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MTT法检测蕲艾鞣酸体外抗肿瘤的活性
目的:探讨蕲艾鞣酸对人体肿瘤的治疗作用.方法:采用超声提取方法对蕲艾鞣酸进行提取,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑溴盐法(MTT法)在体外检测不同浓度的蕲艾鞣酸对人肝癌细胞HepG2的细胞毒性作用.在此基础上通过大孔树脂柱层析对蕲艾总鞣酸正丁醇部位提取分离,得到5个不同极性的鞣酸馏分,并通过MTT法比较不同极性的各提取物对肝癌细胞的抑制活性.结果:蕲艾鞣酸使体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖效率下降,且呈浓度与时间的依赖关系,具有一定的细胞毒性.结论:5个不同极性的提取物均具有抑制肝癌细胞生长的作用,其中40％甲醇部位对肝癌细胞的生长抑制作用强,是蕲艾鞣酸体外抗肝癌肿瘤主要的活性部位.
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普伐他汀对新生大鼠成骨细胞的作用研究
目的 研究普伐他汀对新生大鼠成骨细胞的作用.方法 用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法(MTT)、4-硝基苯磷酸二钠法(PNPP)、茜素红染色法分别检测普伐他汀对成骨细胞的活力,碱性磷酸酶(ALP)活力及骨矿化结节面积的作用.结果 普伐他汀在10-8～10-4 g/ml能促进成骨细胞增殖、提高成骨细胞碱性磷酸酶活性和促进新生大鼠成骨细胞骨结节形成.结论 普伐他汀能促进成骨细胞增殖、分化及矿化.
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重组人粒细胞刺激因子测活方法中几种常见显色方法的对比分析
目的 分析重组人粒细胞刺激因子生物学活性检测中,以NFS-60细胞为测活基础的几种常见显色/裂解/检测方法,所得检测结果是否一致.方法 应用NFS-60细胞/MTT染色法、NFS-60细胞/MTS染色法、NFS-60细胞/CCK-8染色法、NFS-60细胞/化学发光法等检测重组人粒细胞刺激因子生物学活性,并对结果进行统计分析.统计分析了NFS-60细胞/MTT法双波长(570 nm检测,630 nm参比)、单波长(570 nm检测和630 nm检测)结果.分析比较了NFS-60细胞/MTS动态检测法、NFS-60细胞/CCK-8动态法检测结果.结果 各生物学活性检测方法的检测结果差别不显著(P＞0.05);NFS-60/MTT法双波长、单波长检测结果差别不显著(P＞0.05).NFS-60细胞/MTS动态检测法、NFS-60细胞/CCK-8动态法与NFS-60细胞/MTT染色法检测结果间差别不显著(P＞0.05).结论 以NFS-60细胞为测活基础的几种常见的显色/裂解/检测方法,所得检测结果一致,为各实验室(应用不同显色/裂解/检测方法)给出的数据是否可以综合利用提供依据,为2015年版《中国药典》中重组人粒细胞刺激因子生物学活性检测方法的扩充提供支持,也为其他细胞因子生物学活性检测方法的扩充提供借鉴.
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种植合金CPTi和Ti-6Al-4V对内皮细胞增殖的影响及在细胞培养液中腐蚀情况分析
目的 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法体外评价CPTi和Ti-6A1-4V牙科种植体材料对人脐静脉血管内皮细胞(HU)增殖的影响,并检测这两种材料在细胞培养液中的腐蚀情况.方法 将HU(2×104/mL)接种于CPTi和Ti-6Al-4V金属表面,电镜观察细胞接种初期的形态,MTT法检测细胞接种后4h、1d、2d、3d、7d、10d和14 d所测的OD值,X射线光电子能谱分析(XPS)法分析2种金属在细胞培养液浸泡前后的表面层组元.结果 采用SPSS13.0软件分析,细胞接种后4h、1d、2d、3d、7d、10d和14 d所测的OD值表明2种材料没有统计学差异(P＜0.05)；接种后6h电镜下可以观察到细胞在CPTi和Ti-6Al-4V表面的形态基本类似,没有明显的形态和数量差别出现；XPS结果显示2种合金表面都有不同厚度的钝化膜形成,CPTi表面的钝化膜要比Ti-6Al-4V的厚一些.结论 CPTi和Ti-6Al-4V对HU的增殖没有影响,在培养基中也没有发生腐蚀.
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纳米材料体外细胞毒性试验标准的关键项目研究
目的:参考ASTM标准,研究纳米材料体外细胞毒性检测方法(MTT试验和LDH试验)中的关键项目指标,为制定纳米材料体外细胞毒性试验标准提供实验依据.方法:通过全波长扫描获得MTT试验和LDH试验的检测波长;测试阳性对照品APAP的使用剂量和保存条件;通过改变MTT试剂的配制介质,以及DMSO溶解后加入和不加入甘氨酸缓冲液来测试MTT试验条件;考察含不同浓度血清(10％,5％,2.5％)的细胞培养液对LDH试验的背景影响;在确定优化的实验条件下用MTT试验和LDH试验,对某纳米银凝胶产品进行细胞毒性评价.结果:MTT试验和LDH试验在测定吸光度时双波长可分别设定为540～570/680 nm和490/680 nm.APAP作为阳性对照的合适浓度为20～30 mmol·L-1,该溶液保存条件为-20℃,14 d内有效.血清对LDH试验的干扰与浓度呈正相关,为确保细胞正常生长,该方法中血清浓度确定为10％,血清造成的背景值干扰可从空白组扣除.纳米银凝胶产品MTT试验和LDH试验结果(IC50)分别为26.8 mg·mL-1和61.8 mg·mL-1.结论:MTT试验和LDH试验相结合可以在1个实验体系内获得2个检测结果,能够更全面地评价纳米材料可能引起的细胞毒性.本课题确定了纳米材料体外细胞毒性检测方法(MTT试验和LDH试验)的关键项目指标,使该方法具有良好的操作性与可行性.
