中国药学杂志
Chinese Pharmaceutical Journal 중국약학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中国药学会
- 影响因子： 0.95
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-2494
- 国内刊号： 11-2162/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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梓葛冻干粉针对体外氧糖剥夺/再灌注损伤大鼠大脑皮层星形胶质细胞的保护作用
目的 探讨梓葛冻干粉针(C-P)对体外氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤大鼠大脑皮层星形胶质细胞的保护作用及可能的机制.方法 原代分离培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光鉴定星形胶质细胞的纯度.实验分正常组、模型组、辅料组、C-P:12.25、24.50、49.00 μg· mL-1组.对星形胶质细胞进行OGD 6h/R 12h损伤并同时给予C-P.噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率、比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡率.利用试剂盒的方法分别检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性,谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量以及一氧化氮(NO)的释放量,ELISA法测定细胞培养液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和前列腺素(PG)E2的含量,Western blot检测细胞内caspase-3,诱导型一氧化氮合酶(iNOS),环氧酶(COX)-2,核因子(NF)-κB p65,p-NF-κB p65,IκB-α,p-IκB-α蛋白表达量.结果 原代培养的星形胶质细胞纯度在97％以上.与正常组相比,模型组细胞存活率显著降低,LDH漏出率及细胞凋亡率明显增高;细胞内SOD活性和GSH含量明显降低,MDA和ROS含量显著升高;细胞培养液中NO、TNF-α、IL-1β和PGE2的释放量也显著增加.而以上相关生化指标均可被不同剂量的C-P所抑制.辅料组与模型组无显著差异.进一步研究发现,C-P能显著抑制OGD/R损伤引起的细胞中caspase-3、iNOS、COX-2蛋白表达量及NF-κB p65和IκB-α的磷酸化水平的增高.结论 C-P对体外OGD/R损伤的星形胶质细胞具有保护作用,其保护机制与其抗炎、抗氧化以及抑制细胞凋亡和NF-κB信号通路的激活有关.
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中美罕见病和孤儿药科研创新扶持比较研究
目的 介绍中美两国罕见病和孤儿药科研创新扶持情况并形成对比,为我国相关政策的探索提供参考.方法 对中美两国主要的罕见病研究和孤儿药研发资助来源,即美国国立卫生研究院(NIH)、美国食品药品管理局(FDA)及中国国家自然科学基金中罕见病研究资助情况进行数据分析,并进行比较.结果 美国国立卫生研究院每年对罕见病相关研究给予大力扶持,资助金额总体呈增长趋势;FDA建立了孤儿药资助计划,专门为罕见病临床研究提供资助.而我国没有专门的罕见病科研创新扶持项目,国家自然科学基金对罕见病研究的科研扶持力度与美国差距很大,同时缺乏孤儿药研发激励政策.结论 我国应当尽快建立罕见病研究中心,大力促进罕见病研究;成立罕见病研究和孤儿药研发专项基金,加大科研创新扶持力度,保障罕见病患者健康权益.
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基于系统药理学研究柴胡治疗情志疾病异病同治的机制
目的 探究柴胡发挥疏肝解郁功效治疗情志疾病的分子靶点及机制.方法 利用系统药理学方法对柴胡疏肝解郁功效的有效成分、靶点、疾病信息开展研究,构建了“疾病-靶点”及“药物-靶点”网络,并对网络进行拓扑学分析和系统药理学研究.结果 得出中医情志疾病发病的相关靶点共计25个.柴胡中直接与靶点相关的成分为118个,其中核心成分共计8个.柴胡治疗情志疾病的分子机制是通过其中的118个成分与25个情志疾病潜在靶点群之间相互作用产生的,其中8个核心成分在治疗过程中起到核心作用.结论 通过系统药理学模型的构建,从系统层面解释柴胡发挥疏肝解郁治疗情志疾病分子机制,为中药功效机制阐明及中医异病同治理论的研究奠定理论基础.
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蓬莱葛中一个新的单萜吲哚生物碱
目的 研究蓬莱葛(Gardneria multiflora Makino)中的单萜吲哚生物碱类成分.方法 蓬莱葛全株用体积分数95％乙醇溶液加热回流提取,减压回收乙醇,浓缩液加水稀释后经石油醚、三氯甲烷萃取,得总生物碱.总生物碱利用正相硅胶、反相Rp-18、Sephadex LH-20等柱色谱方法分离纯化,通过光谱数据进行结构鉴定.结果 从蓬莱葛中分离得到1个单萜吲哚型生物碱.结论 从蓬莱葛中分离得到1个单萜吲哚型生物碱为一新的化合物.
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溶解度法研究纤维素类聚合物抑制超饱和吲哚美辛结晶的规律
目的 研究纤维素类聚合物抑制超饱和状态下药物结晶的规律.方法 通过制备超饱和状态下的无定型药物,并利用测定溶解度的方法,来分析纤维素聚合物类型、加入量、离子强度和黏度对于生物药剂学分类系统(BCS)Ⅱ类模型药物吲哚美辛的结晶抑制影响.结果 羟丙甲基纤维素-E15(HPMC E15)具有强的结晶抑制效应,纤维素聚合物加入量增多、纤维素聚合物黏度的减少和离子强度的增大会导致聚合物抑制药物结晶能力的增强.结论 本实验可有助阐明纤维素类聚合物抑制超饱和状态下药物结晶的规律,对纤维素聚合物抑制药物结晶的实际应用提供科学指导.
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荒漠肉苁蓉和管花肉苁蓉指纹图谱比较研究
目的 建立荒漠肉苁蓉和管花肉苁蓉药材的超高效液相色谱法(UPLC)指纹图谱,并进行比较研究.方法 采用AC-QUITY UPLC(H)BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),乙腈-0.2％甲酸水梯度洗脱,流速:0.4 mL· min-1,检测波长为240 nm,柱温:40℃,采用对照品指认进行成分分析.结果 建立了两种肉苁蓉药材的超高效液相色谱法(UPLC)指纹图谱,标定了15个共有峰,鉴定其中5个共有峰,10批荒漠肉苁蓉药材相似度在0.667到0.905之间,10批管花肉苁蓉药材相似度在0.249到0.991之间,药典收载的两种肉苁蓉指纹图谱具有显著区别.结论 本法简便,重现性好,可用于区分荒漠肉苁蓉和管花肉苁蓉药材及药材的质量评价.
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软紫草中抑制PTP1B活性成分的研究
目的 研究软紫草中的化学成分,筛选天然蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制剂.方法 采用硅胶、MCI、ODS和Seph-adex LH-20等色谱技术进行分离纯化,通过理化方法和波谱数据进行分析和结构鉴定,对分离得到的化合物进行体外PTP1B抑制活性的筛选.结果 从软紫草中分离鉴定了8个化合物,分别为:去氧紫草素(1)、紫草素(2)、乙酰紫草素(3)、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁(4)、槲皮素(5)、山柰酚(6)、山柰素(7)和β-谷甾醇(8),其中1～4显示,出较好的PTP1B抑制活性,IC50分别为(0.80±0.16),(4.42±0.37),(1.02±0.13)和(0.36±0.08) μmol·L-1.构效关系研究显示,萘醌环可能是这类化合物抑制PTP1B活性的关键母核结构;2位长脂肪链上取代基的变化对于酶的抑制活性影响显著,取代基极性增大抑制活性会降低,末端双键的数目增多抑制活性增加.结论 紫草素衍生物1,4-萘醌类是一类治疗糖尿病的新型药物先导化合物,值得深入研究.
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重组人白介素-15理化对照品的分析鉴定
目的 为了对产品质量进行有效的控制,根据《中国药典》要求,对重组人白介素-15理化对照品进行分析鉴定.方法 参照2010年版《中国药典》三部,测定该样品的生物学活性、蛋白含量、纯度、等电点等指标;通过测定N-末端氨基酸序列、质谱相对分子质量与液质肽图,确证其一级结构.结果 该样品的比活性为1.03×107 IU·mg“;蛋白含量为(0.879±0.065) mg·mL-;非还原SDS-PAGE纯度为100.0％;分子排阻色谱纯度为100.0％;等电点测定结果为5.2;以上结果均符合质量标准要求.实测质谱相对分子质量(12 900.80)与理论值(12 900.71)一致;氨基酸序列与理论一致,氨基酸覆盖率100％;二硫键连接方式为Cys36-Cys86、Cys43-Cys89,与文献报道相符.结论 该理化对照品质量合格、氨基酸序列正确,可用于白介素-15的常规质量控制.
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曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物对不同乳腺癌细胞系的生物学效应研究
目的 研究曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物(T-DM1)对BT-474和HCC1954两种乳腺癌细胞系的不同生物学效应.方法 运用流式细胞术检测两种细胞系中人表皮生长因子受体2(HER2)表达水平;运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物与人表皮生长因子受体2抗原的结合能力;运用细胞增殖抑制/杀伤法,检测曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物对两种细胞系的剂量反应曲线.结果 人表皮生长因子受体2在两种细胞系中表达水平均较高;曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物与人表皮生长因子受体2抗原的结合能力相似;曲妥珠对BT474具有增殖抑制作用,但是对HCC1954无作用,曲妥珠单抗美坦新衍生物则对BT474和HCC1953均具有杀伤作用.结论 在细胞学模型中,曲妥珠单抗美坦新衍生物可以对人表皮生长因子受体2高表达但是曲妥珠耐药的细胞系具有生物学效应.
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首批逆转录酶活性测定国家标准品的研制
目的 研制首批逆转录酶活性测定国家标准品.方法 按《中国药典》2015年版三部相关要求,进行逆转录酶活性测定标准品的制备、检验,并使用热加速试验进行稳定性考察,以SYBR Green Ⅰ实时定量聚合酶链式反应法分别在4个实验室进行协作标定.结果 制备的逆转录酶活性测定标准品外观、无菌检查合格,水分含量为1.3％,分装精度为0.75％.在-20、4、25和37℃放置3个月和6个月的标准品与-70℃保存的标准品相比酶活性均没有下降.经4个实验室协作标定共22次,标准品酶活性的几何平均值为每支26 U,95％置信区间为每支22.95 ～30.45 U.结论 该批逆转录酶活性测定标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品使用,酶活性定为每支26 U.
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人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体质控方法的建立
目的 建立人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体的质控方法.方法 采用还原/非还原型毛细管凝胶电泳(CE-SDS)测定人源化抗VEGF单抗的纯度;在0.5和25.0 mg·mL-1浓度条件下,采用分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测定制品中单体和聚合物含量;毛细管等电聚焦电泳(cIEF)测定其等电点;阳离子交换高效色谱(CEX-HPLC)测定电荷异构体含量;反相高效色谱(RP-HPLC)和LC-MS检测Lys-C酶切后制品肽图;人血管内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cells,HuVEC)增殖抑制试验测定其生物学活性;其余项目按照2015年版《中国药典》要求进行.结果 人源化抗VEGF单抗原液和成品的还原型CE-SDS的纯度分别(97.77±0.25)％和(97.43±0.57)％,非还原型CE-SDS纯度分别为(98.97±0.15)％和(98.73±0.06)％;0.5 mg·mL-1浓度下,原液和成品的单体含量分别为(98.07±0.55)％和(98.20±0.52)％;25.0 mg·mL-1浓度下,原液和成品的聚合物含量分别为(2.00±0.53)％和(1.93±0.55)％;CEX-HPLC检测原液和成品的酸性区含量分别为(18.33±0.64)％和(18.60±0.44)％,主峰含量分别为(69.03±0.80)％和(69.20±0.44)％,碱性区含量分别为(12.70±1.37)％和(12.20±0.87)％;cIEF和LC-MS测定原液和成品的等电点和肽图均与参比品一致;HUVEC增殖抑制法测定原液和成品的生物学活性分别为参比品的(107±6)％和(100±10)％.其他各项指标均符合《中国药典》要求及其他相关要求.结论 初步建立了人源化抗VEGF单克隆抗体的质控方法,可用于该制品的常规质量控制.
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3种中国仓鼠卵巢细胞蛋白残留量检测试剂盒的比较研究
目的 比较市售3种中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量ELISA检测试剂盒(货号:A、B、C)的检测效果.方法 分别使用3种试剂盒检测不同CHO细胞株表达的治疗性单抗原液、提取CHO-K1细胞培养上清蛋白和3种CHO-HCP检测试剂盒自带CHO-HCP标准品,评价3种试剂盒的检测效果.将3种试剂盒的包被板与酶标二抗系列组合后,检测标准品和提取的CHO-K1细胞培养上清蛋白分析产生差异的原因.结果 单抗样品检测中,试剂盒A、B相对于试剂盒C的检测回收率约为1.89％和15.34％;CHO-K1细胞培养上清蛋白样品检测中,试剂盒A、B、C的回收率分别为:4.05％、21.52％和35.98％;试剂盒标准品互测中,3种试剂盒检测自身标准品的回收率均在(100±15)％内;试剂盒A检标准品B、C的平均回收率分别为1.28％和7.99％.试剂盒B检测标准品A、C的平均回收率分别为55.76％和25.08％.试剂盒C检测标准品A、B的平均回收率分别为266.65％和73.31％;通过包被板和酶标二抗的系列组合的检测结果推导:微孔板包被抗体对CHO-HCP的覆盖能力方面:A＞C＞B;二抗对HCP的覆盖能力方面:B＞C＞A.结论 该企业生产的3种CHO-HCP检测试剂盒中检测效率由高到低依次为C＞B＞A.
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重组人粒细胞刺激因子测活方法中几种常见显色方法的对比分析
目的 分析重组人粒细胞刺激因子生物学活性检测中,以NFS-60细胞为测活基础的几种常见显色/裂解/检测方法,所得检测结果是否一致.方法 应用NFS-60细胞/MTT染色法、NFS-60细胞/MTS染色法、NFS-60细胞/CCK-8染色法、NFS-60细胞/化学发光法等检测重组人粒细胞刺激因子生物学活性,并对结果进行统计分析.统计分析了NFS-60细胞/MTT法双波长(570 nm检测,630 nm参比)、单波长(570 nm检测和630 nm检测)结果.分析比较了NFS-60细胞/MTS动态检测法、NFS-60细胞/CCK-8动态法检测结果.结果 各生物学活性检测方法的检测结果差别不显著(P＞0.05);NFS-60/MTT法双波长、单波长检测结果差别不显著(P＞0.05).NFS-60细胞/MTS动态检测法、NFS-60细胞/CCK-8动态法与NFS-60细胞/MTT染色法检测结果间差别不显著(P＞0.05).结论 以NFS-60细胞为测活基础的几种常见的显色/裂解/检测方法,所得检测结果一致,为各实验室(应用不同显色/裂解/检测方法)给出的数据是否可以综合利用提供依据,为2015年版《中国药典》中重组人粒细胞刺激因子生物学活性检测方法的扩充提供支持,也为其他细胞因子生物学活性检测方法的扩充提供借鉴.
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我国重组药物质量控制技术体系的建立和应用研究
为确保生物技术药物安全和有效,国家食品药品监督管理总局发布了一系列法规和指南,中国食品药品检定研究院建立了有效的重组药物质量控制技术体系.笔者简要回顾生物技术制药领域重要发展阶段和我国重组药物研究开发情况,详细介绍我国30年来重组药物质量控制技术体系的建立和应用情况,内容包括:质量标准研究依据及法规要求,《中国药典》三部重组药物质量标准以及新版药典对重组药物质量控制的相关要求;1986年以来国家科技课题对中检院生物技术药质量控制技术体系的支持以及相关重组药物质量标准及其各类检定方法如生物学活性测定、蛋白含量测定、理化分析与蛋白结构鉴定、纯度与杂质测定等方法的建立与应用情况;生物学活性测定和含量测定国家标准品的研究建立以及用于肽图分析和等电点测定用的重组药物理化对照品质量标准建立和鉴定;2001年以来由重组药物室完成的包括注册检验、进口检验、抽验检验、委托检验、合同检验等各类生物技术药检验共计5 920批次检验报告结果分析.
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我国已上市重组人促红细胞生成素的一级结构比较
目的 对我国已上市的重组人促红细胞生成素的一级结构进行比对分析.方法 针对9家制药企业生产的重组人促红细胞生成素理化对照品,测定质谱相对分子质量、液质肽图、寡糖图谱及唾液酸含量,并对测定结果进行比对分析.结果 各样品去除N-糖基后实测相对分子质量均与理论值一致,误差均小于1;液质肽图测定中氨基酸覆盖率均为100％,序列均与理论一致;二硫键连接方式均为Cys7-Cys1 61、Cys29-Cys33;O-糖基化位点均为Ser 126,N-糖基化位点均为Ash24、Asn38、Asn83;各样品的糖基修饰方式存在差异,不同糖型的相对比例不一致;唾液酸含量测定结果介于(物质的量的比11.5～15.7)促红细胞生成素之间.结论 9家EPO制品的一级结构基本一致,差异主要表现在糖基修饰水平.
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重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白质控方法和质量标准研究
目的 建立酵母表达的重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的质控方法和质量标准.方法 采用荧光素酶报告基因法进行效价测定;分别用非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和分子筛液相色谱(SE-HPLC)测定纯度;反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行原液肽图分析;荧光定量PCR方法测定外源DNA残留量;液质联用技术分析重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白理化对照品的相对分子质量和氨基酸序列;其余检测项目按《中国药典》20LO年版三部规定进行.结果 用建立的方法对重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白3批原液、3批成品及1批理化对照品进行了质量控制研究,建立了针对该制品原液和成品的质量标准,原液和成品的检验结果均在质量标准控制范围内,符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》2010年版三部的要求;理化对照品质谱相对分子质量测定结果为71 361.0,与理论相对分子质量一致,氨基酸序列覆盖率达到97％.结论 建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定.
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抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的异质性分析
目的 建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADCs)抗CD30-vc-MMAE异质性分析的质控方法.方法 本实验应用了分子排阻色谱(SEC-HPLC)、毛细管电泳(CE-SDS)以及实时成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)等分析方法,对抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的大小异质性和电荷异质性进行了分析.结果 SEC-HPLC分析的纯度为(95.69±0.01)％;还原CE-SDS分析的纯度为(98.38±0.25)％,非还原CE-SDS可分离开6个主要峰,纯度之和为(97.82±0.44)％;和裸抗药物类似,iCIEF可有效的将酸区,碱区和主峰抗体进行较好地分离,主峰区的峰面积百分比为(43.52±2.03)％.结论 初步建立了一种基于半胱氨酸偶联方式的ADC药物抗CD30-vc-MMAE异质性分析的质控方法,为此类生物制品的质量控制提供参考.
