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甲氧化三丁基锡通过线粒体途径诱导Jurkat T淋巴瘤细胞凋亡
目的 研究甲氧化三丁基锡(tributyltin methoxide,TBTMO)通过线粒体途径诱导Jurkat T淋巴瘤细胞凋亡.方法 使用不同剂量(0、0.4、0.6、0.8和1.0 μmol/L)的TBTMO处理细胞,分别于不同时间点收获细胞后,采用流式细胞仪对磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻、线粒体Apo2.7蛋白和线粒体膜电位等分子生物学标志和指标进行检测和分析.结果 TBTMO诱导后Jurkat T淋巴瘤细胞的PS外翻,可见有凋亡小体、细胞核凝聚、细胞核碎裂等许多凋亡的典型变化特征.TBTMO诱导后线粒体膜蛋白Apo2.7分子增加、膜电位快速降低并维持这种低电位至濒临死亡.结论 TBTMO可通过线粒体途径诱导Jurkat人淋巴瘤细胞凋亡.
关键词： 线粒体途径 甲氧化三丁基锡 Jurkat T细胞 细胞凋亡 -
CD45RO N-糖基化位点对galectin-3结合CD45RO突变体转染细胞的影响
目的 构建CD45RO不同N-糖基化位点突变的T细胞株,并检测其与galectin-3的结合情况.方法 采用N→Q定点突变技术分别去除CD45RO的11个N-糖基化位点,制备单个N-糖基化位点缺失的CD45RO,然后将其导入慢病毒表达载体pWPXL中,11个携带单个N-糖基化位点缺失的CD45RO重组慢病毒质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和MD2.G共转染293T细胞,将包装重组慢病毒感染CD45-的J45.01细胞,流式分选后获得11株分别表达CD45RO单个N-糖基化位点缺失的J45.01 T细胞株.通过RT-PCR和流式细胞术分别从RNA水平和蛋白水平验证CD45RO突变体的转录和表达,应用流式细胞术检测CD45RO突变细胞株与galectin-3的结合情况.结果 成功构建了1 1个CD45RO单个N-糖基化位点缺失的T细胞株,各突变细胞株能稳定表达突变基因,经测序再次证实突变位点正确,CD45 RO突变体能稳定表达于细胞表面.galectin-3与N327Q突变细胞的结合明显增强,与N36Q突变细胞和N217Q突变细胞的结合明显减弱.结论 CD45RON-糖基化位点对galectin-3与CD45 RO-J45.01细胞的结合有调节作用.
关键词： 半乳糖凝集素-3 结合 N-糖基化位点 CD45RO Jurkat T细胞 -
脂氧素A4通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道电流而抑制其激活和增殖
目的 通过研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化、钙池操纵的钙通道电流(Isoc)及细胞激活和增殖的影响,初步探讨其对T细胞的调节作用及机制.方法 钙离子荧光探针 Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜技术动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;全细胞膜片钳技术记录Isoc;ELISA测IL-2水平;3H-TdR掺入法测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 (1)用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时则无显著差异;(2)IXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵的钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起Jurkat T细胞内游离钙浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制anti-CD3或植物血凝素(PHA)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;(3)膜片钳结果显示,LXA,抑制正常Jurkat T细胞Isoc,TG能显著增大Isoc,而LXA,呈剂量依赖性抑制,TG引起的Isoc的升高;(4)LXA4剂量依赖性抑制anti-CD3和anti-CD28诱导的Jurkat T细胞IL-2表达及细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止Jurkat T细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞Isoc引起的胞质内游离钙离子浓度的升高而抑制其激活和增殖.
关键词： 脂氧素A4 Jurkat T细胞 钙池操纵的钙通道 膜片钳 细胞激活和增殖 -
泛素连接酶Cbl对TRAIL诱导Jurkat T细胞凋亡调节作用的探讨
目的:探讨泛素连接酶Cbl在TRAIL诱导Jurkat T细胞凋亡中的调节作用.方法:台盼蓝拒染法检测细胞增殖能力,流式细胞仪PI染色检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测蛋白的表达.结果:不同浓度的TRAIL作用于Jurkat T细胞24 h,TRAIL能以剂量依赖性的方式抑制JurkatT细胞增殖,并能诱导Jurkat T细胞凋亡.100 ng/mL的TRAIL作用24 h,有35.98％的细胞发生凋亡,而对照组仅有2.52％的细胞发生凋亡,P＜0.01.在TRAIL诱导Jurkat T细胞凋亡过程中伴随有p-Akt表达的一过性上调和泛素连接酶Cbl-b和c-Cbl表达的持续上调.结论:TRAIL上调Cbl蛋白的表达是抑制Jurkat T细胞中PI3K/Akt信号过度活化,进而诱导细胞凋亡的重要机制.
关键词： TRAIL 凋亡 PI3K/AKT Cbl蛋白 Jurkat T细胞 -
电离辐射对Jurkat T细胞凋亡与坏死的影响
目的:研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理.方法:采用Annexin V-EGFP和PI 双染、流式细胞术(FCM)检测不同剂量(0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy)X射线照射后Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的时间-效应关系和剂量-效应关系.结果:时间-效应关系,2.000 Gy X射线照射后,与假照组比较,Jurkat细胞凋亡百分率在照射后18 h显著增加,至24 h始终维持在较高水平(P＜0.001);细胞坏死百分率于照射后4 h显著增加,12 h 达峰值,至48 h始终维持在较高水平(P＜0.001).剂量-效应关系,0.075Gy X射线照射后18 h,Jurkat T细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组相比较未见明显变化(P＞0.05).2.000～6.000 Gy较大剂量X射线照射后18 h,细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组比较均呈剂量依赖性增加(P＜0.001).结论:2.000 Gy以上剂量X射线可以诱导Jurkat T细胞发生凋亡和坏死,细胞坏死比细胞凋亡出现时间更早,持续时间更长.
关键词： 辐射 电离 凋亡 坏死 Jurkat T细胞 -
离子霉素对Jurkat T细胞增殖的抑制作用
目的:探讨离子霉素对Jurkat T细胞增殖的抑制作用.方法:以JurkatT细胞为模型,与5种细胞增殖抑制剂比较,观察离子霉素对JurkatT细胞集落形成的影响,分析不同浓度离子霉素对Jurkat T细胞增殖的影响;分析离子霉素对Jurkat T细胞周期的影响;分析离子霉素对Jurkat T细胞凋亡的作用.本实验结果用统计软件包SPSS10.0进行处理,数据以均数±标准差(x±s)表示,多组间比较采用One-Way ANOVA,两组间比较用非配对Student'st检验.结果:随着离子霉素浓度从0.1 mg/L逐渐增至4.0mg/L,Jurkat T细胞的增殖逐渐减弱,以4.0 mg/L离子霉素的抑制作用为明显,呈剂量依赖关系,且该浓度下,离子霉素对JurkatT细胞增殖的抑制作用较PD98059、AG490、GF109203X和Genistein明显.离子霉素可使JurkatT细胞周期停滞于G0/G1期,阻止其进入S期并可促进Jurkat T细胞的凋亡.结论:离子霉素对Jurkat T细胞增殖有明显的抑制作用,可使Jurkat T细胞周期停滞于G0/G1期,阻止其进入S期,且对Jurkat T细胞凋亡有显著促进作用.
关键词： 离子霉素 Jurkat T细胞 增殖 周期 凋亡 -
Jurkat T细胞质膜蛋白组学研究初探
目的:分析Jurkat T细胞质膜蛋白质组成,并对这些质膜蛋白的生理学过程和功能进行初步分析,为进一步研究Jurkat T细胞膜蛋白功能奠定基础.方法:首先采用差异密度梯度离心法提取Jurkat T细胞膜蛋白,然后将提取出的膜蛋白根据分子量大小通过SDS-PAGE进行初步分离,再进一步将分离出的蛋白条带切下进行胶内酶解,酶解后的肤段通过液相-芯片-离子阱质谱技术进行鉴定和生物信息学分析,建立Jurkat T细胞质膜蛋白全谱图,并进一步通过GO(Gene Ontology)对这些质膜蛋白进行功能分析.结果:成功提取了Jurkat T细胞的膜总蛋白,并建立了Jurkat T细胞质膜蛋白全谱图,共鉴定出618个质膜蛋白,经GO注释分析,其中与结合功能相关的质膜蛋白有493个,与信号转导活性相关的有186个,具有酶催化活性的有166个,具有转运活性的有137个,有些还具有酶调节活性、结构分子活性或者运动活性等,功能尚不清楚的有49个.结论:通过差异密度梯度离心,结合一维SDS-PAGE和HPLC-CHIP-MS/MS,成功建立了Jurkat T细胞质膜蛋白全谱图,并通过GO注释,初步分析了这些蛋白的功能和生理学过程,为进一步研究Jurkat T细胞质膜蛋白的功能奠定了基础.
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茴香霉素对Jurkat T细胞生物学行为的影响
探讨茴香霉素对Jurkat T细胞活化、增殖、周期及凋亡的影响.应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测茴香霉素对豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)和离子霉素(Ion)诱导Jurkat T细胞表面分子CD69和CD25的表达; 利用倒置显微镜和噻唑蓝(MTT)比色法观察茴香霉素对Jurkat T细胞的集落形成和增殖影响; 采用碘化丙锭(P1)染色检测茴香霉素对Jurkat T细胞周期的影响; 应用Annexin V-FITC和PI双染色检测茴香霉素对Jurkat T细胞凋亡的影响.结果表明,在PMA和Ion共同刺激下随茴香霉素剂量上升CD69和CD25的表达量逐渐下降; 随着茴香霉素剂量增高,Jurkat T细胞的集落形成减小,其对细胞增殖的抑制率高可达74.29%,使细胞周期停滞于G0/G1期之前; 当茴香霉素剂量为40.0～160.0 ng/ml时能明显促进Jutkat T细胞凋亡.结果提示,茴香霉素能明显抑制PMA和Ion刺激下的Jurkat T细胞早期和中期活化,抑制Jurkat T细胞的增殖,使细胞周期停滞于G0/G1期之前,并能促进Jurkat T细胞凋亡.
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胃癌细胞来源的exosomes对Jurkat T细胞凋亡的影响及机制探讨
目的 观察胃癌细胞来源的外来体exosomes对Jurkat T细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制.方法 将人低分化胃腺癌细胞株进行培养、传代等处理,分离获得外来体exosomes.将消化后的Jurkat T细胞随机分为观察组与对照组,观察组分别加入50、100、200、400 μg/mL的exosomes,对照组不加exosomes,采用流式细胞仪测算培养12、24 h 时Jurkat T细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测培养24 h时Jurkat T细胞中的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspases-3)、Caspase-8.结果 与对照组比较,观察组随着exosomes浓度增加及作用时间的延长,Jurkat T细胞凋亡率均增加(P均<0.05);与对照组比较,观察组Jurkat T细胞中的Caspases-3、Caspase-8蛋白表达上调,差异有统计学意义(P均<0.05).结论 胃癌细胞来源的外来体exosomes可诱导Jurkat T细胞凋亡,该作用与其上调Caspases-3、Caspase-8蛋白表达有关.
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Jurkat T细胞电穿孔转染条件的优化
目的 优化人急性淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat T细胞)的电转染条件.方法 通过选择不同的电压、质粒浓度、细胞状态等转染参数,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒转入Jurkat T细胞.通过锥虫蓝拒染实验和荧光显微镜分析转染效率.结果 Jurk砒T细胞在电压150 V条件下转染效率达到(62.10±2.13)％;处于对数生长期的细胞转染效率较高;质粒浓度低于0.5g·L-1时影响转染效率;短时期内温度对转染效率的影响不大.结论 本实验通过选择优化Jurkat T细胞的转染参数、控制影响因素,可有效提高Jurkat T细胞电转染效率.
关键词： Jurkat T细胞 电转染 转染参数 转染效率 -
脂氧素A4对Jurkat T细胞游离钙浓度变化及增殖的影响
目的 研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化及细胞增殖的影响.方法 钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 ①采用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时,细胞内游离钙离子浓度下降不明显;②LXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起的Jurkat T细胞内游离钙离子浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制抗CD3单抗(a-CD3)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-Aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;③LXA4呈剂量依赖性抑制a-CD3和抗CD28单抗(a-CD28)诱导的Jurkat T细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止JurkatT细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例、细胞增殖指数(PI)和DNA含量.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道引起的胞质内游离钙浓度的升高而抑制其增殖.
关键词： 脂氧素A4 Jurkat T细胞 钙池操纵的钙通道 细胞增殖 -
三氯乙烯对Jurkat T 细胞免疫毒性作用
目的 研究三氯乙烯(TCE)对Jurkat T细胞免疫毒性,探讨TCE对Jurkat T细胞的大无作用剂量.方法 ①分别以不同浓度的TCE(0.10、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00 mmol/L)作用于初始和活化Jurkat T细胞(以佛波酯和离子霉素进行活化处理),并设TCE浓度为0.00 mmol/L的对照组和二甲基亚砜(DMSO)组(溶剂对照组),在培养24、48、72 h后,光学显微镜下观察Jurkat T细胞形态,以CCK-8法检测Jurkat T细胞存活率.②分别采用不同剂量的TCE(0.00、0.02、0.20、2.00 mmol/L)作用于初始和活化JurkatT细胞,分别在培养24、48、72 h后,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,以酶联免疫吸附实验检测细胞培养上清中白细胞介素-2(IL-2)水平.结果 ①染毒24 h后,10.00 mmol/L TCE染毒组可见明显细胞毒性,表现为细胞分散、体积变小、胞膜破裂、胞质浓缩、胞质内容物外溢逐渐增多.细胞存活率在染毒剂量与染毒时间的交互效应上有统计学意义(P＜0.01),其中,在3个时间点,与同时间点对照组和DMSO组比较,0.10、0.50、1.00和2.00 mmol/L TCE染毒组细胞存活率均无出现有统计学意义的下降(P＞0.05),5.00和10.00 mmol/L TCE染毒组细胞存活率均下降(P＜0.01).②以0.00 ～2.00mmol/L TCE染毒时,细胞凋亡率在染毒剂量主效应上以及其与细胞类型、染毒时间的交互效应上均无统计学意义(P＞0.05).活化Jurkat T细胞IL-2水平均高于同时间点同组初始Jurkat T细胞(P＜0.01);在3个时间点,活化Jurkat T细胞IL-2水平均随TCE染毒剂量增加而增加,呈剂量-效应关系(P＜0.01);活化Jurkat T细胞IL-2水平随TCE染毒时间增加而增加,呈时间-效应关系(P＜0.01).结论 本研究条件下,TCE对Jurkat T细胞的大无作用剂量为2.00 mmol/L.高剂量TCE(≥5.00 mmol/L)可对初始和活化Jurkat T细胞造成细胞毒性损伤;低剂量TCE(≤2.00 mmol/L)可刺激活化Jurkat T细胞IL-2分泌增高,并呈剂量-效应关系和时间-效应关系.
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JurkatT细胞模型在外源性化学物免疫毒性研究中应用进展
获得性免疫是高等动物体内非常重要的一种免疫反应，其主角是T淋巴细胞。外源性化学物（如药物和环境污染物等）对T淋巴细胞分化、成熟、增殖和信号转导的影响一直是免疫毒理学研究的难点和热点。在对T淋巴细胞的研究中多采用免疫磁珠分选人周围血，以获得纯度较高的人类T淋巴细胞，但获得的T淋巴细胞不能在体外长期传代，而且成本较高。 Jurkat T细胞属于急性T 淋巴细胞白血病细胞系，是一类永生化的人类T淋巴细胞。20世纪70年代末，Jurkat T细胞（初称为JM细胞）从T淋巴细胞白血病患者的周围血中分离出来［1］，20世纪80年代标准Jurkat T细胞系建立［2］。经过30多年的发展， Jurkat T细胞因其稳定的特性及简单的培养方法，现已广泛应用于T细胞信号转导、细胞因子和受体的表达以及急性T淋巴细胞白血病的治疗和机制研究中，在外源性化学物免疫毒性尤其是针对T淋巴细胞毒性效应研究中也得到快速发展。
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超抗原SEA体外对Jurkat T淋巴细胞增殖活性与表面超微结构的影响
目的:通过显微形态观察和功能检测分析超抗原(SEA)对Jurkat T淋巴细胞的影响.方法:应用CCK-8法,原子力显微镜(AFM)体外检测Jurkat T淋巴细胞增殖活性、及其细胞膜超微结构的改变.结果:与对照组比较,不同浓度的SEA随着作用时间的增加,细胞膜超微结构与Ra值明显发生改变.Jurkat T淋巴细胞经过质量浓度为0.1-100 mg/L SEA,作用48 h期间,Jurkat T细胞的表面超微结构(平均粗糙度,Ra)和增殖活性(A值)变化非常明显.其中,质量浓度10 mg/L SEA作用24 h,Jurkat T淋巴细胞表面结构变化明显,而细胞增殖活性在48 h达强.结论:SEA作为超抗原作用于Jurkat T淋巴细胞后,Jurkat T淋巴细胞的活化表现出表面形态结构改变先于代谢水平的改变,较后者更灵敏.
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钛离子对 Jurkat T 细胞增殖及分泌骨改建相关因子的影响
目的：探讨钛离子对体外培养的Jurkat T细胞增殖及分泌白细胞介素1β（ IL－1β）、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、核因子－κB受体活化因子配体（RANKL）的影响。方法（1）应用噻唑蓝（MTT）法确定对Jurkat T细胞具有大增殖效应的钛离子浓度和作用时间。（2）根据是否用植物血凝素（PHA）预活化将Jurkat T细胞分为PHA（＋）及PHA（－）两个大组，两组细胞按加入钛离子浓度的不同分别设立低、中、高浓度组及对照组，相对应以25、50、100μmol／L，0μmol／L的钛离子进行干预，24 h后离心收集各组细胞上清液，ELISA法检测细胞上清液中IL－1β、TNF－α及RANKL的表达。结果100μmol／L的钛离子与Jurkat T细胞作用24 h能使之产生大的增殖效应，且增殖效应具有浓度依赖性，当钛离子浓度大于100μmol／L时，钛离子对Jurkat T细胞的效应由增殖转为抑制。对于PHA（＋）及PHA（－）组的Jurkat T细胞，低、中、高浓度组的钛离子均能使之分泌IL－1β、TNF－α及RANKL，PHA（＋）组Jurkat T细胞各细胞因子的分泌量高于PHA（－）组。结论钛离子能使体外培养的Jur-kat T细胞产生增殖效应并分泌骨改建相关因子IL－1β、TNF－α及RANKL。
关键词： 钛离子 Jurkat T细胞 细胞增殖 骨改建 -
莪术醇通过JAK3/STAT信号途径抑制Jurkat细胞增殖
目的 观察莪术醇对抑制Jurkat细胞增殖的影响,并从JAK3/STAT信号途径探讨其作用机制.方法 不同浓度(6.25、12.5、25、50 μg/mL)莪术醇干预处理人Jurkat细胞株,分别用新型四唑单钠盐法、流式细胞技术观察检测细胞增殖活力及细胞周期分布.Hoechst 33258染色,观察莪术醇诱导的细胞凋亡形态学变化.设正常对照组、IL-2刺激组、JAK3抑制剂组及莪术醇干预组,Western blot检测细胞中JAK3、STAT3及STAT5a磷酸化蛋白表达量的变化.结果 不同浓度的莪术醇体外处理24 h后,Jurkat细胞的增殖受到明显抑制,呈浓度依赖性下降(P＜0.05).细胞周期分布结果显示,随着莪术醇作用浓度的增加,细胞凋亡的比例明显升高,S期细胞比例呈浓度依赖性增多,G2/M细胞比例则呈减少趋势.50 μg/mL的莪术醇处理24h后,细胞表现出核固缩、碎裂等典型的凋亡形态学变化.Western blot检测结果显示,50 μg/mL的莪术醇可抑制JAK3与STAT5a磷酸化蛋白的表达(P ＜0.05,P＜0.01),但对STAT3无明显影响(P＞0.05).结论 莪术醇作用于Jurkat细胞S～G2/M期,阻滞S期细胞向G2/M期移行,并下调JAK3/STAT5信号分子以抑制该细胞增殖.
关键词： 莪术醇 Jurkat T细胞 JAK3-STAT 细胞增殖 -
Sp1反义寡核苷酸抑制Jurkat T细胞hTERT表达而抑制端粒酶活性
目的:研究转录因子S p1反义寡核苷酸(0DN)对Jurkat T细胞端粒酶活性和端粒酶催化亚基hTERT表达的影响.方法:设计Sp1反义ODN并用脂质体转染细胞,用端粒酶PCR-ELISA方法检测端粒酶活性;用逆转录PCR方法检测Sp1和hTERT mRNA水平,用Western blot检测蛋白水平.结果:Sp1反义ODN(1 μmol/L)明显抑制Jurkat T细胞Sp1 mRNA和蛋白表达,抑制率分别为44.8%(P＜0.05)和57%(P＜0.01),并抑制hTERT mRNA表达,抑制率为43.7%(P＜0.01);当浓度从0.25到2.0 μmol/L,Sp1反义ODN对端粒酶活性抑制率从27.1%到64.6%,呈明显的剂量依赖性关系.结论:Sp1反义寡核苷酸通过抑制hTERT mRNA表达而抑制端粒酶活性.
关键词： Sp1 反义寡核苷酸类 端粒酶 hTERT Jurkat T细胞
