第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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95D细胞转移相关基因在原发灶、循环肿瘤细胞和转移灶中的差异表达
目的 利用人巨细胞肺癌高转移株(95D)裸鼠自发转移模型,分析CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B肿瘤转移相关基因在原发灶、循环血肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)和转移灶中的差异表达.方法 根据前期实验结果并利用GoSufer软件进行GO(gene ontology)分析,筛选出可能与肿瘤转移相关的基因CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B.利用稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人巨细胞肺癌细胞株95D/GFP,建立肺癌裸鼠自发转移模型,用流式细胞分选术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分别纯化原发灶、外周血和转移灶中的肿瘤细胞,利用Real-time PCR技术检测上述基因在上述肿瘤细胞中的相对表达量.结果 CD9、RHOA、MYL12A基因在CTCs中表达较少,其次是肝转移灶,在皮下原发灶中表达较多;B2M基因在皮下原发灶、CTCs和肝转移灶中依次降低;PTOV1基因在CTCs中高表达,其次是皮下原发灶,肝转移灶中表达少;HSPA1B基因只在原发灶中表达.结论 CD9、RHOA、MYL12A、B2M、HSPA1B基因可能是潜在的肺癌转移抑制基因,而PTOV1可能促进肺癌微转移.
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Herpes virus entry mediator/CD160介导入调节性T细胞对CD4+效应性T细胞的抑制作用
目的 研究HVEM、CD160在不同CIM+ T细胞亚群,不同功能状态下的表达以及HVEM-CD160通路对CD4+ CD25+ 调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)免疫调节作用的影响.方法 采用流式细胞分析术分别检测3例不同个体CD4+ CD25+ Tregs及CD4+ CD25-T 细胞在1 000 IU/ml人重组IL-2、与细胞数量1∶1的抗CD3/CD28 mAb包被磁珠的刺激下第0、3、5天HVEM或CD160的表达情况.采用1.25、2.5、5μg/ml HSV1 gD蛋白处理4例不同个体Treg,培养5 d后,将处理的Treg与Teff在体外以1∶1混合并加入300 IU/ml IL-2及等量抗CD3/CD28 mAb包被磁珠,行混合淋巴细胞共培养,于培养结束前18 h加入3H-TdR,共培养7 d后检测各组细胞CPM增殖情况.5 μg/ml gD蛋白处理5例不同个体Treg后将其细胞浓度调整为5×106并接种于6孔培养板内,加入500 IU/ml IL-2共培养7 d,行RT-PCR(Realtime PCR)分析Treg Foxp3基因表达.结果 HVEM在初始CD4+ CD25+ Tregs表面呈中度表达,平均表达率为42%,且随着Treg的活化其表达HVEM上调;CD160在初始CD4+ CD25-T细胞表面呈低度表达,平均表达率仅7%,但伴随其活化,表达CD160有所上调.采用不同浓度HSV1 gD蛋白处理Treg后2.5 μg/ml与5μg/ml浓度组抑制CD4+ CD25-T细胞增殖作用与空白对照组(276±35)相比明显下降,CPM值分别为(2014±202)、(6535±531),差异具有统计学意义(P＜0.05),且具有浓度依赖性;RT-PCR分析发现Treg经5μg/ml gD蛋白处理后Foxp3基因表达率下降,仅为空白对照组的48%,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 机体接受免疫刺激后Treg通过上调HVEM表达与CD4+ CD25-效应性T细胞(effective T cell,Teff)表面上调表达的受体CD160交联从而上调Treg Foxp3基因的表达,终介导了Treg对Teff活化、增殖的抑制作用,HVEM-CD160通路对Treg免疫调节作用具有重要意义.
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笑气吸入清醒镇静法在阻生牙拔除术中的临床观察
目的 观察笑气吸入清醒镇静法在阻生牙拔除术中的临床应用效果.方法 40例需拔除下颌第3磨牙的患者按随机数字表法分为实验组和对照组,每组20例;实验组采用笑气吸入清醒镇静加局麻法拔牙,对照组采用常规局麻法拔牙,记录两种方法的拔牙完成时间,收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、心率(HR)和脉搏氧饱和度(SpO2)变化,并进行疼痛程度(VAS评分)和镇静程度(Ramsay评分)的观察.结果 实验组拔牙时间缩短,SBP、DBP、HR、SpO2变化平稳,疼痛程度减轻,局麻和手术时VAS分别为(1.10±0.72)、(1.75±0.64);镇静程度增强,术前和术中Ramsay分别为(2.55±0.51)、(2.35±0.48),与对照组比较均有显著统计学差异(P＜0.05).结论 笑气吸入清醒镇静法在阻生牙拔除术中具有安全、有效等特点,值得临床推广应用.
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实时定量PCR检测miR-373*、miR-200c在乳腺癌干细胞中的表达及其靶基因预测
目的 分析miR-373*、miR-200c在乳腺癌千细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)和MCF-7乳腺癌细胞株中的差异表达.方法 Trizol法分别抽提乳腺癌干细胞和MCF-7细胞总RNA,实时定量PCR检测miRNAs表达,对表达差异显著的miRNAs进行潜在靶基因预测.结果 miR-373*在乳腺癌干细胞中较MCF-7细胞高表达(6.684±0.548),而miR-200c在乳腺癌干细胞中较MCF-7细胞低表达(0.345±0.031).通过软件分析预测,miR-373*与TP53INP2、CASP8、EIF4A1、EEF1A1等基因均具有可能靶位点,miR-200c与TCF2、TDE2、SYVN1、PDCD10、RAP2C等基因均具有可能靶位点.结论 miR-373*在乳腺癌干细胞中高表达,可能是一个潜在的癌基因.miR-200c在乳腺癌干细胞中低表达,可能是一个潜在的抑癌基因.
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桑葚花色苷的提取及对人乳腺癌细胞株MDA-MB-453生长的抑制
目的 以超声辅助乙醇浸提法提取桑葚花色苷,观察其对人乳腺癌细胞株MDA-MB-453体内外生长的抑制作用.方法 将桑葚冷冻干燥,冷冻干粉于常温下用70%乙醇以1∶15的料液比超声提取1 h,提取液采用Amberlite TM XAD7HP型大孔吸附树脂以1 ml/min的吸附流速和1 ml/min的洗脱流速在pH 3.0酸性环境下纯化,得到桑葚花色苷提 取物.利用CCK-8法检测不同浓度桑葚花色苷提取物(50、100、150、200 ms/ml)对人乳腺癌细胞MDA-MB-453增殖活力的影响;以24只雌性BALB/c裸鼠建立MDA-MB-453细胞移植瘤模型,随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,分别以0、50、100、200 mr/(kg·d)的桑葚花色苷提取物膳食干预,检测其对肿瘤生长的影响.结果 获得花色苷含量为(41.8±4.8)%的桑葚花色苷提取物;CCK-8法检测发现桑葚花色苷提取物可显著降低乳腺癌细胞活力,并显示剂量-效应关系[50、100、150、200 ms/ml桑葚花色苷提取物处理组抑制率分别为(14.8±1.8)%、(29.8±2.2)%、(33.0 ±2.7)%、(44.3±3.8)%];体内实验发现,高剂量组和中剂量组移植瘤体积和质量均显著低于对照组[体积抑制率分别为(55.5±4.8)%、(39.3±3.2)%;质量抑制率分别为(51.6±4.2)%、(38.9±3.1)%],表明桑葚花色苷提取物膳食干预可有效抑制移植瘤的生长.结论 桑葚花色苷提取物能够显著抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-453的生长.
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高技术局部战争条件下军队卫生装备建设分析
本文分析了高技术局部战争条件对卫勤保障所带来的影响,分别介绍了系统网络、抢运急救、伤员后送和检诊救治在高技术局部战争条件下发展所面临的新要求,并提出了我军未来卫生装备建设发展的相关政策建议.
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高效液相色谱-质谱法在筛选胆管癌肿瘤标志物中的应用
目的 应用蛋白质组学技术筛选人胆汁中与胆管癌相关的蛋白质分子.方法 收集2008年3月至2009年10月重庆医科大学附属第一医院肝胆外科经明确病理诊断的胆管癌住院患者的胆汁共15例,正常人胆汁5例.应用非离子型脱脂剂结合分子筛超滤方法制备纯化胆汁样本,通过高效液相色谱-质谱法(HPLC-CHIP-MS/MS)鉴定差异表达的蛋白质,并用Spectrum Mill software对检测结果进行分析.结果 与正常人胆汁比较,在胆管癌患者胆汁中,检测到109个高可信蛋白,其中12个为新增蛋白质,其功能主要涉及癌细胞的发生、增殖、分化、转移等.结论 高效液相色谱-质谱法鉴定的12个差异表达蛋白质可能成为研究胆管癌的生物学分子标志物.
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我国学生营养健康状况未来5年发展趋势预测
目的 预测未来5年全国学生营养健康状况的发展趋势.方法 基于1985、1995、2000、2005年4次全国学生体质调研有关营养检测指标的监测数据,运用多变量灰色预测模型方法,建立全国学生营养不良、超重和肥胖的数学预测模型及其预测值.结果 轻度营养不良2010、2015年的大检出率,城市男生(城男)将达4.25%和4.33%,城市女生(城女)达7.37%和6.65%,乡村男生(乡男)达5.07%和6.29%,乡村女生(乡女)达7.37%和7.88%;中度以上营养不良2010、2015年大检出率,城男达0.18%和0.20%,城女达0.68%和0.70%,乡男达0.20%和0.23%,乡女分别达0.72%和0.72%;超重2010、2015年的大检出率,城男达22.89%和31.86%,城女达16.01%和20.09%,乡男达15.31%和22.42%,乡女达11.42%和14.90%;肥胖2010、2015年的大检出率,城男达19.85%和26.02%,城女达11.18%和15.49%,乡男达10.91%和18.36%,乡女达6.13%和9.55%.13-15岁和16～18岁是未来5年我国学生营养不良的重点干预群体,10～12岁学生是超重和肥胖的重点干预群体;轻度营养不良学生群体有望下降,城市学生下降幅度较明显于农村学生;中度以上营养不良未来增降不明显,城乡差距不显著且水平基本持平.结论 未来5年超重、肥胖学生群体呈递增态势,城市上升幅度高于农村,男生高于女生,肥胖成为未来5年威胁我国学生健康的重大营养问题,应引起全社会的高度重视与关注.
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血液净化对脓毒性休克患者血清细胞因子及预后的影响
目的 研究不同血液净化方式对脓毒性休克患者血清细胞因子水平及预后的影响,探讨血液净化对脓毒性休克患者的治疗作用.方法 将36例急性生理及慢性健康评分Ⅱ(APACHE Ⅱ评分)≥15分的脓毒性休克患者,采用随机数字表法分为对照组、连续性静脉-静脉血液滤过(continuous veno-venous hemofiltration,CVVH)组、血液灌流(hemoperfusion,HP)+连续性静脉-静脉血液滤过组(HP+CVVH),每组12例,分别进行常规治疗、常规治疗+CVVH治疗、常规治疗+HP+CVVH治疗.检测各组治疗后不同时相点血清TNF-α、IL-6、IL-10、HMGB-1浓度,并比较各组1～7 d全身性感染相关性器官功能衰竭评价(sepsis related organ failure assessment,SOFA)评分及28 d存活率的差别.结果 对照组及CVVH组TNF-α、IL-6、HMGB-1、IL-10在第1、3天各时相点浓度变化均无统计学意义(P＞0.05);HP+CVVH组中HP治疗2 h后的TNF-α、HMGB-1、IL-10均有明显下降,IL-6也有一定下降,其他时相点浓度变化均无统计学意义(P＞0.05).与对照组相比,CVVH组从第4天起SOFA评分即明显降低(P＜0.05),HP+CVVH组第2天起SOFA评分即明显降低(P＜0.05);28 d存活率提高(对照组、CVVH组、HP+CVVH组分别为41.67%、58.33%、66.67%),且以HP+CVVH组更明显,但3组间无统计学意义.结论 CVVH对脓毒性休克患者血清TNF-α、IL-6、HMGB-1、IL-10的水平无明显影响,HP能显著降低血清TNF-α、HMGB-1、IL-10浓度;CVVH及HP+CVVH治疗均能促进脓毒性休克患者器官功能恢复,且以HP+CVVH治疗效果更佳.
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丁酸钠对大鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的影响
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)丁酸钠对在体外与膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)接触共培养的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分化能力的影响.方法 常规培养大鼠BMSCs及BSMCs至第3代,种植于多孔膜两侧进行接触共培养.实验组BMSCs培养上室面添加含3 mmol/L丁酸钠诱导其分化;对照组不含丁酸钠行接触共培养.免疫荧光化学染色法对2组BMSCs中平滑肌标志性蛋白calponin进行检测,同时用逆转录PCR(RT-PCR)和荧光定量PCR法(real-time PCR)对BMSCs中平滑肌α肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、calponin、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle-myosin heavy chain,SMMHC)行进鉴定.结果 大鼠原代BMSCs流式检测显示CD29、CD44、CD166表达阳性,阳性率分别为96.55%、92.76%、99.54%;CD31、CD45表达阴性,阳性率为1.39%、5.56%.BSMCs鉴定α-SMA、calponin、SM-MHC 3种标志性蛋白的表达均为阳性.细胞免疫荧光染色显示平滑肌标志性蛋白calponin的表达均随时间的延长而增加,实验组表达强度明显高于对照组.RT-PCR和荧光定量PCR显示实验组中BMSCs平滑肌标志性基因α-SMA、calponin、SM-MHC 随共培养时间的延长逐渐增多,与对照组比较有明显差异(P＜0.05).结论 HDACi丁酸钠可以增强BMSCs向平滑肌细胞的分化能力,提示提高组蛋白乙酰化程度可以促进BMSCs分化.
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情绪效价强度对抑郁症状个体认知控制的影响
目的 探讨情绪刺激效价强度对抑郁症状个体认知控制的影响.方法 选取重庆某大学本科生,发放问卷600份,回收有效问卷585份.利用贝克抑郁量表(Beck depression inventory,BDI)和自评抑郁量表(self-rating depression scales,SDS)进行筛选,得到抑郁症状被试23例和健康被试23例,利用经典的双选择情绪Oddball实验范式,比较在不同情绪刺激效价强度中两组被试对目标刺激反应的正确率和反应时差异.结果 ①正确率:健康组(F=11.221,P＜0.01)与抑郁症状组(F=12.310,P＜0.01)分别在情绪效价强度(愉悦度)上有显著差异,两组在高负性、中性和低正性中目标刺激的正确率均显著高于高正性和低负性(P＜0.05).②反应时:健康组(F=2.903,P＜0.05)与抑郁症状组(F=3.256,P＜0.05)分别在情绪效价强度上有显著差异;健康组在高负性、中性、低正性和高正性中目标刺激的反应时显著长于低负性(P＜0.05);抑郁症状组在高负性和低正性中目标刺激的反应时显著长于中性和高正性(P＜0.05).结论 情绪效价强度对抑郁症状个体的认知控制影响存在差异.随着负性情绪强度的增加,抑郁症状个体认知控制反应延迟;随着正性情绪强度的增加,抑郁症状个体认知控制反应提前.
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血管内皮生长因子促进少突胶质前体细胞增殖及其机制的初步研究
目的 观察不同浓度血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的影响,探索VEGF促进OPCs体外增殖与Notch信号通道上相关蛋白的关系.方法 分离纯化培养OPCs,MTT法检测不同浓度VEGF(50、100、200 ng/ml)促进OPCs增殖的作用以及加入Notch通路γ-分泌酶抑制剂DAPT(VEGF 100 ng/ml+DAPT 50 μmol/ml)后OPCs增殖变化情况,RT-PCR、Western blot技术检测VEGF处理OPCs后Notch信号通道上Notch-1、Hes-1的基因表达和蛋白表达情况.结果 50、100、200 ng/ml VEGF处理组的细胞增殖率分别为(107±2)%、(124±2)%、(142±7)%,与空白对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);VEGF+DAPT处理组的增殖率下降至(103±4)%(P＜0.05).RT-PCR及Western blot分析显示VEGF处理OPCs后,Notch-1、Hes-1蛋白在基因水平和蛋白水平表达均增加(P＜0.05),γ-分泌酶抑制剂DAPT能抑制其表达(P＜0.05).结论 VEGF对OPCs具有促进增殖的作用,其促增殖作用与Nocth信号通路相关蛋白有关.
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持续气道正压通气对胸腹腔镜下食管癌根治术患者单肺通气时肺内分流和氧合的影响
目的 观察胸腹腔镜下食管癌根治术患者单肺通气(one lung ventilation,OLV)时非通气侧肺持续气道正压(continuous positive airway pressure,CPAP)通气对肺内分流和氧合的影响.方法 80例择期行胸腹腔镜下食管癌根治术患者,ASA分级Ⅰ-Ⅱ级,采用随机数字表法分为4组(n=20):对照组(单肺通气时非通气侧支气管导管与大气相通)及CPAP 2 cmH2O组、CPAP 5 cmH2O组、CPAP 8 cmH2O组(单肺通气时非通气侧肺分别给予2、5、8 cmH2O的CPAP处理).分别于单肺通气前(T1)、单肺通气30 min(T2)、60 min(T3)、90 min(T4)、120 min(T5)采血行血气分析,根据公式计算肺内分流率(Qs/Qt).结果 对照组和CPAP2 cmH2O组T2-T5各时点Qs/Qt较T1明显增高,动脉血氧分压[p(O2)]明显降低(P＜0.05);CPAP 5 cmH2O组和CPAP 8 cmH2O组T2-T5各时点Qa/Qt较T1亦有增加,p(O2)亦有降低,但差异无显著性(P＞0.05);T2～T5各时点,CPAP 5 cmH2O组、CPAP 8 cmH2O组Qs/Qt明显低于对照组和CPAP 2 cmH2O组,p(O2)明显高于对照组和CPAP 2 cmH2O组(P＜0.05),而CPAP 5 cmH2O组与CPAP 8 cmH2O组在上述各时点Qs/Qt、p(O2)无统计学差异(P＞0.05).胸外科医师对对照组、CPAP 2 cmH2O组、CPAP 5 cmH2O组手术侧肺萎陷满意度优于CPAP 8 cmH2O组,各组手术时间无差异(P＞0.05).结论 胸腹腔镜下食管癌根治术患者单肺通气时对非通气侧肺实施5 cmH2O和8 cmH2O的CPAP可减少肺内分流,明显提高p(O2),防止低氧血症的发生;5cmH2O的CPAP有利于术野暴露,满足手术操作.
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重型颅脑损伤对小鼠小肠平滑肌自主节律运动和Cajal间质细胞的影响
目的 通过观察重型颅脑损伤(severe head injury,SHI)后小鼠离体小肠平滑肌自主节律运动和小肠肠肌丛Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICC)数量及功能的变化,探讨重型颅脑损伤后肠动力障碍的可能机制.方法 选取36只6-8周龄清洁级健康雄性昆明小鼠,体质量(35±5)g.重型颅脑损伤组(n=18)参照Feeney自由落体法制作小鼠SHI模型,假伤对照组(n=18)只开颅骨不致颅脑伤.于伤后1、3、7 d取材检测离体末端回肠平滑肌肌条运动的模式、幅度、频率及末端回肠ICC数量变化.结果 ①SHI后平滑肌自主节律运动的幅度1 d[(0.16±0.04)g vs(0.31±0.05)g]、3 d[(0.16±0.04)g V8(0.23±0.06)g]、7 d[(0.22±0.07)g vs(0.27±0.05)g]均显著低于假伤对照组(P＜0.05);平滑肌自主节律运动的频率1 d[(30.23±3.71)min-1 vs(34.55 ±1.99)min-1]、7 d[(30.34±4.56)min-1 vs(33.10 ±0.81)min-1]显著低于假伤对照组(P＜0.05),2组3 d时差异无统计学意义[(31.46 ±4.64)min-1 vs (33.39 ±2.17)min-1,P＞0.05];肌条运动模式紊乱、不规律.②SHI后各时相点ICC细胞数量较假伤对照组显著减少[1 d:(189±41)/mm2 vs (303±10)/mm2;3 d:(156±39)/mm2 vs (305 ±9)/mm2;7 d:(215±28)/mm2 vs (325±42)/mm2;P＜0.05],网络明显受损变稀薄.结论 小鼠SHI后存在严重的小肠ICC受损,平滑肌自主节律运动紊乱,从而导致胃肠动力障碍的发生.
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氧化应激上调IL-17水平在Graves眼病中的意义
目的 研究氧化应激及细胞因子白细胞介素17(IL-17)在Graves眼病(Graves ophthalmopathy,GO)发病中的作用.方法 收集15例正常对照组和25例初发Graves眼病病例组外周血,检测血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及IL-17水平.从正常对照和病例组中各选取10例,采外周血分离T淋巴细胞,每例标本均分为空白对照组(H2O2=0,VitC=0)、过氧化氢组(H2O2=1 000 nmol/L,VitC=0)、维牛素C组(H2O2=0,VitC=25、μmol/L)、过氧化氢+维生素C组(H2O2=1 000 nmol/L,VitC=25μmol/L).体外培养后检测细胞培养上清液IL-17水平并进行统计分析.结果 ①GO病例组血清MDA、IL-17明显高于正常对照组(P＜0.05),SOD水平及SOD/MDA显著低于正常对照组(P＜0.05),且IL-17与MDA呈显著正相关(r=0.527,P＜0.01);②T淋巴细胞培养上清液IL-17水平检测分析,GO病例组中H2O2组显著高于空白对照组、VitC组及H2O2+VitC组(P＜0.05);VitC组及H2O2+VitC组均明显低于空白对照组(P＜0.05).正常对照者各组间无显著差异(P＞0.05).结论 氧化应激可诱导GO患者T淋巴细胞分泌IL-17,抗氧化剂VitC可在一定程度减少IL-17释放.
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CaM抑制剂对LPS/IFN-γ诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS表达的影响
目的 观察钙调蛋白(Calmodulin,CaM)抑制剂对脂多糖/干扰素γ(LPS/IFN-γ)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)的生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用及其可能的作用机制.方法 采用LPS/IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,钙调蛋白抑制剂(W-7,TFP)预处理细胞后,采用Griess试剂法测定NO释放量;采用Western blot法测定目的 蛋白的表达;采用反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达的变化.结果 CaM抑制剂可抑制LPS/IFN-γ诱导的RAW264.7细胞NO的释放(P＜0.01);可抑制iNOS蛋白和mRNA的表达,早期可抑制IκBα的降解、磷酸化IKK(PIKK)和STAT1的蛋白(PSTAT1)表达.结论 CaM抑制剂可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO、iNOS蛋白和mRNA表达;可以通过抑制IκBα降解和磷酸化IKK蛋白表达而发挥抗炎作用.
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RNA干扰骨髓基质细胞和/或骨髓瘤细胞APE1表达对共培养骨髓瘤细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨RNA干扰骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)及骨髓瘤细胞株U266 APE1表达对共培养的U266细胞增殖、凋亡的影响.方法 将构建的APE1 siRNA表达载体分别导入BMSCs及U266细胞中.Western blot法检测2种细胞中APE1蛋白表达;2株细胞经APE1 siRNA处理后采用Transwell插入式培养皿构建BMSCs与骨髓瘤细胞共培养模型,采用MTT法、Annexin V-PE/7-AAD双染法、RT-PCR分别检测U266细胞增殖、凋亡及细胞中IL-6/IL-8 mRNA表达水平.结果 APE1 siRNA 可明显降低BMSCs及U266细胞APE1蛋白表达,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.01);在APE1 siRNA同时处理BMSCs和U266细胞后的共培养体系中,U266细胞增殖抑制及细胞凋亡明显高于单一细胞APE1敲低组及APE1 siRNA末处理组(P＜0.01);U266细胞中IL-6及IL-8 mRNA表达水平亦降低(P＜0.01).结论 抑制APE1在BMSCs和/或骨髓瘤细胞株U266的表达,可明显抑制共培养体系中U266细胞的增殖活性并促进其凋亡.
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骨关节炎软骨下骨的成骨细胞生物学表型研究
目的 培养骨关节炎患者软骨下骨成骨细胞,探讨硬化区和非硬化区软骨下骨成骨细胞的生物学特性.方法 收集本科2009年10月至2010年3月拟行全膝关节置换入院的骨关节炎患者7例,男性5例,女性2例,平均年龄68(55-79)岁,留取术后遗弃的胫骨平台骨组织.应用Ⅰ型胶原酶消化联合贴壁培养方法,培养软骨下骨的成骨细胞,光镜下观察细胞形态,免疫组化检测Ⅰ型胶原,NBT/BCIP染色法检测碱性磷酸酶,茜素红染色检测矿化结节,油红O染色检测脂质成分.应用实时定量RT-PCR技术检测并比较硬化区和非硬化区软骨下骨成骨细胞相关基因[碱性磷酸酶(ALP),骨钙蛋白(OCN),转化生长因子β1(TGF-β1),胰岛素样生长因子1(IGF-1),Ⅰ型胶原(COL1)A1/(COL1)A2,基质金属蛋白酶13(MMP-13),骨桥蛋白(OPN),肿瘤坏死因子(TNF-α),白介素(IL)-6和IL-8]的表达.应用茜素红染色比较两种细胞矿化能力.结果 光镜下观察到细胞渐从骨片中爬出的生长过程,免疫组化证实细胞表达Ⅰ型胶原,NBT/BCIP染色显示细胞表达碱性磷酸酶,茜素红染色显示细胞能形成矿化结节,油红O染色显示细胞内无脂质成分,证实Ⅰ型胶原酶消化联合贴壁培养方法能较好的培养出成骨细胞.茜素红染色显示软骨下骨硬化区成骨细胞矿化能力低于非硬化区[(0.92±0.06),(1.32±0.15),P＜0.01].RT-PCR显示,硬化区软骨下骨成骨细胞比非硬化区软骨下骨成骨细胞高表达基因OPN[(2.62±1.47)×10-2,(9.63±3.37)×10-4,P＜0.05]、OCN[(6.04 ±6.27)×10-6,(4.84±2.18)×10-6,P＜0.05]、ALP[(73.62±15.75)×10-4,(3.10±0.33)×10-4,P＜0.01]、IGF-1[(14.84±1.23)×10-4,(6.33±2.80)×10-4,P＜0.01]、IL-6[(8.24±1.05)×10-4,(2.64±0.37)×10-4,P＜0.01]、IL-8[(14.68 ±6.97)×10-6,(2.60±0.89)×10-6,P＜0.01]、MMP-13[(1.50±0.11)×10-3,(1.23±0.10)×10-3,P＜0.05]、TGF-β1[(4.41±0.42)×10-3,(2.96 ±0.36)×10-3,P＜0.01]、COL1A1[(55.44±21.61)×10-2,(9.17 ± 3.30)×10-2,P＜0.01];而TNF-α[(5.62±2.03)×10-6,(5.62±3.146)×10-6]和COL1A2[0.64±0.07,0.46±0.12]表达水平没有明显差异(P＞0.05).结论 硬化区软骨下骨成骨细胞的生物学表型变化是骨关节炎患者病变的重要特征之一.
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基因表达谱芯片筛选强直性脊柱炎差异表达基因的研究
目的 应用表达谱芯片比较人强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)组织与正常骶髂关节组织的基因表达差异,筛选AS疾病相关基因.方法 选取本室采集的3例活动期AS标本为实验组,1例骨折标本为对照组.分别提取标本骶髂关节的滑膜组织与椎旁组织的RNA,制备探针后用于表达谱芯片杂交,筛选AS组织差异表达基因,并采用半定量RT-PCR法验证芯片结果.结果 与正常组织样本相比,在AS组织中筛选获得差异表达基因237条,表达上调的已知基因91条,表达下调的已知基因78条;对其中20条基因进行半定量RT-PCR检测,结果与表达谱芯片结果一致.结论 筛选出与AS相关的多个差异表达基因.
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抑郁症患者局部脑功能静息态磁共振成像研究
目的 通过静息态功能磁共振成像(rsfMRI)技术和局部一致性(regional homogeneity,ReHo)分析方法,探讨抑郁症患者基础状态下自发神经活动特点及脑功能变化.方法 选取年龄、性别和文化程度匹配的10例抑郁症患者和13例正常对照组被试,采用DPARSF软件进行静息态功能数据的预处理,计算两组被试全脑的ReHo值.采用SPM5软件对两组全脑ReHo值进行基于体素的组间比较,考察抑郁症患者和正常对照组静息状态脑功能差异.结果 与正常对照组相比,抑郁症患者存在涉及顶叶、颞叶和边缘叶等多个认知控制和情绪加工相关脑区的自发神经活动异常,其中右侧丘脑、左侧下顶叶、缘上回、右侧小脑、右侧顶内沟和右侧齿状回表现出功能一致性增强(P＜0.01),中脑和右侧后扣带回功能一致性减弱(P＜0.01).结论 抑郁症患者存在多个脑区的静息态功能一致性异常,这些区域多与认知控制和情绪加工有关.
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噬茵体展示EpCAM单链抗体及免疫原性初步研究
目的 利用噬菌体展示技术进行鼠抗人EpCAM单链抗体表达并鉴定其免疫活性,构建特异靶向上皮来源肿瘤细胞及癌干细胞的单链抗体.方法 采用全基因合成的方法合成VL+Linker+VH的EpCAM的单链抗体(scFv)基因,克隆到pMD19-T简易载体中,将scFv基因酶切并纯化后克隆到噬菌体载体pCANTAB-5E,热休克法转化至感受态的 大肠杆菌TG1,随机挑取5个克隆,经辅助噬菌体超感染,形成鼠抗人EpCAM噬菌体单链抗体,用ELISA(以P/N＞2判定为阳性)和免疫细胞化学法测定其抗原结合活性.结果 成功获得pCANTAB-5E/EpCAM SeFv重组克隆,经ELISA和免疫细胞化学测定,噬菌体展示阳性率为20%,展示的单链抗体能与EpCAM抗原和A549细胞特异性结合.结论 噬菌体展示技术制备EpCAM单链抗体方法简便、省时、高效.
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大鼠心肌挫伤后细胞结蛋白破坏与钙超载的实验研究
目的 研究大鼠心肌挫伤(myocardial contusion,MC)后细胞结蛋白(desmin)的破坏与钙超载情况,评价心肌挫伤后结蛋白破坏与钙超载的关系.方法 110只SD大鼠按随机数字表法分为标准对照组(S组,n=10)、单纯致伤组(T组,n=50)和致伤+地尔硫卓组(D组,n=50),BIM-Ⅲ生物撞击机建立胸部撞击致心肌挫伤模型,致伤后D组腹腔注射盐酸地尔硫卓(0.5 mg/ks),分别于伤前,伤后2、4、8、24、48 h检测心肌细胞Ca2+ 浓度,免疫组化法及Western blot检测心肌细胞结蛋白变化情况,RT-PCR检测结蛋白mRNA表达变化情况.结果 ①T组伤后2 h心肌细胞ca2+ 浓度较S组明显增高[(110.4 ±17.6)vs(74.0 ±9.3),P＜0.01],伤后4 h达高值(141.1±17.8)后逐渐下降,48 h恢复至伤前水平(78.6±10.3);②MC后早期即出现严重的结蛋白破坏,T组伤后8 h结蛋白表达量降至低[与S组比较,(0.11±0.11)vs(1.23±0.27),P＜0.01],24 h开始部分恢复,伤后48 h结蛋白表达增高且出现排列紊乱和无规则聚集的现象;③与T组比较,D组显著降低了伤后4、8 h细胞内Ca2+ 浓度[(84.6±9.7)、(89.3±11.8)],结蛋白表达量在伤后2、4 h两组相较无明显差异,但在伤后8 h,D组(0.55±0.18)高于T组(P＜0.05);④T、D组结蛋白mRNA伤后表达增高,24 h达峰值,D组24 h后表达低于T组.结论 MC后早期结蛋白的破坏以细胞的机械损伤为主,随着细胞内ca2+ 浓度增高,其介导的心肌结蛋白降解增加.通过伤后应用钙通道阻滞剂降低Ca2+ 浓度可有效减缓解结蛋白的降解破坏.
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玻璃纤维桩联合氧化锆全瓷冠在残冠残根修复中的临床分析
目的 探讨玻璃纤维桩和树脂核联合氧化锆全瓷冠在残冠残根修复中的临床效果.方法 以玻璃纤维桩和树脂核联合氧化锆全瓷冠修复残冠残根病例48例,共65颗牙(前牙26颗,后牙39颗,其中作为桥基牙的有22颗;残根18颗,残冠47颗).于修复完成6个月至2年,对全部临床病例进行随访、检查和评估.结果 3颗残根修复后纤维桩脱落,失败率为4.62%,其中2颗经再治疗后有效,另1颗被放弃;其余病例氧化锆全瓷冠保持完整,纤维桩无脱落、折断;X线片示牙根和纤维桩无折断,无牙周和根尖的阴影,牙颈部无继发龋.结论 应用玻璃纤维桩树脂核联合氧化锆全瓷冠修复残冠残根,达到了无金属修复的临床要求,是一种较理想的修复方法.
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树突细胞及神经干细胞/前体细胞联合移植促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复
目的 观察树突细胞(dendritic cells,DCs)及神经干细胞/前体细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)联合移植对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)修复的作用,并初步探讨其机制.方法 SD成年大鼠80只制作脊髓损伤模型,随机数字表法分为4组,SCI 9 d后分别移植Hanks平衡盐溶液(Hanks balanced salt solution,HBSS)、DCs、NSPCs、DCs+NSPCs.通过BBB评分法评估SCI大鼠运动功能,组织病理学方法观察损伤局部病理学改变.采用增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)转基因SD大鼠脑来源的NSPCs,损伤局部移植2周后观察存活情况.免疫组织荧光法观察损伤局部神经生长因子3(neurotrophin-3,NT-3)的表达变化.结果 移植84 d后DCs+NSPCs组运动功能明显改善(P＜0.05),DCs+NSPCs组、NSPCs组、DCs组、HBSS组BBB评分分别为(11.70±0.99)、(9.75±0.50)、(7.40±0.93)、(5.93±0.78),相邻两组有统计学差异(P＜0.05).DCs+NSPCs组损伤区范围及空洞均明显减少(P＜0.05),NSPCs存活数量明显增加(P＜0.01),显著上调损伤区NT-3的表达.结论 DCs联合NSPCs移植能够促进神经干细胞存活,减少损伤区范围及空洞形成,改善SCI大鼠运动功能.损伤区NT-3的表达增加可能是促进修复的机制之一.
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结直肠癌组织中核干因子和增殖细胞核抗原的表达与血清叶酸水平的关系
目的 探讨核干因子(nucleostemin,NS)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在结直肠癌组织中的表达与血清叶酸水平的关系.方法 2009年3-12月在肠镜下收集50例结直肠癌患者的组织,根据国际结直肠癌的病理分类标准分为高分化组(12例)、中分化组(17例)、低分化组(21例)和正常肠黏膜组(50例),同时取受检者静脉血5 ml;采用免疫组织化学法检测NS和PCNA结直肠癌组织和正常肠黏膜的表达,采用磁性颗粒化学发光免疫法检测血清叶酸水平.结果 NS和PCNA在结直肠癌阳性表达率分别是70.0%(35/50)和72.0%(36/50),两者在正常肠黏膜中未见表达.NS和PCNA在高分化结直肠癌阳性率为41.7%(5/12)和33.3%(4/12),分别显著低于中分化结直肠癌阳性率[76.5%(13/17)和82.4%(14/17)]与低分化结直肠癌阳性率[81.0%(17/21)和85.7%(18/21),P＜0.05].患者血清叶酸水平在结直肠癌NS和PCNA阳性组与阴性组无显著差别(P＞0.05).结论 NS和PCNA在结直肠癌组织中有表达,且与结直肠癌的恶性程度密切相关,但血清叶酸水平与NS和PCNA在结直肠癌组织中的表达无关.
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风湿性二尖瓣病变并发心房颤动患者483例临床分析
目的 分析风湿性心脏病合并房颤的发病特点及各临床因素与房颤发生、发展的关系,探讨外科治疗经验.方法 回顾性分析2008年3月至2009年6月我科接受二尖瓣置换手术的483例患者临床资料.男性143例,女性340例,年龄22～74(45.23±11.51)岁,其中单纯二尖瓣病变355例,二尖瓣及主动脉瓣双瓣病变128例.合并左心房血栓51例,有脑栓塞病史4例,术中同期行氩气刀心内膜消融术10例,左心房折叠术26例,行三尖瓣成形127例(其中使用人工成形环21例).全组病例根据有无房颤及房颤持续时间分为慢性房颤组(268例)、阵发性房颤组(133例)及窦性心律组(82例),于我科标本库中随机抽取每组患者右心房组织蜡块5例,行Masson染色,观察心房纤维化情况,计算胶原容积分数.结果 阵发性房颤组右心房组织胶原容积分数(14.17±1.96)显著高于窦性心律组(8.65±2.30,P＜0.05),慢性房颤组(19.06±1.85)显著高于阵发性房颤组及窦性心律组(P＜0.05).手术后死亡8例,病死率1.66%,体外循环时间(90.27±46.86)min.术后二次开胸止血9例,发生瓣周漏2例,术后呼吸机辅助时间(11.20±5.87)h.10例同期接受心内膜消融术患者有8例由房颤转为窦性心律.结论 风湿性心脏病二尖瓣狭窄及关闭不全促进了房颤的发生、发展,右心房纤维化程度随房颤持续时间的延长而加重.瓣膜置换术同期行迷宫手术,术后早期应用抗心律失常药物是治疗风湿性心脏病合并房颤的有效方法.
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心肺复苏后大鼠脑组织精脒/精胺-N1α-乙酰基转移酶2与HIF-1表达的动态变化规律
目的 研究心肺复苏后大鼠脑组织中精脒/精胺-N1-乙酰基转移酶2(spermidine/spermine-N1-acetyhransferase2,SSAT2)与缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor l alpha,HIF-1α)表达的动态变化规律,分析二者相关性.方法 88只成年SD大鼠随机数字表法分为正常对照组(n=8)、假手术组(n=40)和心肺复苏组(n=40).其中假手术组和心肺复苏组再分为1、8、24、48、72 h 5个亚组,每亚组8只.采用RT-PCR、Western blot法分别检测脑组织中HIF-1αmRNA和HIF-1α、SSAT2蛋白的表达.结果 SSAT2的表达在复苏后明显降低,1 h[(0.314±0.027),P＜0.01]表达低,随后逐渐升高(P＜0.01),至72 h[(0.731 ±0.024),P＞0.05]时回升到正常对照组水平(0.736±0.02),而假手术组SSAT2的表达与正常对照组相比无显著变化(P＞0.05).HIF-1α mRNA的表达在复苏后1 h[(0.245 ±0.021),P＜0.05]时降低,但8 h[(0.430±0.019),P＜0.05]时明显增强,后24 h[(0.387 ±0.018),P＜0.05]、48 h[(0.385±0.019),P＜0.05]下降,至72 h时回落到正常对照组水平(0.343±0.022);但HIF-1α蛋白在复苏后1 h[(0.755±0.012),P＜0.01]显著增高,随后逐渐下降(P＜0.01),至72 h[(0.033 ±0.002),P＜0.01]时仅轻度增高,而在正常对照组和假手术组未能检测出HIF-1α表达.SSAT2表达与HIF-1α表达在复苏后72 h内呈负性相关(r=-0.945,P＜0.01),SSAT2表达与HIF-1α mRNA表达在复苏后8～48 h呈负相关(r=-0.614,P=0.01).结论 在心肺复苏后一定时间内,大鼠脑组织SSAT2表达减弱,HIF-1α mRNA及蛋白表达增加,两者呈负相关表达,提示SSAT2对HIF-1α蛋白、HIF-1αmRNA可能起负性调节作用.
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颈内动脉延长扩张症对认知功能的影响
目的 探讨颈内动脉延长扩张症是否造成认知功能损害,促进颈内动脉延长扩张症诊疗水平的提高.方法 收集2009年12月至2010年11月本科住院患者,根据脑血管造影结果筛选出颈内动脉延长扩张症患者(DICA组)及无颈内动脉延长扩张症患者(对照组)各25例.2组分别使用简易精神状态量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估(MoCA)、词语流畅性试验(VFT)、数字广度试验(DST)、韦氏成人记忆量表修订版(WMS-RC)评定其认知功能.结果 DICA组25例均存在认知功能损害,MMSE、MoCA、VFT及记忆商数的得分分别为(24.56±2.43)、(15.92±3.37)、(12.16±2.82)、(79.96±13.18),均明显低于对照组[(27.00 ±1.66)、(24.28 ±2.78)、(18.64±3.00)、(107.64 ±12.63),P＜0.01].结论 颈内动脉延长扩张症可能造成包括执行、注意、记忆等认知功能的损害.
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小鼠胫骨骨皮质损伤修复过程中成纤维生长因子受体的表达
目的 观察小鼠胫骨骨皮质损伤修复过程中成纤维生长因子受体(fibroblast growth factor receptors,FGFRs)的表达变化.方法 通过建立小鼠胫骨骨皮质损伤模型,在组织学水平观察皮质损伤后愈合情况,同时提取损伤后3、7、14、21 d 4个时相点损伤部位新生骨痂组织RNA,采用定量PCR检测FGFRs及骨形成标记分子核结合因子al(Cbfal)、骨钙素(OC)、骨桥蛋白(OP)等mRNA的动态表达谱.结果 骨皮质损伤后第7天,小鼠骨髓腔有新生骨组织出现,到第21天,皮质骨缺损处出现新的板层骨结构.Cbfal、OP的mRNA表达水平在骨皮质损伤后早期即迅速升高,OC则在修复阶段中后期表达升高.FGFR1、2在损伤后迅速升高,于第3天达到峰值(2.09±0.25,1.82±0.15,P＜0.01),然后逐渐回落;FGFR3于损伤后7 d达到峰值(3.61±0.52,P＜0.01).14 d稍有回落,在第21天时则又显著升高(P＜0.01).结论 伴随着骨皮质损伤后成骨细胞分化标记基因的表达升高,FGFR1、2、3的mRNA表达水平在皮质损伤后早期即显著升高,并持续高表达到愈合晚期阶段.提示FGFRs参与调节骨皮质损伤后的骨再生过程.
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双生子共患精神障碍1例
双生子是人类遗传学研究的经典方法,是研究人的表型决定中遗传和环境效应的理想对象[1].通过对双生子的研究,在医学遗传学上取得了丰硕的成果.我们在重庆九龙坡区发现1对患有精神障碍的双生子,现报告如下.
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重症手足口病合并脑炎/脑膜炎患儿脑脊液动态变化的研究
手足口病是由肠道病毒引起的传染病,曾在多个国家引起爆发流行[1-4].重症手足口病可导致脑炎/脑膜炎,其起病急,发展快,病死率高;对其早期识别并干预,是降低病死率的关键.早期诊断脑炎/脑膜炎,脑脊液检查具有较强的及时性及可操作性.
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多囊卵巢综合征患者血清IGF-1的变化及其与肥胖、糖脂代谢的关系
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)常起病于青春期,是一种育龄期妇女常见的生殖内分泌紊乱疾病,其患病率达5%-10%[1-2],在无排卵性不育的妇女中占50%～60%.研究提示PCOS患者血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)存在异常变化[2],同时PCOS患者脂代谢紊乱发生率也较高[3].本研究初步探讨PCOS患者血清IGF-1水平的变化对脂代谢紊乱是否产生影响.
