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尿十项分析仪测定尿液时的影响因素
随着尿分析仪的普及,其简单、快捷的优点被人们所接受,但由于试纸条在测定过程中易受尿液中化学因素的干扰,且由于操作误差等诸多因素影响,可造成假阳性、假阴性.现对造成假阳性、假阴性的原因进行分析:
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大便隐血试验邻联甲苯胺法与胶体金法的对比分析
大便隐血试验是临床上常用的检查方法之一,为临床诊断提供重要线索,但也有其局限性,粪便隐血持续阳性与偶尔一两次阳性的意义完全不同.本文对社区退休职工体检大便隐血试验500例用邻联甲苯胺法和胶体金法进行比较.由于邻联甲苯胺法受饮食、一些化学药品、铁剂等干扰,易形成假阳性或假阴性结果.用胶体金法以试纸条一步法检测大便隐血,有较高的敏感性和特异性.
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尿液沉渣检验在尿液常规检查中的重要性
尿液自动分析仪在国内各实验室的普及使用,使原有意义上的尿液常规从项目和临床意义上得到了充分扩展.由于其检验既简便又快速,为临床诊断提供了方便.但在实际工作中发现,由尿液分析仪引起的假阴性、假阳性占有较大比例.有些检验人员放松了对尿液沉渣镜检的重视,特别是对尿液分析检验结果显示正常的标本就不做沉渣镜检.
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临床免疫实验误差原因分析及解决方法
临床免疫实验室是检测传染性肝炎、性病、风湿病等多项检验的实验室,其检测结果直接为临床提供确诊依据,但由于多种原因致实验结果误差,给临床工程带来很多麻烦,是造成临床误诊误治和引起医疗纠纷的主要原因之一。为此笔者作了一些比较试验和临床调查,总结一下引起误差的原因和解决方法。常用的临床免疫实验方法有酶联免疫吸附试验、乳胶凝集试验、金标检测技术和免疫渗滤等等。大型综合性医院仪器设备比较先进,自动化程度高,而且大都参加全国或全省质量控制评比,相对误差比较小。但大多的中、小型医院很少注重质量质控工作或只是走走形式,没有严格控制临床实际标本误差的允许范围,致使误差增大,引起检测结果的不准确。 酶联免疫吸附试验是临床免疫应用广泛的试验方法。尽管目前试剂大都是由生物技术和基因工程生产的,具有很高的特异性,但由于试验方法不当也会造成误差,为了查找误差原因,我们作了一些对比试验:①对比自动化仪器操作和正确的手工操作;②对比正确的手工操作和非正确的手工操作。结果发现:自动化仪器结果误差小;正确的手工操作误差较自动化仪器大一些,但是在允许误差范围之内,而非正确的手工操作,其误差非常大,明显超出允许误差范围,是引起错误结果的主要原因。酶联免疫试验与其他试验所不同的是它有洗板过程:包括冲板力度、浸泡时间、孵育温度等等。那么冲力过大会造成本底丢失,引起假阴性结果,浸泡时间过短,洗脱不充分或冲力过大致洗液外溢,造成交叉污染,则会引起假阳性结果。另外试剂的质量、试剂中反应物质的含量也是引起误差的原因之一,如果试剂反应物质配比不合适,敏感度不同也可以引起假阴性和假阳性结果。我们曾作过不同试剂的对比:同一批号的质控血清两种不同试剂,其吸光度值相差10倍。因此在试剂选择上也要认真对待,选择有批准文号,临床标本具有一定梯度,敏感度高、稳定性好的试剂。
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微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因甲基化的应用
p16基因甲基化是癌症诊断的标志物之一.目前检测p16基因甲基化的甲基化特异性聚合酶链反应法(MSP)[1]灵敏度有限,对血浆中脱落肿瘤细胞少的标本易报告为假阴性.而微流控芯片电泳技术具有高灵敏度、成本低、分析速度快等特点[2].本研究用微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因异常甲基化,并探讨其临床应用价值.
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检测乙型肝炎表面抗原的一步法试剂的钩状效应分析
卫生部下发的<血站管理办法(暂行)>中规定,对献血者血液乙型肝炎病毒(HBV)检测的质量标准是"HBV表面抗原(HBsAg)酶免疫吸附法(ELISA):阴性",但未要求用一步法还是二步法检测.目前,国内检测HBsAg绝大多数采用ELISA中的双抗体夹心双位点一步法.用该方法检测HBsAg,当标本中的HBsAg浓度过高时,会因钩状效应(Hook)现象出现假阴性,而造成漏检,增加输血传播HBV的风险度,严重威胁输血安全.HBVe抗原(HBeAg)和HBV核心抗体(HBcAb)两项阳性时,大多数HBsAg都为阳性,但HBsAg阴性也可能存在漏检问题.为此,我们将对HBeAg和HBcAb两项阳性的血清标本进行不同比例稀释后,再用一步法和二步法进行分别检测及比较,以探讨一步法试剂的HOOK在HBsAg检测的漏检情况和二步法的临床应用意义及价值.
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聚合酶链反应技术检测结核性菌血症的影响因素与防护措施
以往运用聚合酶链反应(PCR)技术检测结核性菌血症阳性率极低,难于满足临床诊断的需要[1,2],我们针对该现象对造成假阴性的多方可能性因素进行了调查,并提出相应的防护措施.
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纸片法检测革兰阴性杆菌产AmpC酶研究
目前临床实验室通常只能根据耐药表型综合判断推测产AmpC酶细菌,但其假阳性和假阴性较高.Coudron等[1]提出的改良三维试验法以及分子生物学方法等虽然准确可靠,但过程繁琐复杂,需要时间长,只适合实验室研究,难以在临床常规检测中开展.为此,我们采用乙二胺四乙胺(EDTA)浸润纸片法,具有灵敏度高、特异性强、操作简便的优点.
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胶体金法检测妇科肿瘤患者高浓度HCG所致钩状效应的解决方案
钩状效应是影响定性和定免疫学检测准确性的一种现象,常导致检测结果呈假低值和假阴性的错误[1-2].高浓度HCG由于钩状效应易使定量检测结果偏低.我们发现3例滋养层细胞疾病患者的HCG浓度超过200 000 U/L,用化学发光免疫分析时结果严重偏低,现报告如下.
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遮断现象致新生儿Rh定型假阴性二例
Rh血型系统抗-D所致新生儿溶血病,患儿红细胞做直接抗人球蛋白试验时呈阳性,这时如果用IgM抗-D(盐水法)检查患儿的Rh血型,可能得到假阴性结果,称为遮断现象[1-2].遮断现象致患儿Rh定型假阴性的报道甚少,近笔者遇到2例,现报道如下.
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定量聚合酶链反应技术及在临床实验室应用的价值
随着分子生物学技术的发展,聚合酶链反应(PCR)技术已逐渐应用于遗传性疾病、肿瘤及感染性疾病等方面的诊断,如检测临床标本中病原体核酸序列、肿瘤基因突变情况、遗传性疾病的基因序列、人类白细胞表面抗原(HLA)配型、法医学方面的鉴定工作等。目前基因芯片的问世,将分子生物学技术又推向一个新的高潮。现就临床实验室开展PCR技术及PCR技术检测病原微生物及肿瘤基因的临床意义和定量PCR技术,谈谈我们的看法。 1.目前国内临床实验室应用PCR技术存在的问题:在设施方面,如仪器显示的温度与孔内的温度不一致,有孔内差;自动化程度较低,人工操作人为误差较大;实验室布局不合理,不能满足3个分开的房间进行分阶段操作(第1间实验室为混合试剂和质控,第2间实验室为标本提取和试剂混合,第3间实验室为PCR扩增及产物检测,工作人员应从第1间依次到第3间实验室,不能返回工作。室内空气流向依次从第1间到第3间实验室,不能逆流,以防止空气污染);加样器及试剂等容易污染导致假阳性。另外,标本采集及保存不合适和操作不当易出现假阴性。例如检测痰中结核杆菌,标本采集一定是痰而不是唾液。血清中检测HCV-RNA标本保存不当,使病原体被破坏.操作者不戴手套或说话唾液溅入标本,RNA降解,失去PCR的模板,造成假阴性结果。合理设计寡核苷酸序列,好在保守区,特异性强,无干扰。 琼脂糖凝胶电泳鉴别PCR产物的影响因素较多。如模板量大则拖尾现象严重,非特异性干扰带多。结果难于清楚判断。标本中有抑制物(Hb,高浓度尿素)均可出现假阴性。 目前美国病理学会(CAP)等组织以及临床实验室改进修正案(CLIA 1988)要求正规检测方法是先行PCR扩增,然后进行杂交来判断结果。但美国一些实验室,如印第安纳大学医学中心的病理和医学实验室用PCR方法检测临床标本中乙肝病毒(HBV)、EB病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)的DNA。他们认为在他们的实验室里,用琼脂糖凝胶电泳和电泳后再杂交的两种判断结果是一致的。因为他们实验室条件非常严格,而且每年都要通过美国CAP检查。但仍有些检测项目未得到美国FDA的批准。 2 .PCR技术检测的临床意义:我们认为对灵敏度和特异性基本上达到临床需要的检测技术,不必一律采用PCR技术。目前没有其他诊断技术可以检测的疾病,如基因缺失、易位、突变及病原体需要较长时间培养或培养难度较大的疾病应考虑用PCR方法。如人类免疫缺陷病毒(HIV)是一种慢性病毒,在细胞内的繁殖水平比较低,感染后潜伏期较长,病毒难以培养而且需要较长时间培养。在对HIV抗原(HIV-Ag)和抗体(HIV-Ab)的检测结果难以判断时,可用PCR技术作为确认手段。当前临床标本一般仅检测HIV-Ab。在美国,血液制品既检测HIV-Ab也检测HIV-P24Ag 。国外有学者报道,感染HIV的患者血清HIV-P24Ag出现早于HIV-Ab10天左右。发现HIV-P24Ag(+)者,HIV PCR(+)。但HIV PCR(+)者,HIV- P24Ag可呈现(-),此时患者已具有传染性。PCR技术可用于艾滋病的早期诊断,定量PCR技术还是艾滋病疗效观察的有效检测手段。 用PCR和杂交方法对HCV基因分型、早期诊断和治疗监测均具有较大的临床意义,这已被国内外医学界的工作者公认。 结核分枝杆菌(MTB)培养时间一般要30~50天,培养出来的分枝杆菌还要鉴定是人型还是鸟型。涂片检查所需的抗酸杆菌也要一定的浓度。因此可以采用PCR方法检测。但PCR技术不能完全取代结核杆菌培养。PCR在药敏结果判断方面亦不理想。 当前有检测沙眼衣原体抗原的试剂盒,特异性高,但敏感性不甚满意。衣原体需在细胞中培养后进行鉴定,对临床常规检验工作有一定的难度。应用PCR技术检测沙眼衣原体有一定的临床意义。 美国FDA已批准HIV、MTB、沙眼衣原体的PCR或杂交检测试剂盒。也批准了HPV的过筛检测,对于HPV各型的检测,目前尚未批准。MTB的靶序列是16 s DNA的584bp。其后带用杂交检测。沙眼衣原体的检测试剂盒于1993年通过FDA批准,目前用特殊探针进行杂交后用免疫化学法检测。
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国际诊断准确研究报告标准介绍
诊断性试验研究的目的是为临床医生在对疾病进行诊断或对健康状况筛查作出决策的重要依据.诊断性试验研究的内容不仅是指常规意义上的实验室检查,还包括对症状、体征、影像学检查、心电图等多种医学仪器检查的诊断价值进行的评价.它可以验证一项新的诊断措施的价值,也可以对传统的两种诊断方法进行比较,其研究结果将促进准确性、敏感度和特异性高的诊断措施在临床的推广应用,摒弃那些过时的、容易造成假阳性或假阴性结果的诊断措施.
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评价幽门螺杆菌根除治疗效果的检查方法和时机选择
幽门螺杆菌(Hp)根除治疗后,因细菌数量减少和尿素酶活性受抑制或其他产尿素酶的细菌过度生长,常导致多种Hp检测方法出现假阴性或假阳性,影响对Hp根除治疗效果的评价.本文对根除治疗后Hp检查方法和时机的选择加以综述,Hp根除治疗后6 mo,尿素酶依赖性试验(RUT或13C-UBT)评价根除治疗效果准确性高,粪便Hp抗原(却SA)试验在根除治疗后6 mo仍有一定的假阳性,准确性不如尿素酶依赖性试验.
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PET和CT在复发转移性结直肠癌诊治中应用
目的:评价PET和CT诊断复发转移性大肠癌的价值.方法:大肠癌术后疑有复发转移的患者62例,行PET检查,其中40例同时行CT检查.术前4例,术后58例.男46例,女16例.随访时间4-36 mo.18氟-FDG-PET的诊断结果基于医师的肉眼判断、SUV值(the standard uptake value)和CT图像三者结果而得出的.结果:PET和CT检查阳性是34例和21例,真阴性15例和7例,假阳性5例和5例,假阴性1例和7例.PET和CT的符合率89.1%和70.0%、灵敏度97.1%和80.8%,特异性75.0%和50.0%,阳性预测值87.2%和75.0%,阴性预测值93.8%和58.3%.二者诊断符合率比较P=0.025.PET阳性病灶的SUV值为4.03±1.60.PET对临床处理的影响率为12.7%(n=7).结论:PET结合常规诊断方法可有效地提高结直肠癌复发转移病灶诊断的正确性.
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应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA
目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30 μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.
关键词: 乙型肝炎病毒 竞争性荧光定量聚合酶链反应 假阴性 -
TDI-FP法分析肝细胞癌组织中HBV核心启动子双突变
目的:通过TDI-FP法检测肝细胞癌组织中HBV DNA核心启动子区A1762 T和G1764A双突变并分析二者之间的相关性,同时建立一种新的突变检测方法.方法:以20例肝细胞癌组织为研究标本,通过PCR扩增含有HBV DNA核心启动子区的DNA片段,然后用TDI-FP法检测R110或TAMRA标记ddNTP的FP值,鉴定nt1762和nt1764的基因型.结果:20例肝细胞癌组织中经HBV检测试剂盒鉴定后,18例为HBV感染阳性,阳性率为90%.经TDI-FP检测,其中有13例为T1762和A1764双突变型,1例为T1762-A1764/A1762-G1764突变杂合型,4例检测结果为阴性.经测序,阳性结果及突变杂合型与TDI-FP结果完全吻合,阴性结果中2例在nt1762前有8个核苷酸缺失突变,导致突变检测引物无法与模板结合,故产生TDI-FP检测出现假阴性结果.在肝细胞癌组织HBV DNA中,Ti762-A1764突变阳性率为75%,突变杂合型为5%,野生型为10%.结论:在肝细胞癌组织中,HBV感染率非常高,而且其核心启动子区出现nt1762和nt1764双突变率较高,提示双突变与肝细胞癌关系密切;同时本实验所建立的TDI-FP法操作快速简便,可以进行高通量自动化操作,具有进一步推广应用的前景.
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ELISA法检测HBsAb产生钩状效应2例临床分析
ELISA检测抗原抗体因其成本低、灵敏度高、特异性强等优点被实验室广泛应用。由于目前多采用一步法检测,当血清中抗原抗体浓度过高时可能会产生钩状效应(HOOK效应),而引起假阴性[1-14]。在采用一步法检测时,钩状效应很难被发现。对此效应的报道主要集中在HBsAg的检测。本课题组在临床工作中遇到两例体检者,应用ELISA一步法检测结果均提示HBsAb阴性,但被检测对象均对结果表示异议,自述3个月前曾检测HBsAb为弱阳性,并于当时分别注射过10μg乙肝疫苗。后经倍比稀释[15]用ELISA一步法检测,确认其HBsAb为阳性,现报告如下。
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实时荧光定量聚合酶链反应法检测痰结核杆菌DNA及其临床应用
结核杆菌培养法周期长,而且存在药物抑菌现象,容易产生假阴性结果.痰涂片抗酸染色计数法在敏感度、特异度等方面均不理想.本研究采用Taqman荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术,检测痰标本结核杆菌载量的实时荧光定量PCR体系,评价该体系检测结核杆菌以及监控抗结核药效的可行性.
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粪便潜血试验的临床应用
粪便潜血试验(fecal occult blood test,FOBT)是测定消化道出血的一种方法,主要用于检验肉眼不可见的少量出血,是临床诊断和检测消化道出血性疾病的一项重要常规检查,也是普查和筛选消化道肿瘤的有效手段.临床应用的FOBT主要有化学法和免疫法两种.过去一直采用化学法检测粪便潜血,其中邻甲苯胺法为1983年中华医学会全国临床检验方法学术讨论会推荐的方法,但易出现假阳性.近年采用 了免疫法,其中血红蛋白单克隆抗体免疫法与传统的化学法相比,灵敏度及特异性都有很大提高,且不受相关食物及药物的影响,但也存在假阴性现象;转铁蛋白单克隆抗体免疫法可避免血红蛋白单克隆抗体免疫法(胶体金法)的后带现象和血红蛋白被消化而出现的假阴性,是将来的发展方向.
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冠心病无创检查的现状与进展
在日常临床工作中,拟诊冠心病时需作一系列检查,首先考虑无创检查,在众多的检查方法中,如何正确选择,是个很重要的问题.本文介绍的四种方法认为有意义,对临床工作较有帮助.一、心电图(ECG)运动试验心电图运动试验为普遍、简便、廉价,相对安全的方法,大约每检查2 500例可能有1例发生急性心肌梗死或死亡,故负责检查的医生应技术熟练和备有抢救的设备.对受检查的患者病情和用药情况应很好了解,地高辛、β-阻滞剂、血管扩张药、降压药等均可影响检查结果.所用药物在检查前至少停用4~5个半衰期(通常为2 d),停药虽不容易,但要注意可能引起假阳性和假阴性问题.根据132项科研报告,此方法检测冠心病的敏感性为68%,特异性为77%[1].由于诊断标准的不同和对象的不一,各学者报告的结果互有出入.低危者的敏感性下降,可仅45%[2].女性敏感性和特异性均比男性低.