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少突胶质前体细胞对脊髓损伤治疗作用的研究综述
脊髓损伤是一种常见的中枢神经系统损伤,可造成患者的感觉、运动等功能严重障碍,给自身、家庭和国家带来沉重的经济与社会负担.从病理生理机制角度,脊髓损伤后出现的局部微环境改变也是造成中枢神经系统再生失败的主要原因.研究表明,SCI后轴突脱髓鞘改变与少突胶质细胞的死亡有着密切联系,而少突胶质前体细胞是少突胶质细胞的未成熟细胞,能在体内增殖、分化后形成少突胶质细胞并形成髓鞘发挥作用.所以开展少突胶质前体细胞对脊髓损伤的研究有着重要的科学意义和社会价值.
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大鼠Olig2基因慢病毒表达载体的构建及其转染后对少突胶质前体细胞分化的影响
目的 构建大鼠少突胶质细胞转录因子2(Olig2)的慢病毒表达载体,并转染少突胶质前体细胞(OPCs),观察Olig2过表达对OPCs向少突胶质细胞(OLs)分化的影响.方法 设计合成PCR引物,从大鼠pEGFP-N3-Olig2表达质粒中扩增并克隆大鼠Olig2-EGFP片段,将其插入到pLenti6.3慢病毒表达载体中,形成pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体.将其与包装质粒混合后共转染293T细胞,包装产生慢病毒后感染培养的OPCs,观察Olig2在感染细胞中的表达并鉴定其表达对OPCs向OLs分化的影响.结果 成功将大鼠Olig2-EGFP片段克隆入pLenti6.3慢病毒表达载体,构建的pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体能够高效表达.与空质粒转染的OPCs相比,重组质粒转染的OPCs体外诱导分化后产生更多的OLs (n =5,P＜0.01).结论 成功建立大鼠pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达系统,慢病毒介导的Olig2过表达促进大鼠OPCs向OLs分化.
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少突胶质前体细胞中枢神经系统相关功能研究进展
胶质细胞在中枢神经系统中的重要作用已经逐渐得到认可,其中特异表达NG2硫酸软骨素蛋白多糖的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)是中枢神经系统发现的一种具有典型双极突起、胞体小而不规则的细胞,在胚胎发育过程中能够增殖及可分化为成髓鞘的少突胶质细胞而命名.体外培养条件下证实OPC可增殖及分化成为少突胶质细胞及Ⅱ型星状胶质细胞,甚至可能分化为神经元,因而认为这类细胞可能是一种多潜能的干细胞.但是在成年脑白质和灰质均发现有大量OPC的表达,细胞形态和电生理功能表明其具有成熟依赖特性,可能不严格属于少突胶质细胞系,而是少突胶质细胞、星状胶质细胞之外的中枢神经系统大胶质细胞类型.由于OPC与神经退行性疾病、毒性物质作用、营养代谢障碍,尤其是新生儿缺氧缺血所致的脑瘫等多种神经系统疾病相关,成为神经科学研究的热点.本文主要对中枢神经系统OPC的发现、研究近况和在髓鞘再生、神经网络、轴突生长、参与突触可塑性中的相关功能做综述.
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GSK3调控神经干细胞和少突胶质细胞前体细胞发育的研究进展
早期在神经系统中对于GSK3信号通路的研究主要集中在对神经元极性的调控.然而,近来研究证明GSK3对神经系统的发育具有多方面的调节作用,包括神经祖细胞的自我更新,神经元和少突胶质前体细胞(OPC)的发生、迁移、分化以及突触形成,阻碍GSK3信号通路严重影响神经元与少突胶质前体细胞的正常发育.本文主要讨论近年来关于GSK3活性的调节机制以及GSK3信号通路如何影响神经干细胞和OPC的发育.这些问题的探讨将为相关疾病研究以及新药开发带来新视角.
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少突胶质细胞体外培养方法的研究进展
寻求纯度高、简便易行的体外培养少突胶质细胞的方法具有非常重要的应用价值.本文综述大鼠皮层胶质细胞混合培养、少突胶质前体细胞增殖纯化、少突胶质细胞诱导分化及细胞体系各发育分化阶段细胞表面抗原的鉴定等体外培养方法.
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AMPA谷氨酸受体亚基-2在大鼠脊髓损伤急性期少突胶质前体细胞凋亡的影响
目的:探讨AMPA谷氨酸受体亚基-2 (AMPA-GluR2)在大鼠脊髓损伤急性期对少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)凋亡的影响.方法:60只SD雌性大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=15),脊髓损伤组(SCI组,n=15),AMPA受体拮抗剂NBQX组(n=15)和Ca2+通透性AMPA受体拮抗剂JSTx组(n=15).SCI组、NBQX组和JSTx组应用Allen's打击法建立大鼠脊髓(T9)损伤模型.采用BBB评分评估各组大鼠脊髓损伤后运动功能恢复情况.HE染色观察脊髓损伤后病理学改变.免疫组化和免疫蛋白印迹(Westernblot)法检测AMPA-GluR2在各组大鼠脊髓组织中的表达情况.免疫荧光标记OPCs并应用TUNEL法检测其在各组中的凋亡情况.结果:SCI组BBB评分较假手术组降低(P＜0.05),脊髓损伤后3d NBQX组(3.60±0.65)和JSTx组(3.80±0.76)BBB评分较SCI组(1.50±0.35)高(P＜0.05),NBQX组和JSTx组之间无差异(P＞0.05).HE染色结果显示SCI组和两个拮抗剂组的脊髓组织均存在损伤,脊髓组织腹侧和腹外侧白质病理学损伤评分显示NBQX组(1.60±0.42)与JSTx组(1.50±0.35)评分较SCI组(2.30±0.20)低(P＜0.05).AMPA-GluR2免疫组化结果显示,脊髓损伤后3d SCI组阳性细胞数(6.15±0.52)较假手术组(13.25±0.21)明显减少(P＜0.05),NBQX组(2.10±0.42)和JSTx组(4.45±0.54)阳性细胞数较SCI组少(P＜0.05),NBQX组阳性细胞数少,与JSTx组比较有显著性差异(P＜0.05).Western blot结果显示,脊髓损伤后3d SCI组和两个拮抗剂组AMPA-GluR2表达水平均较假手术组(0.94±0.07)降低(P＜0.05),NBQX组(0.37±0.07)及JSTx组(0.54±0.12)较SCI组(0.69±0.03)低(P＜0.05),且NBQX组AMPA-GluR2表达水平低(P＜0.05).免疫荧光显示,脊髓损伤后3d各组大鼠脊髓组织均存在免疫荧光标记的OPCs;TUNEL法检测OPCs凋亡指数表明,NBQX组(0.21±0.02)和JSTx组(0.17±0.01)较SCI组(0.42±0.02)均降低(P＜0.05),且JSTx组较NBQX组降低(P＜0.05).结论:大鼠脊髓损伤急性期OPCs凋亡与脊髓组织中AMPA-GluR2表达下降有关.
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少突胶质前体细胞在青老年大鼠慢性脑灌注不足中的活化改变
目的 观察少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPC)在大鼠慢性脑缺血损害中反应性变化及老化对此过程的影响.方法 分别在青年(3个月龄)与老年(24个月龄)大鼠慢性灌注不足模型中,运用免疫组化方法检测NG2抗体标记的阳性OPC在灌注不足2周、1个月和3个月后形态数量及分布等改变.结果 慢性灌注不足大鼠脑内存在NG2标记的免疫组化染色的阳性OPC明显反应性增生,与非缺血青老年对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),在皮质、皮质下、海马、胼胝体及室下区等处均有分布,以皮质下接近白质区域以及海马齿状回为显著,2周、1个月为明显,但于灌注不足后青年大鼠脑内NG2标记的免疫组化染色的阳性OPC染色强度和数量仍高于老年组(P＜0.05).结论 慢性灌注不足过程中脑内OPC具有明显增殖活化,其反应性受月龄因素影响,并可能为慢性脑缺血损伤后的一种代偿适应或修复机制.
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难治性癫痫致痫灶中少突胶质细胞改变的观察研究
目的 研究难治性癫痫(IE)患者致痫灶脑组织中少突胶质细胞(OL)的变化.方法 选择2011-06-2012-06在贵州省人民医院神经外科行致痫灶切除的30例IE患者,术后随访至少6个月,了解患者术后癫痫发作的控制情况;用HE染色、LFB染色方法观察致痫灶脑组织病理改变,用免疫组化方法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)、O4、血小板源性生长因子α受体(PDGFαR)和A2B5在致痫灶中表达情况,以观察不同时期OL的变化,并与健康对照组脑组织中MBP、O4、PDGFαR、A2B5表达情况进行比较.结果 (1)术后5例失访,实际随访25例患者.术后效果按Engel标准分类,Ⅰ级占14/25,Ⅱ级占8/25,Ⅲ级占6/25,Ⅳ级占2/25;(2) HE染色结果显示IE患者致痫灶中神经细胞层次结构紊乱、气球样变,胶质细胞增生;(3)LFB染色结果显示:与对照组比较,IE组中脑白质髓鞘脱失明显,脱髓鞘评分增加[(1.9±0.875)vs.(0.4±0.286)(P＜0.01)];(4)免疫组化结果提示,IE组与对照组比较MBP阳性纤维[(4.76±0.52)vs.(6.32±1.45) (P＜0.05)]和O4阳性细胞[(9.62±3.05)vs.(18.02±6.78)(P＜0.01)]减少,PDGFαR阳性细胞[(10.42±5.70)vs.(1.61±1.14) (P＜0.01)]和A2B5阳性细胞[(15.10±7.45)vs.(7.20±1.30)(P＜0.05)]增多.结论 在IE致痫灶中OL发育各阶段的动态变化可能与IE发病有关.
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少突胶质前体细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响
目的 研究少突胶质前体细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响.方法 采用Allen's打击法制作大鼠脊髓损伤(T10)模型.96只SD大鼠随机分为移植组、对照组、单纯损伤组及假手术组,每组24只.脊髓损伤后第7天时移植组进行少突胶质前体细胞移植治疗,对照组给予等量生理盐水,单纯损伤组未予任何治疗.通过运动功能评分及运动诱发电位、体感诱发电位检测评价少突胶质前体细胞移植对神经功能恢复的影响.结果 脊髓损伤后大鼠脊神经功能明显障碍,运动功能评分、运动诱发电位及体感诱发电位检测结果明显低于假手术组.随伤后时间延长,脊髓损伤大鼠神经功能均有不同程度的恢复,但运动功能评分、运动诱发电位及体感诱发电位检测结果显示,少突胶质前体细胞移植治疗组大鼠的神经功能恢复情况明显优于对照组.结论 少突胶质前体细胞移植治疗能够促进大鼠脊髓损伤神经功能的恢复.
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NBQX对头部照射大鼠大脑皮质少突胶质前体细胞的保护作用
目的探讨大鼠头部照射后早期大脑皮质少突胶质前体细胞的放射性反应及MK801和NBQX对其保护作用.方法SD大鼠10 Gy单次头部照射后即分别向其脑皮质立体定向注射5mmol/L的MK801和50 mmol/L的NBQX各1 μl,然后用免疫荧光组织化学法分别检测各时间点大脑皮质NG2和04阳性细胞数量.结果和对照组相比,照射组大鼠照射后7 d时大脑皮质NG2和O4阳性细胞数显著增加(P＜0.05);MK801组大鼠照射后各时间点大脑皮质NG2和O4阳性细胞数与照射组大鼠比较差异无统计学意义(P＞0.05);而NBQX组大鼠照射后1和7 d时的大脑皮质NG2和O4阳性细胞数明显多于照射组大鼠(P＜0.05).结论大鼠头部照射后早期大脑皮质少突胶质前体细胞反应性增多,并有时程性变化;NBQX对少突胶质前体细胞早期的放射性损伤有一定的保护作用.
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人外周血单个核细胞体外重编程为少突胶质前体细胞研究
目的 利用非整合质粒载体在体外将成人外周血中单个核细胞重编程为少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells, OPCs).方法 经外周静脉采集志愿者血液5 mL,利用Ficoll-Paquem密度梯度离心法获得单个核细胞,体外扩增培养后,电转染携带外源基因(OCT4, SOX2, KLF4, C-myc, LIN28, Nanog)的质粒,然后在加有化学小分子的特定培养基中分三步培养.结果 转染后30 d左右,可以获得血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor-α, PDGFR-α)阳性的早期少突胶质前体细胞(Pre-OPC),该细胞能传20 代以上,继续分化30 d左右可以获得表达O4的少突胶质前体细胞.结论 利用非整合质粒载体携带外源基因可以将成人外周血单个核细胞在较短期时间内重编程为具有增生能力的早期少突胶质前体细胞,且能继续分化为少突胶质前体细胞.
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氙气联合亚低温对少突胶质前体细胞糖氧剥夺后的保护作用
目的：研究氙气联合亚低温对少突胶质前体细胞（OPCs）糖氧剥夺损伤后的保护作用，探讨氙气对新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的保护机制。方法体外培养大鼠原代OPCs，检测氙气联合亚低温对OPCs糖氧剥夺后凋亡、增殖和分化的影响。结果各组细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05），其中正常对照组（Ctrl）凋亡率低为（6.3±1.52）%，而OGD对照组（OGD Ctrl）凋亡率高为（70.3±4.72）%，氙气组（Xe）和亚低温组（HT）凋亡率分别为（27.3±3.05）%、（31.6±4.5）%，显著低于OGD对照组，比较差异有统计学意义（P<0.05），联合治疗组（Xe+HT）凋亡率为（15.6±2.51）%，低于氙气低温组或亚低温组，比较差异有统计学意义（P<0.05）；各组OPCs增殖率比较差异无统计学意义；正常对照组细胞呈健康生长，有明显的三级以上分支的较长网状突起形成，计算成熟细胞率为（81.0±4.58）%；OGD对照组细胞细胞突起短少而紊乱，次级以上分支减少，成熟细胞率为（14.6±3.51）%，OGD对照组与正常对照组相比，差异有统计学意义（P<0.01）。氙气组成熟细胞率（43.6±3.51）%比OGD对照组高，低于亚低温组（53.3±3.21）%，差异均有统计学意义（P<0.05）。联合治疗组成熟细胞率（64.6±4.16）%显著高于单用氙气或亚低温组（P<0.05）。结论氙气联合亚低温治疗能保护OPCs耐受缺氧缺血性损伤的影响，可能是其对HIE的神经保护机制之一。
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OPCs移植对EAE大鼠脊髓有髓神经纤维髓鞘形态及MBP表达的影响
目的：观察少突胶质前体细胞(OPCs)移植对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓有髓神经纤维髓鞘形态的影响。方法选择30只健康大鼠随机分为正常组、模型对照组、治疗组，每组10只。正常组正常饲养，模型对照组、治疗组采用大鼠脊髓匀浆与完全弗氏佐剂混合做抗原单点皮下注射造模，造模后1周治疗组由尾静脉注入OPCs悬液，模型对照组注入同等剂量生理盐水，连续测量大鼠体重的改变，将各组大鼠心脏灌注处死，取脊髓制成切片，用髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫组化染色并观察。结果造模后1周模型对照组与治疗组大鼠体重均下降。移植后，治疗组大鼠体重下降有所缓解；与正常组比较，模型对照组大鼠运动功能评分降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组比较，治疗组运动评分升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组比较，治疗组MBP免疫组化阳性的髓鞘数量增多。结论OPCs移植可促进脱髓鞘模型大鼠运动功能和脊髓髓鞘的修复。
关键词： 多发性硬化 少突胶质前体细胞 细胞移植 实验性变态反应性脑脊髓炎 -
大鼠脊髓源性少突胶质前体细胞体外机械拉伸损伤模型的建立与评价
目的 采用FX-4000TM柔性基底加载系统建立体外大鼠脊髓源性少突胶质前体细胞机械拉伸损伤模型,为进一步探讨少突胶质前体细胞在脊髓损伤及修复过程中的作用及机制提供模型基础.方法 采用振摇法体外纯化培养大鼠脊髓少突胶质前体细胞,并进行免疫荧光细胞鉴定.将纯化培养3d的少突胶质前体细胞随机分为A组(对照组)、B组(拉伸强度5％)、C组(拉伸强度10％)、D组(拉伸强度15％).采用FX-4000TTM柔性基底加载系统机械拉伸少突胶质前体细胞2h后,通过倒置显微镜观察各组细胞形态学改变、MTT法检测细胞存活率、双染流式细胞术检测细胞凋亡,对损伤模型进行评价.结果 体外成功培育少突胶质前体细胞且纯度＞90％.B组拉伸强度对细胞形态及存活没有明显影响,基本不构成损伤.C组和D组细胞存活率较A组显著降低(P＜0.05),凋亡率也明显升高(P＜0.05),并出现明显病理性形态改变;但D组有明显的细胞脱落现象且细胞存活率降到＜50％,不利于后续实验进行.结论 采用FX-4000TTM柔性基底加载系统以10％为拉伸强度可建立有效的少突胶质前体细胞机械拉伸损伤模型.
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抑制EphA4受体活性对少突胶质前体细胞发育影响的研究
目的 探讨抑制EphA4受体活性对少突胶质前体细胞(OPC)发育的影响.方法 将分离纯化的OPC随机分为正常组、EphA4受体抑制剂处理组(EphA4-FC组).EphA4-FC组加入250 nmol/L EphA4-FC,培养至第2天.免疫细胞化学染色法观察正常组OPC特异性标志物NG2与EphA4受体的共表达情况;通过细胞计数观察两组OPC数量变化情况;通过Western blot检测两组细胞蛋白样品中OPC特异性蛋白血小板源性生长因子α受体(PDGFαR)的表达变化情况.结果 免疫细胞化学染色显示,正常体外培养OPC高表达EphA4受体;与正常组比较,EphA4-FC组的NG2+阳性细胞数量明显增多(P＜0.05).Western blot显示,与正常组比较,EphA4-FC组细胞蛋白中PDGFαR的表达显著增高(P＜0.05).结论 培养的OPC上高表达EphA4受体,通过抑制EphA4受体可以促进OPC的增殖.
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VEGF调控Wnt/β-catenin信号通路对少突胶质前体细胞增殖迁移的影响
目的 探讨血管内皮细胞生长因子( VEGF)对少突胶质前体细胞增殖迁移的影响.方法 分离培养小鼠少突胶质前体细胞,VEGF作用于少突胶质前体细胞48 h,同时设置对照组,对照组不加 VEGF.MTT检测细胞增殖情况,Boyden chamber小室检测细胞迁移情况,Western blot检测细胞中 MMP-9、MMP-2、β-catenin、C-myc、cyclin D1 蛋白表达水平.用Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl作用于少突胶质前体细胞48 h,检测细胞增殖迁移情况.结果 VEGF作用后的少突胶质前体细胞存活率和迁移细胞数均明显高于对照组(P＜ 0. 01). VEGF后的少突胶质前体细胞中MMP-9、MMP-2、β-catenin、C-myc、cyclin D1 表达水平高于对照组(P＜ 0. 01). Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl作用后的细胞增殖迁移情况与VEGF作用后的细胞增殖迁移情况趋势一致.结论 VEGF促进少突胶质前体细胞增殖和迁移,作用机制与 Wnt/β-catenin信号通路有关.
关键词： 少突胶质前体细胞 Wnt/β-catenin信号通路 VEGF 迁移 -
低氧对少突胶质前体细胞增殖的影响
目的:观察低氧/复氧和间歇性低氧对少突胶质前体细胞(O2A)增殖的影响.方法:取混合培养4 d的胶质细胞,按实验分为低氧/复氧、间歇性低氧和常氧3组,低氧/复氧组细胞置低氧环境(3%O2)中分别培养1 h、2 h、3 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h和72 h后取出,恢复常氧培养至9 d.间歇性低氧组每天上午定时将细胞置于低氧环境中分别培养1 h、2 h、3 h、4 h后取出,恢复常氧培养.每天一次,分别重复1～4次后,常氧培养至9 d.然后同时取出各组细胞,进行O2A细胞的分离纯化和细胞计数.结果:低氧/复氧1 h、2 h、3 h组和间歇性低氧1 h、2 h、3 h组,O2A细胞数均较常氧组明显增多.结论:低氧/复氧和间歇性低氧都可促进体外培养的O2A细胞明显增殖.其机制尚有待于进一步研究.
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局灶脑缺血再灌注成年模型大鼠大脑髓鞘相关蛋白的基因表达
背景:髓鞘蛋白是少突胶质细胞的主要成分,研究脑缺血再灌注后大脑髓鞘相关蛋白基因表达的变化有助于探讨少突胶质前体细胞在缺血性脑损伤和修复中的作用.目的:观察脑缺血再灌注后成年模型大鼠大脑髓鞘蛋白相关基因,在脑缺血后不同时间及部位表达变化和差异.方法:以线栓法制作成年SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用5′末端标记地高辛的寡核苷酸探针荧光原位核酸分子杂交检测模型大鼠再灌注后早期大脑梗死中心区、梗死周边区和梗死对侧区皮质髓鞘蛋白脂质蛋白mRNA、髓鞘碱性蛋白mRNA和髓鞘转录因子1 mRNA表达变化.结果与结论:在梗死中心区,脑缺血再灌注后早期3种髓鞘相关蛋白基因表达均明显减少;在梗死周边区,再灌注后1 d时3种髓鞘相关蛋白基因表达与对照组比较无明显变化,之后逐渐增加,至14 d时均高于对照组(P < 0.05,0.01),以髓鞘转录因子1 mRNA阳性细胞数升高早(7 d)为显著(P < 0.01).因此,成年SD大鼠脑缺血再灌注后急性期梗死周边区皮质髓鞘相关蛋白的基因表达增加,提示少突胶质前体细胞对脑缺血性损伤敏感,其可能参与了脑缺血后损伤的修复过程.
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短暂脑缺血后老年模型大鼠大脑少突胶质前体细胞的变化
背景:目前老年脑内少突胶质前体细胞在短暂脑缺血后和修复过程中的变化尚不清楚.目的:观察短暂脑缺血后老年模型大鼠大脑少突胶质前体细胞的变化.方法:以线栓法制作大鼠短暂脑缺血模型,24只12月龄老年雄性SD大鼠随机数字表法分4组,对照组仅暴露血管,然后缝合,不进行栓塞;缺血再灌注1,7,14 d组:造模后分别再灌注1,7,14 d.结果与结论:①短暂脑缺血后各时间点梗死中心区硫酸软骨素蛋白聚糖、未成熟少突胶质细胞的标记物(O4)和环核苷酸磷酸二酯酶阳性细胞数明显减少.②梗死周边区硫酸软骨素蛋白聚糖和O4阳性细胞数随着时间延长而逐渐增加,短暂脑缺血后7,14 d时显著增加;而环核苷酸磷酸二酯酶阳性细胞数在短暂脑缺血后1,7 d时稍有减少,脑缺血后14 d时明显增加.③脑梗死对侧区3种抗原阳性细胞数无明显变化.提示老年SD大鼠短暂脑缺血后梗死周边区少突胶质前体细胞增多,并可能分化为成熟少突胶质细胞,参与脑缺血损伤的修复过程.
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少突胶质前体细胞移植联合咪康唑修复脑白质营养不良模型小鼠的髓鞘
背景:少突胶质前体细胞是中枢神经系统中成髓鞘细胞——少突胶质细胞的前体细胞,与中枢脱髓鞘疾病如脑白质营养不良有着密切关系,近研究显示咪康唑可促进少突胶质前体细胞分化和髓鞘再生,咪康唑和少突胶质前体细胞二者联合可能用于脑白质营养不良的治疗.目的:探讨少突胶质前体细胞移植联合咪康唑对脑白质营养不良模型小鼠的髓鞘修复作用.方法:采用髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)基因敲除的shiverer小鼠作为脑白质营养不良模型,新出生shi-/-(MBP基因完全缺失)小鼠分为阴性对照组和治疗组,新出生shi+/+(MBP基因正常)小鼠作为阳性对照组.治疗组于生后24 h内移植少突胶质前体细胞,同时在生后1-5 d腹腔注射咪康唑,阴性对照组和阳性对照组分别以PBS和生理盐水代替少突胶质前体细胞和咪康唑.待小鼠8周龄时行MBP免疫荧光染色和Western blot检测MBP蛋白表达,透射电镜观察胼胝体区域髓鞘结构.结果与结论:①与阴性对照组比较,治疗组MBP荧光表达明显增强,平均荧光强度值差异有显著性意义(P<0.05),但与阳性对照组比较,治疗组MBP荧光强度显著下降(P<0.05);②治疗组的MBP蛋白表达量比阴性对照组高,但比阳性对照组低,差异有显著性意义(P<0.05);③透射电镜下,阴性对照组髓鞘罕见,形态不规则且板层排列松散、紊乱;阳性对照组髓鞘明显增多、增厚,形态均正常且板层排列紧密、边界清晰;治疗组髓鞘数量较阴性对照组增多,部分近似正常,但多数髓鞘厚度仍明显减低;④结果表明,少突胶质前体细胞移植联合咪康唑有助于改善脑白质营养不良的脱髓鞘状况,但不能完全逆转受损髓鞘的病理状态.
