第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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益气滋肾合剂对牙周炎大鼠外周血TNF-α、IL-1β含量及牙槽骨微观形态的影响
目的 观察益气滋肾合剂对牙周炎大鼠外周血TNF-α和IL-1β水平的影响,探讨其治疗牙周炎的机制.方法 选用80只牙体牙列完整,无龋坏及牙周病的5月龄Wistar大鼠,雌雄各半,体质量200～250 g,随机分为5组:正常对照(n=10,N)组;模型对照(n=15,A)组,采用"牙颈部钢丝结扎+高糖饮食+激素"局部与全身因素相结合的方法,建立牙周炎动物模型;益气滋肾合剂(灌胃)高剂量[20 g/(kg·d),B1]、中剂量[10 g/(kg·d),B2]、低剂量[500 mg/(kg·d),B3]组(n=15).12周后通过对大鼠一般状态、牙齿松动度、大鼠外周血中IL-1β、TNF-α含量的变化和大鼠牙槽骨微观形态分析,评价不同浓度的益气滋肾合剂治疗大鼠牙周炎的效果.结果 大鼠外周血中TNF-α、IL-1βA组[(4.909±0 505),(0.318±0.086)]显著高于B1[(4.051±0.463),(0.253±0.193)]、B2[(4.085±0.374),(0.266±0.062)]组(P<0.05);Micro-CT成像分析得出骨小梁数量和骨小梁分离度值A组[(1.24±0.22),(789.3±157.0)]显著低于B1[(1 95±0.34),(362.3±62.7)]、B2[(1.88±0.39),(396.2±58.2)]组(P<0.05).结论 益气滋肾合剂可以降低大鼠外周血中IL-1β、TNF-α的水平,增加牙槽骨密度,对大鼠牙周炎具有治疗作用.
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GW3965在Raji细胞中对BLyS表达的影响
目的 探讨肝X受体(liver X receptors,LXRs)的特异性激动剂GW3965在Raji细胞中对B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)表达的影响.方法 MTT法检测不同浓度的GW3965(浓度分别为0.5、5、10 μmol/L)对Raji细胞活性的影响,观察时间为加入GW3965共孵育后24 h.用LXR的特异性激动剂GW3965刺激人B细胞淋巴瘤株Raji细胞,经 RT-PCR 检测 LXR特异性靶基因三磷酸腺苷结合盒A1 (ATP-binding cassette,ABCA1) mRNA的表达;经 RT-PCR和 Western blot 检测BLyS的表达.结果 对照组1 ‰DMSO D(492)为(0.632±0.055),0 5、5 μmol/L和10 μmol/L的GW3965 D(492)为(0.609±0.073)、(0.612±0.052)和(0.628±0.055).LXR的特异性配体GW3965对细胞活性无影响(P>0.05).GW3965作用于Raji细胞后,ABCA1 mRNA 表达剂量依赖性上调,LXR活化后可在转录和翻译水平剂量依赖性下调抑制BLyS的表达.结论 LXR在Raji细胞中可抑制BLyS的表达.
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门静脉血流阻断加重梗阻性黄疸大鼠肝细胞损伤
目的 探讨门静脉血流阻断对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的影响.方法 Wistar大鼠60只,分为A组:胆道再通、门静脉周围游离、切除肝尾状叶,90 min后关腹腔;B组:胆道再通、肝尾状叶分流门静脉、余肝门静脉血流阻断90 min、恢复正常门静脉血流、切除肝尾状叶,关腹.术后0 、1、6、24、72 h采集标本,进行组织学观察,测定肝功能及内毒素水平变化并利用TUNEL法检测肝细胞凋亡.结果 术后B组肝功能损害更明显(P<0.05),内毒素水平更高,且肝细胞凋亡也更明显.结论 胆道梗阻条件下门静脉血流阻断可能通过损伤肝细胞线粒体导致肝细胞凋亡.
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美洛昔康对铝过负荷致雄鼠生殖损害的保护作用
目的 探讨COX-2抑制剂美洛昔康对慢性铝过负荷所致雄性大鼠生殖损害的保护作用.方法 雄性大鼠分为5组,每组6只,即正常对照组、铝负荷组[葡萄糖酸铝Al3+ 200 mg/(kg·d)灌胃]、美洛昔康组[美洛昔康3 mg/(kg·d)灌胃]、铝负荷+小剂量美洛昔康组[葡萄糖酸铝Al3+ 200 mg/(kg·d) +美洛昔康1 mg/(kg·d)灌胃]及铝负荷+大剂量美洛昔康组[葡萄糖酸铝Al3+ 200 mg/(kg·d)+美洛昔康3 mg/(kg·d)灌胃].每周给药5 d,连续20周后处死大鼠取出睾丸附睾称质量,分别计算每只大鼠睾丸、附睾系数(脏器质量/体质量);HE染色观察睾丸附睾的形态学变化.结果 正常对照组、美洛昔康组、铝负荷组、铝负荷+小剂量美洛昔康组、铝负荷+大剂量美洛昔康组大鼠体质量均值分别是572.2、568.8、451.8、552.3、565.7 g,睾丸质量均值分别是4.92、4.91、4.07、4.65、4.86 g,附睾质量均值分别是1.36、1.33、1.12、1.25、1.32 g,铝负荷组大鼠的体质量、睾丸及附睾质量明显降低(P<0.05),美洛昔康组、铝负荷+大剂量美洛昔康组与正常对照组比较无显著差异(P>0.05),铝负荷+小剂量美洛昔康组大鼠体质量降低无显著意义(P>0.05),但睾丸附睾质量降低具有显著差异(P<0.05),5组间睾丸附睾系数无显著性差异(P>0.05).HE染色见铝负荷组曲细精管的生精上皮明显变薄且几乎看不到精细胞、在曲细精管腔内精子数量很少或没有;铝负荷+大剂量美洛昔康组在曲细精管内见大量的各级精细胞及精子;美洛昔康组见睾丸的组织学形态完全正常.铝负荷组大鼠睾丸组织COX-2蛋白表达明显增加(P<0.05);美洛昔康可明显抑制COX-2蛋白表达,大剂量美洛昔康(3 mg/kg)组抑制效应更明显(P<0.05).结论 美洛昔康具有改善铝所致的生殖损害的潜能;其机制可能与抑制COX-2活性,减轻炎症反应和氧化应激损伤有关.
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大鼠胃溃疡自愈期间三叶因子2的变化
目的 研究大鼠实验性胃溃疡自愈期间三叶因子2(trefoil factor family 2,TFF2)在血清、胃液和胃黏膜组织中的变化及意义.方法 SD大鼠按随机数字表法分为溃疡组(n=42)、盐水组(n=42)、正常组(n=6),胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡模型,免疫组织化学法检测各组大鼠胃黏膜组织TFF2的表达变化;ELISA法检测各实验组大鼠血清及胃液TFF2变化趋势.结果 胃黏膜、血液及胃液检测结果显示在溃疡术后早期(1、2、4、6 d)TFF2增多较为明显.胃黏膜TFF2原位表达以溃疡术后6 d阳性细胞多(24.50±5.68)(P<0.01),表达强度较强,可见以壁细胞、颈黏液细胞为主的阳性表达;血清TFF2以溃疡2 d含量高(338.62±58.72) pmol/L(P<0.01);胃液TFF2含量以溃疡术后1 d高(5 021.65±291.69) pmol/L.胃黏膜、血液、胃液TFF2表达量自溃疡术后10 d有所下降,但均高于相应盐水组及正常组(P<0.05,P<0.01).结论 在胃溃疡自愈早期,TFF2在胃黏膜、血液和胃液表达水平均较高,其通过不同的表达途径参与了胃溃疡修复过程.
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新辅助内分泌联合治疗与单纯根治性手术对前列腺癌预后和疗效的Meta分析
目的 系统评价新辅助内分泌治疗局限性前列腺癌的有效性.方法 计算机检索Cochrane图书馆、PubMed、EMBASE、中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库、中文科技期刊数据库和万方数据库.检索时间为1993-2010年.并追查已纳入文献的参考文献.收集有关新辅助内分泌治疗与单纯根治性手术治疗前列腺癌的随机对照研究,并按Cochrane协作网推荐的方法进行系统评价.结果 共纳入18项研究,4 267例患者.Meta分析结果显示:新辅助内分泌治疗对精囊浸润率无显著改善,但可以改善前列腺癌无生化复发生存率(RR 1.41,95%CI=1.12～1.78,P=0.003),显著降低手术切缘阳性率(RR 0.48,95%CI=0.43～0.53,P<0.05)、淋巴结转移率(RR 0．64，95%CI=0．44～0.93,P=0.02).结论 新辅助内分泌治疗可以显著降低手术切缘阳性率、淋巴结转移率及前列腺癌无生化复发生存率,但对精囊浸润率无改善.
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4种不同含氟窝沟封闭剂氟离子释放和回收的体外研究
目的 检测4种不同含氟窝沟封闭剂的氟离子释放和回收能力.方法 采用4种不同的含氟窝沟封闭剂,包括Fuji VⅡ、FujiⅡLC、Fissurit F 以及Teethmate F-1.将各种材料制备成圆盘状样本,储存在含有5 ml去离子水的聚乙烯试管中,21 d后,用1.23%酸性磷酸氟(APF)凝胶处理每个样本,用氟离子选择性电极检测1～7、14、21、22、28、35 d和42 d的氟释放量.结果 玻璃离子封闭剂Fuji VⅡ氟离子释放量高;树脂加强型玻璃离子封闭剂FujiⅡLC氟离子回收能力强;Fissurit F氟离子回收能力差.在整个检测时间段内,玻璃离子类封闭剂比其他封闭剂有更高的氟离子释放(P<0.05);4种封闭剂在APF凝胶处理后氟离子释放均有显著性增高(P<0.05).结论 在6周的短期研究中,玻璃离子为基础的封闭剂Fuji VⅡ和FujiⅡLC与其他封闭剂比较显示了较高的氟离子释放及回收能力.
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电离辐射诱导小鼠小肠隐窝和绒毛的基因表达分析
目的 通过基因表达的芯片分析方法,观察电离辐射引起的小鼠小肠上皮隐窝和绒毛基因表达的改变,探讨隐窝细胞的DNA损伤和修复、细胞周期调控的特点.方法 20只5周龄C57/BL6小鼠雄性20～22 g,随机分组,对照组不经电离辐照,处理组经12 Gy电离辐射全身照射后,于4、8、24 h分离小肠隐窝和绒毛上皮细胞,用cDNA表达谱芯片分别检测隐窝和绒毛基因表达的动态变化,对上调或下调的基因进行聚类分析,并重点对DNA损伤修复相关和细胞周期相关基因进行分析.结果 与对照组相比上调或下调2倍以上的基因(P<0.01)经聚类分析被归属为各细胞信号通路,其中主要涉及p53通路、MAPK通路、凋亡、细胞周期以及免疫反应(P<0.05),将P值排序发现p53通路、MAPK通路对隐窝的调控更为明显.各DNA修复途径代表基因在隐窝和绒毛中均有不同程度的上调表达,且与细胞周期的变化相一致.基因表达特点提示隐窝细胞以准确性高的方式(核苷酸外切修复、同源重组)进行DNA损伤修复,而绒毛细胞则以快速但易发生错误修复的方式(错配修复)恢复基因的完整性.结论 电离辐射诱导的DNA损伤反应与细胞分化程度相关,隐窝细胞对损伤更敏感.
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肝脏靶向表达大鼠白介素-10基因对猪血清诱导的大鼠肝纤维化的抑制
目的 探讨肝脏靶向表达rIL-10基因对猪血清诱导的大鼠肝纤维化的抑制作用.方法 rIL-10基因通过尾静脉快速大容量注射法转移至大鼠体内,RT-PCR法检测大鼠肝、肾、脾和肺组织rIL-10 mRNA的表达及S-P免疫组化法检测rIL-10蛋白在肝脏中表达.30只体质量100～120 g清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(n=6)、纤维化模型对照组(n=8)、rIL-10基因干预组(n=8)和空质粒对照组(n=8).正常对照组与其余3组大鼠腹腔分别注射生理盐水和猪血清,0.5 ml/只,每周2次.第5周开始造模同时,rIL-10基因干预组和空质粒对照组大鼠分别从尾静脉注射pcDNA3-rIL-10和pcDNA3空质粒,每周1次.第8周末处死全部大鼠收集组织和血清备用.HE、天狼星红染色分别检测各组肝组织病理形态学和Ⅰ、Ⅲ胶原的改变,生化检测血清ALT和AST含量.结果 RT-PCR和免疫组化证实rIL-10基因经尾静脉快速大容量注射转染到大鼠体内后主要在肝组织中转录及表达;纤维化模型和空质粒对照组:HE染色显示大鼠肝细胞脂肪变性,炎性细胞浸润,大量胶原沉积形成粗细不等的纤维隔,部分假小叶形成;天狼星红染色显示肝组织中大量Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维沉积;血清中ALT和AST表达水平较正常对照组明显升高(P<0.01).与对照组比较,rIL-10基因干预组大鼠HE染色显示肝细胞变性坏死程度减轻、炎细胞的浸润减少,胶原沉积明显减少,天狼星红染色显示Ⅰ、Ⅲ型胶沉积面积显著下降(P<0.01),血清中ALT和AST表达水平显著降低(P<0.01).结论尾静脉快速大容量注射法可使rIL-10基因在肝组织靶向表达,靶向表达的rIL-10有效抑制猪血清诱导的大鼠肝纤维化形成.
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高血压治疗依从性量表的编制及信效度研究
目的 研制高血压治疗依从性量表,检验量表的信度和效度.方法 根据文献研究及访谈法发展条目池,经研究小组讨论及专家评定后形成预试量表,通过目的 抽样方法选取重庆市3所教学医院、3家社区卫生服务中心404例高血压患者进行测试,采用探索性因素分析和相关分析等检验量表的信度和效度.结果 探索性因素分析提取的4个公因子符合量表编制的理论结构,各条目在其公因子的负荷值为0.494～0.890.量表总分与4个因子的相关系数为0.681、0.647、0.736、0.421(P<0.01).量表总分与血压控制之间有良好相关性(P<0.01).量表总的Cronbach α系数为0 862,4个因子的Cronbach α系数为0.894、0.866、0.827、0.874.总量表的重测信度系数为0.958,各因子重测信度系数为0.791～0.939.结论 初步建立的高血压治疗依从性量表具有良好的信度和效度,可作为高血压治疗依从性评估的测量工具.
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磁共振报告基因magA的慢病毒载体质粒构建及体外表达
目的 构建携带磁共振报告基因magA的慢病毒载体质粒,初步检测其体外转铁效应.方法 采用人工DNA合成技术合成目的 基因magA,DNA重组技术将magA基因连接入慢病毒表达载体质粒pLenti-EGFP,酶切及DNA测序鉴定重组质粒pLenti-EGFP/magA的准确性.包装、包膜及重组质粒共转染293FT细胞包装慢病毒,收集包被magA基因的慢病毒上清并感染293T靶细胞,细胞培养基内加入500 μmol/L枸橼酸铁连续4次传代,荧光显微镜观察并提取细胞行台盼蓝排除实验和普鲁士蓝染色,同时设立对照组行同样方法实验.结果酶切和DNA测序分析证实magA基因准确克隆入慢病毒表达载体设计位点,合成目的 基因序列与GenBank中magA序列完全一致.荧光显微镜下观察包装细胞293FT细胞质内有大量绿色荧光表达,病毒滴度达到108 Tu/μl.慢病毒感染293T靶细胞后,细胞内稳定表达EGFP,且效率>80%.实验组及对照组台盼蓝拒染率分别为(92.80±2.65)、(93.50±1.29),2组拒染率差异无统计学意义(P>0 05).普鲁士蓝染色发现实验组细胞内有大量蓝染铁颗粒形成,对照组呈阴性.结论 成功构建了携带磁共振报告基因magA的慢病毒表达载体,证实了magA基因在哺乳动物293T靶细胞内的转铁作用.
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瞬时感受器电位香草酸受体4型通道蛋白在气道压力诱导大鼠气道黏液高分泌中的作用
目的 探讨机械通气产生的气道压力对大鼠气道黏液高分泌的影响及机制.方法 48只SD大鼠分为4组,实施麻醉和气管切开后接小动物呼吸机进行机械通气.①对照组(8只):大鼠气管插管后自主呼吸;②机械通气组:对大鼠采用压力控制通气模式机械通气,根据气道压力水平再分10、20、30 cmH2O 3个亚组,每个亚组8只大鼠,机械通气6 h;③钌红干预组(8只):施加机械通气前鼠尾静脉注射瞬时感受器电位香草酸受体4型通道蛋白(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)非特异性阻断剂钌红(ruthenium red,RR)进行预处理;④4α-PDD干预组(8只):机械通气前鼠尾静脉注射4-α-佛波醇-12,13-二癸酸(4-α-Phorbol-12,13-didecanoate,4α-PDD) 进行预处理.实验完毕后收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本.采用ELISA法检测BALF中MUC5AC蛋白含量,RT-PCR法检测大鼠肺组织MUC5AC mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,机械通气组MUC5AC在蛋白及转录水平表达均增加,呈压力依赖性.30 cmH2O 亚组MUC5AC蛋白及mRNA转录水平分别为[(0.71±0.10)、(6.23±0.54)]明显高于对照组[(0.29±0 05)、(1.68±0.35)](P<0.01).在30 cmH2O压力水平下MUC5AC的表达增加可被RR干预减弱[(0.41±0.06)、(4 15±0 22)](P<0.05),被4α-PDD干预增强[(1.12±0.09)、(8.47±0.35)](P<0.05).结论 机械通气产生的气道压力可以通过作用于TRPV4诱导MUC5AC表达增加,这可能是压力诱导气道黏液高分泌的调节机制之一.
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针对survivin的反义寡核苷酸对人胃癌细胞株BGC-823生长、侵袭、迁移能力的影响
目的 观察生存素(survivin)反义寡核苷酸(anti-survivin oligonucleotides,ASODN)对人胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响.方法 脂质体介导ASODN或对照SODN转染人胃癌细胞株BGC-823后,RT-PCR方法检测survivin的mRNA表达水平,四氮唑盐(MTT)法检测ASODN或SODN对肿瘤细胞的增殖抑制效果,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的改变,流式细胞术检测细胞周期及凋亡指数的改变.结果 ASODN转染可明显降低survivin 的表达(P<0.05),并且ASODN转染具有以浓度及时间依赖的方式抑制BGC-823细胞增殖的作用(P<0.05).用600 nmol/L浓度的ASODN转染BGC-823后,BGC-823细胞迁移和侵袭能力下降(P<0.05),细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)由(1.62±0.36)增加到(11.31±0.38)(P<0.01),而增殖指数(proliferation index,PI)则由(43.80±0.81)下降至(27.77±2.97)(P<0.05).停滞于G2/M期的细胞明显增加(P<0.01).结论 下调survivin表达的ASODN可通过抑制胃癌细胞增殖、诱导凋亡、降低胃癌细胞侵袭和迁移能力而发挥抗肿瘤作用.
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运用新的体视学方法定量研究大鼠海马结构神经元和突触数目
目的 建立定量研究海马结构神经元数目和突触数目的 无偏体视学方法.方法选择18月龄正常雌性Long-Evans大鼠5只,取一侧大脑半球进行石蜡包埋后切取14 μm厚的冠状连续切片.根据均匀系统随机抽样的原则,在包含海马结构的连续切片中均匀随机地抽取切片.将抽取的一组切片进行神经元的组织化学染色,以计数神经元的数目;将抽取的另外一组切片进行突触的免疫组织化学染色,以计数突触的数目.在体视学设备下,计数大鼠海马结构CA1和DG的神经元数目和大鼠海马结构CA1、CA1放射层(CA1sr)、齿状回内分子层(DGiml)和齿状回外分子层(DGoml)的突触数目.结果 得到大鼠海马结构CA1和DG的神经元数目分别为[(3.17×105)±(2.23×104)]和[(1.70×106)±(1 87×105)].大鼠海马结构CA1、CA1 CA1sr、DGiml和 DGoml的突触数目分别为[(1.04×108)±(5.39×106)]、[(4 36×107)±(3.78×106)]、[(1.87×107)±(1.81×106)]和[(4.48×107)±(7.29×105)].结论 本研究建立了定量研究海马结构各区域内神经元数目和突触数目的 方法,可为定量研究正常老年及各种神经系统退行性疾病状态下海马结构各区域内神经元数目、突触数目及神经元与突触数目关系的改变提供方法学依据.
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博尔纳病病毒荧光定量PCR试剂盒扩增缓冲液的优化
目的 选择并优化博尔纳病病毒荧光定量PCR TaqMan探针法反应体系中的扩增缓冲液,使PCR反应体系对该病毒p24模板基因的扩增效率得到明显提高.方法 通过常规PCR比较选择3种常用酸(盐酸、磷酸和硫酸)所滴定的缓冲液体系,在其基础上选择适合浓度的硫酸铵配制TSS buffer,在TSS buffer中分别加入四甲基氯化铵、Triton X-100、二甲亚砜和甜菜碱这4种常用的PCR添加剂,并确定各自的佳工作浓度,选择扩增效果较好的添加剂与其他添加剂进行依次组合,寻找佳的添加剂组合,后用荧光定量PCR进行对比验证.结果 在滴定酸上选择了效果好的硫酸,配制TSS buffer硫酸铵的佳终浓度为6 mmol/L.在添加剂的优化组合上,1.5 mol/L甜菜碱、0.15% Triton X-100、8 mmol/L四甲基氯化铵和TSS buffer组合成的TBTT buffer效果佳,在其与TaKaRa PCR buffer的对比中,TBTT buffer效果明显好于后者.结论 成功研制优化出适合扩增博尔纳病病毒p24模板基因的扩增缓冲液.
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24例Wiskott-Aldrich综合征患儿基因型与临床表现型的关系
目的 分析24例Wiskott-Aldrich综合征(Wiskott-Aldrich syndrome,WAS)患儿基因型与临床表现型关系.方法 收集24例WAS患儿临床资料,进行临床表现型评分.流式细胞术检测患儿外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)、WAS蛋白(Wiskott-Aldrich syndrome protein,WASP)的表达.对WASP基因进行直接测序,并分析基因型与表现型的关系.结果 24例患儿系男性,2例临床表现型评分为2分,为X连锁血小板减少症(X-linked thrombocytopenia,XLT);其余患儿评分均≥3分,为典型WAS.除1例WASP正常表达,2例WASP表达减少外,其余患儿WASP均为阴性.发现WASP基因突变包括7例错义突变、4例无义突变、6例缺失突变及7例拼接位点突变.共发现基因突变21种、新发突变3种,即180 C>T(A49V)、342-343del CA(S103fsX121)、IVS7+2 T>C.发现已报道的热点突变6种,包括291 G>A(R86H)、291G>T(R86L)、1035del G(G334fsX444)、665 C>T(R211X)、IVS6+5 G>A、IVS8+1 G>A.错义突变患儿2例为XLT,其余均为典型WAS.无义突变、缺失突变及拼接位点突变的患儿均为评分3～5分的典型WAS,部分患儿表现型严重.结论 WASP下游区域的基因突变、无义、缺失、拼接位点突变类型则更可能导致WASP表达缺失、不稳定或截短型WASP,临床表型多为典型WAS.环境因素可导致患儿表现型加重.
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儿童结核病101例临床分离结核分枝杆菌多位点串联重复序列分型
目的 了解重庆地区儿童结核病中结核分枝杆菌临床分离株的数目可变串联重复序列(variable number tandem repeats,VNTR)的分布特征,寻找适合的VNTR位点组合.方法 采用多位点串联重复序列(multiple locus VNTR analysis,MLVA)分型方法,选择标化的24个VNTR位点,对101例结核分枝杆菌临床分离株DNA进行检测,结果采用BioNumerics 6.1数据库软件进行聚类分析和单位点Hunter-Gaston分辨率指数(Hunter-Gaston index,HGI)分析,并比较分析国际推荐的分组(12、15、24位点)的基因分型鉴定能力.结果 MLVA分析结果显示24个VNTR位点在不同菌株中存在明显的多态性,101例结核分枝杆菌临床分离株可分为1个基因群83种基因型,其中69种基因型只有1个菌株,占68 32%(69/101),另有32株临床分离株表现出14种基因型,占31.68%(32/101),成簇率为17.82%;24个VNTR位点的HGI具有较大差异(0.168～0.829),HGI能达到0.5以上的VNTR位点数有16个;24个VNTR位点进行不同的位点组合:12、15个和24个位点组合的HGI分别为0.995、0.996、0.996.结论 重庆地区儿童结核病中结核分枝杆菌存在基因多态性,国际推荐的15个VNTR位点组合的MLVA分型方法适用于其流行病学的研究.
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慢性咳嗽患者随访一年转归分析
目的 通过慢性咳嗽患者一年的随访数据分析,探讨慢性咳嗽的自然病程及患者用药依从性.方法 收集2008年2月至2009年5月在第三军医大学新桥医院、大坪医院、西南医院和重庆医科大学附属第一医院就诊的173例慢性咳嗽患者,入选标准:咳嗽时间>8周,X线胸片或CT检查正常.排除标准:①高血压病服用ACEI类药物;②患有慢性心肺疾病;③近期粉尘接触史.依据自制随访问卷,所有患者由一位呼吸科专科医师通过电话就咳嗽好转情况、针对病因治疗情况、咳嗽对患者的影响等方面进行随访,随访期间2010年7-9月.结果 共104例患者完成1年期随访研究.平均40岁(12～78岁),平均病程31.8(2～360)个月,性别比例59(男)/45(女).不管病因是否明确的慢性咳嗽,在我们1年后的随访时,咳嗽完全消失占51.9%(54/104),部分好转占18.3%(19/104),时好时坏占6.7%(7/104),无好转或加重占23.1%(24/104).在不同慢性咳嗽病因中,症状完全消失的比例高的是咳嗽变异性哮喘(cough variability asthma,CVA),达58.3%;上气道咳嗽综合征(upper airway cough syndrome,UACS)患者低,仅为45.2%;咳嗽完全无好转的病例中,胃食道反流相关性咳嗽(gastro-esophageal regurgitation cough,GERC)的比例高30.8%,CVA低19 4%.UACS的患者采用针对病因进行治疗的患者仅占16.7(7/42),CVA和GERC的患者采用病因针对性治疗的比较较高,达2/3左右.仅近半数的患者认为咳嗽对他们的生活、工作、情绪以及对他人有影响,而且影响程度以轻度影响为主.结论 不同病因的慢性咳嗽中UACS患者的转归差,加强此类疾病的认识及提高对因治疗依从性具有迫切的临床需求.
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前胃泌素在人胃癌BGC-823细胞的悬浮肿瘤球中的表达
目的 研究人胃癌BGC-823肿瘤细胞系中是否存在悬浮生长的肿瘤球,检测前胃泌素(progastrin,Pro-GRP)在肿瘤球中的表达.方法 取贴壁生长的BGC-823细胞,用有限稀释法和无血清培养法培养,并利用软琼脂克隆形成实验证实BGC-823中存在悬浮生长的具有干细胞特性的肿瘤球,流式细胞仪(FCM)检测该肿瘤球中ABCG2、CD44、CD166的表达.ELISA、细胞免疫荧光、FCM方法比较血清Pro-GRP分别在肿瘤球和贴壁细胞中的表达差异.结果 有限稀释法和无血清培养法均在BGC-823细胞系中培养出了悬浮生长的肿瘤球;克隆形成能力显示:肿瘤球为(37.63±5 99),贴壁细胞为(10.75±3.37),二者间有统计学差异(P<0.01);FCM显示肿瘤球ABCG2的表达率(57.17±3.49)明显高于贴壁细胞(8.67±0.77)(P<0.01);血清Pro-GRP在肿瘤球中的表达(73.37±9.42)明显高于贴壁细胞(5.11±1 03)(P<0.01).结论 人胃癌BGC-823 细胞系中存在悬浮生长的肿瘤球,Pro-GRP的表达与肿瘤球有关.
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妊娠糖尿病患者胎盘组织脂联素及受体与PPAR-γ和IL-6变化的关系
目的 研究妊娠糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者胎盘组织中脂联素(adiponectin,APN)及其受体(Adipo R)与过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)、白介素-6(IL-6)变化关系.方法 GDM和糖耐量正常孕妇(CON)各20例,采用全自动生化分析仪检测血清生化指标,荧光定量PCR法检测胎盘组织APN及其受体Adipo-R1、Adipo-R2、PPAR-γ、IL-6 mRNA水平的表达,Western blot法检测胎盘组织中PPAR-γ、IL-6蛋白水平变化.结果 ①与CON组相比,GDM组APN mRNA表达明显降低[(1.08±0.11)vs(0.68±0.09),t=2.79,P<0.05],Adipo-R1 mRNA表达无显著变化[(1.06±0.09)vs(1.13±0.11),t=0.48,P>0.05)],Adipo-R2 mRNA表达明显增加[(1.03±0.11)vs(2.29±0 42),t=0.29,P<0.05)],PPAR-γ mRNA表达明显降低[(1.02±0.16)vs(0.61±0.09),t=2.28,P<0.05)],IL-6 mRNA 表达明显增加[(1.07±0.10)vs(2.64±0.43),t=3.55,P<0.05)].②与CON组相比,GDM组患者胎盘组织中PPAR-γ蛋白表达明显降低[(1.00±0 05)vs (0.53±0.06),t=5.31,P<0.05],而IL-6蛋白表达明显变化明显增加[(1 00±0.05)vs (2.26±0.22),t=5.51,P<0.05].②脂联素 mRNA和空腹胰岛素水平、IL-6 mRNA和蛋白水平表达变化均负相关(r=-0.39,r=-0.60,r=-0.70,P<0.05),与PPAR-γmRNA水平和蛋白水平变化均呈正相关(r=0.59,r=0.60,P<0.05).结论 GDM患者胎盘局部脂联素的变化可能参与了胰岛素抵抗的发生.GDM患者胎盘组织中脂联素的mRNA表达变化与PPAR-γ及IL-6表达有关.
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潲水油的急性毒性和遗传毒性研究
目的 对潲水油的食用安全性进行毒理学观察.方法 选取SD大鼠20只,按2.0 ml/100 g剂量实施一次性灌胃进行急性毒性实验;昆明种小鼠60只随机分为6组[受试物2.5、5.0、10.0 g/kg及正常对照组(生理盐水)、阴性对照组(食用油)、阳性对照组(环磷酰胺0.04 g/kg)]分阶段实施灌胃,30 h后处死小鼠取股骨的骨髓液制片,进行小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验;昆明种雄性小鼠30只随机分为6组[受试物2.5、5.0、10.0 g/kg及正常对照组(生理盐水)、阴性对照组(食用油)、阳性对照组(环磷酰胺0.04 g/kg)],连续灌胃5 d,实施观察35 d后,处死小鼠取双侧附睾制片,进行小鼠精子畸形实验;选取SD大鼠100只随机分为5组[受试物2.5、5.0、10.0 g/kg及正常对照组(生理盐水)、阴性对照组(食用油)]喂养30 d,观察其体质量变化和食物利用率,并检测其血常规及生化指标和病理改变.结果 本次实验测定所用的潲水油急性毒性经口LD50大于10.0 g/kg.小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验为阳性,小鼠精子畸形实验为阴性.30 d喂养实验中,除低剂量潲水油外均可导致大鼠体质量增重减慢和食物利用率降低,高剂量潲水油可导致大鼠血清总蛋白和球蛋白含量降低,中、高剂量潲水油可导致大鼠肝脏系数增加及肝脏发生不同程度的病理改变.结论 本次实验所用的潲水油急性毒性实验为阴性结果,遗传毒性实验和30 d喂养实验为阳性结果.
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肺炎链球菌溶血素诱导THP-1细胞凋亡涉及MAPK1/3信号途径
目的 探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制.方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制.瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响.AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡.琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA 片段化现象.免疫组化和Western blot检测MAPK1/3蛋白表达的变化.结果 将人THP-1细胞分别与0.05、0.1、0.5、1、2.5、5 μg/ml Ply共同孵育后,在24、48、72、96 h用MTT法检测细胞增殖抑制率,发现Ply对人THP-1细胞具有明显的增殖抑制作用,并且呈剂量和时间依赖性,IC50(24 h)为1.31 μg/ml;0.05 μg/ml和0.1 μg/ml Ply分别处理THP-1细胞12 h后,通过瑞氏染色法观察人THP-1细胞可见凋亡小体及核碎裂象等典型的凋亡形态学改变;用0.05 μg/ml Ply和0.1 μg/ml Ply作用THP-1细胞12 h后细胞早期凋亡率分别为11.83%和48.45%(P<0.05);提取凋亡THP-1细胞DNA,进行琼脂糖凝胶电泳可见典型的 "梯状"条带;Ply作用于人THP-1细胞后,胞内MAPK1/3蛋白表达降低(P<0.05 ).结论 Ply可诱导人THP-1细胞凋亡,此作用涉及MAPK1/3信号通路的参与.
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沉默EC9706细胞NS基因对裸鼠移植瘤组织中EGF、EGFR基因表达的影响
目的 建立裸鼠食管癌移植瘤模型,探讨由RNAi诱导的EC9706细胞核干细胞因子(nucleostemin,NS)基因沉默对裸鼠移植瘤组织中EGF、EGFR基因表达的影响.方法 裸鼠15只,采用STATA 8.0编制随机化分组程序,均分为3组,分别皮下注入pRNAT-U6.1-siNS2转染的EC9706 细胞(siRNA 干预组),pRNAT-U6.1-siC 转染的EC9706细胞(无关siRNA对照组)以及正常EC9706细胞(空白对照组),接种5周,观察移植瘤生长情况,应用免疫组织化学方法和原位杂交技术检测裸鼠移植瘤组织中NS、EGF、EGFR基因蛋白和mRNA的表达.结果 无关siRNA对照组及空白对照组第4天于接种部位出现肉眼可见的肿块,siRNA 干预组于第6天在相应部位发现肉眼可见肿块,第5周各组裸鼠成瘤率均为100%.siRNA干预组、无关siRNA对照组及空白对照组裸鼠移植瘤组织中NS、EGF、EGFR蛋白和mRNA的阳性表达率比较差异显著(P<0.05).相对于无关siRNA对照组和空白对照组,siRNA干预组裸鼠肿瘤组织中NS蛋白及mRNA的阳性表达率均降低.结论 EC9706细胞沉默NS基因可降低裸鼠体内EGF、EGFR基因的表达.
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Oligo基因芯片筛选视网膜慢性高眼压损伤差异表达基因的初步数据分析
目的 采用35 000点的高密度Oligo基因芯片对大鼠慢性高眼压导致视网膜损害的6个时间点(7、35、60、90、180、360 d)的基因表达情况加以研究,探讨慢性高眼压影响下视网膜基因表达改变的情况.方法 将基因分成"活动"基因和"差异"基因:在"活动"基因中,要求6个时间点中大Ratio值/小Ratio值的比值大于2.将差异基因再分为高、低表达及过表达基因,每一类基因按照其生物学功能进行功能检索、分组.对与轴突生长、导向、突触形成相关基因的功能进行初步探讨.结果 差异表达基因1 692个:高表达的基因719个(Ratio≥2),包括6个过表达基因(Ratio≥7);低表达的基因973个(Ratio≤0.5).719个高表达基因中,功能完全未知者占54%,其余功能已知或部分已知者共分为14组,在损伤过程中所占比例大的是代谢和物质转运组.轴突生长、导向及突触形成相关的基因,抑制轴突生长的基因及神经元的迁移、轴突的生长相关基因在损伤过程中均有呈高表达.结论 建立了大鼠慢性高眼压损伤视网膜差异基因表达库,差异表达基因在慢性高眼压视网膜损害中可能有重要的意义.
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通脉糖眼明胶囊对糖尿病视网膜病变患者血管内皮生长因子水平的影响
糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病常见的微血管并发症,是糖尿病患者致盲的主要原因之一,多项研究表明,血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在DR的发生、发展中起重要作用[1],血浆VEGF增高可通过多种途径破坏血-视网膜屏障,导致视网膜微血管通透性增高、渗出增加及视网膜水肿,进一步刺激视网膜内皮细胞增殖,终导致视网膜新生血管形成及纤维增生,促进视网膜病变发生、发展.我们前期研究采用通脉糖眼明胶囊对DR进行防治,疗效显著[2].本研究旨在通过观察通脉糖眼明胶囊对DR患者VEGF水平影响,探讨通脉糖眼明胶囊治疗DR的作用机制.
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心脏右心室未分化肉瘤1例
1 临床资料患者,男性,32岁.因活动后心慌气促于2009年4月23日入院.初步诊断为风湿性心脏瓣膜病,心脏超声检查发现患者右心室巨大肿块,延伸至肺动脉,与三尖瓣以及室间隔相连,面积约3.1 cm×10.4 cm.胸部CT证实右心室巨大肿块.
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腹壁切口子宫内膜异位症72例临床分析
近年来,腹壁切口子宫内膜异位症发病率呈明显上升趋势,影响了妇女的生活质量.2002年9月至2010年9月我院收治了腹壁切口子宫内膜异位症患者72例,均采取手术及术后药物治疗,疗效明显,现报告如下.
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46例前置胎盘与流产史关系分析
前置胎盘是妊娠晚期严重并发症,也是妊娠晚期阴道流血常见的原因,其发病率国外报道0.5%,国内报道0.24%～1.57%[1],是产科临床上常见急症,往往对母儿造成生命威胁.本研究分析了我院2000-2009年的有关资料,旨在探明前置胎盘与流产史有何关系.
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对恶性肿瘤患者进行全程心理护理的效果分析
恶性肿瘤对心理产生着巨大冲击,产生一系列心理反应.临床上对这些心理反应的识别,并采取恰当的护理措施非常重要.我们针对肿瘤患者紧张恐惧、消极悲观及抑郁寂寞等心理反应,对恶性肿瘤患者从入院处接待到出院进行前瞻性随访全程心理护理,取得了较好的效果,现报告如下.
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"倒八字征":第5腰椎关节突关节退行性变骨显像典型表现研究
骨显像是诊断骨转移癌的灵敏的方法,但是对单发或少发病变的定性价值较低,骨显像较难做出准确的诊断,往往要结合其他影像学检查明确诊断[1].本研究对20例全身骨显像发现的第5腰椎椎体后部的特殊表现--"倒八字"形骨代谢异常活跃灶(简称"倒八字征")进行了SPECT/CT断层显像,发现均为第5腰椎椎体后部关节突关节的退行性改变,现报告如下.
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经PTCD窦道胆道金属支架置入术治疗恶性梗阻性黄疸临床疗效分析
恶性梗阻性黄疸系由恶性肿瘤引起的胆道梗阻而致皮肤巩膜黄染,常见于肝门胆管癌、肝癌、胰头癌、壶腹癌、胃癌肝转移等造成的肝胆管受压.若黄疸得不到及时改善,肝功能、肾功能、凝血机制会迅速恶化,危及患者生命.姑息性胆肠吻合术作为减黄手段创伤大、费用高,难以为患者接受.自2005年起,我科开展经皮经肝胆道引流(percutaneous transhepatic cholangial drainage, PTCD)联合记忆型胆道金属支架置入术姑息性治疗恶性胆道梗阻,疗效较好.本研究回顾性分析2008年1月至2009年10月60例PTCD联合胆道支架置入术患者的临床资料,探讨其操作技术方法及临床应用价值.
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超重儿童血脂代谢紊乱状况研究
目的 探讨超重儿童血脂代谢紊乱情况.方法 对80例超重儿童及63例健康儿童(年龄7～13岁)分别检测血浆TG、TC、HDL-c、APOA1、APOB,计算LDL-c、VLDL-c、动脉粥样硬化指数(AI).结果 超重儿童TG、TC、LDL-c、VLDL-c、LDL-c/HDL-c、APOB、AI水平较之健康儿童明显增高(P<0.05);HDL-c、HDL-c/TC、APOA1、APOA1/APOB水平较之健康儿童明显降低(P<0.05).结论超重儿童存在血脂代谢紊乱,其发生动脉粥样硬化的危险性增加,预防动脉粥样硬化等心血管疾病应从儿童时期开始.
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网络成瘾对大学生亚健康状态的影响
目的 探讨网络成瘾对大学生亚健康状态的影响.方法 方便整群抽取蚌埠地区2所大学的3 320名大学生问卷调查.亚健康和网络成瘾评定分别采用亚健康多维评定问卷和Young网络成瘾自评量表,数据分析采用Spearman秩相关、χ2检验和多因素Logistic回归分析.结果 上网类型与亚健康6个维度以及2个领域的条数成正相关(P<0.01);多因素分析显示女性和网络成瘾量表20个条目中的因不能上网心情烦躁为躯体亚健康的独立危险因素;更愿意上网而不愿和亲密朋友在一起、宁愿上网也不愿意和朋友出去玩2个条目为心理亚健康的独立危险因素;会因为上网而忽略自己要做的事情、会因为心情不好去上网、如果无法上网会觉得生活空虚无聊和离开网后会想着网上的事情4个条目为躯体、心理亚健康的共同危险因素;而经常在网上结交新朋友条目则是两者的共同保护因素.结论 网络成瘾是大学生亚健康状态的危险因素之一.
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脑脊膜Rosai-Dorfman病的临床和病理特征分析
目的 探讨原发于脑脊膜Rosai-Dorfman病的临床和病理学特点.方法对我院神经外科于2008年7、12月收治的2例原发于颅内和椎管内仅有中枢神经系统症状而无淋巴结病变的Rosai-Dorfman病患者的临床及病理资料进行整理,并结合文献进行回顾性分析.结果 MRI显示病灶分别位于脑膜和脊膜,呈T1增强强化影,临床诊断为脑脊膜瘤,手术切除病灶.术后组织病理和免疫组织化学显示,与淋巴结内的Rosai-Dorfman病改变相似,病变组织由S100(+)、CD68(+)、CD1a(-)的大组织细胞及大量淋巴细胞、浆细胞构成,并呈"明暗"相间的组织学特征,部分大组织细胞内有吞噬淋巴细胞征象.结论 原发于脑脊膜的Rosai-Dorfman病少见,在术前很难通过影像学或其他手段与脑脊膜瘤进行鉴别,组织病理学和免疫组织化学是确诊的主要手段.
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加强类鼻疽的研究
类鼻疽(melioidosis)是由类鼻疽杆菌感染引起的一种新发传染病,属热带医学疾病.我国海南、广东、香港、台湾以及南海周边国家为流行区,有学者认为它是一种正在扩散的人兽共患病.类鼻疽杆菌主要存在于土壤或水中,极易获取和传播;加上该菌易培养、耐药性强,目前还没有有效的疫苗,WHO将其列为B类生物恐怖剂.海南国际旅游岛的开发以及南海海洋主权维护和经济安全保障等已上升至国家战略要求,加强类鼻疽研究具有重要的社会意义和军事价值.
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美国实验室化学品安全管理模式及借鉴意义
在实验室工作的人员每天都需要处理化学品或处于化学品暴露中,如何管理这些化学品是实验室安全管理的重要工作之一.2008-2010年,笔者作为博士后在美国伯明翰阿拉巴马大学(University of Alabama at Birmingham, UAB)药理毒理系工作时,有幸在第2年作为实验室管理者(Lab Manager)较全面了解了美国实验室化学品安全(Chemical Safety)的管理工作,在此简单介绍如下.
