋亡细胞与小结树突细胞(follicular dendritic cells, FDC)之间的关系. 方法用TUNEL和免疫细胞化学方法分别检测凋亡细胞、FDC和Bcl-2蛋白的表达. 结果在生发中心有散在的凋亡细胞且多被巨噬细胞所吞噬;FDC主要分布在生发中心亮区,其突起彼此连结成网,网眼内充满了B淋巴细胞;Bcl-2主要分布在次级淋巴小结的帽状区,生发中心阴性. 结论生发中心亮区的FDC形成的网状结构,有利于FDC与中心细胞的接触,只有那些有高度亲合性的中心B淋巴细胞才得以生存,生发中心凋亡细胞被认为是选择过程的结果.Bcl-2蛋白在生发中心的减少或消失有助于细胞的凋亡,而帽状区Bcl-2表达可能与保护B细胞的继续分化和抑制细胞凋亡有关.

猪睾丸切除对舌下腺表皮生长因子表达的影响

目的观察睾丸切除后猪舌下腺表皮生长因子(EGF)的改变. 方法应用免疫组织化学ABC方法. 结果阉猪和未阉猪舌下腺组织EGF的免疫染色颗粒均存在于舌下腺纹状管上皮细胞,其阳性率、免疫组织化学染色强度及在腺体细胞的分布均无显著性差异(χ2=0,P=1). 结论睾丸缺失对舌下腺组织EGF表达无明显影响.

猪肾脏中表皮生长因子mRNA活性的研究

目的研究表皮生长因子(EGF)基因在猪肾脏中的表达部位. 方法采用RT-PCR技术分别检测猪肾皮质和髓质中的EGF mRNA活性. 结果公猪和母猪肾皮质中的EGF mRNA活性均很高,而髓质中则无EGF mRNA活性. 结论 EGF仅在猪肾脏皮质中表达,无性别差异.

绿色荧光蛋白在大鼠骨骼肌中的表达

目的研究绿色荧光蛋白(GFP)在哺乳动物细胞中的表达. 方法制备了含绿色荧光蛋白基因的重组DNA,经脂质体(lipofectin)法转染培养的大鼠骨骼肌细胞,用共聚焦显微镜观察GFP的表达. 结果大约20%～30%的骨骼肌细胞呈现不同强度的绿色荧光. 结论 GFP是研究活细胞生命现象的一种新途径.

特比萘芬对小鼠胚胎的致畸作用

目的研究特比萘芬对小鼠胚胎的致畸作用. 方法将特比萘芬用225mg/kg、450mg/kg、900mg/kg3个剂量,于小鼠妊娠第6～15d,每天经口给药1次. 结果 3个剂量组孕鼠体重增长、着床数、活胎数、吸收胎数、死胎数无明显改变.900mg/kg、450mg/kg剂量组胎鼠体重、身长改变明显.225mg/kg剂量组胎鼠体重、身长无明显改变.3个剂量组胎鼠骨骼、外观和内脏均无异常发现. 结论特比萘芬对小鼠无致畸作用.

人肿瘤转移抑制基因真核细胞表达质粒的构建

目的构建人肿瘤转移抑制基因NM23-H1与真核表达载体PcDNA3.1/Zero的重组体. 方法利用分子生物学克隆技术从质粒puc18中酶切回收900bp的人NM23-H1基因片段,与PcDNA3.1/Zero构成重组体,并根据表达载体与克隆基因核苷酸序列中酶切位点分析、鉴定插入片段的正反连接. 结果酶切得到900bp的NM23-H1基因片段,5.0kb质粒载体,两者相连构建成重组体PcDNA.NM23,利用Pst Ⅰ酶切位点确认PstI酶切后得到4条带的重组体为正向连接. 结论人真核细胞表达质粒PcDNA.NM23成功构建,为卵巢癌基因治疗提供了部分实验基础.

一种小鼠肿瘤相关膜蛋白单抗对DCS细胞生物学行为的影响

目的探讨一种小鼠肿瘤相关膜蛋白在DCS细胞表达的意义. 方法用该蛋白抗体处理DCS细胞,观察其对细胞生长速度、软琼脂克隆形成能力、粘附性、细胞运动能力、水解酶活性、侵袭性、体内转移率等生物学行为方面的影响. 结果该抗体能抑制DCS生长速度及克隆形成能力,增强琼脂糖悬滴细胞运动能力,余未见明显作用. 结论该细胞膜蛋白可能调控小鼠肿瘤细胞增殖能力.

生物体研究的新方向--细胞外基质和细胞粘附因子

多年来细胞一直是生物界的研究重点.而近年来研究者们开始关注将细胞连在一起的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)[1～5],并提出单细胞动物的进化论虽未统一,但进化中ECM是必不可少的论点却是一致的.

神经细胞凋亡的分子调控和死亡信号的传导途径

在生物机体的正常发生发育和生长分化过程中,其细胞分裂、生长分化和细胞死亡的精密配合起着重要的作用.脊椎动物神经系统在个体发生中即使没有遇到外在损害,其神经细胞在竞争靶源有限的神经营养因子(神经细胞诱向因子neuronotrophic factors, NTFs)过程中,在特定部位和时间也会按自身的程序主动死亡,即Lockshin和Williams称之为编程性细胞死亡(programmed cell death, PCD).

核转录因子kappa B的研究进展

生物体的生长、发育、分化的过程是受一系列基因表达而调控的,转录因子则对基因表达起着开或关的作用(单独作用或与其他蛋白联合作用.)核转录因子(nuclear transcription factor)是一类蛋白质,它们具有和某些基因上启动子(promotor)区的固定核苷酸序列结合,而启动基因转录的功能.核转录因子kappa B(NF-κ B)是其中重要的一组蛋白质.

不同功能状态精子表面复型的透射电镜观察

目的建立实用的实验程序,观察不同功能状态下的精子表面超微结构特点. 方法用BWW上游法分离活动的人精子:BWW体外获能、诱导顶体反应和低渗膨胀试验处理后,将精子贴附于阳离子膜玻片上,叔丁醇冷却干燥后真空铂-碳喷镀复型.复型膜经3%氢氟酸剥脱,次氯酸钠腐蚀,透射电镜观察. 结果人精子表面复型图像清晰,立体感强,细节较丰富、清晰,获能精子顶体区呈网络状,顶体反应时可见顶体区大量互相吻合的小泡,经低渗处理的精子顶体区出现类似获能和顶体反应的现象. 结论表面复型-透射电镜技术可用于观察精子的不同生理状态引起的表面形貌变化,方法简便,可重复性好,具有良好的应用价值.

脑胶质瘤基因治疗

脑胶质瘤占颅内肿瘤的40%～50%.一般而言,平均生存期不超过1年.现有的治疗措施如外科手术切除、术后放疗、化疗和免疫治疗难以达到根除,复发率很高,严重影响生存质量和生存期.90年代由于肿瘤分子生物学理论与技术的发展,使得基因治疗成为医学研究领域的前沿课题,为国内外研究的热点.

雷公藤及铅镉对小鼠睾丸间质细胞NOS活性的影响

一氧化氮(NO)在睾丸内可促进生精过程和精子成熟,尚未见到有关雷公藤及铅、镉等重金属元素对睾丸间质细胞NOS活性影响的报道.本研究应用NADPH\|d黄递酶组织化学方法,对给与氯化镉、醋酸铅、雷公藤1、2、3、4周后小鼠睾丸间质内NOS活性变化进行观察,结果显示,正常组间质细胞呈NOS活性强阳性,而精曲小管管壁细胞均呈NOS活性阴性.

敏感细胞KB与其耐药细胞KBv200脂质过氧化物含量分析及超微结构观察

肿瘤细胞耐药是化疗失败的重要原因.联系影响抗癌药跨膜转运和胞内分布异常的多药耐药现象,本研究对一对耐药细胞KBv200(其耐药表型为MDR)及其敏感细胞KB的超微结构和脂质过氧化物含量进行了分析.超微结构观察到KBv200细胞多聚核糖体数目较KB细胞增多,这可能与耐药相关的酶蛋白类有关,尤其是P-GP.

<解剖学报>再获中国科协自然科学基础性和高科技学术期刊资助

现代临床解剖学的回顾与展望

[编者按] 一直想请中国工程院院士钟世镇教授写一篇关于我国临床解剖学方面的述评,在世纪之交,对我国近20年来大体解剖学的科研工作给予综观性回顾和前瞻,以飨解剖学界的同仁们.今年岁末,这个愿望终于实现了.