丽斑麻蜥消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

目的 研究丽斑麻蜥(Eremias argus)消化道内5.羟色胺(5-HT)、生长抑素(SS)、胃泌素(Gas)、胰高血糖素(Gh)、胰多肽(PP)和P物质(SP)6种内分泌细胞的形态结构和分布规律. 方法采用免疫组织化学ABC法. 结果 5 -HT细胞较其他5种内分泌细胞的分布更为广泛,整个消化道中(即从食管到直肠)都有分布,在空肠的分布密度高.SS细胞在食管和直肠未检测到,胃体部分布密度高.Gas细胞和PP细胞仅分布于胃幽门和小肠,其分布密度高峰均在十二指肠.Gln细胞分布于幽门、十二指肠和空肠,并且幽门处的分布密度明显高于其他两个部位.在整个消化道中未检测到SP细胞. 结论 5种可检测到的内分泌细胞以圆形和锥体形为主,分布于消化道黏膜上皮细胞之间、腺泡上皮细胞之间及上皮细胞基部,其分布型的特点可能与动物的食性及生活环境有关.

实验性变态反应性神经炎周围神经轴膜离子通道的分布和作用

目的 了解急性炎性脱髓鞘大鼠模型周围神经轴膜离子通道的变化及其对神经功能的影响.方法 使用实验性变态反应性神经炎(EAN)大鼠模型,观察周围神经钠、钾离子通道在病程中的变化,结合神经组织学、神经电生理和临床症状,分析轴膜离子通道与神经传导功能的关系.结果 轴膜离子通道在免疫后第9d EAN发病时即明显减少,此后2周内迅速消失.随之是缓慢的恢复过程.但直至免疫后85d,临床症状消失后数周仍未恢复至正常水平.病程中钠、钾通道的变化基本一致,且与结旁段髓鞘的变化密切相关.电生理指标在急性期(免疫后9～23d)与神经结构损害保持一致,动作电位波幅部分反应了轴膜离子通道的水平.结论 轴膜离子通道异常是导致疾病起始阶段临床症状的直接原因之一,是病变过程中较易受损且较难恢复的结构部件,其在周围神经的准确定位和维护与特定的结旁段髓鞘结构紧密关联.

体外培养的人源神经干-祖细胞超微结构分析

目的 研究神经干细胞的超微结构.方法 利用无血清培养技术从人胚脑组织中分离培养神经干-祖细胞,扫描及透射电镜观察单个神经干-祖细胞及神经球的超微结构.结果 所得神经干-祖细胞体外培养呈典型的神经球样生长.神经球内部由细胞以及无定形结构的物质构成,根据电子密度的不同可分明细胞和暗细胞.相邻细胞间存在细胞连接,部分相邻细胞间以及连接处的胞膜内侧可见小囊泡样结构,部分相邻细胞间还可见胞膜融合.扫描电镜下可见单个神经干-祖细胞呈球形,表面不光滑.透射电镜下可见神经干-祖细胞胞核大,胞质少,核质比高,多种细胞器不发达,多数细胞中自噬小体多见.神经干-祖细胞间存在明显的异质性,包括高尔基复合体、核糖体、溶酶体、神经微幺幺及微管等在不同神经干-祖细胞中的含量和分布均不一致.单个细胞的细胞核多呈球形,也可见.肾形和分叶状,而神经球中细胞核欠规则.神经干-祖细胞常染色质多,异染色质少;单个核仁多见,两个或以上核仁罕见.结论 人胚胎来源的神经干-祖细胞及神经球超微结构中见到的自噬小体、相邻细胞间以及相邻处的胞膜内侧的小囊泡样结构、相邻细胞间的胞膜融合现象,可为研究腩肿瘤干细胞的超微结构奠定基础.

Snail基因沉默对转化生长因子-β1促进骨髓间充质干细胞迁移的抑制作用

目的 研究转化牛长因子Cβl(TGF-β1)对体外培养的骨髓间充质干细胞(MSCs)侵袭力的影响和对Snail、基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的调节作用. 方法采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞.用免疫荧光法对培养第3代的细胞进行鉴定.用改良的Transwell小室检测不同浓度TGF-β1对细胞迁移力的影响;RT-PCR和免疫荧光法检测TGF-β1作用不同时间细胞Snail、MMP-2 mRNA表达以及Snail蛋白表达情况.用脂质体转染针对Snail基因的特异性小分子干扰RNA(siRNA),Western blotting检测转染前后TGF-β1对Snail、MMP-2表达的影响. 结果密度梯度离心结合贴壁法能有效分离、纯化大鼠MSCs.免疫荧光检测显示,培养的细胞CD29、CD44表达阳性,而CD34、CD45表达阴性;外源性TGF-β1对MSCs迁移力的促进作用具有剂量依赖性,在2μg/L时达到高.Snail、MMP-2 mRNA及Snail蛋白表达明显增高.Snail基因沉默可以明显抑制TGF-β1对MMP-2表达的促进作用. 结论 TGF-β1可显著增加促进MSCs的MMP-2表达,从而促进其迁移能力,此作用是通过TGF-131对Snail表达的上凋实现的.

右半肝内门静脉的断层影像解剖学研究

目的 探讨右半肝内门静脉的走行、分布规律及门静脉肝裂和肝静脉的关系,进而为肝段的划分提供断层解剖学依据. 方法使用30例上腹部连续断层标本(10例横断面、20例冠状面)以及20例多层螺旋CT图像和三维图像,探讨右半肝内门静脉的分支类型和常见变异以及肝内门静脉和肝静脉之间的关系. 结果 50例标本和图像中,右半肝内门静脉均可分为前上和后下两组分支.76%(38150)的门静脉右前支的分支向后分布至肝右静脉后方的部分区域.40%(20/50)的门静脉右后支的起始部向尾侧发出的第一分支分布至肝右静脉前的部分区域.门静脉右前支的分布区域,越过肝中静脉偏向左侧,在15例无门静脉右支主干的标本和图像中尤其明显.肝右前叶无明显横裂存在.门静脉的亚段分型有显著的个体差异,且无优势分支类型. 结论右半肝可分为右前上叶和右后下叶,两叶之间为一弯曲的"裂隙".肝右前上叶有一恒定的纵裂存在.肝右静脉不是右叶间裂的准确定位标志,尤其在其上份和下份.肝中静脉不是正中裂的准确识别标志,尤其在门静脉右支主干缺如的人群中.

5-脂氧酶与小鼠肺部感染的关系

目的 探讨小鼠肺组织内5-脂氧酶(5-LO)与呼吸道感染的关系. 方法采用免疫组织化学方法检测24只小鼠肺组织内5-LO的表达. 结果感染组小鼠5-LO阳性强度比未感染组高;治疗组小鼠5-LO的表达强度降低. 结论小鼠肺组织5-LO的表达强度,对临床及科研中肺感染疗效的评价有一定参考价值.

幼年及成年SD大鼠Barrel脑区的变化

目的 研究幼年和成年SD大鼠Barrel脑区的发育及变化.方法 应用细胞色素氧化酶组织化学法研究成年SD鼠Barrel脑区的精确定位,及不同年龄段SD大鼠(出生后20d及3月龄成年SD大鼠)Barrel脑区的发育情况.结果 成年SD大鼠的Barrel脑区面积明显小于年轻鼠(P<0.01);发育过程中,Barrel脑区各列之间的间距缩小,尤其是D和E列之间的间距;应用Nissl复染后发现.分隔各个Barrel桶之间的问距缩小,且神经元数目减少;成年SD大鼠的Barrel桶中高活性细胞色素氧化酶细胞比例明显高于年轻鼠(P<0.01).结论 啮齿类动物躯体感觉皮层Barrel脑区神经网络的排布精细,其构筑在发育过程中存在着微妙的变化.

不同浓度曲古抑菌素A对鸡胚翅芽发育的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对鸡胚翅芽发育中某些基因表达水平的作用,探讨不同浓度TSA(75μmol/L、750 μmol/L、1.5mmol/L)对鸡胚翅芽发育的影响,提高我们对染色质结构重组和表观遗传对基因表达的调控作用,以及对正在开发的抗癌药物的认识. 方法以鸡胚翅芽作为实验模型,用TSA处理翅芽,对鸡胚胎实施原位杂交,检测与肌肉发育相关基因的表达,并采用硫酸耐尔蓝(Nile bluesulfate)法检测细胞凋亡状况. 结果 75 μmol/L TSA能够抑制与肌肉发生相关的基因MyoD和Myf5在鸡胚翅芽的表达,经TSA(75μmol/L)处理的胚胎没有发生明显的细胞凋亡.但是随着TSA药物浓度的提高,TSA(≥750μmol/L)不仅强烈抑制相关基因的表达,而且出现翅芽外部畸形(外形改变、体积缩小)以及细胞凋亡. 结论75μmol/LTSA调控某些重要的转录因子及有力地控制肌肉细胞的分化;高浓度TSA(≥750μmol/L)导致细胞凋亡和胚胎翅芽畸形;发育的鸡胚能够作为一个便利的,供体内研究药物(如HDAC抑制剂类等)的模型.

胃癌组织中ZAC与生长抑素及生长抑素受体表达的相关性

目的 研究胃癌组织中ZAC与牛长抑素及生长抑素受体表达的相关性,探讨其与胃癌临床病理学指征的关系.方法 应用免疫组织化学及RT-PCR技术,检测30例胃癌、癌旁和正常胃黏膜组织中ZAC、生长抑素及生长抑素受体的表达.结果 胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织巾ZAC的阳性表达率分别为33.03%(10/30)、73.3%(22/30)和66.7%(20/30);生长抑素的阳性表达率分别为36.7%(11/30)、53.3%(16/30)和73.3%(22/30).胃癌组织中ZAC和生长抑素的表达阳性率均明显低于正常胃黏膜组织.胃癌、癌旁及相应正常胃黏膜组织中牛长抑素受体5种亚型(SSTR1～SSTR5)mRNA均有表达.与正常胃黏膜组织比较,胃癌组织中SSTR3的阳性率显著降低,SSTR2和SSTR5显著增高.胃癌组织中ZAC与生长抑素的表达趋势一致;与SSTR3的表达趋势亦一致.ZAC与生长抑素的共表达与胃癌的分化程度及浸润深度明显相关,而与淋巴结转移无明显关系.ZAC与SSTR3的共表达与胃痛的分化程度明显相关.结论 ZAC可能是生长抑素抑制胃癌发生的下游靶基因;生长抑素通过与其受体SSTR3结合,影响ZAC的表达,抑制肿瘤细胞的生长,促进其分化.

甘肃裕固族青少年体型的Heath-Carter法研究

目的 探讨裕固族青少年体型的发育特征及其规律. 方法应用Heath-Carter法,对甘肃省肃南县青少年989人(男性512,女性477)进行体型评价. 结果裕固族青少年男性的体型为偏中胚层的外胚层体型(3.0-3.6-3.7),女性为偏外胚层的内胚层体型(3.8-2.9-3.6);男性由中间型经历偏中胚层的外胚层型发展为偏内胚层的中胚层体型,女性从中间型经历偏外胚层的内胚层体型、偏内胚层的外胚层体型发展为偏中胚层的内胚层型.结论 裕固族青少年男女性间体型发育存在着显著的差异;男性在7～12岁时体型与蒙占族、汉族、壮族、匈牙利人相似;在13～17岁时与藏族、壮族、汉族、达斡尔族体型相似.女性在7～9岁青少年期体型与匈牙利人体型相似;10～17岁与藏族、汉族、壮族和芬兰人的体型相似.

轴突成束和延伸蛋白ζ-1基因在1型和2型星形胶质细胞中的表达

目的 探讨轴突成束和延伸蛋白ζ-1(FEZ1)基因在1型和2型星形胶质细胞(T1A、T2A)中的表达差异,及其在新生SD大鼠中枢神经系统中的表达. 方法培养、分离、纯化T1A和T2A,提取总RNA,分别以Cy3-dCTP和cy5-dCTP标记T1A和T2A的mRNA,进行基因表达谱芯片检测分析.选取其中与轴突延伸相关的FEZ1基因,应用半定量RT-PCR法研究FEZ1在新生大鼠中枢神经系统多个部位的表达. 结果 T1A和T2A中差异表达基因138条,其中60条在T1A中高表达,78条在T2A中高表达.FEZ1基因在T2A中高表达.RT-PCR结果显示,FEZ1在新生大鼠中枢神经系统大脑皮层、嗅球和脊髓组织中均有表达. 结论 T1A和T2A中存在多个差异表达基因,其中与轴突延伸相关的FEZ1基因表达明显差异,提示T1A和T2A可能在诱导轴突生长方面有不同功能;FEZ1基因与中枢神经系统的发育和再生相关.

促甲状腺激素受体及碘钠泵在人甲状腺癌中的表达及临床意义

目的 研究促甲状腺激素受体(TSHR)、碘钠泵(NIS)在甲状腺癌中的表达,探讨其在人甲状腺癌治疗中的作用. 方法采用免疫组织化学SABC法,检测TSHR、NIS在45例人正常甲状腺组织、45例乳头状甲状腺癌及21例未分化甲状腺癌中的表达. 结果 TSHR及NIS在人正常甲状腺组织的表达均高于其在乳头状甲状腺癌和未分化甲状腺癌中的表达.在人正常甲状腺组织,TSHR和NIS蛋白均定位于滤泡上皮细胞膜上;在乳头状甲状腺癌组织,TSHR蛋白定位于细胞膜和细胞质中,NIS蛋白仅在细胞质中有阳性表达;在未分化甲状腺癌,TSHR和NIS均定位于细胞质. 结论 TSHR、NIS的定位及表达水平与甲状腺癌的分化程度密切相关,可能成为预测甲状腺癌促甲状腺激素抑制治疗及131Ⅰ治疗是否有效的指标.

骨形态发生蛋白4在人胚胎卵黄囊造血过程中的表达

目的 检测骨形态发生蛋白4(BMP-4)在卵黄囊造血期间的表达及其变化,探讨影响造血细胞早期形成、增殖和分化的凋控机制. 方法用药物流产受精3～8周胚胎57例,免疫组织化学SP法检测BMP-4、血管内皮生长因子受体2(KDR)、CD133、CD34在卵黄囊中的表达,RT-PCR分析转录因子Ihh、SCL、GATA-1、GATA-2和PU.1的表达. 结果在16 d的卵黄囊血岛周边间质细胞BMP-4表达阳性,KDR低表达,CD34、CD133未见表达;21d时,BMP-4、CD34和CD133免疫反应产物均增加,染色增强;30d时,BMP-4、CD34、CD133和KDR表达强,CD34阳性细胞沿血岛边缘形成血管样结构.45d时,BMP-4、CD34、CD133和KDR阳性细胞增多,中等程度染色;7周后,BMP-4、CD133、KDR、CD34阳性细胞明显减少,染色变弱.RT-PCR结果显示,不同时间的卵黄囊持续表达Ihh、SCL、GATA-1和GATA-2.而PU.1在16d时未见表达,此后有阳性表达. 结论卵黄囊造血细胞的发育受BMP-4和转录因子的诱导和调节,卵黄囊造血不仅产生成血管血液干细胞,并能形成造血干细胞,说明卵黄囊不仅具有原始造血能力,而且可能具有长期造血能力.

shRNAs介导的Smad2基因在小鼠成纤维细胞NIH/3T3中表达的沉默

目的 通过构建5个shRNA表达质粒,对转化生长因子β/Smads信号通路中受体调节性Smads蛋白中的Smad2的表达进行抑制.方法 针对鼠Smad2基因的mRNA序列,设计合成了5条shRNA-Smad2 DNA序列,分别插入至shRNA表达载体中,获得了5个shRNA-Smad2表达质粒,将shRNA表达质粒转染NIH/3T3细胞,采用半定量RT-PCR和Western blotting方法,检测shRNA表达质粒对Smad2表达的抑制效果.结果 编号为2.4的shRNA-Smad2表达质粒能够显著降低Smad2的表达,同时发现由不同的shRNA-Smad2表达质粒组成的RNAi池,产生的抑制效果比单个RNAi表达质粒的抑制效果明显提高.结论 成功地构建了特异、高效抑制Smad2表达的shRNA表达质粒.

CD2相关蛋白在肾脏细胞中的分布及其在足细胞中的作用

目的 观察CD2相关蛋白(cD2AP)在肾脏不同细胞系中的表达分布,及其与足细胞裂孔隔膜分子nephrin和细胞骨架蛋白F-actin之间的联系.方法 以DMEM培养基培养人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞系(HK-2),RPMI 1640培养基培养条件永生化小鼠足细胞系.以RT-PCR及Western blotting方法检测足细胞内CD2AP和nephrin的表达.间接免疫荧光结合激光共焦方法观察CD2AP在HMC、HK-2、未分化及已分化足细胞中的表达情况,及CD2AP与nephtin在足细胞中的共存.直接免疫荧光结合激光共焦方法观察F-actin在足细胞的表达及其与CD2AP的共存.结果 CD2AP均匀分布于HK-2及未分化足细胞的核周及胞浆,而不表达于HMC细胞.在足细胞分化过程中,CD2AP的分布发生了变化,出现向周边聚集的现象.CD2AP与足细胞裂孔隔膜分子nephrin及细胞骨架蛋白F-actin在足细胞中存在共定位关系.结论 CD2AP表达于上皮来源的肾脏固有细胞.CD2AP在足细胞中的分布特点,提示CD2AP可能参与足细胞的分化过程,并与裂孔隔膜分子功能及细胞骨架凋节有关.

指长比与冠心病的相关性研究

目的 研究宁夏男性指长比与冠心病的相关性. 方法 采用体质测量法,研究宁夏汉族男性304例(正常对照152例,冠心病患者152例)左右手指长比(2D:3D、2D:4D、2D:5D、3D:4D、3D:5D、4D:5D),探讨其与冠心病的相关性. 结果 宁夏汉族男性正常对照组与冠心病患者组指长比均值呈现2D:3D<2D:4D<3D:4D<2D:5D<4D:5D<3D:5D的趋势;冠心病患者组指长比均值高于正常对照组,2D:3D(左手P<0.05)、2D:4D有显著性差异(左手P<0.01;右手P<0.05),2D>4D的比例高于对照组;冠心病患者组指长比均值与发病年龄呈负相关(P<0.001). 结论 指长比,尤其是左手2D:4D可能是冠心病早期筛选的重要参考指标之一.

内源性端粒酶抑制基因遗传不稳定性与胃癌进展的关系

目的 研究8号染色体上D8S277位点的杂合性缺失(LOH)和微卫星不稳定性(MSI)对内源性端粒酶抑制基因(PINX1)蛋白表达的影响,阐明PINX1基因遗传不稳定性与胃癌进展的关系. 方法采用石蜡包埋组织抽提DNA,聚合酶链-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析,常规银染检测D8S277位点的LOH和MSI,采用Envision免疫组织化学染色和Leica-Qwin计算机图像分析等方法. 结果 D8S277位点的LOH发生率在淋巴结转移组(21.15%)明显高于无淋巴结转移组(0,P<0.05);在胃癌TNM Ⅲ+Ⅳ期(24.39%)显著高于Ⅰ+Ⅱ期(3.33%,P<0.05).PINX1蛋白阳性率在无淋巴结转移组(78.95%)明显高于有淋巴结转移组(48.08%,P<0.05);TNM分期Ⅰ+Ⅱ期(73.33%)明显高于Ⅲ+Ⅳ期(43.90%,P<0.05);蛋白表达阴性组LOH阳性率为32.28%,明显高于蛋白阳性组的2.50%(P<0.01). 结论 PINX1基因的遗传不稳定性可能导致该抑癌基因突变,是肿瘤发生发展的一个因素,LOH和MSI通过不同的途径调控胃癌的发生和发展.

前列腺增生组织中间质细胞增殖和表型转化与雌激素受体α表达的关系

目的 比较人正常前列腺(NP)和前列腺增生(BPH)中间质细胞标记蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)和雌激素受体α(ERα)的表达差异,并检测BPH组织间质细胞标记蛋白与PCNA或ERα同时呈阳性染色的细胞.方法 对4例NP和8例BPH连续切片应用免疫组织化学方法,观察波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肌球蛋白(myosin)、PCNA和ERa的表达定位.结果 与NP相比在BPH中,α-SMA阳性染色细胞显著增加;波形蛋白在间质中阳性染色细胞有所增加,在腺泡基底层及临近腺泡外层间质中阳性染色细胞明显增加;在临近腺泡外的数层间质细胞中肌球蛋白和ERα由部分阳性变为完全阴性染色,而在远离腺泡的间质中其阳性染色细胞由散在斑块状分布变为簇状密集排列;PCNA在间质中阳性染色细胞有所增加,在基底细胞层中阳性染色细胞显著增加.连续切片免疫组织化学染色显示,在腺泡上皮基底层存在PCNA与波形蛋白、ERα共定位的细胞;在间质中存在肌球蛋白与ERα共定位的细胞.结论 与NP相比,BPH间质细胞表型发生明显变化,且其增殖和表型转化与ERα表达定位的改变密切相关.

人参皂甙Rgl组合对人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中核基质构型与蛋白质组成的影响

目的 研究中药有效成分人参皂甙Rgl、肉桂酸CINN及丹参酮TanⅡ A的组合(简称RCT),诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中,细胞核基质构型与蛋白质组成的变化.方法 应用流式细胞仪检测细胞周期变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,以选择性抽提整装光镜与电镜技术及蛋白质组学技术分析观察处理前后MG-63细胞核基质构型与蛋白质组成的变化.结果 生长曲线显示,RCT处理后MG-63细胞的增殖受到明显抑制,增殖抑制率在第7天达到72.37%,细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞.MG-63细胞核基质为典型的肿瘤细胞恶性表型,在RCT处理后发生了向正常细胞转变的恢复性变化.RCT处理后的细胞中多种核基质功能蛋白的表达发生了变化.结论 RCT能显著抑制体外培养MG-63细胞的增殖活动,将细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导核基质构型发生了显著的恢复性变化,并改变核基质蛋白的组成,对MG-63细胞具有显著的分化诱导作用.

禁止交配下调成年雌性大鼠乳腺组织雌二醇水平及雌激素受体α的表达

目的 研究禁止交配对成年雌性大鼠乳腺组织雌二醇(E2)水平、雌激素受体α(ERα)表达的影响.方法 12只成年雌性SD大鼠随机分为对照组(交配组)和禁止交配组,实验第61天终止实验后在间情期采集标本,光镜下观察各组大鼠乳腺组织结构,透射电镜下观察乳腺组织超微结构;采用放射免疫法检测外周血及乳腺组织E2浓度;采用免疫组织化学染色和Western blotting技术检测乳腺组织ERα的表达变化. 结果禁止交配60d后,成年雌性大鼠乳腺组织E2水平下降,与对照组比较P<0.05;同时乳腺组织上皮细胞、基质细胞细胞核ERα表达下调,与对照组比较P<0.05;光镜、电镜下各组大鼠乳腺组织未见明显异常. 结论禁止交配可下调雌性大鼠乳腺组织E2水平和ERα的表达.

EphB/Ephrin-B1信号对睫状神经节α7-尼古丁乙酰胆碱受体电流的影响

目的 探讨EphB/Ephrin.B1信号对鸡胚睫状神经节(CG)神经元上α7-尼古丁乙酰胆碱受体(α7-nAChRs)电流的影响. 方法用膜片钳技术分别在培养的和急性分离的CG神经元上记录α7-nAChRs电流.细胞被随机分为:对照组、Ephrin-BlFc处理组、IgG处理组和Ephrin-B1处理组,观察电流的变化. 结果对照组、lgG组和Ephrin-B1处理组之间α7-nAChRs电流无显著差异(P>0.05),而这3组与Ephrin-BlFc处理组之间有显著差异(P<0.05).Ephrin-BlFc可浓度依赖性抑制α7-nAChRs电流,该过程可在数分钟内发生,并呈现可逆性.培养的和急性分离的CG神经元Ipeak/Cm的IC50分别为0.032mg/L和1.4mg/L. 结论 Eph/Ephrin-Bl信号町影响CG神经元α7-nAChRs的电流,提示Eph/Ephrin-Bl可能参与交感神经系统功能的调控.

皮质酮对大鼠肝再生过程中鸟氨酸脱羧酶的抑制

目的 研究大鼠体内主要的糖皮质激素--皮质酮对部分肝切除(PH)诱导的再生肝鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因表达及酶活性的影响.方法 乙醚麻醉大鼠,于PH前3d行双侧肾上腺切除术及假手术,皮质酮悬浮于芝麻油中皮下注射玄肾上腺鼠.用RT-PCR、Western blotting及高效液相色谱法(HPLC)分别测定ODC mRNA、ODC蛋白及酶活性.结果 与再生肝相比,完整肝中ODC mRNA、蛋白及其酶活性水平较低.PH后所有组(每组n=6)中ODCmRNA水平均显著升高,5h达到峰值.7h前mRNA含量由高到低依次为去肾上腺组、去肾上腺假手术组(即对照组)、10和40ms/kg体重皮质酮处理组.去肾上腺组(n=13,下同)的ODC蛋白量高于对照组.10mg/kg体重皮质酮处理,在PH后0～24h下降,40mg/kg皮质酬处理组低.PH后,所有组(每组n=6)ODC活性迅速升高,6h达到峰值;皮质酮处理后活性在6h下降显著,40ms/kg体重皮质酮处理组活性低.结论 皮质酮处理后,大鼠完整肝及再生肝中ODC mRNA及蛋白水平呈剂量依赖性下降;ODC活性变化的部分原因是由于ODC mRNA及其蛋白量的改变.

FGA等15个短串联重复序列在融水县苗族群体中的遗传学分析

目的 了解广西融水县苗族群体中15个短串联重复序列(STR):TPOX、TH01、CSFIPO、D19S433、vWA、D18S51、D5S818、FGA、D8S1179、D21S11、D7S820、D3S1358、D13s317、D16S539、D2S1338遗传多态的分布情况.方法 用枸橼酸钠抗凝法采集融水县苗族的血样,酚.氯仿抽提法提取DNA,用AmpFISTRR Identifiler TM PCR Amplification kit荧光标记复合扩增技术和ABI 3100型遗传分析仪对DNA进行扩增检测.结果 15个STR分别检测出5～20种等位基因,11～62种基因型,基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,等位基因频率和基因型频率分布在0.002 4～0.4663和0.004 8～0.274 0之间;平均杂合度0.781 1,累积个人识别力1.000 000 000 00,累积非父排除率0.999 999 998,多态信息总量0.999 999 999 4.结论 广西融水苗族群体的15个短串联重复序列基因座具有高度多态性和遗传稳定性,实用价值高,可作为广西苗族群体的民族遗传学研究和法医学鉴定的基础数据.

SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠的建立

目的 构建胃壁细胞定位表达SV40T的真核表达载体并制备转基因小鼠动物模型,为研究胃癌发病机制提供动物模型.方法 从构建的胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV中酶切回收3.8kb的基因片段H+-K+ATPase β promoter/SV40T,通过显微注射的方法制备转基因小鼠,PCR和Southern blotting检测阳性转基因小鼠并建系繁殖,RT-PCR检测基因的表达情况.结果 将422枚注射过的受精卵移植给16只假孕雌鼠,共生出77只仔鼠,移植成功率为18.2%.在出生的77只仔鼠中,2#、4#、8#、16#、24#、51#、57#、61#、68#、73#经PCR检测为阳性首建鼠.除68#不育外,其他9个品系首建鼠共生出99只F1代鼠.8#品系23只F1代尚未发现阳性鼠,另8个品系F1代经PCR和Southern blotting检测发现31只阳性鼠,阳性率为40.8%(31/76).RT-PCR检测F1代阳性鼠均仅在胃组织中有SV40T基因的表达,而在心、肝、肾、肺、食道、肠、骨骼肌等组织中均不表达.不育首建鼠处死解剖发现胃组织有肿瘤存在.结论 建立了胃壁细胞定位表达SV40T基因的转基因小鼠动物模型.

海生素对K562细胞生长及凋亡基因表达的影响

目的 探讨海生素对白血病K562细胞生长及凋亡基因表达的影响. 方法实验分为对照组、10mg/L海生素组和20rag/L海生素组.采用流式细胞术(FcM)、四唑蓝(MTT)和免疫细胞化学法测定海生素对K562细胞周期、细胞生长及细胞凋亡基因bcl-2和bax表达的影响. 结果海生素浓度为10mg/L和20mg/L时,可阻止K562细胞周期于G1/S期;海生素浓度为20mg/L时对K562细胞有抑制作用,在此浓度下随时间的延长细胞存活率有下降趋势;海生素浓度为20mg/L和40mg,L时,可下调凋亡抑制基因bcl-2的表达,上调凋亡促进基因hax的表达.结论 海生素可明显抑制K562细胞的增殖,使其阻滞于细胞周期的G1/S期;海生素还通过减少bcl-2的表达及增加bax的表达从而促进K562细胞的凋亡.

大鼠大脑白质无髓神经纤维老年改变的机制探讨

目的 运用体视学方法研究大鼠大脑白质无髓神经纤维的老年性改变,探讨导致老年白质有髓神经纤维总长度降低的确切原因,并探讨性别因素在老年大脑改变中所起的作用.方法 6～8月龄Long-Evans大鼠9只和18月龄同种大鼠8只.用电镜技术及相应的体视学方法计算白质内无髓神经纤维的体积密度、长度密度和白质内无髓神经纤维的总体积和总长度.结果 雄性和雌性大鼠大脑白质无髓神经纤维总长度均无显著的老年性降低.白质内无髓神经纤维总体积在雌性组存在显著的老年性降低,从年轻组的平均32.79mm3下降到了老年组的平均18.60mm3.雄性大鼠无髓神经纤维总体积老年性降低虽无显著性,但也从年轻组的平均34.79mm3下降到老年组的平均24.02mm3.降低高达31%.年轻组与老年组的各项指标中雄性与雌性动物间均不存在显著的性差别. 结论老年大鼠大脑白质存在大直径无髓神经纤维的显著件丢失,同时存在的细小直径的有髓神经纤维脱髓鞘改变,在一定程度上掩盖了老年白质内小直径无髓神经纤维的丢失.

水通道蛋白-4表达变化与急性高眼压视网膜损伤的相关性研究

目的 观察不同高眼压作用下,水通道蛋白-4(AQP4)及其mRNA在大鼠视网膜内的表达变化.以探讨AQP4与眼压异常性疾病的关系.方法 采用前房加压灌注法.分别制作75cm、125cm和150cm水柱不同压力急性高眼压大鼠模型;通过HE和尼氏染色了解视网膜病理改变和神经节细胞数目变化;应用免疫组织化学、免疫荧光双标、原位杂交以及RT-PCR等技术检测不同高眼压作用下,AQP4及其mRNA在视网膜内的表达变化.结果 与对照组相比,各实验组大鼠视网膜晕不同程度水肿样改变,其内层厚度增加,神经节细胞数目明显减少;AQP4及其mRNA在视网膜内的表达明显增强,其表达上调水平与眼压升高程度呈正相关,并与视网膜内层厚度增加以及节细胞数目减少相关(P<0.01).结论 急性高眼压作用下,大鼠视网膜内AQP4及其mRNA的表达明显增强,呈压力依赖性,其异常高表达可能与急性高眼压的病理损伤过程以及眼内水、电解质代谢失衡有关.

组胺在豚鼠颈上神经节投射到心脏交感神经纤维中的表达

目的 探讨组胺在豚鼠颈上神经节投射到心脏交感神经纤维中的表达,及其与去甲肾上腺素的共存,为组胺可能是心脏交感神经系统新发现的递质提供形态学证据. 方法生物索化葡聚糖胺(BDA)顺行追踪结合组胺和去甲肾上腺素免疫荧光三标技术. 结果将BDA注入颈上神经节后,左、右心房和心室均有其投射的交感神经纤维,同时在这些示踪纤维中亦有组胺和组胺/去甲肾上腺素共存的免疫阳性表达. 结论豚鼠颈上神经节投射到心脏交感神经纤维中有组胺的表达并与去甲肾上腺紊共存.

兔卵巢组织冷冻移植后卯母细胞成熟及受精发育能力的研究

目的 探讨兔卵巢组织冷冻复苏后移植对卵母细胞生长、成熟、受精发育潜能的影响. 方法 25只性成熟新西兰雌兔随机分为对照组(5只)、新鲜移植组(10只)及冷冻复苏移植组(10只),卵巢组织均自体多点移植于子宫系膜内.卵巢移植90d后对兔联合使用促排卵、体外成熟培养和卵泡浆内单精子注射技术,观察卵子的成熟情况以及体内和体外成熟卵子的受精率、卵裂率和囊胚形成率. 结果新鲜移植组和冷冻复苏移植组获卵数均低于对照组(P<0.05),而两移植组间获卵数差异无显著性;各组末成熟卵子所占比率以及未成熟卵子体外成熟后的成熟率间均无显著性差异;各组间体内成熟卵子、体外培养成熟卵子的受精率、卵裂率和囊胚形成率的差异不明显;各组内体内成熟卵子与体外培养成熟卵子相比受精率、卵裂率间无显著性差异,但体外培养成熟卵子囊胚形成率明显低于体内成熟卵子(P<0.05). 结论兔卵巢经冷冻复苏自体移植后,其卵泡能够重新生长发育;通过体外成熟和受精技术,体内和体外成熟卵子均可产生正常的胚胎.提示卵巢组织冻融移植结合辅助生殖技术可作为一种生育力保存的方法.

雌激素受体β在小鼠及猪卵巢中表达的比较研究

目的 研究雌激素受体β(ERβ)在小鼠和猪卵巢中的表达差异. 方法通过免疫组织化学的方法,研究ERβ在小鼠及猪卵巢中不同类型细胞中的表达量和细胞内的定位情况. 结果在小鼠卵巢中,ERβ在黄体和各级生长卵泡的卵母细胞质中均有大量表达,在各级卵泡的颗粒细胞和膜细胞中表达量很少,生殖上皮和间质细胞中没有检测到表达信号.猪卵巢中ERβ强表达于各级卵泡的膜细胞中,各种直径的腔前卵泡的颗粒细胞中也有表达,但有腔卵泡颗粒细胞有的表达,有的则未见表达,间质细胞和生殖上皮中无明显表达. 结论 ERβ在小鼠和猪卵巢中的表达和定位差异很大.表明ERβ在小鼠和猪卵巢中的作用也可能不同.

创伤后应激障碍大鼠海马神经元凋亡的形态学变化及相关基因表达

目的 探讨创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马神经元Bcl-2和Bax的表达及与神经元凋亡的关系.方法 采用国际认定的SPS方法刺激大鼠建立PTSD大鼠模型,取SPS刺激后1d、4d、7d、14d组和正常对照组.应用透射电镜和原位末端标记法观察PTSD大鼠海马神经元细胞凋亡的形态学变化并检测细胞凋亡指数;应用免疫组织化学、免疫荧光双标、激光共焦显微镜技术和免疫印迹法检测Bel-2和Bax蛋白的表达. 结果 PTSD大鼠海马神经元出现细胞凋亡改变;凋亡细胞数量随时问的延长而逐渐增多,于SPS刺激后7d达高峰;Bel-2蛋白于SPS刺激后4d达高峰;Bax蛋白于SPS刺激后7d达高峰,之后逐渐下降.Bcl-2/Bax的比值于SPS刺激后一过性增加,以后随时间延长比值下降. 结论海马神经元细胞凋亡可能是PTSD大鼠海马萎缩的原因之一;Bel-2和Bax蛋白含量增加以及两者的比值失衡可能是导致PTSD大鼠海马神经元凋亡的原因之一.

α-突触核蛋白各结构域与MN9D细胞线粒体的关系

目的 探讨α-突触核蛋白(α-synuclein)各结构域与MN9D细胞线粒体的关系.方法 用PCR方法获得α-synuclein/1～65(N),α-synuclein/61～95(A)及α-synuclein/96～140(C)基因片段,克隆入真核表达质粒pLNCX2,经测序正确后以脂质体转染PT-67细胞,挑取单克隆并扩增,收集上清感染MN9D细胞,分别用Real Time PCR检测细胞基因表达水平,免疫组织化学染色检测蛋白表达,激光扫描共焦显微镜检测蛋白与线粒体共定位,流式细胞术检测细胞状态及线粒体膜电位状态.结果 成功构建了pLNCX2/N、pLNCX2/NAC及pLNCX2/C基因片段的重组真核表达质粒,获得了可稳定表达α-synuclein各基因片段的MN9D细胞株.通过激光扫描共焦显微镜观察,可见α-synuclein/N端与线粒体存在共定位关系;α-synuelein/NAC主要在核内聚集表达;α-synuclein/C端在胞质和胞核内均有表达.JC1染色流式细胞术检测显示,过表达α-synuclein/N实验组细胞线粒体膜电位降低.结论 α-synuclein的N端可能定位于线粒体,并参与调节线粒体功能;α-synuclein/NAC虽具有疏水性但却能穿过核膜,聚集在核仁周围;α-synuclein的C端定位于胞质和核内可能参与多种细胞功能.

骨髓基质细胞促进永久性局灶性脑缺血大鼠脑室下区的神经发生

目的 探讨移植骨髓基质细胞(BMSCs)对永久性局灶性脑缺血大鼠脑室下区(SVZ)细胞增殖的影响及其增殖细胞类型分析. 方法制作永久性局灶性脑缺血大鼠模型,分为空白对照组(MCAO)、PBS对照组(MCAO+PBS)和治疗组(MCAO+BMSCs),每组动物再分为脑缺血后7d和14d亚组.空白对照组不予处理,PBS对照组在脑缺血后1d移植PBS,治疗组在脑缺血后1d移植BMSCs.用Zausinger六分法检测神经功能恢复情况;注射5-溴脱氧鸟嘧啶核苷(BrdU)标记SVZ的新增殖细胞,免疫荧光双重标记检测新增殖细胞的类型. 结果在脑缺血后7d和14d,与两个对照组相比,治疗组的神经功能评分较高,有显著性差异(P<0.05);脑缺血后14d,治疗组的大鼠患侧SVZ的BrdU阳性细胞较其余两组高,存在显著差异(P<0.05);免疫荧光双重标记显示,新增殖细胞表达神经元和星形胶质细胞的标志物,提示新增殖细胞为神经元和神经胶质细胞的混合体. 结论 BMSCs可以改善永久性局灶性脑缺血大鼠的神经功能,其机制可能与促进SVZ的神经细胞增殖有关.

槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖诱导流产孕小鼠子宫组织中CD4+/CD8+T细胞的影响

目的 探讨小鼠子宫组织中CDM+和CD8+T细胞在早期胚胎丢失中的意义,研究槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的保胎效果和对母胎界面免疫平衡的调节作用. 方法采用LPS尾静脉注射,制造小鼠流产模型,孕4～7d分别口服不同保胎药物,用药前后检测各组(n=10)小鼠子宫组织CD4+/CD8+T细胞亚群的变化. 结果 LPS促流产后,小鼠子宫壁CD4+T细胞数量显著增多(P<0.01),CD8+T细胞无明显变化(P>0.05),CD4+/CD8+比值显著升高(P<0.01).预先口服保胎药物能不同程度抑制LPS的作用.其中以槲皮素和乙酸龙脑酯联合使用组的保胎效果为明显,CD4+/CD8+比值下降,较LPS流产模型组差异极著(P<0.01). 结论小鼠子官组织CD4+/CD8+比值升高与早期胚胎丢失关系密切,槲皮素和乙酸龙脑酯能够调节小鼠子宫局部的免疫微环境,从而起到一定的促孕保胎作用.

一种应用振荡切片显示神经元的Cox染色法

目的 探索一种快捷、简便的大脑锥体细胞和小脑普肯耶细胞的染色方法. 方法取猫、家兔、大鼠和豚鼠的大脑和小脑组织,升汞.重铬酸钾.铬酸钾固定液固定、浸染后,部分组织按传统的Cox法制片,即固定后进行火棉胶包埋、滑式切片机切片;部分组织用改良法制片,即组织不经包埋而直接进行振荡切片. 结果与传统Cox法相比,应用振荡切片的Cox法减少了操作程序,大大缩短了制片时间,神经元染色均匀,神经元突起更为完整,小突起细节显示更为满意,且背景浅淡,非特异性沉淀颗粒极少. 结论应用振荡切片的Cox改良法快捷、简便,神经元染色效果明显优于传统Cox法.

《解剖学报》稿约