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浙江省产超广谱β-内酰胺酶菌株的TEM型耐药基因的检测
超广谱TEM型β-内酰胺酶菌株在各国的流行状况各不相同,我国尚无TEM型β-内酰胺酶流行状况的报告.我们对浙江省临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌进行了TEM型β-内酰胺酶编码基因研究.
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流式细胞术用于细菌抗生素敏感性试验的初步探索
大肠埃希菌ATCC25922、临床分离头孢噻肟(CTX)敏感大肠埃希菌7771、7880、CTX耐药大肠埃希菌7992与浓度范围为(0.015~128)μl/ml的CTX于35℃孵育2?h后,用碘化丙啶(PI)标记上流式细胞仪检测.在一系列药物浓度作用下,各菌株的碘化丙啶荧光强度(MFI)随着药物浓度的升高呈现递增的变化趋势,但是,当抗生素浓度过高,如大于其小抑菌浓度(MIC) 8倍时,菌细胞门所占比例将明显减少,MFI值也会显著下降,表明在高浓度抗生素持续作用下,较多细菌死亡后,菌细胞被裂解.
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浙江省产超广谱β-内酰胺酶菌株SHV型β-内酰胺酶分布
随着三代头孢菌素如头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松和单环酰胺类抗生素在临床上的广泛使用,超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)在革兰阴性杆菌中产生率不断增加,ESBLs种类也不断增加,至2000年6月,已发现近100种ESBLs亚型[1],其中TEM型有67种,SHV型有24种,非TEM非SHV型有20多种.TEM和SHV型分别由广谱酶TEM-1、TEM-2和SHV-1编码基因中1~5个位点发生点突变而来.各国各地区流行的ESBLs亚型各不相同[2].我们对浙江省各地区临床分离的表型鉴定为产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌SHV型β-内酰胺酶编码基因进行克隆、序列分析和亚型鉴定,结果如下.
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产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的分析
对我院2001年10月~2002年5月临床分离的30株非重复的产ESBLs大肠埃希菌进行检测,了解CTX-M基因的检出情况及产CTX-M酶大肠埃希菌的耐药性和同源性.
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多重耐药不动杆菌主要β-内酰胺酶基因型及同源性研究
随着广谱抗生素的广泛应用,多重耐药的不动杆菌的比例不断上升,并在全球多处的重症监护病房发生暴发流行,成为抗感染治疗的棘手问题.近年来我院鲍曼不动杆菌分离率不断增加,耐药率也不断上升,本研究分析了我院2007年7月-2008年5月临床分离的61株多重耐药不动杆菌属菌株的耐药性、同源性及主要β-内酰胺酶基因型.
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一株产SHV-5α型超广谱β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌检测
质粒介导的超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的产生引起了肠杆菌科细菌的耐药,ESBL能够水解氧亚氨基β-内酰胺类抗生素和氨曲南,并可被β-内酰胺酶抑制剂所抑制.截止2005年4月11日,在全球范围内至少已发现200多种ESBL.大多数ESBL来源于广谱酶TEM-1、TEM-2和SHV-1,系这些酶活性部位1个或多个位点的氨基酸突变所致,使酶活性部位的空间结构发生改变而扩大了水解底物范围,从而增加了对氧亚氨基类抗生素的亲和力和水解能力.自Prinarakis于1996年首次报道了SHV-5α以来,这一β-内酰胺酶的相继报道不多.我们在研究蚌埠三院临床分离的产ESBL菌株时,从一株阴沟肠杆菌中检测到SHV-5α,现将结果报道如下.
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限制酶分析在假单胞菌及其L型鉴定中的应用
假单胞菌是临床常见的致病菌之一,铜绿假单胞菌为医院内感染常规检测菌.为建立对其快速、准确鉴定的方法,我们对获自中国科学院AS菌种保藏中心的14株假单胞菌标准株(包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌和嗜麦芽假单胞菌等)及临床分离到的铜绿假单胞菌,用EcoRⅠ、 HindⅢ、SmaⅠ和PstⅠ(Promega及华美公司)等限制性内切酶分析其染色体的限制酶图谱(REP),其中EcoRI和SmaI对这些菌种的鉴别效果较好.
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河南发现产KPC-2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌
KPC酶是一种新的碳青霉烯酶,属于A类酶,水解所有的β内酰胺类抗生素,能被克拉维酸抑制[1]。它不仅存在于肠杆菌科的细菌中[2],也存在于铜绿假单胞菌等非发酵菌中[3]。自2001年Yigit等[1]在美国报道KPC-1之后,法国、希腊、中国等国家[4-8]也发现了KPC酶。我国浙江地区曾报道了KPC酶[7-8]。我们在临床分离到1株亚胺培南中敏的肺炎克雷伯菌,研究发现其产生KPC-2型碳青霉烯酶。
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临床分离的1566株革兰阴性杆菌耐药性分析
由于抗生素的广泛应用、滥用造成细菌耐药性日趋严重,已有许多关于多重耐药菌株感染,导致患者病情加重甚至造成重症患者死亡的报道.临床在重症患者的治疗中,及时获得病原菌的药敏结果,对于争取抢救时间具有十分重要的意义.为了解近年来当地细菌的耐药性情况及其发展倾向,本研究通过对我院2001年2月~2003年7月分离的1 566株革兰阴性杆菌的耐药性以及抗菌药物使用情况进行了回顾性分析.
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甲氧西林耐药溶血葡萄球菌耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究
甲氧西林耐药溶血葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus haemolyticus, MRSH)是目前临床常见的重要凝固酶阴性葡萄球菌,常呈多重耐药.特别是MRSH的流行,如得不到及时控制,病死率高.因此早期发现MRSH感染的流行极为重要.本研究采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对我院临床分离的MRSH做同源性分析,为溶血葡萄球菌感染的防治提供基础.
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耐药铜绿假单胞菌携带的整合子及其耐药基因盒检测分析
整合子系统是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)产生耐药的重要因素,其包括5'保守序列(CS,包括整合酶基因int、重组位点att Ⅰ和1个启动子)和3'CS(由qacE△1和sul1组成);整合子携带的耐药基因盒包括1个单独的基因和1个下游的重组位点attC;整合子通过att Ⅰ和attC位点之间或2个attC位点之间的重组而捕获耐药基因.本研究对临床分离的13株耐药PA菌行药物敏感试验后,对整合子和基因盒的携带情况进行检测,并对序列、定位及质粒接合试验进行分析.
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三株黏液型铜绿假单胞菌的生物学特性研究
铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)是慢性呼吸道感染的重要致病菌.根据其形态和是否大量产生藻酸盐可分为黏液型和非黏液型.黏液型铜绿假单胞菌由于大量产生藻酸盐而更易形成生物被膜,使其逃逸机体免疫清除和增强对抗菌药物的耐药性,给临床治疗带来极大的困难[1-3].研究表明,mucA基因突变是造成铜绿假单胞菌发生黏液型转换的主要机制[4-5].目前已发现的mucA基因突变类型有多种[6],mucA基因突变类型对黏液型铜绿假单胞菌的生物学特性极可能造成较大影响.本课题组从临床分离了3株稳定黏液型铜绿假单胞菌,对mucA基因测序结果显示其mucA基因序列有较大差异,并进一步对其生物学特性进行了研究.
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泌尿系感染变形杆菌耐头孢呋新的机理研究
我们收集了1992~1994 年本院住院患者的尿液微生物学检查阳性449例, 临床分离 32株变形杆菌,对各种抗生素均有不同程度的耐药,特别是对临床应用时间不长的头孢呋新,敏感率也仅为75.0%,鉴于此即对其耐药机理进行了研究.
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比例法检测1875株结核分枝杆菌的药物敏感性
1997~1999年,我们采用WHO/IUATLD全球结核病耐药监测项目[1]推荐的比例法1 875株临床分离结核菌株的耐药性进行测定,结果报告如下.
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鲍曼不动杆菌喹诺酮耐药决定区基因突变的研究
随着喹诺酮类药物的广泛应用,鲍曼不动杆菌对其敏感性逐渐降低[1].本研究对临床分离的鲍曼不动杆菌喹诺酮耐药决定区的gyrA和parC基因突变情况进行了分析,报告如下.
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嗜麦芽窄食单胞菌在重症病房的流行
嗜麦芽窄食单胞菌(S.ma)为条件致病菌和医院感染菌[1].我们采用简易快速的三管法和API方法对临床分离的34株S.ma进行鉴定,并采用肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行DNA分型.
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聚合酶链反应-单链构象多态性检测淋病奈瑟菌gyrA基因突变的研究
国外研究表明,DNA旋转酶是淋病奈瑟菌(淋菌)中氟喹诺酮类药物的首要作用靶位,淋菌对氟喹诺酮类药物耐药主要与编码该酶的gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变有关[1].为建立一种简便、快速、可靠的淋菌gyrA基因突变的检测方法,并进一步探讨该突变与我国临床分离淋菌对氟喹诺酮类药物耐药的关系,本课题以浓度梯度(Etest)法检测了42株临床分离淋菌对环丙沙星敏感性,采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)结合DNA测序技术,对淋菌gyrA基因QRDR突变进行了研究,报告如下.
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评价三种检测AmpC酶的方法及临床应用
AmpC酶是一类既可由染色体介导,又可由质粒介导的头孢菌素酶,它与质粒介导的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)是导致革兰阴性杆菌耐药的重要的两类酶.ESBLs的检测方法有多种[1],并日趋成熟,而检测AmpC酶缺乏足够的流行病学资料,尚无统一标准的方法.本研究采用酶提取物三维试验、头孢西丁三相试验及氯唑西林双纸片协同法同时检测阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌的AmpC酶,并加以比较,以找出一种适合临床常规应用的检测AmpC酶的方法.同时了解本院临床分离的菌株AmpC酶的流行情况.
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阴沟肠杆菌高活性β内酰胺酶检测与相关耐药表型分析
阴沟肠杆菌是医院感染的重要病原菌.我们对我院临床分离的部分阴沟肠杆菌进行 AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的检测,并结合临床药敏试验,进行耐药表型及耐药机制分析,为合理使用药物提供参考依据.
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血浆凝固酶阴性葡萄球菌快速两步鉴定方法
近年来使用医疗器械导致的感染,尤其是免疫缺陷患者的血浆凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)感染增多已引起重视,而常用鉴定法程序繁琐、费高耗材.我们参考Ieven等[1]建立的方法,仅用几种常用细菌生化试验与药敏试验组成的两步法,可将临床分离的86株CNS中的83株(96.5%)快速鉴定到种,报告如下.