首页 > 文献资料
-
淫羊藿苷对食管癌细胞EC9706增殖与凋亡的影响
目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对食管癌细胞EC9706增殖的影响,明确其作用机制.方法:ICA(40,160,640 nmol·L-)作用EC9706细胞48 h后,应用CCK8法检测EC9706细胞增殖;应用Hoechest33342染色和荧光显微镜检测细胞凋亡;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA表达;应用免疫印迹法检测Bax,Bcl-2的蛋白表达.结果:ICA能显著抑制EC9706细胞增殖;ICA作用EC9706细胞出现细胞凋亡形态学改变;免疫印迹结果显示Bax蛋白表达减少,而Bcl-2蛋白表达增多.结论:ICA能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖,其凋亡作用机制可能与上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白的表达相关.
-
启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤和补气运脾汤对人食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响
目的 观察启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤、补气运脾汤各证方对人食管癌细胞株EC9706细胞增殖和凋亡的影响作用.方法 体外培养人食管癌细胞株EC9706细胞,分别用启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤和补气运脾汤处理细胞,倒置显微镜下观察EC9706细胞增殖和形态变化;MTT法检测各证方对EC9706细胞增殖影响的量效关系;TUENL法和荧光显微镜观察各证方诱导EC9706细胞凋亡的作用;AnnexinⅤ FITC/PI双标记流式细胞术检测各证方诱导EC9706细胞凋亡率;结果 启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对EC9706细胞增殖的抑制率随药物浓度增加而上升,呈现剂量-效果依赖性关系,在药物浓度为6400μg/ml时,三组抑制率分别为78％、63％、78％.启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤不同程度地诱导细胞发生凋亡,各组诱导细胞的凋亡率依次为:沙参麦冬汤组＞启膈散组＞通幽汤组.结论 启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤可不同程度地明显抑制人食管癌细胞株EC9706细胞增殖,补气运脾汤对体外培养细胞增殖的直接抑制作用很弱.启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤均可不同程度诱导人食管癌EC9706细胞凋亡.
-
热休克蛋白70在人食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达与定位变化
目的 探讨姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用,热休克蛋白70(HSP70)在肿瘤细胞凋亡过程中在核基质上的变化及其与凋亡调控相关蛋白的关系.方法 用细胞计数和流式细胞仪检测姜黄素对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用,以光学显微镜和透射电镜观察姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡前后的细胞结构变化,琼脂糖凝胶电泳观察人食管癌EC9706细胞凋亡前后的DNA结构变化.双向凝胶电泳和质谱鉴定分析HSP70在核基质中的存在与变化;并以Western blotting进行确证;激光扫描共焦显微镜观察HSP70在EC9706细胞凋亡过程中的定位及其与Bax、Bcl-2等基因产物的共定位关系.结果 姜黄素能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖并诱导人食管癌EC9706细胞凋亡,双向凝胶电泳、质谱鉴定和结果 发现并证实,HSP70在姜黄素处理前后的EC9706细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化.激光扫描共焦显微镜观察结果 显示,HSP70在EC9706细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2等基因产物具有共定位关系,且其共定位区域发生了变化.结论 姜黄素对人食管癌EC9706细胞具有显著的凋亡诱导作用;HSP70作为一种新发现的核基质蛋白,在姜黄素诱导人食管癌EC9706凋亡过程中的表达与分布发生了显著变化.HSP70与凋亡相关基因的关系对EC9706细胞凋亡具有重要影响.
-
神经型钙黏附蛋白的表达对食管鳞癌侵袭和转移的影响
目的:探讨神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义.以及RNA干扰(RNAi)沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的影响.方法:采用免疫组织化学PV法和RT-PCR检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中N-cadherin蛋白和mRNA的表达.将N-cadherin基因的RNA干扰载体稳定转染至EC9706.通过RT-PCR和Western blotting检测RNAi的效果:运用Transwell体外侵袭实验检测RNAi后细胞侵袭能力的改变.结果:正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中N-cadherin的阳性表达率依次升高,分别为29.0％(18/62)、61.3％(19/31)、75.8％(47/62),组间比较差异有统计学意义(P<0.05);N-cadherin蛋白的阳性表达率与食管鳞癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关(x2=6.916,6.924,4.486,P<0.05).食管鳞状细胞癌组织中N-cadherinmRNA的相对含量高于癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织(0.6631±0.0162 vs0.4613±0.0239,0.1538±0.0192),组间比较差异有统计学意义(x2=819.242,P<0.01).RNAi后EC9706中N-cadherin的表达显著下降;Transwell小室体外侵袭实验显示,EC9706的体外侵袭能力也降低.结论:食管鳞癌组织中N-cadherin的高表达与食管鳞癌的浸润、恶化有密切的关系.RNAi沉默N-cadherin基因表达能够使EC9706体外侵袭能力降低.
-
卡培他滨对食管癌细胞系EC9706细胞毒性和放射增敏作用的研究
目的:探讨卡培他滨对食管癌细胞系EC9706细胞毒性和放射增敏作用.方法:取健康成年家兔1只,以卡培他滨141 mg/kg,对其进行灌胃,分别于灌胃前、后2.5～3 h,取耳缘静脉血8～10 mL,不加抗凝剂,并防止溶血和细茵污染,离心取血清-20℃保存备用;用CCK8分别检测不同量的加药血清和对照血清对食管癌细胞系EC9706细胞毒性,同时观察不同量的加药血清对食管癌细胞系EC9706的放射增敏作用.结果:加药血清对食管癌细胞系EC9706细胞有明显的抑制作用,其抑制作用48 h达到高峰,2、4、6、8和10uL血清作用细胞48 h后抑制率分别为14.29%、23.96%、50.59%、52.16%和53.96%(P均为0.00),72 h其细胞毒性无增加;加药血清孵育2.5 h后,在相同放射剂量作用下,不同量血清组的OD值均显著低于对照组(P值均为0.00),其增敏作用无明显的剂量依赖性.结论:卡培他滨对食管癌细胞系EC9706有明显的细胞毒性和放射增敏作用.
-
RNA干扰抑制食管癌EC9706细胞中3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1基因的表达及其对肿瘤细胞恶性生物学行为的影响
目的 研究RNA干扰抑制食管癌EC9706细胞中3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1(PDK1)的表达及其对肿瘤细胞恶性生物学行为的影响.方法 以PDK1 siRNA转染EC9706细胞,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测PDK1 mRNA和蛋白的表达以及下游Akt蛋白的磷酸化水平.分别以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell侵袭实验和裸鼠移植瘤实验检测PDK1 siRNA对EC9706细胞增殖、凋亡、侵袭以及体内抑瘤能力的影响.结果 与未转染组相比,PDK1 siRNA转染细胞后继续培养24、48和72 h时,PDK1 mRNA的表达均明显降低,抑制率分别为(28.5±4.2)%、(51.1±5.7)%和(60.6±4.1)%,PDK1蛋白和Akt蛋白的磷酸化水平也明显降低(P＜0.05).PDK1 siRNA能有效抑制EC9706细胞的增殖、侵袭并促进细胞凋亡,且能抑制裸鼠移植瘤的生长并降低移植瘤组织中PDK1蛋白的表达.结论 PDK1可能与食管癌细胞的增殖、凋亡和侵袭等生物学行为密切相关,是肿瘤基因治疗的有效靶点.
-
小干扰RNA下调T细胞淋巴瘤侵袭转移诱导因子1表达对食管鳞癌EC9706细胞的影响
目的 探讨小干扰RNA(siRNA)下调T细胞淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)表达对食管鳞癌EC9706细胞的影响.方法 利用Tiam1 siRNA转染食管鳞癌EC9706细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后Tiam1 mRNA和蛋白的表达,CCK-8试剂盒分析转染后细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western b1ot检测细胞周期相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达.结果 未处理组和对照siRNA组EC9706细胞中Tiam1 mRNA的相对表达水平分别为1.00和0.95±0.02,差异无统计学意义(P＞0.05).Tiam1 siRNA转染24、48、72 h后,EC9706细胞中Tiam1 mRNA的相对表达水平分别为0.30 ±0.04、0.09 ±0.01和0.09 ±0.006,与未处理组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).转染Tiam1 siRNA 24 h后,EC9706细胞中Tiam1蛋白的表达水平(0.11 ±0.02)低于未处理组(0.44±0.05)和对照siRNA组(0.44±0.04,均P＜0.05).Tiam1 siRNA组、未处理组和对照siRNA组Go/G1期细胞所占比例分别为(54.48±2.14)％、(40.69±1.85)％和(41.78±1.31)％,S期细胞所占比例分别为(27.18±1.65)％、(32.32±1.15)％和(30.35±1.09)％,差异均有统计学意义(均P＜0.01).未处理组、对照siRNA组和Tiam1siRNA组中cyclin D1蛋白的表达水平分别为0.43 ±0.02、0.41 ±0.01和0.11±0.02,p27蛋白的表达水平分别为0.10±0.01、0.09 ±0.02和0.20±0.02,差异均有统计学意义(均P＜0.05).未处理组、对照siRNA组和Tiam1 siRNA组中早期凋亡细胞所占比例分别为(10±0.9)％、(10±0.5)％和(27±0.7)％,差异有统计学意义(P＜0.01).未处理组、对照siRNA组和Tiam1 siRNA组EC9706细胞中Mcl-1蛋白的表达水平分别为0.47 ±0.12、0.48 ±0.13和0.16±0.02,Bcl-2蛋白的表达水平分别为0.49 ±0.08、0.50 ±0.05和0.04 ±0.03,caspase-3的活性分别为2.3±0.09、2.3±0.10和16.0±1.50,caspase-9的活性分别为2.3 ±0.08、2.3 ±0.11和14.5 ±0.9,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 Tiam1 siRNA能明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖、诱导细胞周期静止和细胞凋亡的发生,这与细胞周期基因(cyclin D1和p27)和细胞凋亡基因(Mcl-1、Bcl-1、caspase-3和caspase-9)的变化密切相关.
-
人微管不稳定蛋白基因真核表达载体的构建与表达及对食管癌细胞的作用
目的 构建人微管不稳定蛋白基因(stathmin)真核表达载体,研究其对食管癌细胞EC9706的作用.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增stathmin cDNA,克隆至pMDl8-T载体并酶切鉴定后,亚克隆至pEGFP-C2真核表达载体.将测序鉴定正确的重组载体和空载体经脂质体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.通过荧光显微镜观察转染细胞荧光蛋白的表达,采用Western blot检测转染细胞中增强型荧光蛋白(EGFP)和stathmin融合蛋白的表达.选取稳定转染的细胞株,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪分析细胞的增殖状态,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性.结果 RT-PCR扩增获得450 bp的cDNA编码序列;克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定后获反向插入质粒;亚克隆至pEGFP-C2载体后,经酶切与测序鉴定,重组载体pEGFP-stathmin构建成功.重组载体和空载体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.通过荧光显微镜观察到,转染细胞中呈现绿色荧光;经Western blot证实,重组载体表达46 000的融合蛋白.与空载体转染细胞相比,转染重组载体的EC9706细胞形态变大,增殖速度减慢,细胞分裂阻滞于G2/M期,细胞克隆形成数减少,裸鼠体内成瘤性降低(P＜0.05).结论 构建的真核表达载体pEGFP-stathmin在食管癌EC9706细胞中能够稳定表达,并抑制肿瘤细胞的增殖和成瘤性.
关键词： 人stathmin基因 真核表达载体 EC9706细胞 -
6MVX射线对人食管癌EC9706细胞Gadd45α基因表达的影响
生长抑制及DNA损伤诱导基因45a(Gadd45α)是p53的下游靶基因,当面对各种环境应激时表达上调.Gadd45a在调节细胞周期监测点、细胞凋亡、DNA修复等方面扮演重要角色,它与多种肿瘤的发生发展密切相关.
-
壁虎活性多肽对线粒体通路诱导的人食管癌Ec 9706细胞增殖与凋亡的影响
目的 研究壁虎活性多肽(GAP)对人食管癌Ec 9706细胞的增殖与凋亡的影响.方法 将7个不同质量浓度(0.3,1,3,10,30,100和300μg·mL-1)的GAP处理Ec9706细胞48 h,以CCK8法检测细胞增殖水平,根据CCK8的结果,将细胞分为4组:对照组(不加药)和低、中、高3个剂量(GAP:15,30,60μg·mL-1)实验组.用流式细胞仪检测Ec 9706细胞的凋亡率;用蛋白免疫印迹法检测细胞线粒体凋亡通路B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶3(Caspase3)蛋白的表达情况.结果 GAP在24,48 h的IC50分别为70.2和54.6μg·mL-1.处理48 h后,对照组和低、中、高3个剂量实验组凋亡率分别为(6.24±1.73)％,(35.40±6.33)％,(50.60±8.61)％和(84.70±8.89)％,3个剂量实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).这4组的Bax蛋白相对灰度值分别为0.55±0.07,0.61±0.06,0.77±0.11和1.07±0.14;这4组的Bcl-2蛋白相对灰度值分别为0.80±0.13,0.54±0.11,0.36±0.04和0.11±0.03;这4组的Caspase3蛋白相对灰度值分别为0.45±0.05,0.51±0.09,0.92±0.12和0.98±0.16.3个剂量实验组与对照组比较,以上各指标的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 GAP可以显著抑制食管癌Ec 9706细胞增殖,并且诱导细胞凋亡,其机制与其调控线粒体凋亡通路相关蛋白表达有关.
-
穿心莲内酯对人食管癌Ec9706细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨穿心莲内酯(AD)对人食管癌Ec9706细胞增殖、克隆形成、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法:分别以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和平板克隆形成法评价AD对Ec9706细胞增殖和克隆形成的抑制作用;通过流式细胞术、细胞原位凋亡检测(TUNEL)和Annexin-V/PI法观察AD诱导细胞凋亡.结果:AD显著抑制Ec9706细胞的增殖,IC50值为28.6μg·mL-1,也显著抑制Ec9706细胞的克隆形成,IC50值为1.7μg·mL-1.AD 30和60μg·mL-1组G0/G1期的细胞比例较对照组显著增加[(65.6±1.9)%,(60.5±1.1)%vs.(50.6±0.9)%,P＜0.01],凋亡细胞比例也显著大于对照组[(17.9±2.6)%,(39.4±1.7)%vs.(0.5±0.2)%,P＜0.01].结论:AD抑制人食管癌Ec9706细胞的增殖和克隆的形成,阻滞细胞周期于G0/G1期并诱导细胞凋亡.
-
沉默USP39对食管癌细胞增殖的影响
目的 探索食管癌细胞EC9706及人正常食管上皮细胞HEEC中USP39分子的表达差异及沉默USP39对食管癌细胞EC9706增殖的影响.方法 利用qRT-PCR及Western blot法检测细胞中USP39表达情况;设计并合成USP39的siRNA(USP39-siRNA)及对照(USP39-NC)转染食管癌EC9706细胞,利用qRT-PCR、Western blot法检测EC9706细胞中USP39的表达变化;MTT、平板克隆实验检测EC9706细胞的增殖.结果 USP39在EC9706细胞中的表达高于人正常食管上皮细胞HEEC的表达,USP39-siRNA下调了EC9706细胞中USP39基因水平与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖能力.结论 USP39-siRNA能够下调USP39的表达,并有效抑制食管癌EC9706细胞的增殖,为以USP39为靶点的食管癌基因治疗奠定基础.
-
沉默EC9706核干细胞因子基因对裸鼠移植瘤生长的作用
目的:观察由RNAi诱导的EC9706核干细胞因子(NS)基因沉默对裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法:BALB/c裸鼠15只,分为3组,siRNA干预组皮下注入pRNAT-U6.1-siNS2转染的EC9706细胞,无关siRNA对照组皮下注入pRNAT-U6.1-siC转染的EC9706细胞,空白对照组皮下注入正常EC9706细胞,接种5周分别测定各组裸鼠移植瘤体积,并应用RT-PCR技术检测裸鼠移植瘤组织中NS mRNA的表达.结果:无关siRNA对照组及空白对照组于第4天在接种部位出现肉眼可见的肿块,siRNA干预组于第6天在接种部位发现肉眼可见肿块.第5周各组裸鼠成瘤率均为100%.空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组瘤体大小分别为(1 806.40±77.75)mm3、(1 702.20±88.60)mm3和(847.00±82.25)mm3,3组相比差异有统计学意义(P＜0.05).空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组移植瘤组织中NS mRNA的表达量分别为0.681±0.033、0.685±0.034和0.497±0.056,3组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:沉默EC9706细胞的NS基因可抑制裸鼠移植瘤生长,降低裸鼠体内NS mRNA的表达.沉默NS基因有可能成为治疗食管癌的新策略.
-
不同证候噎膈患者血清调控食管癌EC9706细胞PI3 K/Akt/NF-κB信号通路差异分析
目的：通过研究噎膈血瘀证、脾气虚证患者及健康人血清对食管癌 EC9706细胞增殖、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/核因子kappaB（NF-κB）信号通路相关分子mRNA及蛋白表达的调控，探讨噎膈血瘀证、脾气虚证的分子机制。方法本研究于2014年6—12月选择来源于唐山市人民医院、迁安燕山医院肿瘤内科的病理确诊的食管鳞癌患者。按照《中华人民共和国中医药行业标准———中医病症诊断疗效标准》确定噎膈血瘀证或脾气虚证标准，选取血瘀证、脾气虚证患者各10人，另选取健康志愿者10人（来自两院体检人员）。将EC9706细胞于37℃，5％饱和湿度的二氧化碳（ CO2）培养箱孵育24 h，饥饿24 h，分别加入倍比梯度的噎膈血瘀证、脾气虚证患者和健康人血清，噻唑蓝（MTT）染色法检测细胞增殖变化；实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测PI3K、Akt、NF-kB表达；免疫印迹（Western blot）法检测PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关分子蛋白表达。结果血瘀证患者血清刺激细胞的50％增殖率为71.1μl/ml，脾气虚证为118.0μl/ml；血瘀证患者血清上调细胞 PI3K、Akt 和NF-κB mRNA表达水平，与各对照组比较差异有统计学意义（ P﹤0.05），脾气虚证患者血清无上调mRNAs作用；血瘀证患者血清促进细胞表皮生长因子受体（EGFR）、PI3K、Akt、磷酸化的蛋白激酶B（p-Akt）和 NF-κB等蛋白表达水平增高，与各对照组比较差异有统计学意义（ P﹤0.05），脾气虚证患者血清无促进此五蛋白表达作用。结论噎膈血瘀证患者血清能够促进细胞增殖，该证候的分子机制可能与PI3K/Akt/NF-κB信号通路过度激活有关；脾气虚证患者血清无刺激细胞增殖作用，其证候分子机制有待探讨。
-
启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导的影响
目的:研究启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞增殖影响,并从Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路探讨三方作用机制.方法:体外培养食管鳞癌细胞株EC9706细胞,分别加入启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤提取液培养处理细胞,通过MTT染色观察细胞增殖变化,通过Western blot法检测Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路蛋白表达.结果:启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤的IC50值分别是1462、1232、2875 μg/mL,均可促进Caspase-3蛋白表达而诱导细胞凋亡,而Cyt.C蛋白表达较弱;启膈散和沙参麦冬汤对FADD、Fas、TNFR1和DR5蛋白表达有不同程度地影响.结论:三方可通过激活Caspase-3诱导细胞凋亡,其中启膈散主要通过非依赖FADD死亡受体途径,沙参麦冬汤主要通过依赖FADD死亡受体途径,通幽汤可能通过其他凋亡蛋白参与的上游信号途径而激活Caspase-3致细胞凋亡.
-
通幽汤及拆方对食管癌EC9706细胞PI3K/AKT信号通路影响的研究
目的:揭示通幽汤对食管癌抑制作用的细胞内分子机制,确定从功效分类的有效药物及瘀血内结证的分子本质.方法:体外培养食管鳞癌EC9706细胞,通幽汤及活血行气、滋阴养血拆方分别作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化;以MTT法检测细胞抑制率,确定佳药物浓度和作用时间;western blot法观察PI3K/AKT信号通路各蛋白表达变化情况.结果:通幽汤及活血行气拆方可显著抑制EC9706细胞增殖,48h作用强,通幽汤全方IC50=1523μg·mL-1,活血行气拆方IC50=1001μg·mL-1;可抑制PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达,作用强弱依次为:活血行气拆方＞通幽汤全方＞滋阴养血拆方.结论:通幽汤抑制食管癌细胞增殖主要为活血行气类药物,根据"以方测证"理论,瘀血内结证与PI3K/AKT信号通路表达增强有关.
-
血瘀型噎膈患者血清对食管癌EC9706细胞周期及核因子-κB信号通路蛋白表达的影响
目的 通过观察血瘀型噎膈患者血清对食管癌EC9706细胞周期及核因子(NF)-κB介导的信号通路蛋白表达的影响.方法 将EC9706细胞于37℃,5%饱和湿度的CO2培养箱孵育24 h,饥饿24 h,分别加入倍比梯度的血瘀证、脾气虚证患者和健康人血清,MTT染色法检测细胞增殖变化;PI染色法观察细胞周期变化;Western印迹法检测NF-κB信号通路蛋白的表达.结果 血瘀型噎膈患者血清刺激细胞的50%增殖率为711 μl/10 ml培养液体积;细胞周期分析,患者血清刺激的EC9706细胞(38.85±3.11)% 处于S增殖期,与各对照组有显著差异(P<0.05);在NF-κB信号通路中,血瘀型噎膈患者血清对EC9706细胞蛋白IKK-β、NF-κB、磷酸化NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达具有特征性促表达作用,与其他各血清干预的细胞比较有显著差异(P<0.05).结论 噎膈血瘀证患者血清提供利于细胞增殖的微环境,该证候的分子机制与细胞周期调节和NF-κB信号通路蛋白超表标达密切相关.
-
Aurora-A激酶抑制剂VX-680对食管癌细胞凋亡的影响
目的 探讨Aurora-A激酶抑制剂VX-680对食管鳞癌EC9706细胞凋亡的影响.方法 用不同浓度的VX-680(10、30、50、100 nmol/L)处理EC9706细胞48 h,并设DMSO对照组和空白对照组,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,CCK-8法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞的凋亡率.结果 随着VX-680浓度的增加,贴壁细胞逐渐出现皱缩、变圆、脱落等现象;细胞存活率呈逐渐下降趋势(P＜0.01);细胞凋亡率均高于DMSO对照组,且50和100 nmol/L VX-680组细胞凋亡率与DMSO对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 VX-680能促进EC9706细胞凋亡,在食管癌临床治疗方面具有良好的应用前景.
关键词： 食管鳞癌 EC9706细胞 Aurora-A激酶 VX-680 细胞凋亡 -
丹参酮ⅡA通过调控上皮间质转化抑制食管癌EC9706和KYSE70细胞的凋亡、侵袭和迁移
目的:探讨丹参酮IIA对食管癌EC9706和KYSE70细胞侵袭和迁移的影响及其调控机制.方法:食管癌细胞系EC9706和KYSE70培养完成后分为4组:对照组(加DMSO)和2、4、6μg/ml丹参酮组.采用CCK-8法检测EC9706和KYSE70细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR和Westem blotting实验检测EMT相关蛋白E-cadherin、Snail-2、Vimentin和N-cadherin mRNA和蛋白表达水平.结果:小于6μg/ml的丹参酮ⅡA不影响食管癌EC9706和KYSE70细胞增殖活力;4、6μg/ml丹参酮IIA组细胞凋亡率明显高于对照组(均P＜0.01);2、4、6 μg/ml丹参酮组每个视野下的侵袭细胞数及划痕愈合率明显低于对照组(均P＜0.01),且EC9706和KYSE70细胞形态由纺锤状的间充质形态转变为上皮形态.与对照组相比,2、4、6 μg/ml丹参酮组E-cadherin表达明显升高,Snail-2、Vimentin和N-cadherin表达明显下降(均P＜0.01).结论:丹参酮ⅡA通过抑制EMT促进食管癌EC9706和KYSE70细胞凋亡,并减弱其侵袭和迁移能力.
-
IL-21增强CIK细胞对食管癌EC9706细胞的杀伤作用及其可能的机制
目的:探讨细胞因子IL-21对CIK细胞体外杀伤食管癌EC9706细胞活性的影响,并初步分析其可能的分子机制.方法:体外无菌分离人外周血单个核细胞,分别进行常规培养和加IL-21培养CIK细胞.流式细胞术检测2种培养CIK细胞的免疫表型,LDH释放法检测2种培养CIK细胞杀伤食管癌EC9706的活性,ELISA法检测2种CIK细胞培养上清液IFN-γ浓度.结果:常规培养和加IL-21培养的2种CIK细胞增殖数量无明显差异.加IL-21培养的CIK细胞CD3+CD56+细胞比例、CD3+细胞内颗粒酶B和穿孔素表达率均显著高于常规培养CIK细胞[(26.95±3.53)％ vs (16.18±1.04)％,(33.29±2.30)％ vs (23.58±2.28)％和(59.70±1.91)％ vs (45.96±2.67)％,均P＜0.05).效靶比20∶1和30∶1时,加IL-21培养的CIK细胞杀伤EC9706细胞的活性均显著高于常规培养的CIK细胞[20∶1时:(43.66±1.99)％ vs (34.59±1.75)％;30∶1时:(57.52±2.15)％ vs (42.23±1.87)％,均P＜0.05].加IL-21培养CIK细胞的上清液FN-γ的浓度明显高于常规培养CIK细胞的上清液[(142.7± 13.4) vs (42.6±3.3) ng/L,P＜0.05].结论:IL-21增加CD3+CD56+细胞比例和颗粒酶B及穿孔素的表达,提高CIK细胞分泌IFN-γ,从而增强CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性.
