第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响
目的 探讨Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响.方法 将细胞分为4组:阴性对照组(即空白组)、实验对照组(感染Ad-GFP组)、阳性对照组(50 ng/ml RANKL诱导组)、实验组(感染Ad-Wnt3a组).分别给予处理因素后常规细胞培养6d,通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞的分化成熟情况；Western blot检测TRAP、Cathepsin K蛋白的表达；分别于处理因素后3、6、9d提取细胞总RNA,荧光定量Real time (RT-PCR)检测核因子κB受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因的表达.结果 TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导RAW 264.7成多核(核≥10),空白组和Ad-GFP组有少量多核细胞(3≤核≤5),Ad-Wnt3a组为单核有个别双核；Western blot检测显示Ad-Wnt3a组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P＜ 0.05)；RT-PCR检测Ad-Wnt3a组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K、MMP-9基因的表达.结论 Wnt3a能抑制RAW264.7分化成成熟的破骨细胞.
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γ-氨基丁酸对情绪应激大鼠额叶皮质一氧化氮合酶和一氧化氮水平的影响
目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)对情绪应激大鼠一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)含量的影响,结合行为学实验,探讨γ-氨基丁酸抗焦虑作用机制.方法 将40只雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠按随机数字表法分为5组:对照组,模型组,GABA 0.5、1、2 mg/kg组,采用不确定性空瓶刺激的方法建立焦虑大鼠模型,并在应激前分别给予大鼠灌服生理盐水或相应剂量的GABA,14 d后进行旷场实验并分析各组大鼠额叶皮质一氧化氮合酶和一氧化氮水平的差异.结果 应激14 d后对照组与其余各组的食物利用率差异极显著(P＜0.01)；各组大鼠在中央区域的停留时间差异极为显著(P＜0.01)；对照组、GABA 1 mg/kg和2 mg/kg组进入中央区域的次数显著高于模型组(P＜0.05)；模型组的修饰次数显著高于GABA 1 mg/kg和2 mg/kg组(P＜0.05)；总运动距离和直立次数均无显著性差异(P＞0.05)；对大鼠额叶皮质NOS及NO的分析显示对照组和GABA 2 mg/kg组的NOS活力及NO含量显著高于模型组(P＜0.05).结论 GABA与焦虑大鼠额叶皮质的NOS及NO均呈剂量-效应关系,提示GABA可能通过调节焦虑大鼠额叶皮质中的一氧化氮含量发挥抗焦虑作用.
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小鼠胫骨稳定性骨折模型制作及评价
目的 建立稳定的小鼠稳定性胫骨骨折模型.方法 通过骨髓穿钢针的方法,建立了小鼠稳定性胫骨骨折模型,取建模后7、14、21 d3个时间点小鼠,其中每个时间点6只,分别通过X线片、Micro CT以及病理切片来分析骨折愈合中骨痂大小变化及骨痂中细胞类型以评估骨折愈合过程.结果 本实验建立的小鼠胫骨稳定性骨折模型愈合,骨折后7d骨折断端存在极少量软骨痂,基本由未分化间充质细胞构成；第14天软骨痂开始钙化,骨痂中存在大量肥大软骨细胞；第21天骨折已基本愈合,新生骨形成,含有大量成骨细胞及骨细胞.结论 通过本方法所制作的骨折模型愈合过程良好,与临床的骨折愈合过程类似,能更客观地观察骨折愈合过程.
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PD-1+肿瘤浸润性CD8+T淋巴细胞的表型鉴定及功能研究
目的 从肿瘤局部分离衰竭性CD8+T淋巴细胞(CD8+ PD-1+T细胞),并对其功能进行研究,初步探讨机体免疫系统无法有效杀伤和清除肿瘤的原因.方法 C57BL/6小鼠皮下注射Lewis肺癌细胞株建立小鼠肿瘤模型.将肿瘤制成单细胞悬液后,染细胞表面标志.采用流式细胞术从肿瘤局部分选CD8+ PD-1+T淋巴细胞及CD8+ PD-1-T淋巴细胞,体外经非特异性刺激后行细胞内因子染色,检测IFN-γ分泌能力.CFSE细胞染色检测其增殖活性.结果 肿瘤局部成功分离得浸润性CD8+T淋巴细胞,其中将近80％的细胞高表达衰竭表型PD-1+.CFSE结果显示CD8+ PD-1+T细胞较CD8+ PD-1-T细胞增殖活性明显下降；细胞内因子染色后流式细胞术检测结果显示肿瘤局部CD8+ PD-1+T细胞较CD8+ PD-1-T细胞IFN-γ分泌能力降低约50％.结论 肿瘤局部存在一群免疫衰竭性T细胞,可能参与了肿瘤的免疫逃逸.
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儿童结节性硬化症脑白质磁共振弥散加权成像及ADC值测量
目的 探讨结节性硬化症(TSC)儿童与正常儿童脑白质磁共振表观弥散系数(ADC)值差异以及TSC儿童脑白质ADC值与临床相关性.方法 回顾性分析52例经临床确诊的TSC的MRI图像,按年龄分组,测量脑白质ADC值,并以同期性别和年龄相匹配的健康体检儿童作为对照；同时按照临床有无癫痫、智力障碍或孤独症对病情严重程度进行评分,分析病情严重程度与ADC值之间的相关性.结果 各年龄组TSC患者额、顶、枕、颞叶及小脑白质ADC值均高于对照组脑白质ADC值,其中除1～3岁年龄组颞叶和小脑以及＞12～18岁年龄组小脑外(P＞0.05),其余各年龄组各部位脑白质ADC值均与对照组有显著差异(P＜0.05).大脑各部位脑白质ADC值增加与临床病情严重程度之间存在显著相关性(P＜0.05).结论 TSC儿童脑白质ADC值升高,反映了脑白质髓鞘破坏或发育障碍,可能是TSC临床出现认知障碍的主要基础.
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阿奇霉素通过抑制Th17细胞功能活性改善小鼠哮喘炎症
目的 研究阿奇霉素对Th17应答增强致气道以中性粒细胞浸润为主的小鼠哮喘炎症的作用.方法 采用卵蛋白(OVA)+内毒素(LPS)联合致敏,OVA激发的方法建立Th17应答增强致气道中性粒细胞浸润为主的哮喘小鼠模型,48只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组、阿奇霉素组、地塞米松组(n=12).采用HE染色观察肺组织病理改变；小鼠肺功能仪检测气道高反应性(airway hyperreactivity,AHR)；肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)行细胞分类计数；ELISA检测外周血OVA特异性IgE及BALF中IL-17、TNF-α、IL-8、IL-5和IFN-γ浓度；Q-PCR检测肺组织Th1、Th2和Th17细胞分化.结果 用OVA联合LPS的方法可以复制既有Th2活化和肺内嗜酸性细胞增多,又有Th17表达增强和明显中性粒细胞炎症的哮喘小鼠模型.与哮喘组比较,阿奇霉素组气道炎症细胞浸润明显改善,特别是中性粒细胞比例显著降低(P＜0.05).同时还有BALF中IL-17、TNF-α、IL-8、IL-5水平显著降低(P＜0.05)；肺组织Th17细胞分化减少(P＜0.05)以及AHR改善(P＜0.05).而地塞米松组与哮喘组比较,虽然BALF嗜酸性细胞比例显著降低,但BALF中细胞总数、IL-17、TNF-α、IL-8水平及肺组织Th17细胞分化均无明显差别(P＞0.05).结论 阿奇霉素可抑制Th17细胞分化、减少炎症介质分泌从而抑制炎症细胞浸润,由此减弱Th17应答增强致气道中性粒细胞增高的小鼠哮喘炎症.
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HOXA10在肺腺癌中的过表达及其临床意义
目的 研究肺腺癌组织和细胞系中HOXA10的表达及其临床意义.方法 运用免疫组织化学方法检测75例肺腺癌及其癌旁组织中HOXA10的表达情况,并分析HOXA10的表达与患者的临床特征及5年生存率的相关性.此外利用反转录PCR、Western blot及免疫荧光染色检测正常肺支气管上皮细胞系HBE以及4种肺腺癌细胞系H322、H1650、A549、H1975中HOXA10的表达情况.结果 HOXA10主要表达于胞浆中,且于75例肺腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.01),并与肿瘤的浸润深度(P＜0.05)及淋巴结转移(P＜0.01)有关.而HOXA10高表达与低表达的肺腺癌患者的5年生存率没有显著差异(P＞0.05).反转录PCR、Western blot及免疫荧光染色的结果显示HOXA10在肺腺癌细胞系中的表达明显高于正常肺支气管上皮细胞系.结论 HOXA10高表达于肺腺癌及肺腺癌细胞系中,这可能与肺腺癌的侵袭和恶性淋巴结转移的程度密切相关.
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小檗碱减轻炎症反应时肠上皮屏障功能损害的实验研究
目的 研究小檗碱(berberine,BBR)在炎症反应时对肠上皮屏障功能的保护作用.方法 建立人肠上皮细胞株Caco-2单层培养模型,将单层细胞分为对照组、BBR组、TNF-α+ IFN-γ组、TNF-α+ IFN-γ+ BBR组.用电阻仪测定跨单层肠上皮细胞电阻(TER),测定时相点为处理后0、6、12、24、36 h和48 h；免疫荧光法和蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白Occludin的分布及表达变化；蛋白质印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)和磷酸化肌球蛋白轻链(pMLC)的蛋白表达.结果 对照组与BBR组TER均无明显变化；TNF-α+ IFN-γ组TER逐渐下降,并于12、24、36 h及48 h显著低于0 h(P＜0.05)；TNF-α+ IFN-γ+ BBR组也呈逐渐下降趋势,但降幅小于TNF-α+ IFN-γ组,并于12、24、36h及48h显著高于TNF-α+IFN-γ组(P＜0.05).各组紧密连接蛋白Occludin表达无明显变化(P＞0.05)；但TNF-α+ IFN-γ组Occludin形态有明显变化,并发生重分布,而TNF-α+ IFN-γ+ BBR组Occludin形态变化则较TNF-α+ IFN-γ组明显减轻.TNF-α+ IFN-γ组pMLC表达显著高于对照组或BBR组(P＜0.05),而TNF-α+IFN-γ+ BBR组pMLC表达则明显低于TNF-α+ IFN-γ组(P＜0.05).结论 小檗碱通过降低MLC磷酸化水平,改善紧密连接蛋白定位分布变化,从而减轻炎症反应时肠上皮屏障功能损害.
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IRE1α促进人牙周膜成纤维细胞增殖
目的 研究内质网跨膜蛋白IRE1α对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)增殖的影响.方法 将成功构建的人IRE1α基因重组质粒染入hPDLFs细胞,采用免疫印迹法检测IRE1α重组基因在真核细胞内的表达情况,XTT法和流式细胞仪(FCM)检测转染后hPDLFs细胞增殖和细胞周期变化.结果 酶切及测序结果证实IRE1α重组质粒构建成功；免疫印迹分析结果证实,IRE1α重组质粒能在hPDLFs细胞内正确表达；在内质网应激(ERs)状态下,与衣霉素(tunicamycin,TM)对照组相比,XTT检测结果显示:IRE1 α实验组hPDLFs细胞增殖率明显增高(P＜0.01)；FCM结果分析显示:IRE1α实验组hPDLFs细胞s期比例增加而G1期减少(P＜0.05).结论 在ERS状态下,IRE1α促讲hPDLFs细胞增殖,促进hPDLFs细胞从G1期进入S期.
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血液灌流联合血液透析治疗药物性肝损害的临床疗效观察
目的 观察血液灌流(hemoperfusion,HP)联合血液透析(hemodialysis,HD)治疗药物性肝损害(drug induced liver injury,DILI)的疗效,拟摸索出治疗药物性肝损害的血液净化方式.方法 选取2010年12月至2011年11月在第三军医大学西南医院全军消化内科研究所住院治疗的10例以重度黄疸为主要临床表现的药物性肝损害患者.其中5例在住院第1周进行1～2次血液灌流联合透析治疗,另外5例为同时期未接受灌流及透析治疗的患者作为对照.观察治疗后7、14、30 d血清总胆红素(total bilirubin,TBIL)的变化情况,以及总胆红素水平下降的幅度,进行疗效判定.结果 总胆红素在治疗前、治疗后第7、14、30天时,治疗组分别为(464.7±127.7)、(181.3±49.8)、(111.5±45.8)、(28.4±10.5),对照组分别为(373.2±65.8)、(363.4±165.6)、(256.4±131.1)、(75.2±43.3),两组在第14天差异有统计学意义(P＜0.05)；总胆红素下降幅度在治疗后第7、14、30天时治疗组分别为(283.4±156.5)、(353.2±136.4)、(436.4±134.6),对照组分别为(9.8±132.4)、(116.7±103.2)、(297.9±51.3),两组在第7、14天差异有统计学意义(P＜0.05).结论 血液灌流联合血液透析治疗能提高药物性肝损害患者血清总胆红素降低速度,促进患者肝功能的恢复,对药物性肝损害患者应尽早应用,以获得佳治疗效果.
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视网膜变性对RCS-P+大鼠γ-氨基丁酸及其合成酶谷氨酸脱羧酶65表达的影响
目的 观察视网膜变性过程中γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid,GABA)及合成酶谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)的表达变化.方法 选择出生后15、30、60、90 d的RCS-P+和同年龄的RCS-rdy+-P+大鼠,采用免疫荧光(IF)和免疫印迹法(Western blot)观察两种大鼠出生后15、30、60、90 d GABA和GAD65的表达差异.结果 视网膜中GABA和GAD65主要表达于内核层、内从状层和节细胞层.随着天龄的增加,RCS-rdy+-P+大鼠中GABA阳性细胞逐渐减少.RCS-P+变性鼠在出生后15 ～60 d GABA阳性细胞随天龄增加逐渐减少,在出生后60 ～ 90 d(即视网膜变性中晚期)GABA阳性细胞大量增加,GABA表达明显高于RCS-rdy+-P+大鼠(P＜0.05).不同年龄RCS-rdy+-P+大鼠其GAD65表达恒定,发育对GAD65表达无明显影响；与同年龄RCS-rdy+-P+大鼠相比,30 d RCS-P+大鼠GAD65表达略有增加(P＜0.05),90d时大量增加(P＜0.01),其表达随病变发展明显升高.结论 在视网膜色素变性过程中,GABA、GAD65在视网膜内层的表达均有显著的升高,提示输入剥夺后GABA能无长突细胞未见损伤,其活性甚至略有增高.
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维持性血液透析患者症状负担与生活质量相关性研究
目的 了解维持性血液透析患者的症状负担及生活质量水平,探讨症状负担的影响因素及与生活质量之间的相关性.方法 采用自行设计的患者一般情况调查表、血液透析患者症状调查量表(dialysis frequency,severity and symptom burden index,DFSSBI)和简明健康状况量表(SF-36)对重庆市2所三级甲等医院的136例维持性血液透析患者进行调查.结果 维持性血液透析患者的症状负担总体得分为(75.63±32.25)分,生活质量总体得分为(53.32±16.80)分；经多元逐步回归分析症状负担的主要相关因素是人均收入、工作状况、年龄及性别(P＜0.05)；症状负担评分与生理功能、生理职能、躯体疼痛、总体健康、活力、社会功能、情感职能、精神健康8个维度评分均呈负相关(r=-0.94～-0.48).结论 维持性血液透析患者均有不同程度的症状负担,生活质量有待提高；应行有效的症状评估及管理,提高患者生活质量.
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类获得性免疫缺陷(阴性HIV)“患者”的流行病学调查
目的 对社区类获得性免疫缺陷(AIDS)综合征(阴性HIV)“患者”进行病因探索.方法 采用定性系统分析筛检国内外相关综合征报道病例,探索类AIDS综合征“患者”临床特征可能的聚类属性；通过现况调查掌握“患者”人群的一般特征和临床特征.结果 定性系统分析显示,目前在世界范围,与类AIDS综合征(阴性HIV)“患者”相似的疾病有2种,即CD4+T淋巴细胞缺陷综合征(ICL)和非结核分枝杆菌感染(NTM感染)；通过174例网络调查和52例现场观察,发现“患者”人群以男性为主,青、中年为主；在国内分布地区广泛；主诉症状涉及呼吸道、消化道、皮肤、肌肉、骨骼和神经系统；根据症状特点,病程有急性期和稳定期之分；群体症状及体征为:淋巴结部位肿胀感、骨痛、肌肉“跳”(痛)、淋巴结节、皮肤结节(皮疹)、舌苔白厚、关节弹响、皮肤干燥；52例“患者”检测发现CD4+T淋巴细胞＜ 500/μL 17例(32.69％)、CD4/CD8比值异常16例(30.77％)、干扰素-γ抗体阳性17例(36.69％)和PPD阳性39例(++～+++,75.00％)；高危险性行为是可疑的暴露因素之一.结论 类AIDS综合征(阴性HIV)“患者”现象不能完全用心理因素予以解释,其呈现的临床特征有明显的一致性和规律性,亟待开展深入研究进行分析.
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可调控STAT3干扰载体抑制BIU-87细胞侵袭的体外研究
目的 探讨可调控RNA干扰载体通过抑制STAT3信号通路对膀胱癌细胞BIU-87侵袭性的影响.方法 采用受CRE重组酶调控的RNA干扰载体pSico构建针对STAT3的shRNA表达载体,以pLVX-CRE作为CRE蛋白的表达载体,将BIU-87细胞分为pSico-shNeg、pSico-shNeg/CRE、pSico-shSTAT3、pSico-shSTAT3/CRE 4组,分别转染相应质粒,RT-PCR和Western blot法检测其干扰效率,Transwell实验检测其侵袭能力.结果 双酶切及测序证实载体构建正确；各组细胞在转染重组质粒后EGFP的表达受CRE调控；RT-PCR结果显示STAT3的表达在干扰之后有显著降低.Western blot结果显示,在无CRE时,pSico-shSTAT3组与pSico-shNeg组STAT3的表达无显著差异(P＞0.05),在有CRE时,pSico-shSTAT3组STAT3相对表达量下降为pSico-shNeg组的(43±4.2)％(P＜0.05)；体外侵袭实验显示pSico-shNeg组透膜细胞数为(203.33±12.42)/视野、pSico-shNeg/CRE组(196.33±11.85)/视野、pSico-shSTAT3组(201.00±16.64)/视野,而pSico-shSTAT3/CRE组(42.00±3.00)/视野,较其他3组显著降低(P＜0.01).结论 由可调控RNA干扰载体介导的CRE依赖性STAT3表达载体能降低细胞内STAT3信号水平,并降低BIU-87细胞体外侵袭迁移能力.
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Piwil2重编程人成纤维细胞形成肿瘤干细胞的初步研究
目的 初步观察精原干细胞自我更新基因Piwil2重编程人成纤维细胞的细胞形态及功能特征变化,建立Piwil2调控肿瘤干细胞发生过程的细胞实验模型.方法 将携带Piwil2-GFP标记和空载目的基因GFP标记的慢病毒载体分别感染原代培养的小儿包皮成纤维细胞,筛选建立稳定表达Piwil2-GFP和GFP成纤维细胞系,观察细胞形态变化及肿瘤球形成过程,分析细胞染色体核型,进行裸鼠体内成瘤实验,RT-PCR、免疫组织化学进一步鉴定重编程后细胞的干细胞特征及三胚层分化的相关标志物.结果 转染后第5天,Piwil2-GFP成纤维细胞开始由长梭形逐渐转变为圆形,第14天出现集落样生长状态,挑选集落重悬后培养形成类似“肿瘤球”样克隆,其细胞染色体核型呈超二倍体的异质性改变.“肿瘤球”样克隆裸鼠体内移植2周时100％形成肿瘤,肿瘤组织学及免疫组化鉴定为表达多种外胚层、中胚层及内胚层肿瘤标志物的恶性肿瘤,RT-PCR显示细胞及裸鼠肿瘤表达干细胞多能基因Oct-4、Nanog、Sox2,以及三胚层特征标志物.结论 Piwil2重编程人成纤维细胞后的细胞具有干细胞及多潜能分化特性,以及显著的肿瘤细胞异质特性.
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220例极低出生体质量儿医院感染的临床分析
目的 探讨极低出生体质量儿(very low birth weight infants,VLBWIs)医院感染的临床特点及危险因素,为其防治提供依据.方法 对我院新生儿重症监护室(NICU) 2010年1月至2011年12月收治的住院时间＞48 h的220例VLBWIs临床资料进行回顾性分析.结果 院感组88例发生医院感染125例次,医院感染率40.0％,与住院时间相关的医院感染率19.5％.医院感染主要包括呼吸道感染(66.4％),消化道感染(15.2％)和败血症(12.0％).97株G-菌对青霉素类、头孢菌素类抗生素耐药率88.3％ ～97.9％,喹诺酮类、碳青霉烯类抗生素耐药率＜30％.院感组、非院感组抗生素使用强度分别为3.76,2.32；人均抗生素消耗量(1.67±1.21) g/DDD值规定日剂量(defined daily dose,DDD),(0.62±0.50) g/DDD值,差异有统计学意义(P＜0.01).院感组住院时间(44.38±25.98)d较非院感组(19.05±15.29)d长(P＜0.01).Logistic回归表明:住院时间＞28 d、机械通气时间＞72 h和脂肪乳使用＞14 d是VLBWIs医院感染的独立危险因素.结论 VLBWIs医院感染率高,使住院时间延长,抗生素使用强度和消耗量增加.缩短机械通气、脂肪乳使用和住院时间,可能使VLBWIs医院感染减少.
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STAT3基因多态性与重庆地区汉族儿童川崎病易感性的关系
目的 探讨信号转导和转录激活因子-3(signal transducer and activator of transcription-3,STAT3)基因单核苷酸多态性(single nueleotide polymorphism,SNP)与重庆地区汉族儿童川崎病(kawasaki disease,KD)易感性的关系.方法 用序列特异性引物聚合酶链反应(sequence specific primers-polymerase chain reaction,SSP-PCR)分析130例重庆地区汉族川崎病患儿及147名健康儿童STAT3基因内含子11(rs2293152C/G和rs957970C/T)的SNP,统计学分析病例组与对照组之间的差异.结果 川崎病组STAT3基因rs2293152C/G位点CC基因型频率(23.8％)显著高于对照组(10.2％),川崎病组rs2293152C等位基因分布频率(45.4％)显著高于对照组(34.0％,P=0.006,OR=1.612,95％ CI:1.144～2.272)；而STAT3 rs957970C/T位点基因型及等位基因频率分布在川崎病组和对照组间无统计学差异(P＞0.05).结论 重庆地区汉族儿童的STAT3基因内含子11中rs2293152位点多态性与川崎病易感性相关,携带rs2293152C等位基因者比G等位基因携带者易罹患川崎病,而STAT3 rs957970C/T位点多态性与该地区儿童川崎病的易感性无显著相关性.
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TO901317修复酒精致新生小鼠视网膜节细胞损伤的实验研究
目的 观察酒精暴露对新生小鼠视网膜结构的影响,以及肝脏X受体(LXRs)激动剂TO901317对酒精损伤小鼠视网膜的保护作用.方法 将新生C57BL/6J小鼠分为对照组、酒精暴露组和激动剂TO预处理组,每组3只.采用HE染色检测各组小鼠视网膜大体结构改变,采用免疫组化染色检测各组小鼠视网膜NeuN阳性细胞数、GFAP表达变化.结果 免疫组化染色发现LXRβ主要分布于新生小鼠视网膜节细胞层,HE染色发现酒精组新生小鼠视网膜节细胞数量较对照组显著减少(P＜0.01),TO处理能显著翻转酒精暴露导致的视网膜节细胞层细胞数量减少(P＜0.05)；免疫组化染色发现酒精组小鼠眼球视网膜节细胞层NeuN阳性细胞数明显少于对照组(P＜0.01),而TO预处理组较酒精组NeuN阳性细胞显著增多(P＜0.01).对各组进行GFAP免疫组化染色并采用光密度分析进行半定量分析,结果显示酒精组小鼠视网膜GFAP表达较对照组和TO预处理组显著增高(P＜0.01).结论 LXRs受体激活可有效抑制酒精所致视网膜中星形胶质细胞的活化,挽救节细胞丢失.
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莪术醇通过JAK3/STAT信号途径抑制Jurkat细胞增殖
目的 观察莪术醇对抑制Jurkat细胞增殖的影响,并从JAK3/STAT信号途径探讨其作用机制.方法 不同浓度(6.25、12.5、25、50 μg/mL)莪术醇干预处理人Jurkat细胞株,分别用新型四唑单钠盐法、流式细胞技术观察检测细胞增殖活力及细胞周期分布.Hoechst 33258染色,观察莪术醇诱导的细胞凋亡形态学变化.设正常对照组、IL-2刺激组、JAK3抑制剂组及莪术醇干预组,Western blot检测细胞中JAK3、STAT3及STAT5a磷酸化蛋白表达量的变化.结果 不同浓度的莪术醇体外处理24 h后,Jurkat细胞的增殖受到明显抑制,呈浓度依赖性下降(P＜0.05).细胞周期分布结果显示,随着莪术醇作用浓度的增加,细胞凋亡的比例明显升高,S期细胞比例呈浓度依赖性增多,G2/M细胞比例则呈减少趋势.50 μg/mL的莪术醇处理24h后,细胞表现出核固缩、碎裂等典型的凋亡形态学变化.Western blot检测结果显示,50 μg/mL的莪术醇可抑制JAK3与STAT5a磷酸化蛋白的表达(P ＜0.05,P＜0.01),但对STAT3无明显影响(P＞0.05).结论 莪术醇作用于Jurkat细胞S～G2/M期,阻滞S期细胞向G2/M期移行,并下调JAK3/STAT5信号分子以抑制该细胞增殖.
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卡铂联合PF-04691502抗三阴性乳腺癌细胞的体外研究
目的 研究卡铂与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)抑制剂PF-04691502 (PF)联合抗人三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞的作用.方法 通过细胞增殖实验、克隆形成实验、细胞划痕愈合实验以及流式细胞技术来分析卡铂和PF对TNBC细胞(HCC1937和MDA-MB 231)的抑制作用,并通过ELISA实验来检测PF对肿瘤发生过程中的关键蛋白Akt磷酸化的抑制作用.结果 细胞增殖实验发现卡铂与PF对TNBC细胞均有协同抑制作用(CI＜1)；还能有效地抑制TNBC细胞克隆的形成和迁移(P＜0.01).ELISA实验发现PF对TNBC细胞Akt的磷酸化也具有一定的抑制作用,并且具有浓度依赖性.流式细胞结果显示PF对TNBC细胞G1期有阻滞作用,而卡铂为周期非特异性药物.结论 卡铂联合PF具有协同抗TNBC细胞的作用；并提示化疗药物联合PI3K抑制剂也许能够提高TNBC的治疗效果,并减少化疗药物的给药剂量、降低毒副作用.
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肾癌细胞来源的exosomes诱导Jurkat T细胞凋亡
目的 体外研究肾癌786-0细胞来源的exosomes介导肿瘤免疫逃逸的机制.方法 采用CCK-8法检测肾癌786-0细胞来源的exosomes对Jurkat T细胞生长的影响,瑞氏-姬姆萨染色检测Jurkat T细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测Jurkat T细胞凋亡率,ELISA法检测Jurkat T细胞分泌功能,可溶性Fas阻断实验检测exosomes 对Jurkat T细胞凋亡率的影响,Western blot检测exosomes中FasL、及Jurkat T细胞caspase、Bax及Bcl-2蛋白的表达.结果 肾癌786-0细胞来源的exosomes可抑制Jurkat T细胞生长,10 μg/mL exosomes作用于Jurkat T细胞24 h,生长抑制率为(19.64 ±0.92)％,72 h为(36.24±1.12)％；400 μg/mL exosomes作用24 h,生长抑制率为(55.96±1.35)％,72 h为(76.51 ±1.37)％.Exosomes诱导Jurkat T细胞凋亡,10 μg/mL exosomes作用于Jurkat T细胞8h,凋亡率为(7.31±1.32)％,24h为(20.19±1.47)％；400 μg/mL exosomes作用8h,凋亡率为(27.28±1.29)％,24h为(41.72±0.88)％.Exosomes还明显抑制JurkatT细胞IL-2、IFN-γ、IL-6、IL-10的分泌水平；exosomes高表达FasL,可溶性Fas阻断实验能逆转Jurkat T细胞的凋亡；凋亡诱导过程中caspase-3、caspase-8、caspase-9被激活,Bax/Bcl-2上调.结论 肾癌786-0细胞分泌的exosomes能诱导JurkatT细胞凋亡,介导肿瘤免疫逃逸.
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大鼠脊髓压迫性损伤后脱髓鞘病变及MBP、Id2的表达变化
目的 分析脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后脱髓鞘病变与髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)、DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding2,Id2)的表达变化之间的关系,以探讨CSCI脱髓鞘病变机制.方法 采用自行设计的方法制作SD大鼠CSCI模型,通过锇酸染色检测CSCI后1、3、7d有髓神经纤维变化；运用免疫荧光双标和免疫印迹(Westem blot)检测MBP及Id2的表达变化.结果 CSCI后出现脱髓鞘病变,并随着压迫时间延长,髓鞘逐渐发生水肿、变性、崩解；脊髓损伤后MBP表达下调,其表达趋势与脱髓鞘溃变的严重程度一致；CSCI后,Id2广泛分布于白质,随着压迫时间延长,其表达逐渐上调.结论 Id2表达上调,并负向调控MBP基因启动子的活性,使MBP的表达下降,是CSCI后神经纤维脱髓鞘病变的机制之一.
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雾化吸入布地奈德对肺纤维化大鼠的干预效果
目的 研究雾化吸入布地奈德对博莱霉素致大鼠肺纤维化模型的干预作用.方法 45只SD雌性大鼠随机分成3组(每组15只):模型组、对照组和布地奈德吸入组.各组大鼠分别于干预后第7、14、28天用随机数字表法处死5只,HE和Masson染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清和肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluid,BALF)中转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的含量.结果 ①HE和Masson染色结果证实成功复制经典肺纤维化模型,肺纤维化主要发生在肺组织局部,同时伴有不同程度全身反应.②布地奈德吸入组和模型组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较对照组严重(P＜0.05),且布地奈德吸入组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较模型组有明显改善(P＜0.05).③ELISA法显示各组大鼠血清和BALF中TGF-β和CTGF表达水平不同,BALF中TGF-β和CTGF表达水平较血清水平高.④与对照组比较,模型组和布地奈德吸入组大鼠血清和BALF中TGF-β和CTGF明显增加(P＜0.05),布地奈德吸入组中TGF-β和CTGF水平较模型组明显降低(P＜0.05).结论 雾化吸入布地奈德能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能与肺泡灌洗液和血清中TGF-β和CTGF表达有关.
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百合多糖联合BMSCs移植减轻小鼠肺纤维化的实验研究
目的 观察百合多糖联合BMSCs移植是否影响小鼠肺纤维化的形成.方法 培养小鼠BMSCs做移植备用.90只SPF小鼠按随机数字表法分为对照组(C)、模型组(M)、百合多糖联合BMSCs组(A)、BMSCs组(B)、百合多糖组(L),每组18只.建立肺纤维化小鼠模型,24h后各组给予相应处理.第7、14、28天行肺组织病理评分.第28天观察各组肺系数、肺组织胶原沉积、羟脯氨酸(HYP)含量、Western blot检测肺组织TNF-α和NF-κB蛋白表达情况.结果 与C组相比,M组肺系数、病理形态评分、HYP含量、肺组织TNF-α、NF-κB表达均增高(P＜0.05).与M组相比,A组、L组各指标均降低(P＜0.05),B组第28天病理评分降低(P＜0.05).M组有大量胶原沉积,各干预组胶原沉积均较轻.结论 百合多糖联合BMSCs移植后抑制肺纤维化小鼠肺组织的TNF-α、NF-κB的表达,减轻肺纤维化的病理损伤,联合干预的效果强于单用百合多糖或单用BMSCs移植.
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食管异物并发主动脉食管瘘1例
食管异物并发主动脉食管瘘(aortoesophageal fistula,AEF)是食管异物的严重并发症,临床较少见,一旦发生,死亡率极高[1].现将我院收治的1例食管异物并发主动脉食管瘘报告如下.
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外伤性肾假性动脉瘤1例
假性动脉瘤(pseudoaneurysm,PSA)为各种原因导致血管损伤,血液自血管破裂口流出在动脉周围组织间隙内形成血肿,动脉瘤壁由动脉外膜和局部血管破裂形成的血肿及周围结缔组织构成,并与动脉腔相通,而无真正的动脉壁结构[1].肾假性动脉瘤临床少见[2],分肾外型和肾内型两类,以肾内型多见.本院收治1例,报告如下.
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原发性气管支气管肺淀粉样变1例
原发性气管支气管肺淀粉样变临床非常罕见,至今病因未明,极易误诊.现将我们近期遇到的1例原发性气管支气管肺淀粉样变报告如下,以提高临床医师对该病的诊断水平.
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颅内外血管多发性狭窄多支架置入并发症的防治
颅内外血管狭窄或闭塞可导致局部脑血流速度下降、组织灌流不足,造成梗死.文献[1]报道约20％的缺血性脑卒中与颈内动脉狭窄或闭塞有关,特别是颅内外多发性血管狭窄引起神经功能缺损症状更明显.随着神经介入技术的发展,颅内外血管支架置入术已成为治疗脑血管狭窄有效的新方法[2].但由于动脉粥样硬化造成颅内外血管迂曲、狭窄等,在支架介入治疗术后,伴随有各种并发症.在支架置入过程中,正确的术前评估,手术中正规操作,术后正规治疗及规范化护理是减少并发症的主要措施[3].我院自2010年2月至2011年6月,完成颅内外血管狭窄支架置入术66例,其中8例患者是多支架置入,治疗效果良好.现将结果报告如下.
